Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

На правах рукописи

КОЛЕСНИКОВА Екатерина Викторовна

ПРОФИЛИ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА У БЕРЕМЕННЫХ С ХРОНИЧЕСКОЙ ФЕТОПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

Автореферат диссертация на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва- 2013

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Ханферьян Роман Авакович

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Куценко Ирина Игоревна

Официальные оппоненты:

Нестерова Ирина Вадимовна, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Минобрнауки РФ, факультет повышения квалификации медицинских работников, профессор кафедры аллергологии и иммунологии.

Симбирцев Андрей Семенович, доктор медицинских наук, профессор, ГУП «Государственный НИИ особо чистых биопрепаратов» ФМБА

России, директор института.

Ведущая организация: ФГБУ «ГНЦ «Институт иммунологии» ФМБА России

Защита состоится «20» марта 2013 года в 15 часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.26 при ГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Минобрнауки РФ по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.10/2.

С диссертацией можно ознакомиться в учебно-научном информационном библиотечном центре ГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу 117198 г. Москва, ул. Миклухо-Маклая д.6.

Автореферат разослан « ______ » февраля 2013 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Т.А. Славянская

Актуальность исследования

Известно, что иммунологические процессы в организме матери определяют нормальное развитие беременности (Г.Т. Сухих, Л.В. Ванько, 2003; Н.Ю. Сотникова, 2005; А.И. Малышкина и др., 2010; V.M.Abrahams e.a., 2005), а недооценка иммунологической недостаточности негативно влияет на частоту перинатальных потерь и осложнений беременности (Т.И. Долгих, 2012; Н.М. Пастман и др., 2010; Г.Н. Чистякова и др., 2007). Особенностями иммунитета на различных этапах физиологической беременности (ФБ) являются: системная гестационная иммуносупрессия Th-1-иммунного ответа, формирование иммунологической толерантности по отношению к полуантигенному плоду, а также активационные изменения врожденного иммунитета (R. Raghupathy e.a., 2000; J.M. Roberts, 2000; Т. Romero-Adrian e.a., 2002; Н.Ю. Сотникова, 2005). Однако при беременности необходим точный контроль активации иммунной системы, иначе это может привести к развитию различных патологических состояний (Н.Ю. Сотникова, 2005).

Хроническая фетоплацентарная недостаточность (хФПН) является довольно частым осложнением беременности, сопровождающимся гипоксией, задержкой развития плода и являющимся одной из основных причин перинатальной заболеваемости и смертности (И.С. Сидорова, И.О. Макаров, 2007; Е.В. Радзинский и др., 2009; О.А. Пересада, Г.С. Котова, 2009). В последние годы наблюдается значительный рост хФПН инфекционного генеза (В.И. Кулаков и др., 2004; А.Д. Макацария, 2004), при которой основными факторами риска внутриутробного инфицирования плода (ВУИ) и активации иммуновоспалительных процессов являются урогенитальные инфекции, хронические очаги инфекции и их обострение во время беременности (А.Н. Трунов и др., 2012). Синдром задержки развития плода (СЗРП) также является частым (3-24%) осложнением при развитии хФПН (В.Ю. Серебров и др., 2005; J.N. Bulmer e.a., 2010).

По сравнению с объемом исследований адаптивного иммунитета при ФБ и ее осложнениях, данных по оценке врожденного иммунитета недостаточно, и зачастую они имеют противоречивый характер. В этой связи, комплексная оценка факторов врожденного иммунитета на поздних сроках физиологического течения беременности и при различных вариантах течения хФПН представляется актуальной.

Цель исследования

Определение особенностей профилей функционирования врожденного иммунитета при различных вариантах течения хронической фетоплацентарной недостаточности на поздних сроках беременности на основании изучения его клеточных и гуморальных факторов.

Задачи исследования:

1.Уточнить особенности функционирования клеточного и гуморального звена врожденного иммунитета в поздние сроки физиологического течения беременности относительно таковых у здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста.

2.Изучить состояние клеточного и гуморального звена врожденного иммунитета у беременных с различными вариантами течения хронической ФПН.

3.На основе анализа и систематизации полученных данных определить наиболее значимые иммунологические маркеры, характерные для различных вариантов течения хронической ФПН с уточнением иммунопатогенетической роли различных факторов врожденного иммунитета.

4.Выявить критерии адаптивных изменений в иммунной системе у беременных с хронической ФПН различной степени выраженности и компенсации.

5.Изучить характерные особенности цитокинового статуса у новорожденных, рожденных от матерей с различными вариантами течения хронической ФПН, с установлением иммунологических критериев катамнестической оценки исходов беременности и определением степени риска осложнений в раннем неонатальном периоде.

Научная новизна

врожденный иммунитет фетоплацентарный недостаточность

Получены новые данные о состоянии клеточных и гуморальных факторов врожденного иммунитета в поздние сроки (32-34 недели гестации) физиологического течения беременности.

Комплексная и углубленная оценка функционирования различных звеньев врожденного иммунитета у беременных с хронической ФПН позволила уточнить иммунопатогенетическую роль факторов врожденного иммунитета, определить новые иммунологические маркеры различных вариантов ее течения, в том числе, иммунологические маркеры адаптивных изменений врожденного иммунитета при компенсированных вариантах хФПН, и критерии частичного срыва адаптивных механизмов перестройки иммунной системы беременных при субкомпенсированных вариантах ее течения.

Определены новые иммунологические критерии катамнестической оценки исходов беременности и степени риска инфекционно-воспалительных осложнений в раннем неонатальном периоде, основанные на исследовании цитокинов в периферической крови новорожденных от беременных с различными вариантами течения хронической ФПН.

Теоретическая и практическая значимость

Теоретическая значимость работы заключается в расширении представлений об особенностях состояния врожденного иммунитета при ФБ на сроках 32-34 недели гестации, а также в определении иммунопатогенетической роли факторов врожденного иммунитета в формировании различных вариантов течения хФПН. Практическая значимость работы связана с выявлением диагностически значимых параметров функционирования врожденного иммунитета и их использованием в дифференциальной диагностике различных вариантов течения хФПН. Исследование цитокинов в периферической крови новорожденных от беременных с различными вариантами течения хФПН позволяет уточнить исходы беременности и прогнозировать вероятность инфекционно-воспалительных осложнений у новорожденных в неонатальном периоде.

Положения, выносимые на защиту

1. В то время как в поздние сроки физиологической беременности имеет место преимущественная активация в различных звеньях врожденного иммунитета, при хронической ФПН имеют место как однонаправленные его изменения, так и отличительные иммунологические профили, характер и степень выраженности которых определяется наличием ВУИ, СЗРП и их сочетанием.

2. Установлены иммунологические адаптивные маркеры компенсированного течения хФПН, а также критерии частичного нарушения адаптивных иммунологических механизмов при субкомпенсированных вариантах течения данного осложнения беременности.

3. Уточнена иммунопатогенетическая роль клеточных и гуморальных факторов врожденного иммунитета в развитии хФПН и в формировании различных вариантов ее течения.

4. У новорожденных от матерей, беременность которых осложнялась хФПН, выявлены катамнестически и прогностически значимые изменения цитокинового статуса, позволяющие связать их с вариантами течения хФПН, и прогнозировать инфекционно-воспалительные осложнения в неонатальном периоде.

Внедрение результатов исследования

Результаты проведенных исследований внедрены в практику работы врачей отделения реанимации и интенсивной терапии новорожденных №2 ГБУЗ «ДККБ» Департамента здравоохранения Краснодарского края; врачей МБУЗ «Родильный дом» г. Краснодара; МБУЗ «Женская консультация №2» г. Краснодара. Основные положения диссертации внедрены в учебный процесс кафедры клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики ФПК и ППС; кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии; кафедры педиатрии с курсом неонатологии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 4-ом Российском конгрессе «Иммунология репродукции» (Пермь, 2010 г.); на Х конференции иммунологов Урала с международным участием (Тюмень, 2012 г). Апробация диссертации состоялась 11 января 2013 года на совместном заседании кафедры клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики ФПК и ППС; кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии и ЦНИЛ ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 7 - в изданиях, рекомендованных Перечнем ВАК Минобрнауки РФ (4 статьи и 3 тезисов).

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 168 страницах, состоит из введения, 5 основных глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка изученной литературы, включающего 240 источников, в том числе, 171 - отечественных и 69 - иностранных авторов; содержит 15 таблиц и иллюстрирована 29 рисунками.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Всего обследовано 300 беременных женщин, из которых на основании критериев включения и исключения было отобрано 73 женщины с признаками хФПН и 25 женщин с физиологически протекающей беременностью.

Критериями включения пациентов в обследование явились: возраст - от 20 до 30 лет, срок гестации - 32-34 недели, наличие вторичной хронической ФПН, информированное согласие беременных женщин, а также небеременных здоровых женщин репродуктивного возраста на исследование параметров врожденного иммунитета. Критериями исключения пациентов из обследования были: возраст пациенток младше 20 и старше 30 лет, срок гестации до 32 недель, наличие экстрагенитальных заболеваний и других осложнений III триместра беременности, а также отказ пациентки от проведения исследования.

Диагноз хФПН у всех беременных был установлен при комплексном клинико-лабораторном и инструментальном обследовании. О наличии СЗРП судили по данным ультразвуковой биометрии и доплерометрии, о наличии ВУИ - на основании данных эхографического исследования (маловодие, многоводие, характерные изменения в плацентарной ткани, наличие взвеси в околоплодных водах, изменение степени эхогенности кишечника плода), что подтверждалось ретроспективно при оценке степени зрелости и состояния новорожденного в течение первых двух суток послеродового периода. Скрининговым методом диагностики СЗРП служило определение высоты дна матки, отставание которой от нормы гестационного возраста на 2 см и более давало основание заподозрить нарушение роста плода. Для установления инфекционного статуса беременных проводили культуральные исследования, ПЦР- и ИФА-диагностику с использованием идентификационных наборов фирмы Becton Dickinson «BBL Crystal Systems» (США), НПФ «Литех» (Россия), ЗАО «Вектор-бест» (Россия).

Разделение беременных на клинические группы и подгруппы проводилось с учетом варианта течения хФПН, основываясь на классификации, приведенной в Национальном руководстве по акушерству (2011). Основная клиническая группа (группа I) включала 73 обследуемых беременных с признаками хФПН, которые были распределены на четыре клинических подгруппы:

1 подгруппа - 38 беременных (52%) с лабораторно-инструментальными признаками хФПН и отсутствием косвенных признаков внутриутробной инфекции (ВУИ) и синдрома задержки развития плода (СЗРП);

2 подгруппа -16 беременных (22%), сочетающих клинико-лабораторные и инструментальные признаки хронической ФПН и ВУИ (без СЗРП);

3 подгруппа - 11 (15%) беременных, имеющих клинико-лабораторные признаки хронической ФПН, осложненной СЗРП (без ВУИ);

4 подгруппа - 8 (11%) беременных с клинико-лабораторными признаками хронической ФПН в сочетании с ВУИ и с СЗРП.

Группу сравнения (II группа) составили 25 женщин с физиологически протекающей беременностью благоприятного репродуктивного возраста (26,5±0,78 лет).

В контрольную группу (III группа) вошли 20 практически здоровых небеременных женщин репродуктивного возраста (23,20±1,12 лет).

Исследование врожденного иммунитета на системном уровне (периферическая кровь) включало определение содержания натуральных киллеров (NK-клеток) методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител к СD3-СD16+СD56+ («Веckman Coulter», США) на проточном цитометре Сytomics FC-500 («Веckman Coulter»,США); оценку фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов (НГ) по числу активных фагоцитов (%ФАН, ФАН абс), их поглотительной (ФЧ, ФИ) и переваривающей (%П, ИП, ИППА) способности; исследование оксидазной биоцидности НГ в спонтанном и стимулированном NBT-тесте (%ФПК, СЦИ, КМ); иммунофенотипирование НГ проводили иммунофлюоресцентным методом с использованием моноклональных антител к СD16+, CD11b+, CD95+, CD25+ (ООО«Сорбент», Москва) с учетом результатов на микроскопе «Люмам-8»; определение концентрации цитокинов - ИЛ-1б, ИЛ-1в, РАИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-4, ИФНб, ИФНг, а также компонентов комплемента - С3, С4, С5, С3а, С5а, С1-ингибитор проводили методом ИФА с использованием тест-систем ООО «Цитокин» (г. Санкт-Петербург) на анализаторе «ASCENT» (Финляндия). У новорожденных, рожденных от беременных основных клинических групп оценивали содержание цитокинов (ИЛ-1в, ИЛ-6, ИЛ-8, РАИЛ-1) в периферической крови на 1-2 сутки жизни.

Методика статистического анализа включала расчет средней величины с вычислением средней арифметической М, средней ошибки m и вероятности различий р с использованием компьютерной программы SPSS Statistics 17,0 для Microsoft. Сравнение средних двух выборок производилось с помощью критерия Стьюдента. Достоверными считались различия 95% (p?0,01).

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Оценка особенностей течения беременности при различных вариантах хронической ФПН показала, что признаки компенсированного варианта течения хФПН отмечались в 1-й и 2-й клинических подгруппах (Табл.1).

Таблица 1.

Особенности течения хронической ФПН в различных клинических подгруппах беременных

Группа\ подгруппа	Мно гово дие	Мало водие	СЗРП 1 ст.	СЗРП 2 ст.	ВУИ	Субкомпенс. хФПН	Компенс. хФПН
1 подгруппа хФПН, n=38	7 18,4%	20 52,6%	0	0	0	0	38 100%
2 подгруппа хФПН+ВУИ, n=16	3 18,75%	6 37,5%	0	0	16 100%	0	16 100%
3 подгруппа хФПН+СЗРП,n=11	1 9,09%	3 27,3%	6 54,6%	5 45,5%	0	5 45,5%	6 54,6%
4 подгруппа хФПН+ВУИ+ СЗРП, n=8	1 12,5%	7 87,5%	3 37,5%	5 62,5%	8 100%	6 75%	2 25%
ФБ, n=25	0	0	0	0	0	0	0

При наличии СЗРП у части беременных 3-й и 4-й подгруппы по совокупности признаков, в том числе, по степеням гемодинамических нарушений при доплерометрии, определен субкомпенсированный вариант течения хФПН, который у беременных 4-й подгруппы был наиболее выражен.

Независимо от наличия или отсутствия жалоб со стороны беременных на патологические выделения из половых путей, зуд или дискомфорт в области наружных половых органов, в результате инфекционного скрининга во всех группах беременных были выявлены изменения при бактериологическом посеве из цервикального канала на условно-патогенную флору. В то же время наибольший процент инфекций, передаваемых половым путем, был выявлен в подгруппах с наличием ВУИ (2-я и 4-я подгруппы).

Оценка содержания цитокинов, как связующего звена между иммунитетом, гомеостазом, гемопоэзом, ангиогенезом и резистентностью организма (А.С. Симбирцев, 2004), показало значительное возрастание уровня содержания ИЛ-1в, ИЛ-6 и ИЛ-8 у новорожденных, рожденных от матерей с различными вариантами течения хФПН, относительно нормы новорожденных (Табл. 2), выраженность которого определялась наличием ВУИ (максимальное возрастание ИЛ-8), СЗРП (максимальное возрастание ИЛ-1в) или отсутствием признаков ВУИ и СЗРП при хФПН (максимальное возрастание ИЛ-6).

Таблица 2.

Содержание цитокинов в периферической крови новорожденных от матерей с различными вариантами течения хронической ФПН (М±м,р).

Группа	ИЛ1в, пкг\мл	РАИЛ-1 пкг\мл	ИЛ-6 пкг\мл	ИЛ-8 пкг\мл	ПВИ (ИЛ1б+ИЛ1в РАИЛ-1),у.е.
Новорожденные от матерей с хФПН, n=38	157,10± 12,23*	85,46± 7,10	194,15± 17,07*	420,90± 15,11*	1,84±0,61*
Новорожденные от матерей с хФПН+ВУИ, n=16	136,50± 11,18*	89,48± 9,18	114,29± 10,00*	539,40± 22,07*	1,50±0,12*
Новорожденные от матерей с хФПН+СЗРП, n=11	276,29±18,13*	130,00±17,24*	126,65±9,27*	567,67± 17,25*	2,10±0,21*
Новорожденные от матерей с хФПН+ ВУИ+СЗРП, n=8	105,05± 9,83*	108,40±8,11*	31,20± 4,08*	273,80± 11,12*	0,94±0,11
Здоровые новорожденные (контроль, n=25)	18,71± 2,73	74,38±10,42	14,23± 1,12	57,42± 3,29	0,95±0,30

Примечание: * - достоверность отличий от контроля (р<0,01)

Показано также, что содержание противовоспалительного РАИЛ-1 у новорожденных от матерей с компенсированным течением хФПН (1-2-й подгруппы) находится в пределах физиологической нормы, тогда как при субкомпенсированных вариантах течения хФПН наблюдается его увеличение в среднем в 1,5 раза.

Комплексная оценка врожденного иммунитета в поздние ФБ по сравнению с параметрами небеременных здоровых женщин репродуктивного возраста показала его преимущественную активацию, связанную: с увеличением содержания в крови НГ (4,10±0,17 против 3,10±0,32) и доли среди них активированных CD25(+)-НГ (0,98±0,08 против 0,72±0,07), CD95(+)-НГ (0,82±0,12 против 0,46±0,08) и функционально значимых CD11b(+)-НГ (0,98±0,08 против 0,72±0,07), CD16(+)-НГ (0,89±0,06 против 0,70±0,08); с усиленной фагоцитарной и микробицидной активностью, в том числе, при антигенной нагрузке in vitro; с увеличением сывороточной концентрации ряда компонентов комплемента (C3, C5a-KK) и цитокинов (ИЛ-1б, ИЛ-1в, ИЛ-8, ИЛ-6, ИЛ-4, ИЛ-10). При этом наблюдалось снижение содержания регуляторного С1-ингибитора (150,15±11,02 против 236,20±41,80), РАИЛ-1 (39,60±3,35 против 121,24±10,34) и СD3(-)СD16(+)СD56(+)-NK-лимфоцитов (5,30±0,60 против 11,20±1,11) (Рис.1).

Рис.1.Изменение параметров врожденного иммунитета при ФБ (в процентах от контроля - небеременные женщины репродуктивного возраста)

При этом обращает на себя внимание факт наибольшего возрастания (в 25 раз) при ФБ концентрации ИЛ-1б (3158,65±100,05 против 128,30±12,71), тогда как содержание ИЛ-1в (197,43±18,69) лишь в 3 раза превышало контрольный уровень (69,32±2,43).

Исследование показателей рецепторной функции НГ при хФПН относительно ФБ показало преимущественное снижение процентного содержания активированных СD25(+)- и СD95(+)-НГ у беременных всех клинических подгрупп. При этом абсолютное содержание СD11b- (0,87±0,07 против 0,98±0,08) и СD16-позитивных НГ(0,67±0,08 против 0,89±0,06) было достоверно снижено только в 4-й подгруппе беременных с наиболее неблагоприятным субкомпенсированным вариантом хФПН (Рис.2)

Рис.2 Рецепторная функция НГ при различных вариантах течения хронической ФПН (в % от физиологической нормы беременных)

Исследование фагоцитарной функции НГ при хФПН показало достоверное снижение процента активных фагоцитов (%ФАН) у беременных с хФПН в сочетании с ВУИ (2-я и 4-я подгруппы), а снижение абсолютного содержания ФАН - только у беременных 4-й подгруппы (в 1,12 раза). Между тем при хФПН в сочетании с СЗРП наблюдалось возрастание данного показателя на 13% относительно такового при ФБ.

При всех вариантах течения хФПН выявлено усиление (в 1,3 раза) общей поглотительной способности фагоцитов, в то время как относительная переваривающая способность (%П) была более высокой в первых трех клинических подгруппах. Важно отметить, что у беременных с наиболее неблагоприятным вариантом течения хФПН (4-я подгруппа) относительная активация переваривания соответствовала норме, а абсолютная (ИППА) - была достоверно ниже таковой (Табл.3).

Таблица 3

Показатели фагоцитарной функции циркулирующих нейтрофильных гранулоцитов беременных в норме и при

хронической ФПН (М±м,р).

Группа Показатели	1 группа (хФПН)	2 группа (группа срав нения)ФБ (n=25)	3 группа (контроль): Неберем.женщи ны репродукт. возраста (n=20)
	1 подгруппа (хФПН) (n=38)	2 подгруппа (хФПН+ВУИ) (n=16)	3 подгруппа (хФПН+СЗРП) (n=11)	4 подгруппа (хФПН+ВУИ+СЗРП) (n=8)
ФАН, %	48,09±1,28*	44,75±1,19# ^	47,70±2,03*	46,27±1,43*#	50,32±1,68*	43,00±1,26
ФАН абс	1,94±0,18*	1,87±0,15*	2,32±0,11*#	1,83±0,10*#	2,05±0,12*	1,36±0,16
ФЧ, у.е	5,60±0,48*#	5,55±0,37*#	5,52±0,28*#	5,63±0,41*#	4,44±0,24	4,80±0,14
ФИ, у.е	2,73±0,22	2,45±0,28	2,70±0,24	2,63±0,21	2,49±0,15*	2,15±0,08
П,%	65,40±2,09#	64,50±1,41#	66,66±2,29#	62,13±2,86	61,19±1,55	64,20±2,67
ИП, у.е	1,10±0,08*#	1,58±0,18 ^	1,84±0,15* ^	1,69±0,12 ^	1,86±0,15*	1,37±0,09
ИППА, у.е.	124,94±10,14*	119,27±8,59*	130,65±11,12*	111,17±9,25*#^	123,40±10,02*	87,30±1,30

Примечание: * - достоверность отличий от контроля (р<0,02, p<0,01)

# - достоверность отличий показателей клинических подгрупп от группы сравнения

^ - достоверность отличий между показателями 2,3 и 4 подгруппы от показателей 1 подгруппы

ФАН - число активных фагоцитов, ФЧ - фагоцитарное число, ФИ - фагоцитарный индекс,

П - процент переваривания, ИП - индекс переваривания, ИППА - интегральный показатель переваривающей способности.

Оценка оксидазной биоцидности НГ при хФПН (1-я подгруппа) выявила более выраженное увеличение показателей спонтанного NBT-теста (в среднем в 3 раза) по сравнению со стимулированным, в связи с чем, имело место снижение величины коэффициента мобилизации (КМ), рассчитываемого как по %ФПК (в 2,8 раза), так и по СЦИ (в 1,5 раза). При хФПН с ВУИ (2-я и 4-я подгруппы) также была обнаружена преобладающая активация оксидазной биоцидности в спонтанных условиях и неадекватность ее ответа на антиген in vitro, тогда как у беременных 3-й подгруппы КМ соответствовал физиологической норме ввиду адекватной величине %ФПК и СЦИ, выявленной в стимулированном NBT-тесте.

Результаты определения содержания NK-лимфоцитов свидетельствуют об увеличении показателей при всех вариантах течения хФПН, наиболее выраженных, у беременных 4-й клинической подгруппы (10,05±1,12 против 5,30±0,60 при ФБ) (Рис.3).

Рис.3. Содержание в периферической крови NK-лимфоцитов при различных вариантах течения хронической ФПН (в % от ФБ).

При оценке цитокинового профиля выявлено, что при всех вариантах течения хФПН наблюдается снижение концентрации цитокинов - ИФНг, ИЛ-4, ИЛ-10, РАИЛ-1 и резкое увеличение содержания ИЛ-8. Однако маркером варианта «хФПН+ВУИ» является увеличение концентрации ИЛ-1б, варианта «хФПН+СЗРП» - увеличение концентрации ИЛ1в, а «хФПН+ВУИ+СЗРП» - выраженное снижение содержания ИЛ1в, ИЛ-6, ИФНб (Табл.4).

Таблица 4.

Цитокиновый профиль крови беременных в норме и при хронической ФПН (М±м,р)

Группа Показатели	1 группа (хФПН)	2 группа ФБ (группа сравнения) (n=25)	3 группа (контроль): Небер.женщины репродукт. возр. (n=20)
	1 подгруппа (хФПН) (n=38)	2подгруппа (хФПН+ВУИ) (n=16)	3 подгруппа (хФПН+СЗРП) (n=11)	4 подгруппа (хФПН+ВУИ+ СЗРП) (n=8)
ИЛ1в, пкг\мл	157,10±31,12*	136,50±12,21*#	276,29±17,11*# ^	127,36±8,38*# ^	197,43±18,69*	69,32±2,43
ИЛ1б, пкг\мл	2642,90±124,0*#	3500,75±73,21*^	2498,20±96,12*#	2494,30±95,12*	3158,65±100,05*	128,30±12,71
РАИЛ-1,пкг\мл	55,62±4,68*#	41,63±3,19* # ^	55,62±12,11*^	39,60±3,35*#^	121,24±10,34 * ^	358,13±21,11
ИЛ-8, пкг\мл	420,90±24,16*#	539,40±31,25*# ^	567,67±27,12*# ^	273,81±18,56*# ^	39,00±2,50 *	32,35±1,83
ИЛ-6, пкг\мл	114,42±5,13*#	114,29±9,56*#	175,04±3,22*# ^	31,21±2,29*# ^	80,79±3,28 *	45,50±8,30
ИЛ-4, пкг\мл	2,70±0,22*#	2,89±0,16*#	2,10±0,14*# ^	2,18±0,18*# ^	45,00±7,80 *	14,32±0,87
ИЛ-10, пкг\мл	24,12±2,11*#	29,09±0,97* ^	28,24±1,30*# ^	17,42±1,24*# ^	39,31±3,58 *	13,70 ± 0,8
ИФНб, пкг\мл	13,64±1,26*#	15,26±1,13*#	10,50±1,90* ^	6,34±1,30 # ^	8,14±0,70	7,58±0,90
ИФНг, пкг\мл	4,36±0,38*#	12,96±1,15*# ^	3,42±0,33* ^	2,53±0,33*# ^	23,60±2,75 *	18,70 ±2,70
ИЛ1в+ИЛ1б\РАИЛ-1 (ПВИ1),у.е	49,58±4,00 *#	86,31±3,15 *# ^	49,76±6,19 *#	65,13±3,98 *# ^	27,50±2,25 *	0,60±0,05
ИФНг \ ИЛ4, (ПВИ-2), у.е	0,18±0,05 *#	0,45±0,06 *	0,12±0,01 *#	0,13±0,01 *#	0,52±0,04 *	1,31±0,09

Примечание: * - достоверность отличий от контроля (р<0,01, p<0,001)

# - достоверность отличий показателей клинических подгрупп от группы сравнения

^ - достоверность отличий между показателями 2,3 и 4 подгруппы от показателей 1 подгруппы

Изучение содержания компонентов комплемента (КК) при компенсированном варианте хФПН (1-я подгруппа) показало достоверное снижение концентрации С3-КК (0,88±0,09 против 0,98±0,13) и С4-КК (0,19±0,02 против 0,29±0,03). Между тем у беременных 3-й подгруппы (хФПН+СЗРП) наблюдалось наиболее выраженное снижение концентрации С3-КК (0,74±0,11), и С3а-КК (68,90±5,21), а также максимальное увеличение содержание С1-ингибитора (196,00±14,15) (Рис.4).

Рис.4. Показатели системы комплемента при различных вариантах течения хронической ФПН (в % от ФБ)

Отличительной особенностью хФПН, сочетающейся с ВУИ, явилось достоверное увеличение концентрации С3-КК (1,50±0,14 против 0,98±0,13 при ФБ) и максимально высокое содержание С5а-КК (33,10±4,39 против 13,58±2,07 при ФБ).

Анализ полученных результатов исследования в целом позволяет уточнить особенности функционирования врожденного иммунитета в поздние сроки физиологической беременности и при ее осложнении хФПН с различными вариантами течения и степенью компенсации. При этом выявлены факторы врожденного иммунитета с общим для всех вариантов течения хФПН характером изменений, а также отличительные особенности гуморальных и клеточных факторов, определяющие профили его функционирования при различных вариантах течения и степени компенсации хФПН (Рис.5).



Рис.5 Профили функционирования врожденного иммунитета при различных вариантах течения хронической ФПН

При этом выявленные профили функционирования некоторых факторов врожденного иммунитета при различных вариантах течения хФПН, позволяют уточнить их иммунопатогенетическую роль и установить диагностически значимые маркеры различных вариантов течения и степени компенсации хФПН в поздние сроки беременности, что имеет практическое значение в рамках оптимизации диагностики ее поздних осложнений.

Выводы

1. Физиологическое течение беременности на поздних сроках гестации

(32-34 недели) характеризуется преимущественной активацией в различных звеньях врожденного иммунитета в виде увеличения содержания НГ и активации их функций, увеличения концентрации провоспалительных цитокинов и компонентов системы комплемента, тогда как содержание лимфоцитов с фенотипом CD3-CD16+CD56+ и концентрация С1-ингибитора достоверно ниже таковых у небеременных здоровых женщин репродуктивного возраста.

2. Общим для всех вариантов течения хФПН относительно ФБ на поздних сроках гестации является снижение содержания в крови активированных - CD25(+)- и CD95(+)-НГ, наличие скрытых дефектов оксидазной биоцидности НГ, снижение концентрации ИФНг, ИЛ-4, ИЛ-10, РАИЛ-1, наряду с увеличением содержания ИЛ-8 и NK-лимфоцитов.

3. Маркерами адаптивных изменений врожденного иммунитета при компенсированном варианте течения хФПН (без ВУИ и СЗРП) следует считать сохранение на уровне физиологической нормы беременных ряда параметров (содержания СD11b(+)-,CD16(+)-НГ, активных фагоцитов, ИЛ1в, С5-, С5а-,С3а-компонента комплемента и С1-ингибитора).

4. Выявлены различные профили функционирования некоторых факторов врожденного иммунитета при различных вариантах течения хФПН, позволяющие уточнить их иммунопатогенетическую роль и установить диагностически значимые маркеры компенсированного варианта с ВУИ (увеличение концентрации С3-КК, ИЛ-1б), а также иммунологические критерии частичного срыва компенсаторных механизмов при хФПН с СЗРП (увеличение концентрации ИЛ1в), и хФПН с ВУИ в сочетании с СЗРП (выраженное снижение содержания ИЛ1в, ИЛ-6, ИФНб и максимальное возрастание содержания NK-лимфоцитов).

5. Характерной особенностью цитокинового статуса новорожденных, рожденных от матерей с различными вариантами хФПН, обуславливающей риск развития инфекционно-воспалительных осложнений в раннем неонатальном периоде, является резкое увеличение концентрации сывороточных провоспалительных цитокинов (ИЛ6, ИЛ-8, ИЛ1-в), при этом при наличии ВУИ имеет место максимальное возрастание ИЛ-8, СЗРП - максимальное возрастание ИЛ-1в, а при отсутствием признаков ВУИ и СЗРП - максимальное возрастание ИЛ-6.

Практические рекомендации

1. Для оптимизации дифференциальной диагностики вариантов течения хФПН на поздних сроках гестации (32-34 недели) рекомендуется оценивать наиболее значимые маркеры функционирования врожденного иммунитета:

· при компенсированной хФПН (без ВУИ и СЗРП) большинство показателей соответствует норме беременных, что свидетельствует об адаптивных изменениях иммунной системы. Тем не менее, целесообразно определение % формазан-позитивных клеток (%ФПК) в спонтанном NBT-тесте, возрастающего в 3,5 раза относительно ФБ;

· для компенсированного варианта течения хФПН, сочетающегося с ВУИ диагностическую значимость имеет резкое увеличение концентрации С3-КК (в 1,5 раза), С5а-КК (в 1,8 раза) и ИЛ-1б (в 1,2 раза), уровень которого при других вариантах течения хФПН достоверно снижен относительно физиологической нормы;

· иммунологическим маркером субкомпенсированного варианта течения хФПН (с СЗРП) является увеличение концентрации сывороточного ИЛ-1в (в 1,4 раза), тогда как при других вариантах хФПН наблюдается его снижение относительно физиологической нормы;

· иммунологическими критериями наиболее неблагоприятного субкомпенсированного варианта течения хФПН (с ВУИ и СЗРП) является снижение содержания ИЛ-6 (в 2,5 раза) и ИФНб (в 1,3 раза) на фоне увеличения продукции данных цитокинов относительно ФБ при других вариантах течения хФПН, а также максимальное возрастание содержания NK-лимфоцитов с фенотипом CD3-CD16+CD56+ (в 2,5 раза относительно нормы беременных).

2. Для оценки исходов беременности при хФПН с прогнозированием возможных инфекционно-воспалительных осложнений в раннем неонатальном периоде у новорожденных рекомендуется оценивать уровень содержания их сывороточных провоспалительных цитокинов, выраженность которого определяется вариантом течения хФПН:

· ИЛ1в, максимальное содержание которого отмечено у новорожденных от матерей 3 подгруппы (хФПН+СЗРП);

· ИЛ-6, максимальное содержание которого выявлено у новорожденных от матерей 1 подгруппы (хФПН без ВУИ и СЗРП);

· ИЛ-8, максимальное содержание которого наблюдается у новорожденных от матерей 2 подгруппы (хФПН+ВУИ);

· cодержание РАИЛ-1, которое у новорожденных с компенсированным течением хФПН (хФПН; хФПН+ВУИ) находится в пределах физиологической нормы новорожденных, а при субкомпенсированных вариантах течения (хФПН+СЗРП; хФПН+СЗРП+ВУИ) - увеличивается в 1,5 раза.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Колесникова Н.В., Кравцова Е.И., Ермошенко Б.Г., Колесникова Е.В., Чудилова Г.А.. Рецепторная активность НГ при хФПН. // Российский иммунологический журнал.- 2007. -т.9. -№4. - С.92.

2. Комендантов В.В., Колесникова Н.В., Кравцова Е.И., Колесникова Е.В., Чудилова Г.А. Факторы врожденного иммунитета в динамике развития физиологической беременности. // Российский иммунологический журнал.- 2008. - т.2, -№2-3. - С.149.

3. Колесникова Е.В., Кравцова Е.И., Колесникова Н.В, Ханферьян Р.А., Чудилова Г.А. Баланс цитокинов у беременных с различными вариантами течения хронической фетоплацентарной недостаточности // Сборник трудов Х Международного Конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Казань - 2009. - С.464.

4. Колесникова Е.В., Ханферьян Р.А., Кравцова Е.И., Чудилова Г.А. Состояние гуморальных факторов врожденного иммунитета у беременных с различными вариантами течения хронической фетоплацентарной недостаточности. // Российский иммунологический журнал.- 2010. - Т.4(13).- №4. - С.404.

5. Колесникова Е.В., Ханферьян Р.А., Куценко И.И., Чудилова Г.А., Кравцова Е.И., Ломтатидзе Л.В., Колесникова Н.В. Цитокиновый профиль крови при различных вариантах течения хронической фетоплацентарной недостаточности. //Российский иммунологический журнал.- 2011. - Т.5(14). - №2. - С.140-145.

6. Колесникова Е.В., Ханферьян Р.А., Чудилова Г.А., Ломтатидзе Л.В., Колесникова Н.В. Система комплемента сыворотки крови беременных с различными вариантами течения хронической фетоплацентарной недостаточности. // Вестник Уральской медицинской академической науки - 2011. - №2\1(35). - С.149-150.

7. Колесникова Е.В., Ханферьян Р.А., Куценко И.И., Кравцова Е.И., Колесникова Н.В. Состояние клеточного звена врожденного иммунитета у беременных с различными вариантами течения хронической фетоплацентарной недостаточности. //Кубанский научный медицинский вестник.- 2011. - №6(129). - С.72-77.

8. Колесникова Е.В., Ханферьян Р.А., Куценко И.И., Колесникова Н.В., Кравцова Е.И., Чудилова Г.А., Ломтатидзе Л.В. Особенности врожденного иммунитета у беременных с различными вариантами течения хронической ФПН // Российский иммунологический журнал. - 2012. - Т.6(14). - №2(1). - С.77-78.

Список используемых сокращений

% П - процент переваривания

% ФАН - процентное содержание активно-фагоцитирующих клеток

CD - кластер дифференцировки клеток

ВУИ - внутриутробная инфекция

NK - натуральные киллеры

ИЛ - интерлейкин

ИП - индекс переваривания

ИППА - интегральный показатель переваривающей активности

ИФН - интерферон

КК - компоненты комплемента

НГ - нейтрофильные гранулоциты

NBT-тест - тест восстановления нитросинего тетразолия

РАИЛ-1 - рецепторный антагонист интерлейкина-1

СЗРП - синдром задержки развития плода

ФБ - физиологическая беременность

ФИ - фагоцитарный индекс

ФЧ - фагоцитарное число

хФПН - хроническая фетоплацентарная недостаточность

Аннотация

Диссертация посвящена решению актуальной научной задачи в области иммунологии репродукции - определению особенностей профилей функционирования врожденного иммунитета (ВИ) на основании изучения клеточных и гуморальных факторов иммунитета при различных вариантах течения хронической фетоплацентарной недостаточности (хФПН) на поздних сроках беременности. Показана иммунопатогенетическая роль факторов ВИ в формировании различных вариантов течения хФПН. В диссертации уточнены представления об особенностях клеточных и гуморальных факторов ВИ при физиологическом течении беременности на 32-34 неделе гестации, а также при ее осложнении хФПН; выявлены диагностически значимые параметры функционирования ВИ у беременных с различными вариантами хФПН на поздних сроках гестации (32-34 недели), характер и степень выраженности которых зависит от наличия внутриутробной инфекции, синдрома задержки развития плода, либо их сочетания. Установлены иммунологические адаптивные маркеры компенсированного и субкомпенсированного течения хФПН и иммунологические катамнестические критерии оценки исходов беременности и степени риска инфекционно-воспалительных осложнений у новорожденных в раннем неонатальном периоде. В диссертации показано, что исследование цитокинов в периферической крови новорожденных от беременных с различными вариантами течения хФПН позволяет уточнить исходы беременности, а также прогнозировать вероятность инфекционно-воспалительных осложнений у новорожденных в неонатальном периоде.

Summary

Thesis deals with the actual scientific tasks in the field of immunology of reproduction - the determination of the features profiles of functioning of innate immunity (II) based on the study of cellular and humoral immunity factors in different types of chronic fetoplacental insufficiency (CFPI) in late pregnancy. Shows the role of factors immunopathogenetic II in forming different variants of the CFPI. The dissertation refined understanding of the features of cellular and humoral factors II in physiological pregnancy at 32-34 weeks of gestation, as well as its complications CFPI, revealed important diagnostic parameters functioning II pregnant with various CFPI in the later stages of gestation (32-34 weeks), the nature and extent of which depends on the presence of intrauterine infection, fetal growth retardation syndrome, or a combination thereof. Set adaptive immunological markers subcompensated and compensated flow CFPI prospective follow-up and immunological criteria for evaluating outcomes of pregnancy and the risk of infectious and inflammatory complications in neonates in the early neonatal period. The thesis shows that the study of cytokines in peripheral blood of newborns of pregnant women with different variants of the course CFPI clarifies pregnancy outcomes, and predict the probability of infection and inflammatory complications in newborns at the neonatal period.

Размещено на Allbest.ru

...