Резистентность клеток культуры Нер-2 к апоптозу, некрозу и дистрофии
Проявление спонтанного апоптоза в опухолевых клетках при экспериментальных онкологических исследованиях. Моделирование иммунного гранулематозного воспаления, индуцированного злокачественной опухолью. Определение резистентности клеток культуры Нер-2.
Рубрика | Медицина |
Вид | статья |
Язык | русский |
Дата добавления | 22.07.2013 |
Размер файла | 14,0 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
РЕЗИСТЕНТНОСТЬ КЛЕТОК КУЛЬТУРЫ НЕР-2 К АПОПТОЗУ, НЕКРОЗУ И ДИСТРОФИИ
клетка культура онкологический иммунный
Ильин Д.А., Архипов С.А., Михайлова Л.П., Игнатович Н.В., Ахроменко Е.С.
В настоящее время клеточная культура Нер-2 широко используется для проведения многих исследований прикладного и теоретического характера в различных областях биологии и медицины [1; 2]. Важным критерием, определяющим стабильность культуры, как и любой другой клеточной популяции, считают устойчивость её элементов к спонтанному апоптозу [3; 4; 5; 6]. Длительно поддерживаемая in vitro культура Нер-2 является перевиваемой линией клеток карциномы гортани человека [1; 2]. Поэтому она может быть использована в качестве модели проявления спонтанного апоптоза в опухолевых клетках при экспериментальных онкологических исследованиях. Информацию о резистентности этой культуры к апоптозу, некрозу и дистрофии необходимо учитывать во время совместной инкубации с иммунокомпетентными клетками при моделировании иммунного гранулематозного воспаления, индуцированного злокачественной опухолью [1]. Исходя из вышесказанного, целью исследования являлось определение резистентности клеток культуры Нер-2 к спонтанному апоптозу, некрозу и дистрофии.
Клетки инкубировали в термостате при температуре 370 С в растворе Игла с гидролизатом лактальбумина, добавлением L-глутамина и сыворотки крупного рогатого скота. Препараты фиксировали 50 % раствором этанола и окрашивали азур - эозином. Исходная концентрация посадки в контрольной группе составляла 100 тыс. клеток культуры Нер-2, а в первой и во второй экспериментальных группах она была соответственно 50 и 25 тыс. на 1 мл. Подсчитывали количество клеток, имевших признаки апоптоза, некроза, и клетки в состоянии дистрофии. Определяли концентрацию апоптозных телец на 100 клеток. Результаты оценивали на 24, 48, 72 и 96 часов инкубации. Контролем служили культуры, инкубируемые в течение 24 часов. Все последующие изменения описаны относительно контроля.
Клетки культуры Нер-2 при начальной концентрации 100 тыс. в 1 мл подвергались апоптозу с одинаковой частотой на 24, 48 и 72 часа инкубации, что составляло 5 % от общего числа клеток. На 96 часов наблюдения их количество снижалось в 2,2 раза по сравнению с контрольными культурами (на 24 часа). Численность клеток с признаками фрагментации цитоплазмы превосходила количество клеток с фрагментацией ядра на все сроки экспозиции, за исключением 96 часов, когда наблюдали диаметрально противоположную ситуацию. Количество апоптозных телец имело тенденцию к снижению, начиная с 72 часов инкубации. Число некротизированных клеток прогрессивно увеличивалось, и на 96 часов было больше по сравнению с контрольным параметром в 2,1 раза. Показатели концентрации дистрофически измененных клеток на все сроки наблюдения не имели между собой достоверных различий. Они снижались к 72 часам экспозиции. Максимальные значения митотической активности были зарегистрированы через 72 часа инкубации. Количество клеток в состоянии митоза на указанный срок превосходило контрольный показатель в 3,8 раза.
Из вышесказанного следует, что в культуре Нер-2 отмечали высокую концентрацию клеток в состоянии апоптоза (в контрольный срок наблюдения), которая затем уменьшалась. Митотическая активность напротив, сначала нарастала, достигая максимального уровня, и держалась на нем в течение 2 суток. Вероятно, такое разнонаправленное течение указанных процессов способствует поддержанию баланса между погибшими и новообразованными клетками, который, однако, остается отрицательным на все сроки наблюдения. Большинство апоптозных клеток Нер-2 имели фрагментированную цитоплазму. Апоптозные тельца не подвергались фагоцитозу, а их наивысшую концентрацию находили через 48 часов от начала инкубации. Клетки линии Нер-2 подвергались некрозу одинаково часто на все сроки культивирования, за исключением повышения их содержания через 96 часов. Численность дистрофически поврежденных клеток на 72 часа инкубирования имела тенденцию к снижению.
Две группы с уменьшенной исходной концентрацией клеток в культурах отличались от контрольной тем, что на 48 часов инкубации имели максимальную активность процесса апоптоза, которая двукратно превосходила начальную и снижалась в дальнейшем. В контрольной группе проявления апоптоза имели тенденцию к уменьшению, начиная уже с 48 часов экспозиции. Во всех группах и на все отмеченные сроки наблюдения клетки в состоянии апоптоза чаще имели фрагментированную цитоплазму. Ядро подвергалось фрагментации значительно реже (в 30 % случаев). Численность апоптозных телец во всех группах имела тенденцию к увеличению на 48 и 72 часа инкубации. Максимальное значение разницы содержания апоптозных телец в культурах наблюдали на 72 часа экспозиции. Численность апоптозных телец в группах культур с исходной концентрацией клеток 25 тыс. и 50 тыс. в 1 мл превосходила контрольную на указанные сроки, соответственно в 3,4 и в 5,3 раза. Эти группы имели более высокую численность апоптозных телец по сравнению с контролем на все сроки экспозиции. В целом аналогичная ситуация прослеживалась и в отношении количества клеток с признаками дистрофии. Содержание таких клеток в опытных группах превосходила контрольные параметры в 1,5 - 2 раза на различные сроки инкубации. Достоверных различий в содержании некротизированных клеток в культурах, в зависимости от исходной концентрации посадки, не наблюдалось. Во всех группах максимальное количество клеток в состоянии некроза находили на 96 часов экспозиции.
Степень проявления митотической активности имела прямую зависимость от исходной концентрации клеток во взвеси. В опытных группах максимальное количестве клеток в состоянии митоза было на 24 часа позже, чем в контрольной. Достоверное увеличение количества митотически активных клеток относительно исходного уровня в контрольной группе наблюдалось на 48 часов экспозиции, и только на 72 часа инкубации - в опытных группах. В опытных группах возрастание митотической активности имело линейную зависимость от сроков инкубации, начиная с 48 часов культивирования. В отличие от этого, в контроле митотическая активность сначала нарастала, достигая максимального уровня, и держалась на нем в течение 2 суток, а к 96 часам инкубации уменьшалась.
Таким образом, были выявлены морфологические различия и динамические изменения в активности течения апоптоза, некроза и дистрофии в культуре Нер-2 в зависимости от длительности инкубации и исходной концентрации посадки клеток. Баланс между погибшими клетками и образованными в результате митотического деления был отрицательным на всех сроках наблюдения до 96 часов.
Список литературы
1. Ильин Д.А., Архипов С.А., Михайлова Л.П., Игнатович Н.В., Ахроменко Е.С. Морфоцитологические аспекты взаимодействия клеток в генетически гетерогенных клеточных культурах // Компенсаторно-приспособительные процессы: Всероссийская конференция. -- Новосибирск, 2004. -- С. 32-33.
2. Казначеев В.П., Михайлова Л.П. Сверхслабые излучения в межклеточных взаимодействиях. -- Новосибирск: Наука, 1981. --144 с.
3. Фильченков А.А., Абраменко И.В. Апоптоз в патогенезе заболеваний человека. -- К.: ДИА, 2001. --324 с.
4. Brodbeck W.G., Shive M.S., Colton E., Nakayama Y., Matsuda T., Anderson J.M. Influence of biomaterial surface chemistry on the apoptosis of adherent cells // J. Biomed. Mater. Res. - 2001. - V. 55. - № 4. - Р. 661- 668.
5. Kluck R.M., Bossy-Wetzel E., Green D.R., Newmeyer D.D. The release of cytochrome c from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis // Science. - 1997. - V. 275. - P. 1132-1136.
6. Agostini C., Perin A., Semenzato G. Cell apoptosis and granulomatous lung diseases // Curr. Opin. Pulm. Med. - 1998. - V. 4. - № 5. - Р. 261 - 266.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Содержание ДНК в ядрах опухолевых клеток и изменение числа хромосом. Атипизм обмена нуклеиновых кислот и углеводов. Изменение изоферментного спектра. Накопление в крови эмбриональных белков и ферментов. Изменение функционирования регуляторных систем.
презентация [1,1 M], добавлен 15.09.2015Отношение к животным и этика их использования в экспериментах, история данного воспроса и его исследование на современном этапе. Изолированные культуры клеток и тканей. Методы, альтернативные работе с животными в медицине, их преимущества и значение.
контрольная работа [32,2 K], добавлен 06.06.2011Закладка и первичная дифференцировка парафолликулярных клеток щитовидной железы человека, их значимость в регуляции процессов жизнедеятельности. Цитология и физиология С-клеток щитовидной железы. Медуллярный рак как один из видов злокачественной опухоли.
реферат [21,5 K], добавлен 21.03.2011Канцерогенез: определение и основные стадии опухолевой трансформации клеток, классификация и характеристика провоцирующих факторов. Вирусный онкогенез, клинические признаки. Биологические особенности и свойства злокачественных опухолевых клеток.
презентация [1,0 M], добавлен 24.10.2013Дифференциация стволовых клеток. Использование стволовых клеток в медицине: проблемы и перспективы. Пуповинная кровь как источник стволовых клеток. Лекарства будут испытывать на стволовых клетках. Эмбриональные и соматические стволовые клетки.
реферат [851,0 K], добавлен 24.07.2010Проблема терапевтической резистентности шизофрении. Лимит эффективности психотропных препаратов. Резистентность негативной симптоматики. Биологические методы преодоления лекарственной резистентности у больных шизофренией с позиции доказательной медицины.
презентация [566,5 K], добавлен 08.12.2014История создания и понятие культуры клеток и тканей. Анализ влияния генетических, физических и химических факторов на рост и развитие культур. Особенности образования полифенолов, алкалоидов и вторичных метаболитов в культуре тканей различного рода.
курсовая работа [400,8 K], добавлен 18.05.2010Опухоли – группа генных болезней с неконтролируемой пролиферацией клеток, их классификация. Механизм действия радиационного канцерогенеза. Действие радиации на ДНК. Основные химические канцерогены. Защитные механизмы опухолевых клеток, их метаболизм.
презентация [1,9 M], добавлен 17.06.2014Первичные и врожденные нарушения нормального иммунного статуса, обусловленные дефектом одного или нескольких механизмов иммунного ответа. Факторы, определяющие неспецифическую резистентность. Действие гормонов, нейромедиаторов и пептидов на клетки.
презентация [502,4 K], добавлен 05.02.2017Факторы и регуляция дифференцировки. Стволовая клетка и дифферон. Особенности протекания и характерные признаки апоптоза и некроза. Причины и факторы опухолевой трансформации клеток. Описание стадий превращения нормальной клетки в трансформированную.
лекция [28,0 K], добавлен 27.07.2013Определение иммунитета, его типы и виды. Общая схема иммунного ответа. Маркеры и рецепторы клеток иммунной системы. Распределение T-клеток в организме. Особенности структуры имунноглобулина, его классы и типы. Общая характеристика энергетических реакций.
реферат [203,4 K], добавлен 19.10.2011Основное свойство стволовых клеток - дифференциация в другие типы клеток. Виды стволовых клеток. Рекрутирование (мобилизация) стволовых клеток, их пролиферация. Болезни стволовых клеток, их иммунология и генетика. Генная терапия и стволовые клетки.
курсовая работа [94,3 K], добавлен 20.12.2010Роль тучных клеток в регуляции гомеостаза организма. Локализация тучных клеток, их медиаторы. Секреция медиаторов и их функции. Основные типы тучных клеток. Рецепторы и лиганды, эффекты медиаторов. Участие тучных клеток в патологических процессах.
презентация [2,2 M], добавлен 16.01.2014История открытия метода гибридизации соматических клеток, его использование в регенераторной медицине; инструменты клеточной инженерии. Иммунотерапия онкологических заболеваний с помощью стволовых и дендритных клеток. Направления развития наномедицины.
реферат [45,9 K], добавлен 14.12.2012Отделы желудка. Состав желудочного сока. Клетки желез и их секреты. Механизм образования соляной кислоты в обкладочных клетках. Регуляция париетальных клеток. Функции гастрина. Виды пепсинов. Электрическая активность гладкомышечных клеток разных отделов.
презентация [3,2 M], добавлен 13.12.2013Виды злокачественных и доброкачественных опухолей, их биологические особенности, атипизм размножения. Частота выявления болезни. Причины ее возникновения. Цитологическая и гистологическая дифференцировка опухолевых клеток. Их взаимодействие с организмом.
презентация [25,4 K], добавлен 12.04.2014Понятие и функции стволовых клеток, их типы в зависимости от способов получения, потенциал. Характеристики эмбриональных стволовых клеток. Дифференцировки стволовых клеток костного мозга. Органы и ткани, которые ученые смогли вырастить с их помощью.
презентация [817,5 K], добавлен 04.11.2013Морфология апоптоза - физиологической гибели клеток в живом организме. Структура и функции белков, участвующих в его регуляции. Цитопротекторы - лекарственные средства, защищающие здоровые клетки от цитотоксического действия лекарственных препаратов.
презентация [1,5 M], добавлен 14.03.2017Дистрофии как количественные и качественные структурные изменения в клетках и/или межклеточном веществе органов и тканей, обусловленные нарушением обменных процессов. Их причины и механизмы, морфологическая сущность. Врожденные и приобретенные дистрофии.
презентация [3,4 M], добавлен 24.03.2016Экзогенные и эндогенные факторы, патогенез воспаления. Нарушение обмена веществ в очаге воспаления. Физико-химические изменения в организме. Исследование механизма экссудации. Пролиферация клеток и эмиграция лейкоцитов. Плазменные медиаторы воспаления.
презентация [437,1 K], добавлен 18.10.2013