Основные показатели гематологических анализаторов и факторы, влияющие на их значение

Размещено на http://www.allbest.ru/

ГОУ ВПО Сургутский государственный университет ХМАО-Югры

Медицинский институт

Факультет последипломного образования

Кафедра кардиологии

Реферат

на тему:

Основные показатели гематологических анализаторов и факторы, влияющие на их значение

Работу выполнила:

Южакова Анастасия Геннадьевна

Работу проверила:

доцент, к.м.н. Ефимова Лариса Петровна

Сургут, 2013



Содержание

Введение

1. Основные гематологические показатели

1.1 Эритроцитарные параметры

1.2 Ретикулоцитарные параметры

1.3 Тромбоцитарные параметры

1.4 Лейкоцитарные параметры

2. Гистограммы

Список литературы



Введение

Гематологический анализатор -- прибор (комплекс оборудования), предназначенный для проведения количественных и качественных исследований крови в клинико-диагностических лабораториях.

В целом весь ряд гематологических анализаторов по виду выполняемых исследований можно разделить на четыре типа.

- К первому типу относятся приборы, выполняющие анализ по небольшому числу показателей, обычно по 6-8, и без дифференцирования лейкоцитов на субпопуляции.

- Ко второму типу следует отнести 16-20-параметровые анализаторы, способные дифференцировать лейкоциты на три субпопуляции.

- К третьему типу относятся так называемые 5DIFF системы, способные дифференцировать лейкоциты по 5 популяциям и позволяющие определять до 28 параметров.

- И, наконец, особой функцией, не всегда включаемой в стандартную комплектацию анализатора, а иногда поставляемой отдельным модулем, является возможность дифференцирования ретикулоцитов. Общее количество параметров, определяемых анализаторами с таким модулем доходит до 40.

Количество показателей в пределах группы зависит, прежде всего, от дополнительных возможностей анализаторов, таких, например, как выявление атипичных лимфоцитов или больших незрелых клеток, С-реактивного белка и т.д.

Кроме того, следует учитывать, что не все показатели напрямую измеряются анализатором, многие из них являются расчетными, таким образом, количество показателей, определяемых приборами одного класса, может варьировать.

Отличие между системами первого и второго классов в настоящее время незначительно как по технологии измерения, так и по цене. Некоторые приборы допускают модернизацию из первого класса во второй уже после установки и запуска прибора.



1. Основные гематологические показатели

1.1 Эритроцитарные параметры

RBC (red blood cells) - количество эритроцитов крови (х /л).

Определение количества эритроцитов осуществляется путем вычитания из общего числа клеток в цельной крови тромбоцитов и лейкоцитов. Для исключения из счета тромбоцитов, которые имеют существенно меньшие размеры по сравнению с эритроцитами и лейкоцитами, используются пороговые значения. Считаются все частицы размером более 36 фл. Лейкоциты считаются в лизате после разрушения эритроцитов.

Коэффициент вариации для данного параметра составляет 1-2%, а в некоторых приборах - менее 1%. Следует отметить, что иногда лейкоциты включаются в подсчет вместе с эритроцитами, так как их влияние в норме незначительно. Их количество на 3 порядка (несколько тысяч) существенно меньше числа эритроцитов (несколько миллионов).

Ошибки измерения количества эритроцитов:

Ложное повышение:

· гигантские тромбоциты (с объемом более 30 фл);

· криоглобулинемия;

· высокий лейкоцитоз (более 50 х /л).

Ложное понижение:

· агглютинация эритроцитов;

· гемолизированные образцы крови;

· выраженный микроцитоз эритроцитов.

Нормобласты (NRBC) - большинство гематологических анализаторов подсчитывает все ядросодержащие клетки, поэтому при наличии нормобластов в периферической крови они определяются как лейкоциты и могут быть причиной увеличения WBC и лимфоцитов, т.к. нормобласты имеют размер малого лимфоцита. В этих случаях необходим строгий визуальный контроль и коррекция истинного количества лейкоцитов.

В анализаторах фирмы Sysmex (ХЕ-2100, ХТ-2000i) и Bayer (ADVIA 2120) при наличии нормобластов в крови коррекция лейкоцитов проводится автоматически.

Нормобласты появляются в периферической крови при онкогематологических заболеваниях, анемиях (гемолитические, В12- и фолиеводефицитные), тяжелых септических состояниях и интоксикациях.

Появление нормобластов в послеоперационном периоде является плохим прогностическим признаком, предсказывающим возможный летальный исход. Наличие в крови нормобластов может расцениваться как маркер гипоксии и воспаления.

HGB (hemoglobin) - концентрация гемоглобина (г/дл или г/л) в большинстве гематологических анализаторов определяется фотометрически гемиглобинцианидным или гемихромными методами. Коэффициент вариации при этом не превышает 2%.

Ложное повышение:

· Гиперлипидемия;

· Гипербилирубинемия;

· Присутствия нелизированных эритроцитов;

· Гиперлейкоцитоза. Для снижения ошибки измерения рекомендуется обработать кровь лизатом, отцентрифугировать образец и провести измерение гемоглобина в надосадочной жидкости фотометрическим методом;

· Криоглобулинемия;

· Гемолиз (in vivo);

· Парапротеинемия;

· Присутствие нестабильных гемоглобинов (hbs, hbc).

Повышение концентрации гемоглобина наблюдается при реактивных и опухолевых эритроцитозах, обезвоживании.

Снижение концентрации гемоглобина имеет место при анемиях, гипергидратации. кровь эритроцит тромбоцит лейкоцит

Ложное понижение гемоглобина возникает при образование микросгустков в пробе крови.

НСТ (hematocrit) - гематокрит. Показатель отражает сумму прямо измеренных объемов эритроцитов в единице объема крови.

Проблемы "остаточной" плазмы (плазмы, оставшейся между эритроцитами при центрифугировании) в гематологических анализаторах по сравнению с гематокритной центрифугой не существует.

Повышение гематокрита наблюдается при реактивных и опухолевых эритроцитозах, уменьшении объема циркулирующей плазмы (ожоговая болезнь, дегидратация).

Снижение гематокритной величины имеет место при анемиях, беременности (второй триместр), гипергидратации.

Ложное повышение:

· гигантские тромбоциты (с объемом более 30 фл);

· криоглобулинемия;

· высокий лейкоцитоз (более 50 х 109/л);

· гипергликемия (>33 ммоль/л);

· диабетический кетоацидоз.

Ложное понижение:

· агглютинация эритроцитов;

· выраженный микроцитоз эритроцитов (< 36 фл).

MCV (mean corpuscular volume) - средний объем эритроцита, выражается в кубических микрометрах (куб. мкм) или фемтолитрах.

MCV определяется большинством гематологических анализаторов благодаря прямой зависимости амплитуды электрического импульса от объема клетки.

Вычисляется MCV делением суммы клеточных объемов на число эритроцитов.

В то же время MCV - это средний показатель объема всей популяции эритроцитов, содержащихся в диапазоне от 36 - 360 фл. Поэтому необходимо иметь в виду, что MCV может иметь нормальное значение при наличии у пациента одновременно выраженного макро- и микроцитоза, большом количестве аномальных эритроцитов (например, при серповидно-клеточной анемии, выраженном пойкилоцитозе).

В этом случае особую диагностическую важность приобретает анализ эритроцитарной гистограммы и морфология клеток в мазках крови.

MCV - показатель, отражающий изменения, возникающие в эритроцитах при длительном хранении крови.

Изменения в мембране эритроцитов возникают раньше, чем в лейкоцитах и тромбоцитах, поэтому хранение крови более 8 часов вызывает увеличение MCV.

MCV меняется в течение жизни: у новорожденных достигает 128 фл, в первую неделю снижается до 100-112 фл, к 1 году составляет 77-79 фл, в возрасте 4-3 лет нижняя граница нормы (80 фл) стабилизируется.

Ложное повышение:

· холодовые агглютинины;

· диабетический кетоацидоз;

· гиперосмолярность плазмы;

· гипернатриемия;

· высокий лейкоцитоз (более 50 х 109/л);

· длительное хранение крови (более 8 часов);

· ретикулоцитоз;

· макротромбоцитоз.

Ложное понижение:

· повышенное содержание фрагментов эритроцитов в крови вследствие механического гемолиза;

· коагулопатия потребления.

МСН (mean corpuscular hemoglobin) - среднее содержание гемоглобина в эритроците.

Рассчитывается по формуле:

МСН = гемоглобин х 10кол-во эритроцитов 106/мкл

МСН характеризует среднее содержание гемоглобина в отдельном эритроците в абсолютных единицах.

В норме МСН составляет 27-31 пг. МСН - более объективный параметр, чем устаревший цветовой показатель, который не отражает синтез гемоглобина и его содержание в эритроците.

Возможные ошибки измерения. Параметр МСН является расчетным, поэтому к ложно повышенным результатам приводят все факторы, влияющие на увеличение значений гемоглобина и снижение количества эритроцитов.

Ложно пониженные результаты МСН получаются вследствие ошибок, связанных с неправильным определением числа эритроцитов (завышения их количества) и занижением концентрации гемоглобина.

Снижение МСН наблюдается при анемиях, обусловленных нарушением синтеза гемоглобина (железодефицитной анемии, порфирии), повышение - при макроцитарных и, особенно, мегалобластных анемиях.

МСНС (mean corpuscular hemoglobin concentration) - средняя концентрация гемоглобина в эритроците (г/дл).

Вычисляется по формуле:

МСНС = гемоглобин х 100HCT (%)

Различия между двумя последними индексами заключаются в том, что МСН указывает на массу гемоглобина в одном эритроците и выражается в долях грамма (пикограммах).

МСНС показывает концентрацию гемоглобина в одном эритроците, т.е. соотношение содержания гемоглобина к объему клетки. Он отражает насыщение эритроцита гемоглобином.

В отличие от МСН МСНС не зависит от клеточного объема и является чувствительным показателем нарушения процессов гемоглобинообразования.

Возможные ошибки измерения.

Поскольку параметр МСНС является расчетным, то к ложно завышенным результатам приводят все факторы, влияющие на завышение значений гемоглобина и занижение гематокрита (последний связан с измерением объема эритроцитов).

Ложно пониженные результаты МСНС получаются вследствие неправильного определения MCV (завышения их значения) и занижения концентрации гемоглобина.

Снижение значения МСНС наблюдается при заболеваниях, сопровождающихся нарушением синтеза гемоглобина.

Повышение МСНС выше 38 г/дл встречается редко (врожденный сфероцитоз), т.к. это может закончиться кристаллизацией гемоглобина и гемолизом эритроцита.

Чаще всего увеличение МСНС свидетельствует об ошибках, допущенных при измерении пробы (погрешности определения гемоглобина или MCV).

По этому данный параметр часто используется в качестве индикатора ошибок, допущенных на аналитическом или преаналитическом этапах работы.

LHD (low hemoglobin density), % - гемоглобин низкой плотности - новый параметр, который коррелирует с процентом гипохромных эритроцитов.

Показатель LHD является индикатором железодефицитного состояния.

Hypo% - процент гипохромных эритроцитов, имеет значение в диагностике гипохромных анемий и мониторинге терапии эритропоэтином.

Более 10% гипохромных эритроцитов является индикатором железодефицитного состояния.

RDW (red cell distribution width) - показатель гетерогенности эритроцитов по объему, характеризует степень анизоцитоза.

Этот показатель вычисляется большинством современных гематологических анализаторов на основании гистограммы распределения эритроцитов как коэффициент вариации объема эритроцитов:

RDW-CV = Стандартное отклонение размеров эритроцитов х 100МСН

где SD - стандартное среднеквадратическое отклонение объема эритроцита от среднего значения.

На этот показатель влияет MCV, поэтому как при микроцитозе, так и при макроцитозе отмечается тенденция к увеличению RDW-CV.

В гематологических анализаторах фирмы Sysmex имеется еще один расчетный показатель RDW - это RDW-SD, который независим от MCV и представляет собой прямое измерение ширины эритроцитарной гистограммы на уровне 20% пика кривой.

При этом высота пика RBC-гистограммы принимается за 100%.

Повышение RDW предполагает присутствие смешанной популяции клеток (нормоциты и микроциты или макроциты и нормоциты).

RDW-SD является более чувствительным показателем при наличии минорной популяции макроцитов или микроцитов, т.к. он измеряет нижнюю часть кривой распределения эритроцитов по объему.

В то же время этот показатель будет изменяться при высоком ретикулоцитозе в силу их большого объема, что расширяет основание кривой распределения эритроцитов.

RDW-CV менее чувствителен к присутствию небольшой популяции микроцитов или макроцитов или ретикулоцитов, но лучше отражает общие изменения в размере эритроцитов при макроцитарной или микроцитарной анемии.

FRC - (fragment red cells) (RBC-F) - подсчет фрагментов эритроцитов, используется для оценки тромботических микроангиопатий.

1.2 Ретикулоцитарные параметры

Классические параметры ретикулоцитов:

RET% - относительное количество ретикулоцитов (в %);

RET# - абсолютное количество ретикулоцитов (х 109/л);

Ложное повышение:

· включения в эритроцитах (тельца Жолли, малярийные паразиты);

· высокий лейкоцитоз;

· аномальные формы гемоглобина;

· гипертромбоцитоз;

· гигантские тромбоциты.

Ретикулоцитоз с резким увеличением фракции незрелых ретикулоцитов на фоне активного эритропоэза отражает повышенную регенераторную способность костного мозга.

Ретикулоцитопения - индикатор угнетения эритропоэза.

Нормализация абсолютного количества ретикулоцитов (RET#) - показатель восстановления пролиферативной активности эритрокариоцитов.

Объемные параметры ретикулоцитов:

MCVr (Mean Cell Volume Reticulocytes) - средний объем ретикулоцитов (фл).

MSRV (Mean Sphered Reticulocyte Volume) - средний объем сферических ретикулоцитов, фл.

Низкий объем ретикулоцитов объясняет появление микроцитов в периферической крови.

Изменение MSRV у спортсменов указывает на злоупотребление препаратами, стимулирующими эритропоэз.

Параметры, характеризующие степень зрелости ретикулоцитов:

LFR% - популяция малых зрелых RET (87 - 99%);

MFR% - популяция средних RET (2 - 12%);

HFR% (1 - 2%) - популяция больших незрелых RET.

MFR+HFR определяется как фракция незрелых ретикулоцитов - IRF (Immature Reticulocyte Fraction).

Фракция незрелых ретикулоцитов может служить индикатором активности эритропоэза.

Увеличение фракции незрелых ретикулоцитов свидетельствует об ускоренном выбросе незрелых клеток из костного мозга.

RET% и может служить наиболее чувствительным маркером в мониторинге за состоянием эритропоэтической активности костного мозга и эффективности лечения витамином В12, фолиевой кислотой препаратами железа и ЭПО.

Ретикулоцитарные индексы:

СRC (Corrected Reticulocyte Count) - скорректированный подсчет ретикулоцитов по формуле:

CRC = RET (%) х Ht / 0,45

где: Ht - гематокрит больного; RET% - количество ретикулоцитов (%), измеренное в крови при данном гематокрите; 0,45 - идеальный гематокрит.

Если у больного одновременно с низким гематокритом (Ht) в периферической крови присутствуют незрелые ретикулоциты (MFR и HFR), то рассчитывается индекс продукции ретикулоцитов RPI (Reticulocyte production index):

RPI = RET (%) х Ht / 0,45 х дни циркуляции Ret в крови

Величина RPI широко варьирует в зависимости от степени тяжести анемии, продукции ЭПО и других факторов.

Снижение данного индекса менее 2 указывает на низкую пролиферативную активность эритрокариоцитов.

1.3 Тромбоцитарные параметры

PLT (platelet) - количество тромбоцитов.

Ложное повышение:

· микроцитоз;

· криоглобулинемия;

· гемолизированные образцы крови;

· наличие фрагментов эритроцитов и лейкоцитов.

Ложное понижение:

· агрегация тромбоцитов;

· тромбоцитарный "сателлизм" (прилипание тромбоцитов к лейкоцитам);

· гигантские тромбоциты;

· агглютинация эритроцитов;

· тромбообразование;

· взятие крови с гепарином или цитратом;

· гипертромбоцитоз (более 1,000 х 109/л).

MPV (mean platelet volume) - средний объем тромбоцитов выражается в фемтолитрах (фл) или куб. мкм.

При наличии макротромбоцитов порог измерения для тромбоцитов может быть превышен, и они не подсчитываются, что приводит к занижению MPV. Небольшие фрагменты эритроцитов и лейкоцитов могут препятствовать измерению MPV. Тромбоциты могут быть в агглютинатах эритроцитов, что приведет к ошибочным результатам MPV. Это можно проверить по аномальным значениям МСН и МСНС.

Увеличение MPV наблюдается при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, гипертиреозе, атеросклерозе, сахарном диабете, у курильщиков и лиц, страдающих алкоголизмом.

Крупные тромбоциты с аномальной морфологией появляются при миелопролиферативных заболеваниях.

Уменьшение этого показателя отмечается после спленэктомии и при синдроме Вискотта-Олдрича.

PDW (platelet distribution width), % - ширина распределения тромбоцитов по объему.

Этот параметр определяется на основании гистограммы распределения тромбоцитов. PDW количественно отражает гетерогенность популяции этих клеток по размерам (степень анизоцитоза тромбоцитов).

Увеличение PDW может быть признаком присутствия агрегатов тромбоцитов, микроэритроцитов, фрагментов эритроцитов.

PDW изменяется при миелопролиферативных заболеваниях.

РСТ (platelet crit - тромбокрит), % - является параметром, который отражает долю объема цельной крови, занимаемую тромбоцитами.

IPF- (Immature Platelet Fraction) - фракция незрелых тромбоцитов. Отражает состояние костномозгового тромбоцитопоэза. IPF повышается при ДВС-синдроме, идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, регенерации костномозгового гемопоэза после химиотерапии.

МРС - (mean platelet component) - средний тромбоцитарный компонент. Характеризует плотность и гранулярность тромбоцитов. МРС коррелирует с активностью тромбоцитарного звена и может использоваться среди других показателей в качестве предвестника острых ишемических осложнений, а также риска развития тромбоза.

1.4 Лейкоцитарные параметры

WBC (white blood cells) - количество лейкоцитов крови (х 109/л). Измерение лейкоцитов проводится после полного лизиса эритроцитов специальным реагентом. Все частицы размером более 35 фл считаются как лейкоциты. Тромбоциты, размер которых меньше порогового значения 35 фл, исключаются из подсчета.

Ложное повышение:

· нормобласты в периферической крови;

· криоглобулинемия;

· агрегаты тромбоцитов;

· резистентные к лизису эритроциты;

· малярия (эритроциты с гаметоцитами распознаются как лейкоциты).

Ложное понижение:

· хранение крови более 24 часов;

· грубое перемешивание крови.

Многие современные гематологические анализаторы определяют от 6 до 10 показателей лейкоцитарной формулы с учетом относительного и абсолютного количества клеток, так называемые 3Diff или 5Diff. Гематологические анализаторы, определяющие 18 параметров крови, дифференцируют все WBC на три популяции (3Diff) и определяют как относительное, так и абсолютное их содержание:

· Лимфоциты, %, - LYM% или LY%;

· Лимфоциты, кл/мкл, - LYM или LY#;

· Гранулоциты, %, - GRN% или GR%;

· Гранулоциты, кл/мкл, - GRN или GR#;

· Моноциты, %, - MON% или МО%;

· Моноциты, кл/мкл, - MON или МО#.

2. Гистограммы

Эритроцитарная гистограмма.

Как правило, регистрируемая кривая подчиняется закону нормального распределения.

Нормальная эритроцитарная гистограмма имеет симметричную (куполообразную) форму. На некоторых анализаторах при уменьшении количества эритроцитов амплитуда гистограммы уменьшается.

При появлении патологических или нескольких популяций эритроцитов форма гистограммы меняется.

Несмотря на то, что пороговое значение для эритроцитов составляет 36 фл, дополнительная область от 24 до 36 фл позволяет выявить клетки небольших размеров.

Рис.1 Эритроцитарная гистограмма

Тромбоцитарная гистограмма.

В норме тромбоцитарная кривая характеризуется унимодальностью и асимметричностью.

Гистограмма должна начинаться с базовой линии в области значений менее 2 фл и заканчиваться в зоне 20-30 фл. Количество тромбоцитов более 20 фл невелико.

Наличие в пробе патологических тромбоцитов (макро- или микро-), шизоцитов, микроэритроцитов, фрагментов лейкоцитов меняет форму тромбоцитарной гистограммы, что требует определенной корректировки получаемых результатов.

Анизоцитоз тромбоцитов не влияет на результаты счета тромбоцитов.

Множественные пики на тромбоцитарной гистограмме могут наблюдаться при агрегации тромбоцитов, при этом результат подсчета тромбоцитов может быть ложно занижен.

Для исключения ошибочного результата рекомендуется повторить исследование с цитратом натрия, который предотвращает свертывание крови в случае несовместимости образца с ЭДТА.

При выявлении патологической тромбоцитарной гистограммы следует анализировать окрашенный мазок крови.

Рис.2 Тромбоцитарная гистограмма

Лейкоцитарная гистограмма.

На лейкоцитарной гистограмме показано распределение клеток по объему после обработки лейкоцитов специальным лизатом и лизиса эритроцитов.

Субпопуляции лейкоцитов попадают в три главные области гистограммы распределения WBC, которые отделены с помощью пороговых значений (дискриминаторов).

Если результаты подсчета попадают в область нормальных значений, то никаких маркеров, предупреждающих о возможной патологии, не появляется.

Форма гистограммы изменяется при нарушении распределения лейкоцитов по популяциям или недостаточном лизисе эритроцитов.

Рис.3 Лейкоцитарная гистограмма.



Список литературы

1. Ефимова Л.П., Винокурова Т.Ю. Гематологические анализаторы. Эритроцитарные параметры общего анализа крови. - Сургут: Издательский центр СурГУ, 2011. - 24 с.

2. Методические рекомендации от 21 марта 2007 г. N 2050-рх. Гематологические анализаторы. Интерпретация анализа крови.

3. Долгов В.В., Меньшиков В.В. Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство. В двух томах. Том 1. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. - 928 с.

4. Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. - М.: ГЭОТАР-Медиа,2009. - 2000 с.

5. Луговская С.А. Лабораторная гематология. - М.- Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2006. - 224 с.

Размещено на Allbest.ru

...