Размещено на http://www.allbest.ru/

ЭТНИЧЕСКАЯ ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ КАК ФАКТОР РИСКА РАЗВИТИЯ ПРОЛАПСА ГЕНИТАЛИЙ И НЕДЕРЖАНИЯ МОЧИ.

Закрытная О.С., Ящук А.Г.

Актуальность. Нерешенной проблемой современной медицины является прогнозирование вероятности развития заболевания, выявление неблагоприятных преморбидных факторов. Выделение групп риска и ранняя диагностика при скудной клинической симптоматике позволят своевременно начать патогенетически обоснованное лечение и улучшить качество жизни пациентов.

Синдром дисплазии соединительной ткани (ДСТ) является нозологически самостоятельным синдромом полигенно-мультифакториальной природы и проявляется внешними фенотипическими признаками ДСТ в сочетании с диспластическими изменениями соединительно ткани и клинически значимой дисфункцией одного или нескольких внутренних органов [2] Ряд исследователей рассматривают опущение и выпадение внутренних половых органов (ОиВВПО) женщин как частное проявление синдрома ДСТ на уровне репродуктивной системы [4]. Частота сочетания пролапса гениталий с недержанием мочи (НМ) может достигать 75% [3]. Отечественными и зарубежными авторами показаны качественные и количественные различия состава соединительной ткани при сравнении морфологии связочного аппарата у континентных и инконтинентных женщин [1,6]. Исследователями разных стран ведется поиск генетической обусловленности пролапса гениталий и недержания мочи у женщин.

По литературным данным выявлена связь полиморфизмов гена рецептора витамина Д со многими мультифакторными заболеваниями. Установлено, что рецептор витамина Д относится к ядерным рецепторам и подобно другим ядерным рецепторам регулирует активность многих генов путем связывания со специфическими последовательностями ДНК в их промоторных областях. Вариации в экспрессии и функции гена рецептора витамина Д могут обусловливать существенные различия в функциональной активности тех генов-мишеней, на которые воздействует продукт этого гена.

Цель: выявление генетической предрасположенности к развитию ОиВВПО и НМ у больных с клиническими проявлениями ДСТ на основе изучения полиморфизма гена рецептора витамина Д. Исследование данного ДНК-локуса у больных с выпадением женских половых органов и недержанием мочи ранее не проводилось.

Материал и методы исследования. Для молекулярно-генетического анализа использованы ДНК 116 неродственных женщин с различной степенью опущения и выпадения женских половых органов, из них 67 имели симптомы стрессового недержанием мочи различной степени тяжести, а также контрольной группы здоровых доноров - 140 женщин без клинических признаков патологии соединительной ткани, принадлежащих трем самым многочисленным этническим группам Республики Башкортостан (52 русских, 50 татар, 38 башкир). Средний возраст обследованных пациентов составил 52,25+12,03 года. По национальному составу больные с ОиВВПО и НМ распределились следующим образом: 48% татар, 25% русских, 7% башкир и 20% метисов. Забор крови проводился на базе гинекологического отделения городской больницы №8 (г. Уфа) и кафедры акушерства и гинекологии №2 БГМУ.

Выделение ДНК из цельной крови проводилось методом последовательной фенольно-хлороформной экстракции 22. Генотипирование FokI полиморфизма гена рецептора витамина Д (VDR), проводилось методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР) с использованием праймеров (табл.1). Для генотипирования локуса FokI гена VDR использовалась рестриктаза BseGI, с последующей инкубацией при 55°С в течение 4 ч. Результаты рестрикционного анализа оценивали путем проведения электрофореза в 7% -ном полиакриламидном геле с последующим окрашиванием бромистым этидием и визуализацией под ультрафиолетовыми лучами. Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ Statistica v.5.5 и Genepop v.1.2

Таблица 1

Праймеры, использованные для амплификации исследованного локуса

Результаты и обсуждение. Нами проведен анализ ассоциаций полиморфизма FokI гена VDR целью выявления возможного сцепления с ОиВВПО и НМ. FokI полиморфизм во втором экзоне гена VDR обусловлен заменой тимина на цитозин (АТ>GACG) в первом сайте инициации трансляции, приводящей к синтезу укороченного на три аминокислоты белка (белок начинает синтезироваться со второго сайта инициации, лежащего на 3 кодона ниже), активность которого в 1,7 раз выше, чем у удлиненного варианта [7]. Аллель, детерминирующий синтез рецептора витамина Д размером 427 аминокислот обозначается как *f, тогда как более короткого варианта рецептора (424 аминокислоты) - *F. В популяциях вариант f рецептора встречается с частотой порядка 65%, что, возможно, отражает его эволюционные преимущества по сравнению с коротким вариантом рецептора витамина Д [5].

Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса FokI гена VDR у здоровых доноров русской, татарской и башкирской этнической принадлежности представлено табл.2.

генетическая предрасположенность полиморфизм ген

Таблица 2

Распределение частот аллелей и генотипов FokI полиморфизма гена VDR в этнических группах здоровых доноров

Частота аллеля VDR*f в контрольной группе варьировала от 0,55 у татар до 0,724 у башкир, доставляя в среднем 0,621. Анализ гетерогенности исследуемых этнических групп здоровых доноров из Башкортостана обнаружил достоверные различия в распределении частот аллелей исследуемого ДНК-локуса между татарами и башкирами (чІ=б,83, p=0,01). У больных частота аллеля VDR*f составила 0,672, варьируя от 0,5 у больных башкирской этнической принадлежности до 0,741 в группе больных татарского происхождения (табл.3).

Таблица 3

Распределение частот аллелей и генотипов FokI полиморфизма гена VDR у больных с ОиВВПО и НМ

Сравнительный анализ распределения частот генотипов полиморфного локуса FokI гена VDR в этнических группах контроля обнаружил достоверные различия популяций татар и башкир по генотипам VDR*f/*f (чІ=4,07; p=0,05) и VDR*F/*F (чІ=5,76; р=0,025). Частота гетерозиготного генотипа VDR*F/*f была примерно одинаковой во всех исследуемых группах контроля, варьируя от 0,461 до 0,5. Генотип VDR*F/*F встречался с частотой 0,026 у башкир, 0,154 у русских и 0,2 у татар. Частота аллеля VDR*F у русских и башкир была приблизительно одинаковой (0,385 и 0,3 соответственно), тогда как у татар составила 0,5. Достоверных различий в распределении частот аллелей и генотипов полиморфного локуса FokI гена VDR между общими выборками больных ОиВВПО и НМ и здоровых доноров не обнаружено (p>0,05). Значения частот аллелей в обеих группах были приблизительно одинаковыми с превалированием аллеля VDR*f (0,621 в контроле и 0,672 у больных), при этом у больных преобладал генотип VDR*Ff*f, тогда как в контрольной группе чаще встречался генотип VDR*F/*f (0,491 и 0,479, соответственно).

При разделении исследуемых нами выборок согласно национальностям выявлены достоверные различия в частоте аллеля VDR*F (чІ=5,74, p=0,025) и генотипа VDR*F/*F между больными и здоровыми башкирами (чІ=9,83, р=0,005). Относительный риск (ОR) для носителей аллеля VDR*F составил 3,725 (95%СI 1,22 - 11,37), для аллеля VDR*f - ОR=0,27 (p=0,025, 95%СI 0,088 - 0,82), а для носителей генотипа VDR*F/*F - 21,6 (95%СI 1,25 - 250). У больных татар с ОиВВПО и НМ выявлены достоверные отличия по распределению частот аллелей (чІ=8,5, p<0,005). Относительный риск для носителей аллеля VDR*F составил 2,3 (95%СI 1,3 - 4,2), для аллеля VDR*f - ОR=0,43 (95%СI 0,24 - 0,76), что позволяет рассматривать аллель VDR*F в качестве аллеля риска, а аллель VDR*f - протективного варианта гена VDR. У русских больных не обнаружены статистически достоверные различия по распределению частот аллелей и генотипов локуса FokI гена VDR (p >0,05).

Таким образом, анализ распределения частот аллелей и генотипов FokI - полиморфизма гена VDR между больными различной этнической принадлежности и контрольной группой позволил выявить этноспецифичные аллели и генотипы риска развития ОиВВПО и НМ. Обнаружена ассоциация аллеля VDR*F гена VDR с развитием ОиВВПО и НМ у больных башкир и татар, а также генотипа VDR*F*F гена VDR с развитием ОиВВПО и НМ у больных башкир. Обнаружены протективный генотип VDR*f*f для татар и протективный аллель VDR*f для башкир.

Выводы