Размещено на http://www.allbest.ru/

Изучение антоцианозидов, выделенных из плодов черники обыкновенной

Маршанова Л.М

Черника обыкновенная (Vaccinium myrtillus), широко распространенное лекарственное растение, плоды которого используются для улучшения зрения, а также при других заболеваниях. В составе черники обыкновенной, в качестве красителя, присутствуют антоцианозиды. Это гликозиды, в состав которых входят различные полифенольные соединения, отличающиеся по положению радикалов, и различные углеводные компоненты.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рисунок 1.- Полифенольный агликон антоцианозидов, встречающиеся в чернике обыкновенной.

Состав радикалов и их месторасположение, встречающиеся в полифенольном агликоне антоцианозидов, и соответствующие названия соединений представлен в табл. 1.

Таблица 1.- Состав радикалов полифенольных агликонов антоцианозидов, выделенных из черники обыкновенной

В качестве углеводной составляющей этих гликозидов служат глюканы, галактаны, арабаны. Таким образом, сочетание различных агликонов и углеводных составляющих приводит к большому разнообразию антоцианозидов, встречающиеся в плодах и листьях черники обыкновенной. В настоящее время в плодах черники обыкновенной обнаружено 15 антоцианозидов [1].

Наш интерес к антоцианозидам черники обыкновенной был обусловлен тем, что многие из них при потреблении уменьшают риск сердечно-сосудистых заболеваний и предотвращают некоторые хронические болезни. Кроме того, сообщалось, что антоцианозиды уменьшают формирование тромбов, улучшают визуальную функцию, обладают сосудорасширяющими свойствами и могут проявлять положительные неврологические эффекты. Эксперименты in vitro также показали, что антоцианозиды приостанавливали рост раковых клеток и вызывали их разрушение [2,3]. Положительные эффекты этих пигментов могли быть связаны с их мощной антиоксидантной активностью, демонстрируемой в различном in vitro и в исследованиях in vivo [4-8].

Данными клинических исследований подтверждена способность антоцианозидов, содержащихся в листьях и плодах черники, ускорять регенерацию светочуствительного пигмента - родопсина, улучшать трофику сетчатки глаза, стимулировать ее микроциркуляцию и восстанавливать тканевые механизмы защиты сетчатки [9]. Поэтому нами ставилась цель исследовать состав антоцианозидов, содержащиеся в плодах черники обыкновенной с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием ультрафиолетового детектора.

Материалы и методы исследования

Объекты исследований

В качестве объектов исследования были плоды черники обыкновенной, полученные путем сбора в местах произрастания в Карачаево-Черкесской республике, а также приобретенные в торговле в замороженном виде.

Выделение антоцианозидыов

Антоцианозиды черники обыкновенной были получены путем настаивания ягод в 0,12 моль/л HCl в 10 % этаноле в течение 24 часов в соотношении 100 мл/100 г продукта и затем полученный экстракт отделяли от ягод и нейтрализовали раствором бикарбоната натрия до нейтральной среды и высушивали под вакуумом на роторном испарителе при температуре 350 С. К сухому остатку вновь приливали 25 мл 10% водного раствора этанола и вновь экстрагировали в течение 24 часов путем настаивания. Экстракт центрифугировали, вновь высушивали под вакуумом при температуре 350 С до объема 1 мл. Полученный экстракт в количестве 50 мкл вводили в жидкостный хроматограф.

ВЭЖХ анализ

Анализ антоцианозидов проводился с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии [991, Waters] с использование в качестве датчика ультрафиолетовый детектор (785A, Perkin Elmer, Франция), а регистрация осуществлялась при длине волны 524 нм. Элюирование было проведено, используя в качестве основного раствора А - вода/H3 PO4 (99:1) и растворитель ацетонитрил в качестве раствора В. Все образцы были проанализированы как описано в (10).

Образцы, полученные при экстракции черники обыкновенной, были разделены на колонке (150 x 4,6 мм) Uptisphere 30DB C18-3 мкм защищенный предколонкой (Uptisphere 30DB C18-3мкм, 10 x 4 мм; Interchim Франция). Хроматографические условия разделения были следующие при скорости элюирования 1 мл/мин: 0-10 мин, при добавлении 9 % раствора B к раствору А; 10-25 мин, линейный градиент от 9 % B к 12 % раствора B, 25-40 мин, линейный градиент от 12 % B к 16 % раствора B; 40-45 минут, 16 % B; 45-50 мин, линейный градиент от 16 % B к 40 % B.

Идентификация хроматографических пиков в образцах была проведена по сравнению с подлинными результатами, основанными на временах удержания отдельных веществ при ВЭЖХ анализе при ультрафиолетовом детектировании.

Обсуждение результатов

В исследуемых образцах плодов черники обыкновенной вначале были проведены качественные характеристики отдельных антоцианозидов. Было идентифицировано по временам удерживания 15 соединений. При варьировании условий хроматографирования были максимально получены 13 пиков, что хорошо показано на рис. 2.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Рисунок 2.- Хроматографическое разделение антоцианозидов из плодов черники обыкновенной с помощью ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием при 524 нм.

1.- Дельфинидин 3-галактозид; 2.- Дельфинидин 3-глюкозид; 3.- Цианидин 3-галактозид; 4.- Дельфинидин 3-арабинозид; 5.- Цианидин 3-глюкозид; 6.- Петунидин 3-галактозид; 7.- Цианидин 3-арабинозид; 8.- Петунидин 3-глюкозид; 9.- Пеонидин 3-галактозид; 10.- Петунидин 3-арабинозид; 11.- Пеонидин 3-глюкозид + Мальвидин 3-галактозид; 12.- Пеонидин 3-арабинозид + Мальвидин 3-глюкозид; 13.- Мальвидин 3-арабинозид.

Затем были проведены исследования по определению количественного содержания отдельных антоцианозидов в плодах черники обыкновенной, полученной как в Карачаево-Черкесской республике, так и из других регионов Российской Федерации. Всего было исследовано 7 образцов. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1.- Количественное содержание отдельных антоцианозидов в плодах черники обыкновенной, произрастающей в разных регионах РФ

Как видно из данных табл.2, антоцианозиды, содержащие агликон дельфинидин, количественно преобладает во всех исследуемых образцах. Второе место занимают антоцианозиды, содержащие агликон цианидин, а затем уже в разных образцах преобладают те или иные антоцианозиды.

Таблица 2- Количественное содержание отдельных антоцианозидов по агликонам в плодах черники обыкновенной, произрастающей в разных регионах РФ

агликон антоцианозид черника хроматография

Особый интерес, содержащихся в плодах черники антоцианозидов, привлекают исследователей из-за их оригинальных свойств. По данным различных авторов, данные вещества обладают противовоспалительным и антиоксидантным действием. Они способствуют улучшению реологических свойств крови (снижая тонус сосудистой стенки и уменьшая тромбообразование), способствуют укреплению стенки кровеносных сосудов (эффект обусловлен способностью данных веществ влиять на регуляцию биосинтеза коллагена), а также ускоряют восстановление обесцвеченного родопсина.

Фармакокинетические исследования антоцианозидов показали, что после внутривенного введения данные вещества быстро распределяются в различных тканях. Выделение происходит с мочой и желчью. После разового орального введения концентрация антоцианозидов в плазме достигает максимума через 15 мин и затем быстро снижается в течение 2 часов. Несмотря на ограниченное желудочно-кишечное всасывание и низкую абсолютную биодоступность (1,2% введенной дозы), максимальное значение в плазме (2-3 мкг/мл) после орального приема находится в диапазоне биологической активности для данных веществ.

Особый интерес вызывает выявление усиления биологической активности антоцианозидов за счет отделения углеводной части и использования их уже в виде агликона.

Литература

1. Talavйra S., Felgines C., Texier O., Besson C. , Lamaison J.-L., Rйmйsy C. (2003) Anthocyanins Are Efficiently Absorbed from the Stomach in Anesthetized Rats. J. Nutr. 133:4178-4182

2. Katsube, N., Iwashita, K., Tsushida, T., Yamaki, K., Kobori, M. (2003) Induction of apoptosis in cancer cells by bilberry (Vaccinium myrtillus) and the anthocyanins. J. Agric. Food Chem. 51:68-75.

3. Kang, S. Y., Seeram, N. P., Nair, M. G., Bourquin, L. D. (2003) Tart cherry anthocyanins inhibit tumor development in Apc(Min) mice and reduce proliferation of human colon cancer cells. Cancer Lett. 194:13-19.

4. Wang, H., Nair, M. G., Strasburg, G. M., Chang, Y. C., Booren, A. M., Gray, J. I., DeWitt, D. L. (1999) Antioxidant and antiinflammatory activities of anthocyanins and their aglycon, cyanidin, from tart cherries. J. Nat. Prod. 62:294-296.

5. Tsuda, T., Watanabe, M., Ohshima, K., Norinobu, S., Choi, S.-W., Kawakishi, S., Osawa, T. (1994) Antioxidative activity of the anthocyanin pigments cyanidin 3-O-beta-D-glucoside and cyanidin. J. Agric. Food Chem. 42:2407-2410.

6. Wang, H., Cao, G., Prior, R. L. (1997) Oxygen radical absorbing capacity of anthocyanins. J. Agric. Food Chem. 45:304-309.

7. Matsumoto, H., Nakamura, Y., Hirayama, M., Yoshiki, Y., Okubo, K. (2002) Antioxidant activity of black currant anthocyanin aglycons and their glycosides measured by chemiluminescence in a neutral pH region and in human plasma. J. Agric. Food Chem. 50:5034-5037.

8. Ramirez-Tortosa, C., Andersen, O. M., Gardner, P. T., Morrice, P. C., Wood, S. G., Duthie, S. J., Collins, A. R., Duthie, G. G. (2001) Anthocyanin-rich extract decreases indices of lipid peroxidation and DNA damage in vitamin E-depleted rats. Free Radic. Biol. Med. 31:1033-1037.

9. Миртикам - лекарство для глаз.- КОФ, Том 3 № 3, 2002
10. Felgines, C., Talavйra, S., Gonthier, M. P., Texier, O., Scalbert, A., Lamaison, J. L., Rйmйsy, C. (2003) Strawberry anthocyanins are recovered in urine as glucuro- and sulfoconjugates in humans. J. Nutr. 133:1296-1301.

Размещено на Allbest.ru