Методы автоматизированного подсчета форменных элементов крови

Размещено на http://www.allbest.ru/

Введение

Общий анализ крови (ОАК) предоставляет клиницистам важнейшую информацию, т. к. характеризует физиологическое состояние организма, изменяющееся под воздействием различных внешних и внутренних факторов, является неотъемлемой частью диагностического процесса и последующего мониторинга на фоне проводимой терапии. В 1895 году швейцарский врач Сали впервые предложил колориметрический метод определения концентрации гемоглобина в крови,прошло более века, однако до сих пор общий анализ крови не потерял значимости, актуальности.

Развитие прикладных медицинских наук усовершенствовало подход к этому исследованию, но не изменило его сути. По-прежнему врачей интересует концентрация гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в единице объема крови, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и лейкоцитарная формула. На смену рутинному подсчету клеток в счетной камере и визуальному определению гемоглобина в гемометре Сали пришли новые технологии, реализованные в гематологических анализаторах.

Помимо общеизвестных показателей, использование анализаторов позволило пополнить ОАК новыми диагностически значимыми параметрами, которые расширили понимание процессов, происходящих в крови в норме и при патологиях, стало реальным предоставлять значительно больше клинической информации о состоянии кроветворной системы и реагировании ее на различные внешние и внутренние факторы.

1. Материал для проведения общего клинического анализа крови

общий клинический анализ кровь

Венозная кровь считается оптимальным материалом для клинического исследования. Это обусловлено тем, что при известной стандартизации процессов забора, хранения, транспортировки крови удается добиться минимальной травматизации и активации клеток, примеси других веществ (тканевой жидкости), при этом всегда имеется возможность повторить и/или расширить анализ.

Пункция кожи с целью получения капиллярной крови является процедурой выбора в тех ситуациях, когда получение венозной крови невозможно (у новорожденных, ожоговых больных, при выраженном ожирении, спавшихся венах). Однако следует помнить, что при прохождении капиллярной крови через поврежденную ткань активируются процессы свертывания крови, а с тканевой жидкостью в образец попадает большое количество тромбопластина, что влечет за собой образование в пробирке микросгустков.
Что касается нормальных значений основных показателей крови, то нет указаний на какие-либо достоверные различия в клеточном составе венозной и капиллярной крови, а также в концентрации гемоглобина и СОЭ.

2. Автоматизированное исследование клеток крови

Высокотехнологические гематологические анализаторы способны измерять более 32 параметров крови, осуществлять полный дифференцированный подсчет лейкоцитов по 5-ти основным популяциям: нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты.

Аналитические возможности гематологических анализаторов:

· высокая производительность (до 100-120 проб в час)

· небольшой объем крови для анализа (12-150 мкл)

· анализ большого количества (десятки тысяч) клеток

· высокая точность

· оценка 18-30 и более параметров

· графическое представление результатов в виде гистограмм,скатерограмм.

Гематологические анализаторы имеют систему обозначения - флаги или "сигналы тревоги" - указывающую на отклонение параметров от установленных границ. Они могут касаться как увеличения или уменьшения количества тех или иных клеток, так и изменения их функционального состояния, которое отражается на характеристиках измеряемых прибором клеток.

Диагностические возможности гематологических анализаторов:

· оценка состояния гемопоэза

· диагностика и дифференциальная диагностика анемий

· диагностика воспалительных заболеваний

· оценка эффективности проводимой терапии

· мониторинг за мобилизацией стволовых клеток из костного мозга.

Несмотря на все достоинства, даже самые современные гематологические анализаторы обладают некоторыми ограничениями, которые касаются точной морфологической оценки патологических клеток (например, при лейкозах), и не в состоянии полностью заменить световую микроскопию.

Автоматические счетчики крови оценивают размеры, структурные, цитохимические и другие характеристики клеток. Они анализируют около 10000 клеток в одном образце и имеют несколько различных каналов подсчета клеточных популяций и концентрации гемоглобина.

На основании количества определяемых параметров и степени сложности их можно условно разделить на 3 основных класса:

I класс - автоматические гематологические анализаторы, определяющие до 20 параметров, включая расчетные показатели красной крови и тромбоцитов, гистограммы распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему, а так же частичную дифференцировку лейкоцитов на три популяции - лимфоциты, моноциты и гранулоциты.

II класс - высокотехнологичные гематологические анализаторы, позволяющие проводить развернутый анализ крови, в том числе полную дифференцировку лейкоцитов по 5-ти параметрам (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты), гистограммы распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему, скатерограммы.

III класс - сложные аналитические системы, выполняющие не только развернутый анализ крови с дифференцировкой лейкоцитов по 5 параметрам, но и подсчет и анализ ретикулоцитов, некоторых субпопуляций лимфоцитов;

В основе работы анализаторов I-го класса лежит кондуктометрический метод. Анализаторы II и III-го классов используют в своей работе комбинации разных методов.

1. Кондуктометрические гематологические анализаторы

Рисунок 1. Схема регистрации клеток, проходящих через апертуру

Апертуро-импедансный метод (метод Культера или кондуктометрический метод) основан на подсчете числа и определении характера импульсов, возникающих при прохождении клеток через отверстие малого диаметра (апертуру), по обе стороны которого расположены два изолированных друг от электрода.

Рисунок 2. Принцип "Культера", схема строения.

Если через узкий канал, заполненный электропроводящим раствором, проходит клетка крови, то в этот момент сопротивление электрическому току в канале возрастает. Несмотря на то, что изменение сопротивления невелико, современные электронные приборы легко его улавливают.

1. электрод

2. апертурная ванна

3. апертура

4. корпус апертуры

5. суспензия клеток

6. электрод

7. вакуум

8. прохождение потока 9. Апертура

В пространстве апертуры возникает так называемая «чувствительная зона», проходя через которую, каждая частица/клетка вытесняет определенное количество электролита, вызывая импульсное возрастание сопротивления. В результате происходит небольшое изменение величины электрического тока в усилителе, который преобразует колебания силы тока в импульсы напряжения, которые находятся в прямой зависимости от размера прошедшей через апертуру клетки. Чем крупнее клетка, тем выше значение импульса. Чтобы определить концентрацию клеток, достаточно пропустить определенный объем пробы через канал и подсчитать число электрических импульсов, которые при этом генерируются.

Если в один и тот же момент в канале находятся две клетки, они регистрируются в виде одного импульса, что приведет к ошибке подсчета клеток. Во избежание этого, проба крови разводится до такой концентрации, при которой в канале датчика всегда будет не больше одной клетки.

Метод кондуктометрии в фокусированном потоке создает оптимальные условия для надежного подсчета клеток при помощи гидродинамического фокусирования.

Первичный фокусирующий поток заставляет клетки проходить через апертуру одной цепочкой, а вторичный предотвращает возврат к апертуре уже подсчитанных клеток. Эти сфокусированные клетки измеряются по сопротивлению постоянному току, проходящему между электродами, которые расположены по разные стороны счетной апертуры.

Рисунок 3. Гидродинамическое фокусирование

Апертуро-импедансный метод позволяет определять большинство эритроцитарных и тромбоцитарных показателей, связанных с объемом клеток, а также является основой для дифференцировки лейкоцитов по трем параметрам.

3. Подсчет эритроцитов и тромбоцитов, расчет величины гематокрита, эритроцитарных и тромбоцитарных индексов

Разделение эритроцитов и тромбоцитов в современных анализаторах проводится по измерению амплитуды электрического сигнала: тромбоциты (небольшие по размеру клетки) при прохождении измерительного канала генерируют электрические импульсы низкой амплитуды, а сравнительно большие клетки - эритроциты и лейкоциты - импульсы высокой амплитуды. После лизиса эритроцитов в суспензии остаются лейкоциты. Из первого счета импульсов высокой амплитуды вычитают импульсы высокой амплитуды второго счета (лейкоциты). Разница импульсов высокой амплитуды до и после лизиса соответствует количеству эритроцитов - RBC (Red Blood Cells).

Устройство, разделяющее импульсы по величине амплитуды, называется дискриминатор. В современных анализаторах применяются многоканальные дискриминаторы, позволяющие получить детальную информацию о размерах клеток в виде гистограмм.

Дискриминатор

- устройство, преобразующее изменение контролируемого параметра электрического сигнала (на входе) в изменение полярности напряжения (на выходе).

Амплитудный дискриминатор выдаёт импульс на выходе, когда амплитуда входного сигнала превышает порог дискриминации Uпор. Обычно имеется возможность изменять порог дискриминации в широких пределах и тем самым отделять для последующей регистрации импульсы определённых амплитуд. В дискриминаторе сравниваются значения параметра (амплитуды, длительности, полярности, частоты, фазы) входного сигнала с номинальным значением этого параметра опорного источника сигнала. В результате сравнения на выходе дискриминатора возникает разностное напряжение рассогласования. Его амплитуда и полярность определяются степенью и знаком отклонения значения данного параметра входного сигнала от номинального.

Рисунок 4. Простая дискриминация импульсов по амлитуде

Амплитудный дискриминатор имеет определённый уровень срабатывания и пропускает только сигналы с амплитудой выше (ниже) номинального значения.

Амплитудный дискриминатор - один из основных узлов спектрометрической аппаратуры, используемой для амплитудного анализа импульсов напряжения, пропорциональных энергии ядерного излучения. Дискриминатор предназначен для пропускания импульсов последующие устройства анализатора только с определёнными амплитудами.

Сигналы некоторых детекторов несут информацию об энергии зарегистрированного кванта или частицы: их амплитуда пропорциональна энергии. Поэтому, исследуя распределение амплитуд импульсов нетрудно получить спектр излучения. В простейшем случае такие измерения могут быть выполнены также с помощью амплитудного дискриминатора. Для этого производится подсчёт импульсов на выходе дискриминатора при разных порогах срабатывания в течение одинаковых интервалов времени. Получаемая при этом кривая n=f(Uпор) называется интегральным амплитудным спектром.



Рисунок 5. Амплитудные спектры:

а) - интегральный

б) - дифференциальный

Каждая точка кривой показывает, какое число импульсов имеет амплитуду А, превышающую порог срабатывания Uпор дискриминатора. По форме интегральной кривой можно судить о составе спектра исследуемого излучения.

При суммировании амплитуд импульсов, получаемых при подсчете количества эритроцитов, получается величина, отражающая общий объем, занимаемый эритроцитами, то есть гематокрит Hct. Разделив гематокритную величину на концентрацию эритроцитов (RBC), получается полезная характеристика эритроцитов - средний объем MCV (mean corpuscular volume). Аналогичные показатели можно получить и для тромбоцитов: концентрация тромбоцитов - PLT (platelet), тромбокрит - РСТ (platelet crit), средний объем тромбоцитов - MPV (mean platelet volume).

В норме концентрация эритроцитов в крови на 3 порядка превышает концентрацию лейкоцитов, вклад лейкоцитов в общее количество подсчитываемых клеток пренебрежимо мал по сравнению с эритроцитами, поэтому в некоторых анализаторах за количество эритроцитов принимают общее подсчитанное количество клеток. Такое допущение справедливо, за исключением случаев явных лейкоцитозов.

4. Подсчет и дифференцировка лейкоцитов

Определение количества лейкоцитов возможно только после лизиса эритроцитов. Эта задача оказалась легко решаемой, так как свойства мембран эритроцитов и лейкоцитов существенно различаются. Эритроциты легко лизируются под воздействием многих поверхностно-активных веществ, при этом лейкоциты, хотя и претерпевают некоторые изменения, остаются целыми. Поэтому при подсчете лейкоцитов, прежде чем пропустить разведенную суспензию крови через апертуру датчика, к ней добавляют лизирующий раствор или гемолитик, эритроциты разрушаются до очень мелких фрагментов, которые при подсчете лейкоцитов генерируют электрические импульсы очень низкой амплитуды, не влияющие на результат анализа.

Разделение неизмененных лейкоцитов кондуктометрическим методом на основные субпопуляции невозможно в виду близости их объемов, однако можно подобрать такую композицию растворителя и гемолитика, что различные формы лейкоцитов претерпевают изменения размеров в разной степени и, благодаря этому, могут разделяться данным методом. Изменение объема клетки зависит от многих факторов, включающих величину и форму ядра, объем цитоплазмы, наличие внутриклеточных включений и т.д., поэтому размер трансформированных клеток не соответствует размерам клеток при визуальном просмотре их в окрашенном мазке крови (таблица 1).

Таблица 1

Соотношение размеров клеток в окрашенных мазках крови и в приборах после обработки их лизирующим реагентом

Тип клеток	Размер клеток при визуальном анализе мазков крови	Размер клеток после обработки лизатом
Лимфоциты	малый	малый
Базофилы	средний	средний, малый
Эозинофилы	средний	средний, большой
Моноциты	наибольший	средний
Нейтрофилы	средний	большой, средний
Патологические формы клеток	различный	различный

Полученные после анализа лейкоциты распределяются на гистограмме следующим образом:

- Область малых объемов (35-90 фл) формируется лимфоцитами, которые под действием гемолитика значительно уменьшаются в объеме.

- Гранулоциты (нейтрофилы, базофилы и эозинофилы), напротив, подвергаются небольшому сжатию и расположены в области больших объемов (120-400 фл).

- Между двумя пиками имеется зона так называемых "средних лейкоцитов" (90-120 фл), которая лучше всего коррелирует с моноцитами (по этой причине в некоторых анализаторах клетки в этой области указываются как моноциты). Однако, коэффициент корреляции с моноцитами R = 0,5-0,8 сравнительно невысок, более корректным является название параметра "средние лейкоциты" MID. Практически в область средних клеток могут частично попадать базофилы, эозинофилы, различные патологические формы.

5. Основные реагенты кондуктометрических анализаторов

Основными составляющими комплектов реагентов для кондуктометрических гематологических анализаторов являются:

а) изотонический разбавитель; б) лизирующий раствор;

А) Изотонический разбавитель - это буферный раствор с фиксированными параметрами рН, электропроводности и осмолярности. Слово «изотонический» указывает только на одно и не самое важное свойство реагента - поддержание требуемого осмотического давления с целью обеспечения постоянства объема клеток крови. Дело в том, что эритроциты принимают тот объем, который им диктует осмолярность раствора. При увеличении осмолярности эритроциты сжимаются до некоторого равновесного объема. Если осмолярность раствора уменьшается, объем эритроцитов, соответственно, увеличивается. Таким образом, средний объем эритроцитов (MCV) увязывается с осмолярностью изотонического разбавителя. Стабилизирующие добавки в изотоническом разбавителе должны обеспечивать сохранность форменных элементов крови в течение достаточно длительного. Присутствие в растворе антикоагулянта должно эффективно предотвращать образование фибриновых сгустков и агрегацию тромбоцитов. В случае гематологических анализаторов, проводящих дифференциацию лейкоцитов на три популяции, изотонический разбавитель содержит специальные добавки, модифицирующие мембраны лейкоцитов.

Б) Лизирующий раствор - гемолитик, который при добавлении в разведение крови приводит к лизису эритроцитов и в то же время сохраняет лейкоциты.

Необходимо, чтобы гемолиз эритроцитов был качественный, поскольку в гемолизате подсчитываются лейкоциты, которых первоначально примерно в 1000 раз меньше, чем эритроцитов. Для обеспечения этих свойств лизирующий раствор, как правило, содержит сложную композицию ионных поверхностно-активных соединений.

Высокотехнологические гематологические анализаторы

Высокотехнологические гематологические анализаторы способны осуществлять дифференцированный счет лейкоцитов по 5-ти (5Diff) основным популяциям, используя различные принципы дифференцирования клеток: нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты, оценивать наличие незрелых гранулоцитов, анализировать ретикулоциты и их субпопуляции, проводить оценку стволовых гемопоэтических клеток и субпопуляций лимфоцитов. Многочисленные функции современных гематологических анализаторов стали возможны, благодаря развитию новых технологий, которые отличаются у разных фирм-производителей.

В анализаторах фирмы Bekman-Coulter (LH 500, LH750) (США - Франция) используется трехмерный анализ дифференцировки лейкоцитов (VCS-технология), который включает в себя одновременный компьютерный анализ клеток по объему (Volume), электропроводности (Conductivity) и дисперсии лазерного света (Scatter).

Полученные по трем каналам данные с помощью электроники комбинируются и анализируются, в результате чего происходит распределение клеток по дифференцировочным кластерам и, таким образом, лейкоциты разделяются на пять основных популяций: лимфоциты, моноциты, нейтрофилы, эозинофилы и базофилы. Результатом отображения объемного графика на плоскости является лейкоцитарная скатерограмма, на которой каждый тип клеток имеет свою зону расположения.

В анализаторах серии Cell-Dyn для дифференцировки лейкоцитов применяется технология MAPSS - Multi Angle Polarized Scatter Separation - мультипараметрическая система лазерного светорассеивания - регистрация интенсивности рассеивания клетками поляризованного лазерного луча под разными углами. Этот метод заключается в компьютерном анализе дисперсии лазерного счета клетками крови. Рассеивание клеткой поляризованного лазерного луча под разными углами дает сведения о таких ее свойствах, как:

- размер клеток - для чего оценивается прохождение поляризованного лазерного луча под малым углом рассеивания (близким к 0 град.);

- структура и степень сложности клеток - оценивается по анализу рассеивания поляризованных лазерных лучей, направленных под углом до 7 град.;

- ядерно-цитоплазматическое соотношение - оценивается по анализу рассеивания поляризованных лазерных лучей, направленных под углом до 10 град.;

- оценка формы клеточного ядра - осуществляется благодаря анализу светорассеивания поляризованных лазерных лучей под углом 90 град.;

- для оценки клеточной зернистости и дифференцировки эозинофилов используется оценка светорассеивания деполяризованного луча под углом 90 град.

В гематологических анализаторах серии XT и ХЕ фирмы Sysmex применяется метод проточной цитофлюориметрии с использованием флюоресцентного красителя полиметина.

Флюоресцентный краситель связывается с ДНК и РНК неизмененных клеток. Анализ клеток происходит в проточной кювете при пересечении луча лазера длиной 633 нм. После контакта лазерного луча с окрашенной клеткой происходит рассеивание последнего под большим и малым углами и возбуждение флюоресцентного красителя. Данные сигналы улавливаются фотоумножителями и регистрируются в виде трех параметров:

1. Светорассеивание под малым углом (FSC) - отклонение лазерного луча под малым (до 10 град.) углом, которое зависит от размера (объема, только при условии сферической формы частицы) и формы клетки;

2. Боковое светорассеивание (SSC) - рассеивание под углом до 90 град. зависит от рефрактерного индекса (или плотности) клетки и характеризует сложность внутриклеточных структур;

3. Детекция специфического флюоресцентного сигнала (SFL), которая регистрируется также как боковое светорассеивание под углом 90 град. и позволяет судить о содержании РНК/ДНК в клетках.

На основании полученных сигналов все клетки распределяются по соответствующим кластерам (зонам) в соответствии с их размером, структурой и количеством ДНК. Таким образом, происходит дифференцировка лейкоцитов на 4 популяции: лимфоциты, моноциты, эозинофилы и нейтрофилы вместе с базофилами.

6. Метод проточной цитофлюрометрии

Принцип метода проточной цитометрии основан на регистрации флюоресценции и светорассеяния от каждой отдельно взятой клетки в клеточной суспензии. Суспензия клеток под давлением подается в проточную ячейку, где за счет разности давлений между образцом и обтекающей жидкостью клетки, находясь в ламинарном потоке жидкости, выстраиваются в цепочку друг за другом (т.н. гидродинамическое фокусирование). Клетки одна за другой проходят через лазерный луч, а высокочувствительные детекторы, расположенные вокруг проточной ячейки регистрируют флюоресценцию и рассеянное лазерное излучение каждой клетки. Полученный сигнал передается в компьютер, обрабатывается, и полученные данные отображаются в виде различных графиков и гистограмм.

Рисунок 6. Принцип цитофлюрометрии

Параметры, клеток регистрируемые при помощи проточного цитометра:

А) Прямое (малоугловое) светорассеяние - детектор прямого светорассеяния располагается по ходу лазерного луча за проточной ячейкой и регистрирует излучение лазера, которое рассеивается под углами 2-19 градусов. Интенсивность рассеянного под малым углом света пропорциональна размеру клетки. Более крупные клетки рассеивают свет сильнее мелких.

Рисунок 7. Прямое и боковое рассеяние света клеткой

Б) Боковое светорассеяние - внутреннее содержимое клеток оптически неоднородно. Луч лазера, проходя сквозь клетку, многократно преломляется и рассеивается во все стороны. Регистрация этого излучения позволяет судить о сложности внутреннего строения клетки (соотношение ядро-цитоплазма, наличие гранул, других внутриклеточных включений). Комбинация бокового и прямого светорассеяния позволяет судить о морфологии клетки в целом, выделять различные популяции клеток (лимфоциты, моноциты, гранулоциты) для дальнейшего анализа.

Рисунок 8. Интегрированная дифференциация клеток по анализу прямого и бокового преломления. (структуре и размеру клеток)

В) Регистрация флуоресценции.

Система для регистрации свечения флюоресцентных меток состоит из комплекса светофильтров и фотоумножителей, каждый из которых регистрирует излучение в диапазоне длин волн, соответствующих флуорохрому. Выбор типа и количества флуоресцентных красителей определяется поставленной задачей для данного исследования.



Рисунок 9. Цитометр

7. Определение гемоглобина

Для определения гемоглобина чаще всего анализируют производные

гемоглобина, образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к нему химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора.

Кровь человека - это нормальная смесь производных гемоглобина с различными спектрами поглощения. При количественном определении гемоглобина колориметрическими методами необходим реагент, который превращал бы все производные гемоглобина только в одну форму перед фотометрическим анализом.

Гемиглобинцианидный метод.

Принцип основан на переводе всех форм гемоглобина в одну - гемиглобинцианид. Перевод гемоглобина в гемиглобинцианид осуществляется при его взаимодействии с трансформирующим раствором.

Основные достоинства гемиглобинцианидного метода:

- HbCN является стабильным производным гемоглобина, и все имеющиеся в крови формы гемоглобина могут быть быстро и количественно превращены в HbCN;

- спектр поглощения HbCN имеет плоский максимум при л= 540 нм, поэтому достаточная точность анализа возможна при измерении оптической плотности на фотометрах даже со светофильтрами;

- растворы HbCN строго подчинены закону Ламберта-Бера:

I=I₀·exp{-(_a·r·DPF+G)}, где _a(л_j)=(л_j)·C

при л= 540 в широком диапазоне концентраций;

Гемихромный метод

Основные достоинства гемихромного метода:

- калибровочный раствор HbChr устойчив в течение нескольких месяцев и даже лет;

- трансформирующий реагент не ядовит и безвреден: в его составе не содержится цианистых соединений.

Молярный коэффициент экстинкции HbChr при

л= 540 нм равен ~ 10,14 (е540~10,14).

Рисунок 10. Величина оптической плотности: Гемихрома - 1 Гемиглобинцианида - 2.

В гематологических анализаторах к методам определения гемоглобина предъявляется ряд специфических требований.

Во-первых, время реакции должно быть в десятки раз меньше для обеспечения высокой производительности анализаторов.

Во-вторых, для оптимизации конструкции анализаторов гемоглобин должен измеряться в том же гемолизате, который используется для подсчета лейкоцитов, и, следовательно, компоненты, обеспечивающие гемоглобиновую реакцию, не должны негативно влиять на подсчет лейкоцитов.

Многие гематологические анализаторы измеряют концентрацию гемоглобина модифицированным гемиглобинцианидным методом. Высокая скорость реакции достигается путем быстрого лизиса эритроцитов, денатурирования и окисления гемоглобина до Fe+3 с помощью поверхностно-активных веществ. Последующая реакция с цианидом формирует устойчивую форму со спектром поглощения, похожим на

спектр гемиглобинцианида в методе Драбкина, и максимумом поглощения около 545 нм.

Достоинством метода является его простота, высокая скорость реакции и стабильность конечного продукта. Применение циановых методов в гематологических автоанализаторах имеет два существенных недостатка, связанных с тем, что цианид из флаконов постепенно выпаривается в виде синильной кислоты.

Учитывая недостатки модифицированных гемиглобинцианидных методов, в последние годы в большинстве новых моделей гематологических анализаторов используются бесциановые методы. Одной из первых бесциановый SLS (натрий лаурил сульфат) - метод использовала фирма Sysmex. Этот метод оказался несовместимым с определением лейкоцитов в одном канале, для его реализации используется дополнительный реагент и канал измерения.

В других современных бесциановых методах используются компоненты гемихромной реакции, которые совместимы с подсчетом лейкоцитов и их дифференциацией на три популяции.

8. Качество результатов исследования крови на гематологическом анализаторе

Качество результатов исследования крови на гематологическом анализаторе определяется следующими факторами:

- точностью дозирования цельной или разведенной крови;

- точностью дозирования изотонического раствора при проведении процедуры разведения крови;

- точностью определения объема суспензии, пропущенного через датчики подсчета клеток;

- точностью самого подсчета клеток;

- точностью определения размеров клеток;

- корректностью математических методов обработки первичных результатов измерений.

Основные параметры автоматизированного анализа крови и факторы, влияющие на их значения.

Гематологические анализаторы позволяют не только автоматизировать процесс подсчета клеток крови, улучшить качество и точность измерения, но и получить дополнительные информативные характеристики клеток крови. При анализе гемограммы следует учитывать возможные причины ложных результатов. Любые изменения общего анализа крови трактуются как патологические и требуют тщательного обследования пациента. Изменения в гемограмме при многих заболеваниях могут иметь неспецифический характер. В этих случаях их используют для динамического наблюдения за больным, а также по ним ориентируются при прогнозировании исходов заболевания. При системных заболеваниях кроветворной системы исследование общего анализа крови приобретает первостепенное диагностическое значение. Оно определяет дальнейшую стратегию обследования пациента с последующим выбором схемы лечения и необходимо для мониторинга проводимой терапии.

В гематологических анализаторах различных фирм-производителей нормальные показатели крови могут существенно варьировать в зависимости от норм, используемых в той или иной стране. Следуя инструкции прибора, перед началом работы на анализаторе рекомендуется изменить их в соответствии с нормами, принятыми в нашей стране (таблица 2).

Таблица №2

Нормальные показатели периферической крови у взрослых

Показатель	Нормальные значения
	мужчины	женщины
Гемоглобин, г/л	130,0-160,0	120,0-140,0
12 Эритроциты (RBC) х 10 /л	4,0-5,0	3,9-4,7
Гематокрит, %	40-48	36-42
Средний объем эритроцита (MCV), фл, куб. мкм	80,0-100,0
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН), пг	27,0-31,0
Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), г/дл (%)	30,0-38,0
Ширина распределения RBC по объему(RDW - CV) (%)	11,5-14,5
Ретикулоциты, промилле (%)	2,0-10,0 промилле (0,2-1,2%)
9 Лейкоциты х 10 /л	4,0-9,0
9 нейтрофилы, % (10 /л): палочкоядерные сегментоядерные	1,0-6,0 (0,040-0,300) 47,0-72,0 (2,000-5,500)
эозинофилы	0,5-5,0 (0,020-0,300)
базофилы	0-1,0 (0-0,065)
лимфоциты	19,0-37,0 (1,200-3,000)
моноциты	3,0-11,0 (0,090-0,600)
плазматические клетки	-
9 Тромбоциты (10 /л)	180,0-320,0
Средний объем тромбоцита (MPV), фл	7,4-10,4
Ширина распределения тромбоцитов по объему (PDW), %	10-20
Тромбокрит (РСТ), %	0,15-0,40
СОЭ, мм/час	2,0-10,0	2,0-15,0

Заключение

В гематологических исследованиях применяются различные счетчики клеток крови, например для измерения концентрации эритроцитов и лейкоцитов в суспензиях крови -- кондуктометрические гемоцитометры, для определения концентрации гемоглобина в крови -- фотоэлектрические гемоглобинометры, автоанализаторы морфологические и др. Эти и аналогичные им приборы в крупных лабораториях диагностических центров заменили трудоемкие процессы подсчета клеток крови и определения содержания гемоглобина, распределения клеток по размерам и т.д.

Оснащение современных лабораторий автоматизированными и механизированными устройствами постепенно вытесняет ручные и визуальные методы исследования, обеспечивает более высокую точность и воспроизводимость результатов определений, увеличивает производительность труда лаборантов, что особенно важно в связи с постоянным ростом числа выполняемых в лабораториях анализов, появлением новых методик и расширением количества исследуемых показателей.

Рисунок 11. Используемые методы и определяемые ими параметры.

Комплексные методики, применяемые в автоматических анализаторах крови, такие как метод Культера, исследование светого рассеяния и флюоресценции клеток повышают точность измерений и говорят в пользу интегрированного подхода проведения исследований.

Список литературы:

1. Козинец Г.И., Погорелов В.М., Шмаров Д.А. « Клетки крови - современные технологии их анализа» М, "Триада-Фарм", 2002.

2. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. «Лабораторная гематология» М., "Триада", 2006.

3. Муханов В. С. «Проточная цитометрия». Севастополь, «Экологический журнал», 2011.

4. Бажибина Е. Б. «Критерий оценки автоматического оборудования для гематологических исследований» М. «Лабораторная диагностика», 2012.

Размещено на Allbest.ru

...