Использование специализированных математических методов для оценки суточной динамики некоторых микроморфометрических параметров гепатоцитов в эксперименте

Размещено на http://www.allbest.ru/

ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России

ФГБНУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека»

ГОУ ВО МО «Московский государственный областной университет»

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ МАТЕМАТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ ОЦЕНКИ СУТОЧНОЙ ДИНАМИКИ НЕКОТОРЫХ МИКРОМОРФОМЕТРИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ГЕПАТОЦИТОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Чернов И. А., Кириллов Ю. А.,

Козлова М. А., Макарцева Л. А.,

Арешидзе Д. А., Штемплевская Е. В.

г. Тюмень, г. Москва

Аннотация

Цель. Изучить суточную динамику некоторых микроморфометрических показателей гепатоцитов крыс линии Вистар в возрасте 6 месяцев в условиях фиксированного светового режима.

Материалы и методы. Исследование проведено на 40 самцах крыс линии Вистар в возрасте 6 месяцев, массой 300 ± 20 г, содержащихся в стандартных лабораторных условиях при фиксированном световом режиме свет: темнота 10:14 часов с включением света в 8 часов и выключением в 18 часов. Через три недели эксперимента, проведена эвтаназия животных в углекислотной камере в 9.00,15.00,21.00 и 3.00 часа. Для исследования извлечена печень. Осуществляли патоморфологическое исследование печени, оценивали суточную динамику ядра и клетки (по площади и ядерно-цитоплазматическому отношению), а также плоидности гепатоцитов. Достоверность циркадной ритмичности (ЦР) определяли посредством косинор-анализа.

Результаты. Максимальные значения всех исследованных микроморфометрических параметров обнаружены в утренние и дневные часы. Акрофазы ритмов, установленные в результате косинор- анализа, регистрируются в дневные часы. Анализ суточных колебаний ядер гепатоцитов показал, что кривая, характеризующая вариационный ряд, в утренние и дневные часы преимущественно сдвинута вправо. В вечерние и ночные часы выявлено снижение среднего размера ядер, сопровождающееся сдвигом кариограммы влево. Максимальная плоидность исследованных гепатоцитов выявлена в 15.00, а минимальная - в 9.00.

Заключение. В результате исследования установлены достоверные циркадные ритмы ядра, клетки и ядерно-цитоплазматического отношения. Выявлены особенности вариации ядра и плоидности гепатоцитов в течение суток. циркадный ритмичность микроморфометрический гепатоцит

Ключевые слова: гепатоцит, микроморфометрия, плоидность, циркадный ритм, косинор.

Annotation

Chernov I. A., Kirillov Yu. A., Kozlova M. A., Makartseva L. A., Areshidze D. A., Shtemplevskaya E. V.

USE OF SPECIALIZED MATHEMATICAL METHODS TO ESTIMATE THE DAILY DYNAMICS OF CERTAIN MICROMORPHOMETRIC PARAMETERS OF HEPATOCYTES IN AN EXPERIMENT

Aim. To examine the daily dynamics of certain micmmorphometric values of Vistar rat hepatocytes at 6 months of age under a fixed light regime.

Materials and methods. The study was conducted on 40 male Wistar rats at age of 6 months, weighing 300 ± 20 g, holded in standard laboratory conditions with a fixed light regime light: darkness 10:14 hours with the light on at 8 hours and off at 18 hours. After three weeks of the experiment, the animals were euthanized in a carbon dioxide chamber at 9.00,15.00,21.00 and 3.00 hours. The liver was extracted for the study. A pathomorphologi- cal study of the liver was carried out, the daily dynamics of the nucleus and cell (by area and nuclear-cytoplasmic ratio), as well as the hepatocyte ploidy, were evaluated. Reliability of circadian rhythm (CR) was determined by cosinor analysis.

Results. The maximum values of all studied micromorphometric parameters were found in the morning and afternoon hours. Acrophase rhythms established as a result of cosinor analysis are recorded in the daytime. The analysis of diurnal fluctuations of the hepatocyte nuclei showed that the curve characterizing the variation series in the morning and afternoon hours is predominantly shifted to the right. In the evening and night hours, a decrease in the average size of the nuclei was revealed, accompanied by a shift of the karyogram to the left. The maximum ploidy of the studied hepatocytes was revealed at 15.00, and the minimum - at 9.00.

Conclusion. As a result of the study, reliable circadian rhythms of the nucleus, cells and nuclear-cytoplasmic relationship were established. The features of variation in the nucleus and ploidy of hepatocytes during the day were revealed.

Keywords: hepatocyte, micromorphometry, ploidy, circadian rhythm, cosinor.

Актуальность

Общеизвестно, что печень играет ведущую роль в осуществлении процессов метаболизма, и обеспечении динамического постоянства внутренней среды и устойчивости основных физиологических функций организма (гомеостаз). В реализации этих процессов печень может выступать как в качестве центрального, так и эффекторного органа [1].

Для всех живых систем, независимо от их сложности, характерно наличие ритмичности функционирования. Благодаря наличию ритмической структуры биопроцессов, обеспечивающей необходимый порядок их протекания, осуществляется функционирование организма на оптимальном уровне в каждый конкретный промежуток времени. Несмотря на наличие в биосистемах ритмов различной периодичности, наиболее значимыми биологическими ритмами для млекопитающих являются суточные или циркадные (ЦР) [28].

Изучение особенностей суточной ритмичности протекания различных процессов в нормальных физиологических условиях открывает значительные перспективы прогнозирования динамики состояния организма при острых и хронических заболеваниях и патологических состояниях, вызываемых различными этиологическими факторами как эндогенного, так и экзогенного происхождения. Сменяющие друг друга различные циклы отличаются по ряду параметров - фазе, амплитуде, длительности периода. При нормальном протекании процессов адаптации не происходит значительного воздействия стрессоров на циркадные ритмы. В противном случае ритмы организма утрачивают регулярность структуры, что в конечном итоге может привести к развитию десинхроноза [9].

Временная организация систем организма млекопитающих имеет эндогенную природу и обусловлена генетически, однако обладает значительной пластичностью и модулируется под действием периодических факторов внешней среды - синхронизаторов [5, 11, 30]. К числу наиболее значимых синхронизаторов циркадных биоритмов у млекопитающих относится световой режим. Его выраженное изменение может приводить к развитию в организме состояния десинхроноза, который является чрезвычайно сильным стрессогенным фактором и способен индуцировать развитие ряда заболеваний и патологических состояний, особенно в случае наличия уже имеющихся предпосылок к ослаблению адаптационных возможностей организма [10, 16, 19, 18, 27, 29].

Ритмическая активность печени также находится в тесной зависимости от светового режима, хотя важными для печени пейсмейкерами являются режим и состав питания [32].

В настоящее время могут считаться достаточно изученными циркадные ритмы желчеобразования, синтеза липидов, гликогенолиза и гликогеногенеза, репликации ДНК и некоторых других процессов в печени [4, 17, 25]. В то же время развитие некоторых метаболических нарушений (ожирение, артериальная гипертензия, резистентность к инсулину) нередко ассоциируют с нарушениями циркадной ритмичности [12, 31] и, напротив, функционирование гепатоцитов в строго определенном ритме помогает печени выполнять свыше пятисот своих функций [22]. Происходящие изменения функционального состояния гепатоцитов вполне закономерно находят отражение в модификации их строения, причем спектр морфологических реакций гепатоцита весьма широк - от незначительных изменений, идентифицируемых лишь на ультра- структурном уровне, до гибели клетки путем апоптоза и некроза [21, 26].

Нам представлялось важным изучить суточную динамику некоторых микроморфометрических показателей гепатоцитов крыс линии Вистар в возрасте 6 месяцев в условиях фиксированного светового режима. Исследовали динамику площади поперечного сечения ядра и клетки как показателя их активности и функционального состояния, а также изменения ядерно-цитоплазматического отношения (ЯЦО) посредством косинор-анализа, а также вариационные кривые площади и логарифмов объема ядер гепатоцитов в каждую из исследованных временных точек.

Материалы и методы

Исследование проведено на 40 самцах крыс линии Вистар в возрасте 6 месяцев, массой 300± 20 г. Животные были получены из питомника ФГБУН НЦБМТ ФМБА России «Столбовая».

Крыс содержали в стандартных лабораторных условиях в пластиковых клетках при постоянном свободном доступе к воде и пище в условиях фиксированного светового режима свет: темнота 10:14 часов с включением света в 8 часов и выключением в 18 часов в течение 3 недель.

Эвтаназию животных проводили в углекислотной камере в 9.00, 15.00, 21.00 и 3.00 спустя три недели после начала эксперимента. Печень извлекали и фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине с дальнейшей проводкой через спирты возрастающей концентрации (50%, 60%, 70%, 80% и 96%) и ксилол с последующей заливкой в гистологическую среду «Гистомикс» (БиоВитрум, Россия) Из образцов ткани печени, залитых в парафин, приготовляли серийные срезы толщиной 5-6 мкм на роторном микротоме МПС-2 (СССР). Окраску гематоксилином и эозином осуществляли по общепринятой методике. Окрашенные срезы заключали в монтирующую среду БиоМаунт (БиоВитрум, Россия).

Гистологические препараты изучали и описывали на цифровом микроскопе Nicon Eclipse 80I с применением цифровой фотокамеры Nicon DI-FI (Япония) с использованием окуляров х10, х15, объективов х4, х10, х20, х40, х100. С каждого исследованного препарата выполняли по 10 цифровых снимков случайно выбранных полей зрения при увеличении х400, х1000, в которых в дальнейшем осуществляли карио- и цитометрию, определяли суточную динамику ядра и клетки, оцениваемую по их площади и ядерно-цитоплазматическому отношению. При морфометрических исследованиях для определения площади поперечного сечения гепатоцитов и площади поперечного сечения их ядер использовали программу «ImageJ» (США) с соответствующими плагинами [6]. Измерения проводили в микрометрах после предварительной геометрической калибровки по оцифрованной с тем же увеличением шкале объект-микрометра. Рассчитывали ядерно-цитоплазматическое отношение в клетках по формуле: ЯЦО = Sя/Sц, где: Sя - площадь ядра клетки; Sц - площадь цитоплазмы.

Для этого массив данных разбивали на равные классовые интервалы в соответствии с правилами, изложенными в руководстве [23].

Для проведения плоидометрии парафиновые срезы окрашивали метиленовым-зеленым - пиро- нином G по Браше и в последующем обрабатывали РНК-азой. Плоидность гепатоцитов рассчитывали в единицах плоидности относительно оптической плотности результатов окраски диплоидных ядер малых лимфоцитов

Осуществляли микроморфометрию только одноядерных интерфазных гепатоцитов без признаков патологических изменений

Все эксперименты на животных проводили в соответствии с требованиями директивы EC86/609/EEC и Российского законодательства, регламентирующего эксперименты на животных.

Полученные результаты обрабатывали на персональном компьютере с использованием программы GraphPad Prism 6.0. Определяли показатели М±(т), где М - среднее арифметическое значение, а (m) - ошибка среднего арифметического Сравнение групп по одному признаку проводили с помощью критерия Манна-Уитни для независимых выборок (MannWhitney U-test). Статистически значимыми считались различия данных при р < 0,05.

Полученные цифровые ряды, характеризующие суточные колебания изучаемых физиологических ритмов животных, подвергали математической обработке, на основании которой вычерчивали групповые хронограммы Изучали форму хронограмм и рассчитывали среднесуточные значения.

Для статистического расчета амплитуды и акро- фазы ЦР выполняли косинор-анализ, являющийся международным, общепризнанным методом унифицированного исследования биологических ритмов с использованием программы CosinorENipse2006-1.1. Определяли наличие достоверного циркадного ритма, а также его акрофазу и амплитуду. Акрофаза - это мера пикового времени общей ритмической изменчивости за 24-часовой период. Амплитуда соответствует половине общей ритмической изменчивости в цикле. Акрофазу выражали в часах, а значения амплитуды - в тех же единицах, что и исследуемые переменные [7].

Результаты

В результате исследования установлено, что среднесуточная величина площади ядра гепатоцита составляла 41,79 ±8,13 мкм2, площадь гепатоцита равнялась 185,80±31,95 мкм2, а ЯЦО - 0,230 ±0,056. Выявлена суточная динамика исследованных параметров. Так, максимальный размер площади поперечного сечения ядер гепатоцитов регистрировали в 15.00, затем величина этого параметра значительно снижалась и достигала минимума к 21.00 (рис. 1). Результаты косинор-анализа свидетельствовали о наличии достоверного циркадного ритма площади поперечного сечения ядра гепатоцита (табл. 1).

Рис. 1Суточная динамика площади ядра гепатоцита Примечание: здесь и далее: *** - р < 0,0005, ** - р < 0,005, * - р < 0,05 - достоверность отличий от показателей 9 часов; ^ ^^ - р < 0,0005, ^ ^ - р < 0,005, ^ - р < 0,05 - достоверность различий между показателями соседних временных точек

Таблица 1

Амплитудно-фазовые характеристики исследованных микроморфометрических параметров гепатоцитов

При рассмотрении суточной динамики клетки был также выявлен достоверный циркадный ритм. При этом максимальное значение параметра, зарегистрированное в 9.00, в дальнейшем неуклонно снижалось в течение суток и достигало минимума к 3 часам (рис 2)

Рис. 2 Суточная динамика площади гепатоцита

Наряду с другими исследованными параметрами, ЯЦО также был свойственен достоверный ЦР (табл. 1). При этом максимальное значение ЯЦО фиксировали в 15.00, а минимальное - в 21.00 (рис. 3).

Рис. 3 Суточная динамика ЯЦО

На графике среднесуточного распределения ядер гепатоцитов по площади четко выделяется один пикядер (15,3% всех ядер), площадь которых расположена в диапазоне 35-40 мкм2 (рис. 4).

Рис. 4 Вариационная кривая среднесуточного распределения ядер гепатоцитов по площади

Вместе с тем, гистограммы распределения ядер по площади в исследованные временные точки существенно отличаются от среднесуточной вариационной.

Так, 9 часам соответствует пик, на который приходится 20% ядер, расположенных в диапазоне 50-55 мкм2. К 15.00 кривая распределения ядер гепатоцитов по площади становится наиболее пологой, а максимальное количество ядер с размером в диапазоне 55-60 мкм2 составляет 14% (рис. 5).

Рис. 5 Вариационная кривая распределения ядер гепатоцитов по площади в исследованные временные точки

К 21.00 кривая распределения площади ядер значительно смещается к оси ординат, а наибольшая доля ядер (23,5%) имеет площадь 35-40 мкм2 В 3 00 конфигурация кривой сохраняется, пик располагается в том же диапазоне площади, однако доля ядер по сравнению с предыдущей временной точкой уменьшается до 20,6%.

Анализ результатов плоидометрии показал, что среднесуточная плоидность исследованных гепатоцитов составила 4,47 ± 2,12п (рис. 6). Среди исследованных гепатоцитов нами выявлено 3 группы клеток - диплоидные, тетраплоидные и октаплоид- ные, процентное соотношение которых в популяции колеблется в течение суток (табл. 2).

Рис. 6 Печень крысы. Окраска метиленовым зеленым-пиронином G по Браше, х400

Таблица 2

Динамика плоидности гепатоцитов в течение суток

В частности, установлено, что в дневные часы доля диплоидных гепатоцитов минимальна, но она значительно возрастает в вечерние и ночные часы, причем происходит это, очевидно, за счет уменьшения доли октаплоидных ядер. Наименьшие суточные колебания испытывает доля тетраплоидных клеток.

Изучение характера среднесуточного колебания плоидности исследованных гепатоцитов показало, что максимальная плоидность нами выявлена в 15.00, а минимальная - в 9.00.

Заключение

Проведенное исследование свидетельствует о наличии достоверных циркадных ритмов исследованных параметров в печени самцов крыс линии Вистар в возрасте 6 месяцев.

Максимальные значения всех исследованных микроморфометрических параметров обнаружены в утренние и дневные часы. Акрофазы ритмов, установленные в результате косинор-анализа, также приходятся на дневные часы

Анализ суточных колебаний ядер гепатоцитов показал, что в течение суток кривая, характеризующая вариационный ряд, испытывает значительные изменения. Если в утренние и дневные часы она преимущественно сдвинута вправо, то в вечерние и ночные часы выявлено снижение среднего размера ядер, сопровождающееся сдвигом кариограммы влево

Как известно, печень обладает уникальным восстановительным потенциалом благодаря способности гепатоцитов к пролиферации, полиплоидизации и внутриклеточной регенерации [8, 15, 20].

Несмотря на то, что паренхима печени, представленная, в основном, совокупностью гепатоцитов, относится к типу обновляющихся растущих тканей, стволовые клетки в ней отсутствуют, а рост органа происходит за счет дифференцированных клеток, расположенных на периферии классических долек. Эти клетки постепенно мигрируют по печеночным пластинкам по направлению к центральным венам. Предполагается, что клетки периферии печеночных долек менее дифференцированы, чем гепатоциты их центров. По мере созревания эти клетки перемещаются к центру дольки, стареют и завершают жизненный цикл посредством апоптоза. В течение месяца гепатоциты перемещаются на расстояние, равное в среднем 0,3 диаметра печеночной дольки. Механизм миграции гепатоцитов, имеющих прочные адгезивные связи с соседними клетками, не вполне ясен. Предполагается, что перемещаются не отдельные гепатоциты, а их комплексы, т. е. печеночные пластинки. Не исключено, что в этот комплекс включены и клетки синусоидных капилляров, и клетки перисинусоидальных пространств [1, 2, 24]. С другой стороны, печень относится к органам с относительно низкой скоростью клеточного обновления. Показано, что, несмотря на большие значения пролиферативного пула (19,5%), в печеночной ткани наличествует низкое число клеток, синтезирующих ДНК и вступающих в митотическое деление, что связано с реализацией в ткани печени процесса поли- плоидизации [13]

Полиплоидизацию, в данном случае следует рассматривать в качестве эквивалента клеточного размножения гепатоцитов при росте печени, а её непосредственным механизмом считать эндомитоз, характеризующийся накоплением клеток в премито- тическом периоде клеточного цикла, ведущего к увеличению размеров клеток [14]

Анализ распределения логарифмов ядер гепато- цитов, отражающих их плоидность, также установил, что в течение суток наибольшей популяцией в печени крыс являются тетраплоидные клетки, содержащие около половины всех исследованных ядер и превалирующие во все исследованные временные точки. В то же время ди- и октаплоидные клетки, составляя в среднем в течение суток приблизительно по четверти всех гепатоцитов, испытывают более выраженную динамику. В 9.00 и 15.00 доля октаплоидных гепатоцитов значительно превышает долю диплоидных, но картина меняется на противоположную в 21.00 и 3.00.

Таким образом, в результате проведенного исследования изучена суточная динамика микро- морфометрических параметров, проиллюстрированы значительные колебания их величин относительно среднесуточных значений. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости учета хронобиологического компонента при проведении исследований печени

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Литература

1 . АруинЛ. И. Печень. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций / под ред. Д. Саркисова. М.: Медицина, 1987. С. 249-259.

2 . Мяделец О. Д., Лебедева Е. И. Дегенеративные и регенераторные процессы в печени белых крыс при моделировании токсического цирроза. Изменения овальных клеток // Журнал Гродненского государственного медицинского университета. 2017. № 3.С. 294-230.

3 . The liver: biology and pathobiology / Arias I. M., Alter H.J., Boyer J. L., Cohen D. E. et al. (eds. ). Wiley-Blackwell. 2020. 1144 p

4 . Balsalobre A. Clock genes in mammalian peripheral tissues // Cell and tissue research. 2002. Vol. 309. № 1. P 193-199.

5 . Boyce P R. Human factors in lighting (3rd edition). CRC Press, Boca Raton, FL 2014. 703 p.

6 . Broeke J., PerezJ. M.M., Pascau J. Image Processing with Image J, 2nd Edition: Extract and analyze data from complex images with ImageJ. Birmingham, Mumbai: Packt Publishing Ltd. 2015. 256 p

7 . Cornelissen G. Cosinor-based rhythmometry // Theoretical Biology and Medical Modelling. 2014. Vol. 11. P 16.

8 . Fausto N. Liver regeneration // Journal of hepatology. 2000. Vol. 32 (Suppl. 1). P 19-31.

9 . Ferrer C. F. Jr., Bisson R. U., French J. Circadian rhythm desynchronosis in military deployments: a review of current strategies // Aviation, space, and environmental medicine. 1995. Vol.66. №6. P 571-578.

10 . Fonken L. K., Workman J. L., Walton J. C. et al. Light at night increases body mass by shifting the time of food intake // Proceedings of the National Academy of Sciences. 2010. Vol. 107. № 43.P 18664-18669.

11 . Foster R. G., RoennebergT Human responses to the geophysical daily, annual and lunar cycles // Current biology. 2008. Vol. 18. N 17. P 784-794.

12 . Froy O. Metabolism and circadian rhythms - implications for obesity // Endocrine reviews. 2010. Vol. 31. № 1. P 1-24.

13 . Gentric G., Desdouets C. Polyploidization in liver tissue // The American journal of pathology. 2014. Vol. 184. № 2. P 322331

14 . Gentric G., Desdouets C., Celton-Morizur S. Hepatocytes polyploidization and cell cycle control in liver physiopathology// International journal of hepatology. 2012. Vol. 2012. P. 282430.

15 . Gilgenkrantz H., Collin de l'Hortet A. Understanding Liver Regeneration: From Mechanisms to Regenerative Medicine // The American journal of pathology. 2018. Vol. 188. № 6. P. 13161327.

16 . Ha M., Park J. Shiftwork and metabolic risk factors of cardiovascular disease // Journal of occupational health. 2005. Vol. 47. № 2. P. 89-95.

17 . Jagannath A., Taylor L., WakafZ., Vasudevan S. R. et al. The genetics of circadian rhythms, sleep and health // Human molecular genetics. 2017. Vol. 26 (R2). P. 128-138.

18 . Jasser S. A., Blask D. E., Brainard G. C. Light during darkness and cancer: relationships in circadian photoreception and tumor biology // Cancer Causes & Control. 2006. Vol. 17. № 4. P. 515523

19 . Knutsson A. Health disorders of shift workers // Occupational medicine. 2003. Vol. 53. № 2. P. 103-108.

20 . LacroixB., MaddoxA.S.Cytokinesis, ploidy and aneuploidy // The Journal of pathology. 2012. Vol. 226. № 2. P. 338-351.

21 . Li W., Li L., Hui L. Cell Plasticity in Liver Regeneration // Trends in Cell Biology. 2020. Vol. 30. № 4. P. 329-338.

22 . MukherjiA., Bailey S. M., StaelsB., BaumertT F The circadian clock and liver function in health and disease // Journal of hepatology. 2019. Vol. 71. № 1. P. 200-211.

23 . Pagano M., Gauvreau K. Principles of biostatistics. CRC Press, 2018 584 p

24 . Patch, D., & Luong, T V. (2018). Biopsy of the Liver. Sherlock's Diseases of the Liver and Biliary System, 39-52.

25 . Reinke H., Asher G. Circadian Clock Control of Liver Metabolic Functions // Gastroenterology. 2016. Vol. 150. № 3. P. 574-580.

26 . Shiojiri N., Kametani H., Ota N., Akai Y. et al. Phylogenetic analyses of the hepatic architecture in vertebrates // Journal of anatomy. 2018, Vol. 232. № 2. P. 200-213.

27 . Stevens R. G. Artificial lighting in the industrialized world: circadian disruption and breast cancer // Cancer Causes & Control. 2006. Vol. 17. № 4. P. 501-507.

28 . Vitaterna, M. H., Takahashi, J. S., & Turek, F. W. (2001). Overview of circadian rhythms // Alcohol Research & Health. 2001. Vol. 25. № 2. P. 85.

29 . Wang, F., Zhang, L., Zhang, Y, Zhang, Bet al. Meta-analysis on night shift work and risk of metabolic syndrome // Obesity reviews. 2014 Vol. 15. № 9. P. 709-720.

30 . WehrT. A. Photoperiodism in humans and other primates: evidence and implications // Journal of Biological Rhythms.2001. Vol.16.№4.P.348-364.

31 . Zimmet P., Alberti K. G. M. M., Stern N., Bilu C. et al. (2019).

32 The Circadian Syndrome: is the Metabolic Syndrome and much more! // Journal of internal medicine. 2019. Vol. 286. № 2. P. 181-191.

33 . Zwighaft Z., Reinke H., Asher G. The Liver in the Eyes of a Chronobiologist // Journal of Biological Rhythms. 2016. Vol. 31. №2. P. 115-124.

Сведения об авторах

Чернов Игорь Алексеевич, к. м. н., доцент, заведующий кафедрой патологической анатомии и судебной медицины ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России, г. Тюмень.

Кириллов Юрий Александрович, д. м. н., ведущий научный сотрудник лаборатории клинической морфологии ФГБНУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека», г. Москва; профессор кафедры патологической анатомии и судебной медицины ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России, г. Тюмень.

Козлова Мария Александровна, младший научный сотрудник лаборатории экспериментальной биологии и биотехнологии научно-образовательного центра ГОУ ВО МО «Московский государственный областной университет», г. Москва.

Макарцева Людмила Андреевна, младший научный сотрудник лаборатории экспериментальной биологии и биотехнологии научно-образовательного центра ГОУ ВО МО «Московский государственный областной университет», г. Москва.

Арешидзе Давид Александрович, к. б. н., директор научно-образовательного центра ГОУ ВО МО «Московский государственный областной университет»; заведующий лабораторией экспериментальной биологии и биотехнологии научно-образовательного центра ГОУ ВО МО «Московский государственный областной университет», г. Москва.

Штемплевская Евгения Вадимовна, ординатор ФГБНУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека», г. Москва.

Размещено на Allbest.ru