Модификация метода "ТСХ-скрининга" для некоторых контролируемых соединений
Результаты исследований по изучению хроматографического поведения некоторых контролируемых веществ в условиях нормально- и обращенно-фазных вариантах скрининга. Особенности осуществления процесса скрининга методом хроматографии в тонких слоях сорбента.
| Рубрика | Производство и технологии |
| Вид | статья |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 06.03.2019 |
| Размер файла | 83,3 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Модификация метода «ТСХ-скрининга» для некоторых контролируемых соединений
Г.П. Петюнин, А.В. Чубенко, Н.В. Гузенко
Представлены результаты исследований по изучению хроматографического поведения некоторых контролируемых веществ в условиях нормально- и обращенно-фазных вариантах скрининга, осуществляемого методом хроматографии в тонких слоях сорбента. Особенностью его проведения является использование общей для обоих механизмов разделения системы растворителей, что позволяет повысить селективность обнаружения ряда токсикологически важных веществ.
Ключевые слова: хроматография в тонких слоях сорбента, скрининг, системы растворителей, контролируемые вещества.
МОДИФІКАЦІЯ МЕТОДУ «ТШХ-СКРИНІНГУ» ДЛЯ ДЕЯКИХ КОНТРОЛЬОВАНИХ СПОЛУК
Петюнін Г. П., Чубенко О. В., Гузенко Н. В.
Репрезентовано результати досліджень з вивчення хроматографічної поведінки деяких контрольованих речовин в умовах нормально- і зворотньо-фазних варіантів скринінгу, здійснюваного методом хроматографії в тонких шарах сорбенту. Особливістю його проведення є використання загальної для обох механізмів поділу системи розчинників, що дозволяє підвищити селективність виявлення деяких токсикологічно важливих речовин.
Ключові слова: хроматографія в тонких шарах сорбенту, скринінг, системи розчинників, контрольовані речовини.
TLC-SCREENING METHOD MODIFICATION FOR CERTAIN CONTROLLED SUBSTANCES
Petunin G. P, Chubenko A. V, Guzenko N. V
Modern screening methods in toxicology are represented by several variants - the use of enzyme-linked immunosorbent assay and chromatographic analysis principles. While screening with thin-sorbent-layer chromatography method is now conducted both in normal phase and reverse phase modes for substances grouped as to their acid-base nature. The undertaken studies were aimed at developing a TLC-screening scheme for a limited number of controlled substances, which would combine two mechanisms with different underlying principles of dividing toxic agents within one system of solvents. In order to implement that we have applied systems usedfor group screening by the method of reverse- phase chromatography on slabs with inoculated RP-phase. The studies were conducted concurrently both as a normal-phase variant on Sorbfil slabs and in reverse-phase Plasmokhrom slabs variant with RP-3 layers. The findings allowed to develop the analysis scheme based on the use of calculated parameters of chromatographic mobility with the use of two division mechanisms and color-reactions, received with the help of two respective developing agents.
Keywords: chromatography in thin sorbent layers, screening, systems of solvents, controlled substances.
Многообразие токсикантов, являющихся причиной отравлений, требует предварительного исследования. В токсикологическом анализе такого рода исследования принято называть аналитическим скринингом. Это исследование представляет собой поэтапный процесс обнаружения индивидуального вещества путем последовательного исключения токсикантов, а затем отсеивания их в обнаруженной группе до выявления конкретного соединения. Из современных скрининговых методов токсикологического анализа широко применяются методы иммуноферментного анализа (ИФА) и тонкослойной хроматографии (ТСХ). Причем скрининг методом хроматографии в тонких слоях сорбента в настоящее время осуществляется как в нормально-фазном См.: Петюнин Г. П. Скрининг токсических веществ органической природы в биологических жидкостях / Г. П. Петюнин, А. В. Чубенко, Ж. В. Дмитриевская // Проблеми діагностики, профілактики та лікування екзогенних та ендогенних інток- сикацій : тези доп. Всеукр. наук.-практ. конф., Чернівці, 16-18 жовтня 2004 р. -- Чернівці : Медик, 2004. -- С. 64-65., так и в обращенно-фазном варианте См.: Поспелова А. А. Обращенно-фазный вариант тонкослойной хроматографии в химико-токсикологическом анализе ряда лекарственных средств основного харак-тера : автореф. дис. на соискание уч. степени канд. фарм. наук : спец. 14.04.02 «Фар-мацевтическая химия, фармакогнозия» / А. А. Поспелова. -- Пермь, 2012. -- 24 с..
В продолжение ранее начатых исследований См.: Петюнин Г. П. Исследование некоторых лекарственных и наркотических препаратов - аналогов по структуре и действию методом хроматографии в тонких слоях сорбента / Г П. Петюнин, А. В. Чубенко, Н. В. Гузенко // Теорія та практика судової експертизи і криміналістики : зб. наук. праць. -- 2011. -- Вип. 11. -- С. 378-384. нами была предпринята попытка разработать вариант скрининга для ограниченного круга контролируемых веществ, при котором процедура ТСХ-скрининга совмещала в себе два разных по своим принципам механизма разделения токсикантов в одной системе растворителей. Для реализации этого варианта мы использовали системы, применяемые для группового скрининга методом обращен- но-фазной хроматографии на пластинках Merk с привитой фазой С18 См.: Поспелова А. А. Экстракционное вымораживание и твердофазная экс-тракция в судебно-химическом исследовании ряда антигистаминных средств, ней-ролептиков, транквилизаторов, опиатов, опиоидов, местных анестетиков / А. А. По-спелова, Т Л. Малкова, Л. Н. Карпова [Электронный ресурс]. -- Режим доступа : www.MEDLINE.RU, Токсикология, т 13, ст 8 (с. 94-102). -- 01.02.2012.. В нашем случае исследования проводились параллельно как в нормальнофазном варианте на пластинках «Сорбфил» пТСХ-П-А-УФ, так и на обращенно-фазных пластинках «Плазмохром» с RP-3 слоями. В качестве объектов исследования были использованы экстракты, полученные из биологического материала пациентов наркологического диспансера. Присутствие в экстрактах соответствующих веществ доказывалось методом хроматомасс-спектрометрии на хроматомасс-спектрометре Agilent 6890N/5973N/FID производства Agilent Technologies с пневматическим микропотоковым переключателем Дина и дополнительным детектором ионизации в пламени. Колонка № 1 - кварцевая капиллярная HP-5MS 0,25 мм х 30 м, выход колонки присоединен к детектору ионизации в пламени. Колонка № 2 - кварцевая капиллярная DB-17MS 0,25 мм х 30 м, конец колонки непосредственно входит в масс-спектрометр. Температура инжектора - 250 °С, интерфейса масс-спектрометра (Transfer line) - 280 °С, источника ионов - 230 °С, квадруполя - 150 °С, детектора ионизации в пламени - 250 °С. Режим ионизации масс-спектрометра - электронный удар, энергия электронов - 70 эВ. Диапазон сканирования 40-700 а. е. м., порог - 100, скорость сканирования - 4,29 скан./с. Режим программирования температуры термостата: 70 °С - 2 мин, потом повышение до 210 °С со скоро- стью - 45 °С/мин, затем повышение до 320 °С со скоростью - 15 °С/мин и выдержка при этой температуре 17,56 мин. Давление газа - носителя (гелия) на входе в первую колонку - 179,66 кПа (26,06 psi), вторую - 133,06 кПа (19,30 psi). Режим ввода пробы - 1мкл без делителя потока.
Результаты хроматографической подвижности исследуемых веществ представлены в табл. 1.
Таблица 1
Хроматографическая подвижность исследуемых веществ
|
Препарат |
Rf в системах растворителей на «Плазмахроме» (I) и «Сорбфиле» (II) |
||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
||||||
|
I |
II |
I |
II |
I |
II |
I |
II |
||
|
Кодеин |
0,62 |
0,59 |
0,6 |
0,87 |
0,76 |
0,85 |
0,76 |
0,82 |
|
|
Морфин |
0,25 |
0,22 |
0,31 |
0,87 |
0,76 |
0,85 |
0,76 |
0,82 |
|
|
Папаверин |
0,82 |
0,82 |
0,44 |
0,80 |
0,74 |
0,85 |
0,74 |
0,88 |
|
|
Трамадол |
0,75 |
0,67 |
0,56 |
0,84 |
0,74 |
0,85 |
0,74 |
0,81 |
|
|
Метадон |
0,66 |
0,69 |
0,18 |
0,81 |
0,69 |
0,85 |
0,69 |
0,82 |
|
|
Кокаин |
0,81 |
0,87 |
0,56 |
0,81 |
0,65 |
0,83 |
0,77 |
0,75 |
|
|
Кетамин |
0,82 |
0,79 |
0,37 |
0,81 |
0,62 |
0,84 |
0,71 |
0,75 |
|
|
Декстрометорфан |
0,75 |
0,79 |
0,37 |
0,87 |
0,56 |
0,76 |
0,68 |
0,85 |
|
|
Димедрол |
0,68 |
0,68 |
0,18 |
0,44 |
0,33 |
0,76 |
0,68 |
0,75 |
|
|
Метамфетамин |
0,60 |
0,46 |
0,82 |
0,79 |
0,83 |
0,80 |
0,83 |
0,68 |
|
|
Амфетамин |
0,56 |
0,64 |
0,60 |
0,71 |
0,60 |
0,80 |
0,60 |
0,75 |
Примечание
1) ацетонитрил - этанол - 25% р-р аммиака (3:6,5:0,5);
2) метанол - вода - 25% р-р аммиака (6:4:4);
3) этанол - вода - 25% р-р аммиака (6:2:4);
4) метанол - 25% р-р аммиака (7:3).
хроматографический скрининг сорбент
На основе приведенных в табл. 1 данных о хроматографической подвижности исследуемых веществ можно сделать вывод о том, что в этих системах вещества удалось разделить как на пластинках «Плазмохром», так и на пластинках «Сорбфил». Для повышения селективности обнаружения веществ, показавших близкие величины R, были использованы расчетные показатели, подобные изложенным в источнике См.: Пат. України на корисну модель № 64698, МПК G01N 33/493. Спосіб виявлення кетаміну та сильнодіючих лікарських засобів в біологічному матеріалі /
Г. П. Петюнін, О. В. Чубенко, Н. В. Гузенко ; заявник і патентовласник Харківська медична академія післядипломної освіти. -- № U201005636 ; заявл. 10.11.2011 ; опубл. 27.12.12, Бюл. № 24..
Показатель рассчитывали по формуле
Rfx (I) + Rfx(H) Rf CT(I) + Rf CT(II)
где Rfx(1) - численное значение хроматографической подвижности анализируемого вещества в варианте I; R - численное значение хроматографической подвижности анализируемого вещества в варианте 11; Rf ст(1) - численное значение хроматографической подвижности вещества - стандарта в варианте 1; R/CT(n) - численное значение хроматографической подвижности вещества - стандарта в варианте 11.
В качестве вещества, принятого за стандарт, был выбран димедрол (табл. 2).
Таблица 2
Рассчитанная хроматографическая подвижность исследуемых веществ
|
Препарат |
Rx в системах растворителей |
||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
||
|
Кодеин |
0,66 |
2,37 |
1,47 |
1,10 |
|
|
Морфин |
0,34 |
1,90 |
1,47 |
0,68 |
|
|
Папаверин |
1,20 |
2,00 |
1,47 |
1,13 |
|
|
Трамадол |
1,04 |
2,16 |
1,47 |
1,08 |
|
|
Метадон |
0,97 |
1,59 |
1,22 |
1,05 |
|
|
Кокаин |
1,23 |
1,72 |
1,35 |
1,06 |
|
|
Кетамин |
1,18 |
1,90 |
1,33 |
1,02 |
|
|
Декстрометорфан |
1,13 |
2,00 |
1,21 |
1,06 |
|
|
Димедрол |
2,00 |
1,00 |
1,00 |
1,00 |
|
|
Метамфетамин |
0,77 |
2,59 |
1,49 |
1,05 |
|
|
Амфетамин |
0,76 |
2,11 |
1,28 |
0,94 |
Приведенные данные показали, что предпочтительнее использовать систему 1, в которой имеется наименьшее количество повторяющихся или близких результатов.
Кроме параметров хроматографической подвижности, в современном скрининге определяющее значение имеют результаты визуализации. Мы воспользовались последовательностью проявления пластинок, изложенной в источнике Clarke's Analysis of Drugs and Poisons in pharmaceuticals, body fluids and postmortem material / Consulting Editions A. C. Moffat, M. D. Osselton, B. Widdop. -- Fourth Editions. -- © Pharmaceutical Press, 2011.. Результаты первого этапа представлены в табл. 3, а после нанесения указанных реактивов-проявителей - в табл. 4.
Таблица 3
Флюоресценция исследуемых веществ в ультрафиолете (Уф)
|
Препарат |
Длина волны в УФ, нм |
||||
|
на «Плазмахроме» (I) |
на «Сорбфиле» (II) |
||||
|
254 |
365 |
254 |
365 |
||
|
Кодеин |
фиолетовая |
голубая |
голубая |
желтая |
|
|
Морфин |
фиолетовая |
голубая |
голубая |
желтая |
|
|
Папаверин |
фиолетовая |
желтая |
желтая |
желтая |
|
|
Трамадол |
синяя |
- |
- |
- |
|
|
Метадон |
фиолетовая |
- |
- |
- |
|
|
Кокаин |
голубая |
- |
- |
- |
|
|
Кетамин |
фиолетовая |
белая |
- |
белая |
|
|
Декстрометорфан |
фиолетовая |
желтая |
желтая |
желтая |
|
|
Димедрол |
синяя |
- |
- |
- |
|
|
Метамфетамин |
голубая |
голубая |
голубая |
желтая |
|
|
Амфетамин |
голубая |
голубая |
- |
- |
Таблица 4
Окрашивание исследуемых веществ с реактивами-проявителями
|
Препарат |
Реактивы-проявители |
||||
|
Драгендор- фа по Мунье |
Манделина |
1 % р-р нингидрина в ацетоне |
Марки |
||
|
і |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
|
Кодеин |
оранжевое |
сине-зеленое |
- |
сине-зеленое |
|
|
Морфин |
оранжевое |
фиолетовое |
- |
фиолетовое |
|
|
Папаверин |
оранжевое |
сине фиолетовое |
- |
фиолетовое |
|
|
Трамадол |
оранжевое |
сине зеленое |
серое |
бурое |
|
|
Метадон |
оранжевое |
сине зеленое |
- |
- |
|
|
Кокаин |
оранжевое |
- |
- |
- |
|
|
Кетамин |
оранжевое |
- |
зеленое |
- |
|
|
Декстрометорфан |
оранжевое |
сине черное |
изумрудно зеленое |
сине черное |
|
|
Димедрол |
оранжевое |
желтое |
фиолетовое |
желтое |
|
|
Метамфетамин |
желтое |
- |
фиолетовое |
оранжевое |
|
|
Амфетамин |
желтое |
- |
фиолетовое |
оранжевое |
Таким образом, можно предложить последовательность выполнения ТСХ-скрининга в одной системе растворителей на двух пластинках с разными механизмами разделения (рисунок):
Используя предложенную схему ТСХ-скрининга в токсикологическом анализе, можно значительно повысить селективность обнаружения в случае направленного исследования на группу контролируемых веществ. Кроме того, применяя одновременно два механизма разделения в методе хроматографии в тонких слоях сорбента, можно повысить и достоверность полученных результатов. Отметим, что предложенные системы растворителей вполне могут конкурировать с системами, рекомендованными Международным комитетом по токсикологическому анализу, как по времени хроматографирования, так и по отсутствию в составе систем растворителей - прекурсоров.
Размещено на Allbest.ru
Рисунок. Последовательность выполнения ТСХ-скрининга
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Расчет посадки для подшипника скольжения. Взаимозаменяемость резьбовых соединений. Установление контролируемых параметров цилиндрических зубчатых колес. Взаимозаменяемость шлицевых соединений. Расчет калибров для контроля цилиндрических соединений.
контрольная работа [513,3 K], добавлен 28.03.2014Перечень контролируемых метрологических характеристик. Локальная и принципиальная поверочная схема цифрового амперметра. Обоснование требований к метрологическим характеристикам рабочих эталонов. Условия, подготовка, проведение и результаты поверки.
курсовая работа [119,2 K], добавлен 10.12.2013Описание технологического процесса рафинации рапсового масла. Выбор измеряемых, регулируемых и контролируемых параметров. Выбор устройств автоматического управления. Нейтрализация жиров натриевой щелочью средней крепости. Уравнение материального баланса.
курсовая работа [200,3 K], добавлен 28.03.2015Описание метода атомно-силовой микроскопии, его достоинства и недостатки. Схематическое устройство атомно-силового микроскопа. Особенности осуществления процесса сканирования. Применение атомно-силовой микроскопии для определения морфологии тонких пленок.
реферат [883,8 K], добавлен 09.12.2015Передаточные функции объекта регулирования и регулятора, построение основных переходных характеристик его звеньев. Технологическая схема барабанной сушилки. Необходимость автоматизации процесса сушки. Выбор контролируемых и регулируемых параметров.
курсовая работа [2,6 M], добавлен 04.07.2015Назначение и область применения устройства числового программного управления металлообрабатывающим оборудованием; требования к его надежности. Описание процесса испытания контролируемых параметров аппарата на воздействие изменения температуры среды.
курсовая работа [448,7 K], добавлен 09.05.2011Определение и расчет параметров посадки гладкого цилиндрического соединения. Выбор контролируемых параметров зубчатых колес. Определение размеров калибров для контроля отверстия и вала, контрольных калибров к ним. Расчет посадок для подшипников качения.
курсовая работа [30,5 K], добавлен 28.11.2013Технологическая схема переработки золотосодержащих руд. Технология процесса бактериального окисления. Реактор биоокисления как объект автоматизации. Обоснование контролируемых и регулируемых параметров. Схема электроснабжения проектируемого участка.
дипломная работа [488,9 K], добавлен 16.12.2013Технологический процесс производства пивного сусла и его охлаждения в пластинчатом теплообменнике. Выбор и обоснование контролируемых и регулируемых, параметров. Разработка автоматической системы регулирования температуры сусла на выходе теплообменника.
дипломная работа [2,5 M], добавлен 16.12.2013Схема установки для приготовления сиропа, перечень контролируемых и регулируемых параметров. Материальный и тепловой баланс установки. Разработка функциональной схемы установки, выбор и обоснование средств автоматизации производственного процесса.
курсовая работа [264,2 K], добавлен 29.09.2014Описание объекта испытаний изделия: назначение и область применения, наличие обязательных требований, номенклатура контролируемых параметров, характеристики условий испытаний. Выбор и обоснование автоматизированных средств контроля испытаний стали.
курсовая работа [64,1 K], добавлен 19.11.2010Особенности выбора посадок для гладких цилиндрических и шпоночных соединений редуктора, применяемого для понижения оборотов двигателя и повышения крутящего момента. Методика расчета размерной цепи методом полной взаимозаменяемости и вероятностным методом.
курсовая работа [124,9 K], добавлен 13.09.2010Характеристика объекта автоматизации. Описание поточной линии для приготовления шоколадных масс. Анализ технологического процесса как объекта автоматизации и выбор контролируемых параметров. Выбор технических средств и описание схемы автоматизации.
курсовая работа [170,4 K], добавлен 09.05.2011Построение современных систем автоматизации технологических процессов. Перечень контролируемых и регулируемых параметров установки приготовления сиропа. Разработка функциональной схемы автоматизации. Технические характеристики объекта автоматизации.
курсовая работа [836,2 K], добавлен 23.09.2014Выбор посадок гладких цилиндрических соединений, для шлицевых соединений с прямым профилем зуба. Расчет и выбор посадок с натягом. Расчет размерной цепи методом полной взаимозаменяемости и вероятностным методом. Решение линейных размерных цепей.
курсовая работа [208,2 K], добавлен 09.04.2011Характеристика сырья и готовой продукции. Выбор контролируемых и сигнализируемых величин. Описание систем автоматизации. Датчики и исполнительные устройства. Преобразователь давления АИР-20 и клапан регулирующий РУСТ 512. Описание контролера серии БАЗИС.
курсовая работа [62,9 K], добавлен 19.11.2013Строение электродвигателя постоянного тока. Расчет основных параметров, построение естественной и искусственной механических характеристик. Особенности поведения показателей при изменении некоторых данных: магнитного потока, добавочного сопротивления.
контрольная работа [3,8 M], добавлен 08.12.2010Кривая намагничивания, температура Кюри, коэрцитивная сила. Характеристики магнитных материалов. Подготовка к напылению. Термообработка тонких пленок в вакууме. Термообработка по патенту. Расчет защит, заземления для установки вакуумного напыления.
курсовая работа [2,2 M], добавлен 22.06.2015Проведение идентификации неизвестного вещества по ИК-спектру, которая заключается в сопоставлении спектра вещества с эталонным спектром, приведенным в атласе. Особенности люминесцентного анализа и хроматографического исследования, их результаты.
курсовая работа [321,8 K], добавлен 11.12.2012Определение точности гладких соединений. Подбор посадки методом подобия и ее назначение расчетным методом. Допуски и посадки подшипников качения на вал и в корпус. Допуски размеров, входящих в размерные цепи. Выбор универсальных средств измерения.
курсовая работа [317,9 K], добавлен 23.01.2022
