Иммунитет у свиней

Размещено на http://www.allbest.ru/

1. Общая характеристика работы

1.1 Актуальность темы работы

Длительность и напряжённость иммунитета против РРСС и ПВИС у проверяемых и основных свиноматок предопределяет защиту от инфекции в случае попадания возбудителей в производственные помещения свинокомплексов. Обеспечение протективной защиты против этих инфекций у свиноматок позволяет предотвратить инфицирование поросят как в натальный, так и в постнатальный период жизни.

1.2 Связь работы с научными программами, темами

Работа выполнялась в 2006-2008 годах на кафедре микробиологии и вирусологии ВГАВМ в разделе темы «Изучение вируса парвовирусной инфекции свиней и возбудителя репродуктивно респираторного синдрома свиней и методы профилактики болезней свиней».

1.3 Цель и задачи исследования

Цель исследований: изучить динамику формирования специфического иммунитета у ремонтных свинок и основных свиноматок, привитых инактивированной бивалентной эмульсионной вакциной против репродуктивно респираторного синдрома свиней и парвовирусной инфекции свиней.

Задачи исследования:

1. Определить иммунный статус ремонтных свинок и основных свиноматок.

2. Исследовать динамику формирования специфического иммунитета против ПВИС у ремонтных свинок, привитых инактивированной бивалентной эмульсионной вакциной против репродуктивно респираторного синдрома свиней и парвовирусной инфекции свиней.

3. Исследовать динамику формирования специфического иммунитета у основных свиноматок против ПВИС, привитых инактивированной бивалентной эмульсионной вакциной против репродуктивно респираторного синдрома свиней и парвовирусной инфекции свиней.

4. Исследовать динамику формирования колострального иммунитета у поросят полученных от основных свиноматок, привитых инактивированной бивалентной эмульсионной вакциной против репродуктивно респираторного синдрома свиней и парвовирусной инфекции свиней.

1.4 Методология и методы проведённого исследования

Исследования сывороток крови на наличие специфических антител против вируса РРСС и ПВИС полученных от свиней разных половозрастных групп проводились с помощью коммерческих наборов ИФА «РРСС-серотест» и РТГА производства НПО «Нарвак» г. Москва.

1.5 Научная новизна, практическая и экономическая значимость полученных результатов

Полученные результаты позволят усовершенствовать методы специфической профилактикия для борьбы с РРСС и ПВИС в свиноводческих хозяйствах и позволят существенно снизить финансовые затраты на приобретение биологических препаратов.

2. Основная часть

2.1 Обзор литературы

Патология репродукции свиней связана в первую очередь с инфекционными агентами [29].

Инфекционные агенты, вызывающие патологию воспроизводства свиней, подразделяют, как правило, на три группы [37]. В первую группу входят обычные микроорганизмы, распространенные практически во всех свиноводческих хозяйствах. Они проявляют патогенное действие у свиноматок с пониженной резистентностью. В эту группу микроорганизмов входят эшерихии, коринебактерии, стрепто- и стафилококки, пастереллы, микобактерии, листерии, микоплазмы и др. Полноценное кормление и соблюдение технологии производства - основа профилактики патологии репродукции свиней, связанной с инфекционными агентами первой группы.

Вторая группа включает инфекционные агенты, широко распространенные во многих свиноводческих хозяйствах и против которых развивается хороший иммунитет. В эту группу входят энтеровирусы свиней 4 серотипов (1, 3, 6, 8) и парвовирус свиней. Эти вирусы нарушают физиологический статус свиноматок, и после проникновения через плаценту вызывают гибель эмбрионов и плодов. Патогенное действие вирусов проявляется только в том случае, если они проникают через плаценту и поражают плоды в период их иммунологической ареактивности (до 70-дневного возраста). Аборты у свиноматок, как правило, не происходят.

В третью группу входят инфекционные агенты, вызывающие тяжелые репродуктивные нарушения. К этой группе относят вирусы классической чумы, болезни Ауески и репродуктивно-респираторного синдрома свиней, а также бруцеллы и лептоспиры. Эти инфекционные агенты вызывают патологию воспроизводства и нарушения общего состояния организма свиней. Клинически у животных отмечают повышение температуры тела, отсутствие аппетита и аборты. Плоды, погибшие до 55-60-дневного возраста, как правило, мумифицируются, а погибшие в более позднем возрасте подвергаются аутолизу - разложению под влиянием гидролитических ферментов. Аномалии у плодов развиваются после поражения вирусом классической чумы свиней [8,39,48].

Среди многочисленных болезней животных - инфекционные - причиняют самый серьезный экономический ущерб, особенно странам с высокоразвитым свиноводством. Поэтому специфическая профилактика многих инфекционных болезней свиней достигла исключительно широких масштабов и стала неотъемлемой частью технологии ведения свиноводства, особенно на промышленной основе [52,55]. В последние 15 лет во многих странах мира с развитым свиноводством были обнаружены два новых массовых вирусных заболевания, причиняющих ощутимый экономический ущерб. Во-первых, это репродуктивно респираторный синдром свиней (РРСС), впервые зарегистрированный в США и Канаде в 1987 г. и в большинстве стран Европы и Азии в 1990-1992 годах [55]. Во-вторых, это парвовирусная инфекция свиней [1]. В крупных свиноводческих хозяйствах эти заболевания нередко протекают совместно [7,8,25,35,39,41]. В конце 80-х годов двадцатого столетия в США начали накапливаться сообщения о болезни неизвестной этиологии, в которых основное внимание уделялось клиническому проявлению болезни. Ветеринарные специалисты полагали, что наблюдаемый ими синдром уникален вследствие своей тяжести, продолжительности, комбинации признаков нарушения репродуктивной и респираторной функций. Поскольку этиология оставалась неизвестной, синдром назвали «таинственная болезнь свиней» (Mystery swine disease) [52,54,55]. Использовали также и ряд других названий этой болезни: «синее ухо», «голубой аборт», «энзоотический аборт свиней», «инфекционный поздний аборт свиней», «SMEDI-подобный синдром», «бесплодие и респираторный синдром свиней» [65, 56, 57].

В июле 1991 года исследователи Центрального ветеринарного института в г. Лелистад (Голландия) сообщили, что им удалось выделить специфический возбудитель - вирус РРСС. Голландским ученым удалось установить истинную этиологическую природу этой болезни, выделив вирус, названный ими «агент Лелистад», в культурах легочных макрофагов свиней [52]. В настоящее время установлено, что возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, который входит в род артеривирусов [14,48,52,55]. Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС, «синее ухо, голубой аборт», эпизоотический поздний аборт свиней) - вирусное контагиозное заболевание главным образом свиноматок, характеризующееся абортами, наличием мертворожденных поросят, преждевременными опоросами или задержкой опороса, респираторными нарушениями, появлением окрашивания кожи ушей и других органов. Болезнь отличается большим разнообразием признаков, определяемых во многом общим состоянием здоровья животного [3,7,33,]. При интродукции в неинфицированное стадо инфекция причиняет большой экономический ущерб, но скоро переходит в умеренную или даже инаппарантную форму. В эндемичной форме вирус продолжает долгое время циркулировать в стаде. В течение многих недель персистирует виремия. Вирус предрасположен к макрофагам и не размножается в большинстве клеточных линий, отличается чрезвычайной генетической и АГ - вариабельностью [6,10,11,14,22,23,26]. Первоначально это заболевание получило название «таинственная болезнь свиней» В 1991 г. были опубликованы сообщения о появлении аналогичного заболевания свиней в странах Европы. При этом ученым из Центрального ветеринарного института в Нидерландах был выделен новый вирус, который назвали «вирус Лелейстад». Вирус Лелейстад это РНК-содержащий, оболочечный вирус, отнесен к роду артеривирусов. Для исключения разночтения этой болезни в различных странах мира, сессия МЭБ (апрель 1991 г.) и 2-й Международный симпозиум в США (1992 г.) приняли единое название - репродуктивный респираторный синдром свиней (РРСС), или PRRS в латинской транскрипции [34,36].

В настоящее время можно говорить о панзоотии РРСС. Многие страны не могут лабораторно диагностировать болезнь или не хотят сообщать о ее появлении. [7,13,47,52,53,55,56,57]. На американском континенте о болезни сообщали США и Канада. В США существуют четкие статистические данные по болезни. Известны данные о её наличии в 19 штатах [55]. Cообщается о ретроспективном выявлении 364 стад животных, положительно реагирующих на РРСС на основании серологических исследований только в 7-ми свиноводческих штатах (Айова, Иллинойс, Индиана, Мичиган, Небраска и Северная Каролина). В Канаде сообщения подтверждены серологически в 2-х штатах: Онтарио и Квебек. В Европе наибольшее распространение болезни отмечали в свиноводческом поясе, охватывающем западные земли Германии, Нидерланды и Бельгию [52,53,54,55,56,57]. В Бельгии наибольшее количество вспышек болезни регистрировали в апреле 1991 г. В свиноводческих хозяйствах Франции РРСС - новое заболевание, вызываемое у свиней новым вирусом. Проявляется разнообразной симтоматологией и сопровождается абортами, мертворождением и гибелью поросят, а также гриппоподобными проявлениями. Во Франции РРСС регистрировали на 169 племенных фермах в период с ноября 1991 г. по май 1992 г., главным образом, в провинции Бретань. В Англии болезнь появилась в мае 1991 г. и широко распространилась в графствах Хамберсайд и Северном Йоркшире, а в последующем и в Шотландии. Болезнь регистрировалась также в Дании, Испании, Голландии и на о. Мальта. Обнаружены специфические AT к возбудителю в пробах крови свиней, поступившей в диагностические центры Европы из Италии и Польши.

Возбудитель болезни - РНК-содержащий вирус размером 45-65 нм. [34,36]. Он имеет наружную оболочку и чувствителен к липидным растворителям. По физико-химическим свойствам напоминает представителей семейства тогавирусов, рода артеривирусов (вирус артериита лошадей). Вирусы РРСС, выделенные в Европе (агент Лелистад) и в США (VR-2332), несколько отличаются по биологическим свойствам, хотя и имеют перекрестные серологические связи [45,46].

В культурах легочных макрофагов вирус РРСС вызывает ЦПИ в виде округления клеток с последующим пикнозом и отделением от монослоя в течение 2-4 сут. Вирус содержит РНК и оболочку, способен реплицироваться в макрофагах и проходить через плаценту, заражая плод, может длительно персистировать в организме животного и вызывать повторно иммуносупрессию. Передается при прямом контакте и респираторно. Быстро распространялся на фермах. Вирус РРСС проникает трансплацентарно, на что указывает обнаружение возбудителя и специфических AT у мертворожденных плодов и живых ослабленных поросят до первого приема молозива. Вирус чувствителен к изменению рН среды. Оптимум рН от 5 до 7. Обследовано 4 свиноводческие фермы на наличие AT к вирусу РРСС с помощью ИФА в течение 12 нед после опороса [47]. Титр AT у свиноматок сопоставляли с титром материнских AT у поросят в возрасте 2 нед. Материнские AT, выявляли у поросят в течение 4-10 нед. ВНА обнаружили через 12 дней после заражения или 18 дней после контакта с больными животными. Максимальных титров они достигали на 40-50-е сутки после заражения и сохранялись до 120 дней (срок наблюдений) [16,17].

Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных макрофагах (АМФ) поросят [26]. Для получения АМФ используют 4-6-нед поросят, свободных от патогенной микрофлоры ферм. АМФ выделяли 2-кратным промыванием отпрепарированных и изолированных легких забуференным физраствором, содержащим антибиотики (пенициллин, стрептомицин, неомицин и амфотерицин), который нагнетали через трахею с помощью автоматического шприца с иглой (около 500 мл). Выбор жидкости из легких, содержащей АМФ, проводят обычно шприцами через то же отверстие. Суспензию клеток из легких центрифугировали при 1500 обор. - 15 мин. При наличии эритроцитов к осадку добавляли 0,83%-ный р-р хлорида аммония и после 5-мин инкубации при комнатной температуре клетки вновь центрифугируют при тех же условиях. Заражение вирусом РРСС проводили через 2-24 ч после 2-кратной отмывки питательной средой и антибиотиками. Учет цитотоксического действия вируса проводят через 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Культуральную жидкость используют в качестве AT ELISA. Титр макрофагального вируса составлял 1:8-1:16. Таким образом, АМФ могут быть использованы для препаративной наработки вируса в исследовательских целях, изготовления диагностикумов и обнаружения вируса в патологических материалах. Чувствительными к вирусу РРСС являются первичная культура АМФ свиней и клон клеток MARC-145 (клоновый вариант, полученный из перевиваемой культуры клеток МА-104 почки африканской зеленой мартышки). Максимальное накопление вируса отмечали при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток/1 мл с использованием фетальной сыворотки и снятия монослоя не позднее 3-4-х суток [24].

У свиноматок болезнь начинается с временного отказа от корма или худшей его поедаемости [40,42]. В период абортов отмечают как повышенную до 41,5°С, так и пониженную температуру тела. У отдельных животных наблюдают респираторные нарушения и у 1-5% - голубовато-красное окрашивание кожи ушей, пятачка и вульвы. Существенным признаком заболевания супоросных свиноматок периода, близкого к опоросу, являются аборты и преждевременные опоросы, возникающие через 2-3 нед после обнаружения первых симптомов болезни. По данным английских ученых, пораженные свиньи на первой стадии болезни проявляют признаки инфлюэнцы, в частности, высокую температуру тела и тяжелое дыхание. Позднее ярко-красные пятна появляются по всему телу свиньи. Спустя некоторое время окраска пятен изменяется, и они приобретают синий цвет [25,38]. В первые 2 недели болезни, аборты могут составлять 60-70%, через 3 нед - 50 и через 18 нед - 10%. В естественных условиях клиника может значительно варьировать от стада к стаду и не коррелировать с основной тяжестью репродуктивных нарушений. В отдельных хозяйствах количество абортировавших свиней на последней стадии супоросности достигает 100%.

При анализе 214 пораженных хозяйств в округе Мюнстерленд в Германии [52] установлено, что 37% абортов произошло на 100-112 дни, 49% - на 113-11 дни 14% - на 117-120 дни супоросности. Если рассматривать крайние пределы нормальной супоросности в 113-117 дней, то запоздалые опоросы до 120 дней могут свидетельствовать о гибели плодов в более раннем периоде, обусловленных другими инфекциями свиней с репродуктивным синдромом, такими как парвовирусная или энтеровирусная. Однако, как правило, мумификации плодов при остром течении РРСС не наблюдается. В отдельных случаях у свиноматок наблюдали залеживание, шаткую походку, паралич задних конечностей или косую постановку головы. Гибель свиноматок не превышает 2%. После абортов свиноматки довольно быстро выздоравливают и только у отдельных из них отмечали «послеродовые схватки». Свиноматки повторно приходят в охоту, однако сообщается об удлиненном сроке холостого периода. У свиноматок, опоросившихся в оптимальные сроки супоросности (114,7±1,7 дн) в остром периоде болезни до 100% поросят могут быть мертворожденными. Немецкие авторы [52,56], обработав большое количество статистических показателей пораженных хозяйств, установили, что от больных свиноматок в пометах насчитывали 30-40% мертворожденных, 30% слабых и 30% внешне здоровых поросят. У мертворожденных поросят наблюдали выпуклообразную форму головы, конъюнктивиты и поражение роговицы глаз, подкожные отеки. Слабые поросята массой до 1 кг издают ужасающий визг и стенания, задние конечности их часто вытянутые, и они не могут нормально встать на ноги. При хроническом течении наблюдают относительное благополучие супоросных маток. Спустя 1-1,5 месяца возможно рождение на неблагополучной ферме здоровых поросят, но через некоторое время вновь отмечают аборты [18]. В откормочных хозяйствах болезнь протекает с рядом особенностей: основные клинические признаки связаны с поражением органов дыхания.

При вскрытии наблюдают кровоизлияния и отеки подкожной клетчатки, увеличенное содержание жидкости в перикардиальной и брюшной полостях, дистрофию печени и изменения в легких. Они кровенаполнены и чаще имеют мозаичную окраску. Слаборазвитые поросята, как правило, гибнут в первые недели жизни. Через 4-6 нед заболевание начинает приобретает хроническое течение; наблюдается задержка роста и развития, а также повышенная чувствительность к секундарным инфекциям. У отдельных животных отмечали негнойные энцефалиты и миокардиты [12, 20,21,38]. Правда, у большинства поросят их не обнаруживали. В целом патологоанатомические признаки не характерны и напоминают таковые при бактериальных инфекциях. У маток с поражением ушей признаков миокардита не отмечали. У больных животных в США процент поражения сердечной мышцы значительно выше, чем в Германии. Нередко болезнь протекала в смешанной форме, одновременно с гриппом, БА, парвовирусной инфекцией [39].

Korenc [54] проводил опыты по заражению культуральным вирусом РРСС 8-ми свиноматок на 84-й дн супоросности. Только у 2-х свиноматок наблюдали 1-дн повышение температуры тела до 39,6°С. У 2-х - покраснение кожи ушей и учащенное дыхание. Одна свиноматка абортировала на 10-й дней супоросности и принесла 7 мертвых и 4 живых слаборазвитых поросят. Две другие опоросились на 116-й и 117-й дн супоросности и в пометах обнаружили 10 живых и 19 мертворожденных поросят, из которых 5 были мумифицированными Оставшиеся 5 свиноматок опоросились на 113-115-и дн супоросности без репродуктивных нарушений. В пометах было 58 поросят, многие из которых были слаборазвитыми и 26 из них (40%) пали в течение 1-й нед жизни Вирус РРСС был выделен от 31 поросенка (30% инфицированности). При интратрахеальном и внутримышечном заражениях на 2-5-е сут у инфицированных подсвинков отмечалось незначительное (на 0,5-1,5°С) повышение температуры тела. У 2-х животных на 10-12-й день после заражения отмечен кашель. Других клинических признаков болезни не выявлено. Повышение количества лейкоцитов в крови было установлено через сутки после заражения животных и к 4-му дню их уровень достигал 28-30 тыс/мл и сохранялся в течение 2-3 нед. У подсвинка, находившегося в контакте с зараженными животными, повышение температуры тела отмечено на 18-19-е, а увеличение числа лейкоцитов на 6-е сутки после совместного содержания. На 5 и 14 день после заражения было убито по одному животному. При патологоанатомическом исследовании у них отмечали единичные очажки острой бронхопневмонии [21]. В обоих случаях из легких и легочных альвеолярных макрофагов выделен вирус РРСС. В остальных внутренних органах подопытных животных видимых изменений не обнаружено. При интраназальном заражении вируссодержащей суспензией поросят 4-нед возраста температура тела их повышалась до 40,5°С, удерживаясь на этом уровне 3 дн, отмечалось учащенное дыхание, отказ от корма и общее угнетение Подкожное и внутримышечное введение вируссодержащего материала не вызывало у взрослых белых мышей никакой видимой реакции. Однако та же суспензия после внутримозгового введения белым мышам вызывала появление нервнопаралитических признаков и их гибель. С 3-го пассажа гибель мышей наступала через 24 ч Вирус №9-181-93, адаптированный к белым мышам, вызывал специфическое ЦПД. В 1995 г. в Курской области был выделен вирус РРСС, который не вызывал ГА эритроцитов и Гад. У животных, зараженных европейским стандартным штаммом «Лелистад» вируса РРСС, клинических признаков не отмечалось.

С эпизоотической точки зрения важен путь распространения инфекции. В частности, в декабре 1990 г. болезнь зарегистрирована в Нидерландах. Свиноводство в этой стране - одно из наиболее концентрированных в мире, и естественно, болезнь очень быстро распространилась респираторным путём, весьма возможно, аэрозольно. Предположительно, факторами передачи возбудителя могли быть и птицы, а также люди и автомобили (если эти объекты были в контакте с инфекционным агентом) [40].

Большинство сельскохозяйственных выставок и ярмарок по продаже свинопоголовья в 1991 г. в Великобритании были запрещены. По данным госветслужбы этой страны в настоящее время нет доказательств распространения болезни воздушным путём, и все случаи заноса возбудителя связаны с передвижением поросят. Вирус может персистировать в заражённых стадах свиней до полугода. Это может быть связано с отсутствием сероконверсии у отдельных явно инфицированных животных. Отдельные заражённые свиноматки могут быть источником заражения для здоровых животных в течение 99 дней. Английские исследователи считают, что стада свиней остаются заражёнными в течение 2-х мес после прекращения появления явных клинических признаков болезни. Отмеченное прямо связанно с производственными показателями поражённых РРСС племенных ферм свиней. На небольших фермах на 50-200 свиноматок в период острого течения болезни недополучают более 50% поросят.

В 1993 г. в Голландию [были направлены 40 проб сывороток крови от свиноматок с нарушениями репродуктивной функции из 10 хозяйств для исследования на наличие AT к вирусу репродуктивного и респираторного синдрома. Во всех 10 обследованных хозяйствах обнаружены положительно реагирующие свиноматки. Из 40 исследованных проб сывороток крови 38 оказались положительными, причем большая часть сывороток (72,5%) содержала специфические AT в высоких титрах (1:640 и выше). Высокий процент положительных сывороток свидетельствует о широкой циркуляции вируса в исследуемых свиноводческих хозяйствах. Вирус РРСС, вероятно, обладает иммунодепрессивными свойствами. Американскими исследователями [52] установлено уменьшение числа альвеолярных макрофагов и нарушение их функции у инфицированных поросят. Макрофаги играют важную роль в индукции AT образования - они передают агент Т- и В-лимфоцитам. Развитие респираторного синдрома, по-видимому, обусловлено вторичными бактериальными инфекциями после размножения вируса в альвеолярных макрофагах и нарушения иммунной системы лёгких [22].

Диагноз на РРСС ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований [16,17,19,30,31]. Для выделения вируса используют сыворотку или плазму крови больных и павших поросят, пробы лёгких, селезёнки, плевральной и перикардиальной жидкости [4,5,24]. Выделение вируса проводят в культурах альвеолярных макрофагов, полученных от молодых (6-8 недель) СПФ-поросят. Успех голландских учёных [22,53] объясняется прежде всего тем, что они использовали эту культуру, в то время как культуры клеток РК-2, РК-15 и К-6 оказались не чувствительными для выделения возбудителя. Идентификацию возбудителя проводят по физико-химическим и серологическим свойствам. Из серологических методов используют вначале непрямой метод ИФ и прямой метод ИФА В США для идентификации возбудителя использовали РН, разработанную с этим вирусом в университете штата Миннесота, а также ИФ и ИФА, разработанные в национальной лаборатории Ames в шт. Айова. Во Франции разработан непрямой метод ИФА для обнаружения специфических AT [1,2,14,20. Сероконверсия в диагностических титрах (1:20 и выше) развивается к 14-му да после экспериментального инфицирования, а к 28-му дн титры антител накапливаются до 1:1280. Разработана методика очистки и концентрирования культурального вируса РРСС, репродуцированного в культуре клеток МАРС-145 и FL [32]. Предварительно вируссодержащая суспензия очищается от балластных белков низкоскоростным центрифугированием, затем концентрируется 2-кратным осаждением ПЭГ мол м. 6000 и очищается высокоскоростным центрифугированием (70000 мин-1 в течение 6 ч). В градиенте плотности CsCl-сахарозы материал концентрировали в 100 раз. Очистка составляла 96,5%. Все этапы подготовки препаратов контролировали по активности в ИФА. Высокоспецифичные активные препараты АГ вируса РРСС используют для изготовления AT диагностикумов для ИФА [23]. Метод непрямой ИФА более простой и его можно использовать в полевых условиях. Достаточно исследовать из стада 10 проб сывороток, (лучше парных), чтобы с уверенностью поставить лабораторный диагноз [31].

В Англии практикуется сбор из 12-15 пар сывороток от подозреваемого стада. Служба диагностики на РРСС в этой стране действует с апреля 1992 г. Исследовано уже 118 стад и было выявлено 31 стадо, положительно реагирующее на РРСС. При серологическом исследовании ложноположительные реакции, как правило, отсутствуют, хотя ложноотрицательные являются обычными и достигают 25%. В РФ разработан твердофазный ИФА, для проведения диагностики РРСС, составлены наборы диагностикумов для выявления вируса РРСС и специфических AT [31,41,50,51]. МонАТ к вирусу РРСС могут быть использованы как для выявления АГ вируса РРСС в патологическом материале, так и для определения AT в сыворотках крови свиней, так как они дают более специфическую реакцию по сравнению с полиАТ [23].

При дифференциальной диагностике необходимо исключить вирусные и бактериальные болезни, протекающие с нарушениями в репродуктивных системах, а также отравления. Исключают прежде всего АЧС, КЧС, БА, грипп свиней, ЭМК, парвовирусную болезнь, ТГЭ, лептоспироз и хламидиоз [9,39]. Характерной особенностью этой болезни является обострение вторичных и хронически протекающих инфекций, возбудители которых могут скрытно циркулировать в пораженных стадах свиней. Это ещё более усложняет проведение лабораторной дифференциальной диагностики [42,43,44].

После переболевания большая часть свиноматок оказываются иммунными к повторному инфицированию. AT к вирусу РРСС, выявляемые в ИФА, могут персистировать в течение года. При достаточно пессимистичном отношении к созданию средств специфической профилактики РРСС появляются предпосылки решения данного вопроса [15,27,28,49]. Так выдан патент ЕРА 95200877.9 Akzo Nobel (Нидерланды) на европейские штаммы вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней, используемые для создания вакцин. О механизме развития иммунитета известно крайне мало. В Англии также ведется разработка вакцин.

Меры борьбы. Специфических средств лечения при РРСС нет. Отсутствуют также средства специфической профилактики. Лабораторная диагностика болезни затруднена прежде всего из-за необходимости проведения большого спектра дифференциальных диагностических исследований. Поэтому при возникновении болезни в ранее благополучной стране необходимо принятие решений проблемы в национальном масштабе: полностью запретить вывоз свиней, туш и навоза из подозрительных ферм и свинохозяйств; наложить ограничения по передвижению свинопоголовья в течение 8 нед после последнего случая выздоровления. Свинопоголовье, предназначенное на экспорт, надо перевозить в специально оборудованных транспортных средствах. Подозрительный инфицированный материал (плаценту, плоды и мертворождённых поросят) необходимо уничтожать. Убирать, дезинфицировать помещения и места опороса свиноматок. Обязательно должны быть дезинфицированы коврики на входе свиноводческих помещений.

Парвовирусная инфекция свиней (ПВИС) является одной из причин наносящих большой ущерб свиноводству [39]. Она рассматривается как болезнь, которой подвержены только супоросные свиноматки, в период до 60 дней супоросности. ПВИС является одной из основных причин появления свиноматок, неоднократно приходящих в охоту. Вирус вызывает гибель эмбрионов и появление в опоросах мумифицированных плодов различного возраста. Заболевание вызывается ДНК вирусом, относящимся к семейству Parvoviridae [34]. Вирус содержит одноцепочечную молекулу нуклеиновой кислоты. Для репродукции этого вируса требуется наличие высокого уровня митотического деления. Первый представитель семейства Parvoviridae был описан Килхэмом и Оливьером [34,36] в 1959 году и получил название латентный вирус Килхэма. Вирионы парвовирусов представляют собой мелкие безоболочечные икосаэдрические частицы диаметр которых варьирует от 17 до 28 нм, состоящие из 32 капсомеров диаметром 2-4 нм. Поверхность вирионов гладкая - без углублений и выростов. Плавучая плотность в хлориде цезия составляет 1,38 - 1,45 г./см3. Геном парвовирусов - односпиральная ДНК размером 1,4-1,7х106 Да. Репродукция парвовирусных нуклеиновых кислот происходит в ядре, фабрики сборки вирионов могут располагаться как в ядре, так и в цитоплазме зараженных клеток. Парвовирусы термостабильны, устойчивы к действию липидораствори-телей и кислой среде.

В состав вирусной частицы входят три полипептида - VP1, VP2, VP3 c молекулярными массами 83х103, 65х103 и 60-62х103 Да.

В состав вирионов парвовирусов входят одноцепочечные молекулы ДНК, но в различных вирионах могут присутствовать нити разной полярности - как «+», так и» -». В относительном составе популяции «-» - цепь может отсутствовать или иметься в количестве не превышающем таковое «+» - цепи. При выделении ДНК одноцепочечные молекулы могут спонтанно гибридизоваться, давая двуспиральные молекулы. ДНК аденонезависимых парвовирусов неинфекционна, но нуклеиновой кислотой аденосателлитных парвовирусов можно трансфецировать клетки, зараженные аденовирусом - помощником, в результате чего образуется полноценное потомство аденосателлита. Парвовирусы для которых совершенно четко установлен вид животного-хозяина могут вызывать переболевание той или иной тяжести у других родственных или не родственных видов, например вирусы мышей и крыс (Н1, Н3, RV, Х14 и МВМ) при введении их хомякам вызывают видимую патологию. Характер ее зависит от возраста зараженного животного: у новорожденных хомяков болезнь протекает молниеносно с уровнем летальности близким к 100%.

Парвовирусы, поражающие один какой-либо вид животных, либо близкие виды, могут иметь серологическое родство, как например, парвовирусы грызунов, обнаруживающие родство в реакциях нейтрализации и иммунофлуоресценции, либо не обладать никаким серологическим родством, как например вирус Алеутской болезни норок и вирус инфекционного энтерита норок. Парвовирусы для которых совершенно четко установлен вид животного-хозяина могут вызывать переболевание той или иной тяжести у других родственных или не родственных видов, например вирусы мышей и крыс (Н1, Н3, RV, Х14 и МВМ) при введении их хомякам вызывают видимую патологию. Характер ее зависит от возраста зараженного животного: у новорожденных хомяков болезнь протекает молниеносно с уровнем летальности близким к 100%.

Парвовирусная болезнь свиней (ПВБС) - контагиозное вирусное заболевание, которое клинически проявляется только у супоросных свиноматок и характеризуется гибелью эмбрионов и плодов, рождением мумифицированных плодов, мертвых и слабых поросят и уменьшением числа поросят в помете.

Аборты у зараженных свиноматок наблюдаются редко и они не характерны для данной болезни. У животных других половозрастных групп заболевание протекает в латентной форме, хотя вирус у них активно размножается во многих тканях и органах. У хряков-производителей парвовирус не нарушает спермиогенез и функции репродуктивных органов.

Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие свиньи, выделяющие вирус с фекалиями, мочой, носовыми и вагинальными секретами, плацентой и мертворожденными плодами. Здоровые животные, как правило, заражаются пероральным и аэрогенным путями.

С экскретами и секретами вирус выделяется до 2 недель после заражения свиней и в животноводческих помещениях сохраняет инфекционность до 100-135 дней. В распространении парвовируса определенную роль играют хряки, выделяющие вирус со спермой, при этом на качество спермы вирус существенного влияния не оказывает.

Диагноз на наличие в хозяйстве ПВБС ставят по результатам лабораторных исследований. В лабораторию доставляют пробы сывороток крови свиноматок и новорожденных поросят до приема молозива, абортированные плоды и мертворожденных поросят.

Специфические антитела в сыворотке крови определяют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с эритроцитами морской свинки. При обнаружении в испытуемых сыворотках специфических антител в разведении 1:64 и выше реакцию считают положительной. В РТГА можно исследовать не только сыворотку крови, но и транссудат из грудной и брюшной полостей абортированных плодов старше 70-дневного возраста (длиной более 17 см) и мертворожденных поросят. Обнаружение антител к парвовирусу в сыворотке крови новорожденных поросят до приема молозива или в транссудате абортированных плодов и мертворожденных поросят свидетельствует о заражении их в матке, поскольку материнские антитела не проходят через плаценту. Выявление антител в сыворотке крови только свиноматок недостаточно для постановки диагноза на парвовирусную болезнь и говорит лишь о циркуляции вируса в хозяйстве.

Абортированные плоды до 60-65-дневного возраста (длиной менее 15 см) используют для обнаружения парвовирусного антигена в реакции гемагглютинации (РГА). Для этого из внутренних органов плодов готовят 10% суспензию на фосфатно-буферном растворе и исследуют ее в реакции. Плоды старше 70-дневного возраста (длиной более 17 см) непригодны для обнаружения вирусного антигена, поскольку в тканевой жидкости у них содержатся специфические антитела, которые связываются с антигеном и препятствуют его выявлению. В мумифицированных плодах парвовирусный антиген может содержаться в очень большом количестве - в разведении до 1:16384. В России набор компонентов для диагностики ПВБС в РТГА впервые разработан в 1986 г. и с 1989 г. налажено его производство и применение в ветеринарной практике. Для специфической профилактики ПВБС во многих странах мира с развитым свиноводством используют инактивированные вакцины, которые обладают выраженной иммуногенной активностью и предохраняют свиноматок от заболевания и трансплацентарной передачи вируса плодам. Основную роль в защите против парвовируса свиней играет гуморальный иммунитет. Для изготовления инактивированных вакцин используют штаммы парвовируса свиней, выращенные в перевиваемых культурах клеток свиного происхождения. В нашей стране наличие ПВБС впервые было установлено в 1988 г. путем выделения вируса из плодов абортировавших свиноматок. Были отработаны условия массового культивирования парвовируса свиней в перевиваемой культуре клеток почек поросят, обеспечивающие стабильное накопление вируса в высоких титрах. Разработана инактивированная эмульгированная вакцина против ПВБС, методы ее контроля и технология промышленного производства. Вакцина широко применяется в ветеринарной практике страны с 1987 г. Применение вакцины в хозяйствах, неблагополучных по парвовирусной болезни, показало ее эффективность в профилактике нарушений воспроизводительной функции свиноматок парвовирусной этиологии.

2.2 Состояние животноводства и анализ ветеринарного обслуживания хозяйства

Свиноводческий комплекс «Багратионовский» введен в эксплуатацию в 1989 году. Он расположен на территории Дубровенского района в 18 км от г. Дубровно. Численность работников на 1 января 2008 года составляла 307 человек.

Основным направлением деятельности является получение, выращивание и откорм свиней, с последующей реализацией их государству и другим потребителям. В 2005 году было произведено 13420 ц и реализовано 10039 ц свинины. В 2006 году - соответственно 17963 и 17449 центнеров, в 2007 году - 620786 и 20486 ц. Организована реализация продукции через фирменную торговлю в виде мясопродуктов и копченостей. В хозяйстве проводится целенаправленная работа по увеличению объемов продукции и расширению ассортимента.

Для организации производства свинины основными материальными ресурсами являются комбикорма, которые в структуре затрат занимают около 75%. Потребность кормов на 2007 год с учетом планируемого объема производства свинины составила 11140 тонн кормовых единиц. Основными поставщиками комбикормов являются Оршанский комбинат хлебопродуктов. Имеющиеся в распоряжении ЗАО «Багратионовский» 40 га земли для покрытия потребности в кормах не используются.

Поголовье животных и структура стада за 2003-2005 года отражены в таблице 2.1., а продуктивность животных - в таблице 2.2.

Все поголовье свиней размещается в типовых помещениях, которые оборудованы приточно-вытяжной вентиляцией, раздача кормов механизирована, уборка навоза самотечно-сплавной системой. Свиньи содержатся групповым способом. Свиноматки в период опоросов и осеменения содержатся в индивидуальных станках.

Благодаря согласованной работе ветеринарной и зоотехнической служб хозяйства, постоянному контролю за качеством кормов и полноценностью рационов, в 2005 году удалось снизить расход кормов на 1 центнер прироста живой массы до 5,37 ц кор. ед. В 2005 году эта цифра составляла 5,6 ц.к.ед. Соответственно в 2004 году на 1 к.ед. было получено 179 г. прироста живой массы, а в 2005 году - 186 г.

Важнейшей проблемой в процессе производства свинины на свинокомплексе «Багратионовский» является непроизводственное выбытие поросят (падеж, вынужденный убой, санитарный брак) в периоды подсоса и доращивания. В отдельные годы эта цифра достигала 50% и более. В 2005 году, благодаря решительным действиям со стороны ветеринарной службы, непроизводственное выбытие поросят в периоды подсоса и доращивания снизилось до 21,3%.

Таблица 2.1. Поголовье животных и структура стада в свинокомплексе «Багратионовский»

№ п/п	Вид и группа животных	Годы
		2003 г.	2004 г.	2005 г.
		голов	%	голов	%	голов
Свиньи - всего, в т.ч.:	16508	100	17206	100	21378
1.	свиноматки основные	1010	6,6	1063	6,1	1342
2.	свиноматки проверяемые	393	3,5	512	5,9	812
3.	хряки - производители	34	0,3	-	-	-
4	Поросята-сосуны	5811	35,2	6209	36,1	7644
5	Поросята-отьемьши	2962	18,0	2743	16,0	3480
6	Ремонтный молодняк	1148	7,0	1272	7,4	1879
7	Откормочное поголовье	4950	30,0	5371	31,2	6221

Таблица 2.2. Продуктивность животных на свинокомплексе «Багратионовский»

Показатели продуктивности	Ед. изм.	Годы
		2005 г.	2006 г.	2007 г.
Получено поросят на одну основную свиноматку	гол	23,9	23,5	24.1
Среднесуточный прирост живой массы свиноматок	кг	0,441	0,252	0.357
Поросята до 2-х месячного возраста	кг	0,185	0,160	0,187
Поросята 2-4 месячного возраста	кг	0,303	0,171	0,380

Среди причин гибели и вынужденного убоя поросят подавляющее большинство приходится на болезни органов дыхания (более 70%).

В таблице 2.3. приведены объем проведенных ветеринарных мероприятий по профилактике заразных болезней в свинокомплексе «Багратионовский» за 2005 год.

Таблица 2.3. Объем проведенных ветеринарных мероприятий по профилактике заразных болезней в свинокомплексе «Багратионовский» за 2005-2005 год

Вид животных, название исследований и мероприятий	Годы
	2003 г.	2004 г.	2005 г.
Свиньи: Исследовано на туберкулез аллергически: свиноматок	1380	1420	1570
Исследовано сывороток крови на репродуктивно респираторный синдром свиней	-	460	1726
Исследовано сывороток крови	46	92	472
Исследовано на бруцеллез и лептоспироз серологически: свиноматок	421	349	567
Исследоано на аскаридоз копрологически	740	1076	1279
Привито свиней против чумы 40 дн. откормочное поголовье 100 дн. подсосоные свиноматки ремонтные свиноматки хряки - производители	38550 26417 3900 68	40960 18746 4020	3967 1730 487
Про колибактериоза свиноматки и поросята 75-85 дн.	4327	5240	6491
Против рожи откормочное поголовье 72 дн. свиноматки 62 дн. ремонтные свинки хряки	25966 5344 2671 112	21468 5814 2917	22674 6392 3196
Привито против болезни Ауески свиноматки откормочное поголовье 140 дн. хряки	2815 21510 116	2900 18099	3071 21645
Привито против Лептоспироза свиноматки 30 дн. ремонтные свинки хряки	7050 2013 73	6386 1794 -	6398 3196 -
Дегельминтизация свиноматки хряки откормочное поголовье	5878 72 1008	5605 5776	6228
против бешенства сторожевые собаки	10	-	-

Согласно плану противоэпизоотических мероприятий на комплексе проводятся вакцинации животных против чумы и рожи свиней, эшерихиоза и сальмонеллеза, лептоспироза, болезни Ауески, репродуктивно-респираторного синдрома свиней, парвовирусной инфекции свиней, трансмиссивного гастроэнтерита.

На свинокомплексе ЗАО «Багратионовский» оборудована производственная ветеринарная лаборатория, в обязанности которой входит лабораторный контроль за качеством кормов, ветеринарно-санитарная экспертиза туш и органов убойных животных, а также готовой продукции (колбасы, копчености), лабораторный контроль за качеством дезинфекции, за состоянием обмена веществ у животных, определение чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам.

2.3 Безопасность жизнедеятельности

Интенсивный путь развития животноводства предусматривает внедрение в производство различных механизмов, нового оборудования, за частую создающих дополнительную опасность для работников в процессе производства. В связи с этим особое внимание необходимо уделять вопросам охраны труда, предусматривающим исключение, либо снижение до минимума опасного влияния производственных факторов на жизнь и здоровье людей, а также улучшение существующих условий труда в промышленном животноводстве.

Ответственность за организацию жизнедеятельности на свинокомплексе ЗАО «Багратионовский» Дубровенского района Витебской области несет директор предприятия, который обеспечивает соблюдение норм и правил по технике безопасности, санитарии, противопожарным мероприятиям и другим вопросам сфер охраны труда. Организацией этой работы в хозяйстве занимается инженер по охране труда. В его обязанности входит: организация охраны и агитации по безопасности труда, контроль за наличием на рабочих местах плакатов, табличек и предупредительных надписей, а также контроль за выполнением работниками требований охраны труда, организация мероприятий по предупреждению травматизма и профзаболеваний.

Вводный инструктаж по технике безопасности со всеми работника ми, которые впервые принимаются на постоянную или временную работу, проводит инженер по охране труда. данные о его проведении регистрируются в «Журнале регистрации инструктажа».

Первичный инструктаж на рабочем месте проводит руководитель работ с практическим показом безопасных приемов и методов труда. данные о его проведении фиксируются в «Рабочем журнале по охране труда». Повторный инструктаж проводится через каждые б месяцев.

В ЗАО «Багратионовский» строго выполняются все правила техники безопасности при проведении лечебных и профилактических мероприятий, при обслуживании животных, работе с техникой.

Свинокомплекс спроектирован и построен в соответствии со всеми требованиями производственной санитарии и техники безопасности. В производственных помещениях поддерживается чистота, их освещенность соответствует нормативным показателям, вентиляция и отопление работают в автоматическом режиме. На санпропускнике имеются душевые и санузлы для работников оборудованы раздевалки и комната отдыха.

Рабочие и специалисты обеспечены спецодеждой и спецобувью согласно установленным нормативам. При работах, связанных с использованием опасных для здоровья химических веществ, рабочие обеспечиваются дополнительными средствами защиты: прорезиненная одежда, очки, респираторьи, противогазы. На входах в производственные помещения оборудованы дезванны.

На производственной территории отсутствуют аптечки первой медицинской помощи и не вывешены инструкции по охране труда. Меры противопожарной безопасности не соблюдаются, поскольку отсутствуют огнетушители и планы эвакуации людей, животных и материальных ценностей.

За последние два года несчастных случаев на свинокомплексе зарегистрировано не было. В ЗАО «Багратионовский» 40-часовая рабочая неделя с двумя выходными днями. С 1 марта 2000 года для работников ветеринарной службы предприятия введена 6-дневная рабочая неделя с двумя выходными днями.

С целью улучшения сложившейся ситуации по охране труда в хозяйстве необходимо провести следующие мероприятия:

1. Обеспечить участки аптечками первой медицинской помощи;

2. Обеспечить работников средствами личной гигиены (мыло, полотенца) в достаточном количестве;

3. Установить огнетушители, планы эвакуации людей, животных и материальных ценностей;

4. Вывесить в производственных помещениях инструкции по охране труда;

5. Регулярно проводить день охраны труда;

6. Регистрацию инструктажей по технике безопасности проводить согласно действующим правилам в «Журнале регистрации инструктажей».

2.4 Экологическое обоснование работы

Функционирование крупных животноводческих предприятий нередко вызывает негативные изменения экологической ситуации в зоне их деятельности, что может стать причиной возникновения инфекционных болезней и незаразных заболеваний среди животных и людей. Рациональное использование и охрана природных ресурсов - основной принцип организации системы мероприятий по охране природы в нашей стране.

На свиноводческом комплексе ЗАО «Багратионовский» Дубровенского района проводится определенная работа по охране окружающей среды. Как и на любом другом крупном свиноводческом комплексе вопрос об использовании и обезвреживании навоза находится под постоянным контролем. Навоз из производственных помещений удаляется по самотечно-сплавной системе. Трупы павших животных, отходы санитарной бойни отправляют на Бельшовичский утильзавод. Мусор вывозится на городскую свалку.

В хозяйстве имеется крупная котельная, где в качестве топлива используется природный газ, что способствует сохранению чистоты воз душного бассейна. Ответственность за экологическую обстановку на комплексе несет директор. Экологический паспорт комплекса отсутствует.

Ядохимикаты хранятся в отдельных закрытых помещениях, куда не допускается проникновение посторонних лиц, животных, для перевозки данных веществ используется специальный транспорт, который не применяется для перевозки кормов.

Территория комплекса огорожена железобетонным забором. Въезд оборудован шлагбаумом и дезбарьром. Входы в производственные помещения оборудованы дезваннами. Все вновь поступившие животные выдерживаются в карантинном отделении на протяжении 30 дней.

Согласно плану противоэпизоотических мероприятий на комплексе проводятся вакцинации животных против чумы и рожи свиней, эшери хиоза, сальмонеллеза, болезни Ауески, лептоспироза, репродуктивно респираторного синдрома свиней, парвовирусной инфекции свиней, трансмиссивного гастроэнтерита. Регулярно проводится дегельминтизация свиней.

Все неиспользованные биопрепараты утилизируются согласно наставлениям по применению. Санитарный день во всех производственных помещениях проводится один раз в неделю (четверг). Все работники комплекса один раз в год проходят плановое медицинское обследование.

В производственных помещениях поддерживается чистота, ведётся постоянный контроль за состоянием микроклимата. Но, несмотря на это, в помещениях периодически отмечается повышенная влажность, содержание вредных газов, что оказывает негативное влияние на организм животных и людей.

Предложения по улучшению природно-охранных мероприятий:

1. Отрегулировать приточно-вытяжную систему вентиляции и периодически контролировать эффективность ее работы.

2. Озеленить территорию комплекса.

3. Составить экологический паспорт комплекса.

4. Регулярно проводить с работниками комплекса беседы на актуальные экологические темы.

2.5 Материал и методы исследований

Дипломная работа выполнена с мая 2006 г. по май 2008 г. в условиях 24-тысячного свиноводческого комплекса ЗАО «Багратионовский» Дубровенского района Витебской области и на кафедре микробиологии и вирусологии УО «Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины».

При исследовании динамики формирования специфического иммунитета против ПВИС кровь отбирали у поросят до сосания молозива и возрасте 2, 7, 14, 21, 30, 60, 90 дней. Затем при отборе ремонтных свинок в возрасте 100-112 дней.

В 150 дней, перед первичной вакцинацией против ПВИС и РРСС в 170 дней, 184 дня жизни, перед ревакцинацией на 191 день жизни. И перед осеменением в возрасте 210-220 дней жизни. Последнее взятие крови проводили в 20 дней супоросности. У основных свиноматок, неоднократно привитых инактивированными эмульсионными вакцинами против репродуктивно респираторного синдрома свиней и парвовирусной инфекции свиней, проводили отбор проб крови в день опороса, перед вакцинацией за 2 недели до отъёма поросят (на 21 день после опороса). Затем через 7 дней, 14 дней (в день отъёма поросят) и 21 день после вакцинации.

В опыте была использованы 30 основных свиноматок - №4271 (третий опрос), №3693 (третий опрос), №3691 (пятый опрос), №3640 (пятый опрос), №4270 (третий опрос), №0003 (второй опрос), №4235 (третий опрос), №4236 (третий опрос), №4241 (третий опрос), №4242 (третий опрос), №4243 (третий опрос), №4233 (третий опрос), №4245 (третий опрос), №4246 (третий опрос), №4279 (третий опрос), №4272 (третий опрос), №4277 (третий опрос), №5611 (четверный опорос), №5625 (четверный опорос), №5627 (четверный опорос), №5630 (четверный опорос), №5638 (четверный опорос), №5631 (четверный опорос), №5641 (четверный опорос), №5644 (четверный опорос), №5645 (четверный опорос), №5646 (четверный опорос), №5651 (четверный опорос), №5672 (четверный опорос) и №5681 (четверный опорос).

Для исследования динамики формирования колострального иммунитета против ПВИС использованы пять основных свиноматок - №5692 (четвёртый опорос) и 12 полученных от неё поросят, №5601 (четвёртый опорос) и 9 полученных от неё поросят, №5623 (четвёртый опорос) и 10 полученных от неё поросят, №5222 (четвёртый опорос) и 11 полученных от неё поросят, №5697 (четвёртый опорос) и 10 полученных от неё поросят. Отъём поросят проводили на 35 день жизни. При проведении отъёма сформирована группа из 30 свинок (желтая метка, выщипы от 100 до 129). Эта группа была разбита на 2 подгруппы 20 и 10 голов. Подгруппа из 20 животных была помещена в отдельно стоящее помещение бывшей СИО. Из этих животных, в возрасте 110-112 дней жизни сформирована группа из 20 голов ремонтных свинок - №7110, №7111, №7112, №7113, №7114, №7115, №7116, №7117, №7118, №7119, №7121, №7122, №7123, №7124, №7125, №7126, №7132, №7143, №7144, №7145. Подгруппа из 10 голов находилась в секторе доращивания вместе с другими поросятами-отъёмышами.

...