Клиническая биохимия

Размещено на http://www.allbest.ru/

Клиническая биохимия

Клиническая биохимия - это раздел клинической лабораторной диагностики, основными целями которого является количественное и качественное определение биохимических показателей в биологических жидкостях организма, изучение характера изменений этих показателей при патологии и ряде физиологических состояний, а также разработка методов их определения.

Мочевина

Мочевина является главным конечным продуктом обмена аминокислот. Синтезируется мочевина из аммиака, который постоянно образуется в организме при окислительном и неокислительном дезаминировании аминокислот, при гидролизе амидов глутаминовой и аспарагиновой кислот, а также при распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Часть аммиака образуется в кишечнике в результате действия бактерий на пищевые белки (гниение белков в кишечнике) и поступает в кровь воротной вены. Аммиак - токсичное соединение. Даже небольшое повышение его концентрации оказывает неблагоприятное действие на организм, и прежде всего - на центральную нервную систему. Несмотря на то, что аммиак постоянно продуцируется в тканях, он содержится в периферической крови лишь в следовых количествах, так как быстро удаляется из кровеносной системы печенью, где входит в состав глутамата, глутамина и мочевины. Биосинтез мочевины является основным механизмом обезвреживания аммиака в организме.

Биосинтез мочевины

Синтез мочевины происходит в печени в цикле Кребса-Гензелейта (другое название - орнитиновый цикл мочевинообразования Кребса) в несколько этапов с участием ряда ферментных систем. Синтез сопровождается поглощением энергии, источником которой является АТФ.

Весь цикл мочевинообразования можно представить следующим образом:

На первом этапе синтезируется карбамоилфосфат в результате конденсации ионов аммония, двуокиси углерода и фосфата (поступающего из АТФ) под действием фермента карбамоилсинтетазы. Карбамоилфосфат - это метаболически активная форма аммиака, используемая в качестве исходного продукта для синтеза ряда других азотистых соединений.

На втором этапе мочевинообразования происходит конденсация карбамоилфосфата и орнитина с образованием цитруллина; реакцию катализирует орнитинкарбамоилтрансфераза.

На следующей стадии цитруллин превращается в аргинин в результате двух последовательно протекающих реакций. Первая из них, энергозависимая, сводится к конденсации цитруллина и аспарагиновой кислоты с образованием аргининосукцината (эту реакцию катализирует аргининосукцинатсинтетаза). Аргининосукцинат распадается в следующей реакции на аргинин и фумарат при участии другого фермента - аргининосукцинатлиазы.

На последнем этапе аргинин расщепляется на мочевину и орнитин под действием аргиназы.

Эффективность работы орнитинового цикла при нормальном питании человека и умеренных физических нагрузках составляет примерно 60% его мощности. Запас мощности необходим для избежания гипераммониемии при изменении количества белка в пище. Увеличение скорости синтеза мочевины происходит при длительной физической работе или длительном голодании, которое сопровождается распадом тканевых белков. Некоторые патологические состояния, характеризующиеся интенсивным распадом белков тканей (сахарный диабет и др.) также сопровождаются активацией орнитинового цикла.

Нормальный ход метаболического превращения аммиака в мочевину имеет большое значение для организма. При серьезных нарушениях функции печени - например, при обширном циррозе или тяжелом гепатите - аммиак, являясь токсичным веществом, накапливается в крови, вызывая тяжелые клинические симптомы. Известны врожденные метаболические нарушения, связанные с недостатком одного из ферментов, участвующих в синтезе мочевины. Все нарушения синтеза мочевины вызывают аммиачное отравление.

Выведение мочевины.

Синтезированная в печени мочевина попадает в кровь, затем в почки и в итоге выводится с мочой. Мочевина является беспороговым веществом: все образующееся количество фильтруется в просвет проксимальных канальцев, а затем часть (около 35 %) реабсорбируется обратно за счет реабсорбции воды. В связи с этим величина экскреции мочевины является менее информативным показателем клубочковой фильтрации, чем показатель, основывающийся на экскреции креатинина (который, в отличие от мочевины, практически не реабсорбируется).

Нормальные значения мочевины в крови и моче

Определение концентрации мочевины в крови широко используется в диагностике, применяется для оценки тяжести патологического процесса, для наблюдения за течением заболевания и оценки эффективности проводимого лечения. Однако не следует забывать, что на уровень мочевины в крови могут влиять не только патологические, но и физиологические факторы (характер питания, физическая нагрузка и т. д.), а также прием лекарственных препаратов. Уровень мочевины может изменяться как в сторону повышения, так и снижения. При физиологических процессах степень отклонения уровня мочевины от нормы, как правило, незначительна, в то время как при патологии наблюдаются значительные сдвиги, причем степень изменения уровня мочевины зависит от тяжести патологического процесса.

Мочевина в крови. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в крови

Концентрация мочевины в сыворотке крови здоровых взрослых людей составляет 2,5 - 8,3 ммоль/л (660 мг/л). У женщин, по сравнению со взрослыми мужчинами, концентрация мочевины в сыворотке крови обычно ниже. У пожилых людей (старше 60 лет) наблюдается некоторое увеличение концентрации мочевины в сыворотке крови (примерно на 1 ммоль/л по сравнению с нормой здоровых взрослых людей), что обусловлено снижением у пожилых способности почек концентрировать мочу.

У детей уровень мочевины ниже, чем у взрослых, однако у новорожденных в первые 2 - 3 дня содержание ее может достигать уровня взрослого (проявление физиологической азотемии, обусловленной повышенным катаболизмом на фоне недостаточного поступления жидкости в первые 2 - 3 сут жизни и низкого уровня клубочковой фильтрации). В условиях гипертермии, эксикоза цифры мочевины могут возрасти еще больше. Нормализация наступает к концу первой недели жизни. Уровень мочевины в крови у недоношенных 1 нед. - 1,1 - 8,9 ммоль/л (6,4 - 63,5 мг/100 мл), у новорожденных - 1,4 - 4,3 ммоль/л (8,6 - 25,7 мг/100 мл), у детей после периода новорожденности - 1,8 - 6,4 ммоль/л (10,7 - 38,5 мг/100 мл).

Повышение уровня мочевины в крови.

Повышение уровня мочевины в крови наблюдается при: употреблении в пищу чрезмерного количества белка (в результате усиленного синтеза мочевины);

диете, бедной ионами хлора (компенсаторная, приспособительная реакция, направленная на поддержание коллоидно-осмотического давления крови);

обезвоживании организма: неукротимая рвота, профузный понос и т. д. (вследствие усиленной пассивной реабсорбции в почечных канальцах);

приеме некоторых лекарственных препаратов: сульфаниламидов, левомицетина, тетрациклина, гентамицина, фуросемида, изобарина, допегита, невиграмона, лазикса, анаболических стероидов, кортикостероидов, тироксина в большом количестве;

чрезмерном катаболизме белка: лейкозе, паренхиматозной желтухе, тяжелых инфекционных заболеваниях, непроходимости кишечника, ожоге, дизентерии, шоке;

нарушении выведения мочевины, связанного с заболеваниями почек и мочевыводящих путей: хронические заболевания почек (гломерулонефрит, пиелонефрит); обструкции мочевыводящих путей (опухоли мочевыводящих путей, предстательной железы, почечно-каменная болезнь); острая и хроническая почечная недостаточность;

нарушении выведения мочевины при заболеваниях и состояниях, не связанных с заболеваниями почек и мочевыводящих путей: недостаточность деятельности сердца, острый инфаркт миокарда; сахарный диабет с кетоацидозом, аддисонова болезнь и другие заболевания.

Повышение уровня мочевины в крови, связанное с ее усиленным образованием или снижением ее фильтрации в почках в результате нарушения гемодинамики, как правило, не достигает больших значений, содержание мочевины обычно не превышает 13 ммоль/л.

Большие значения уровня мочевины в крови наблюдаются при заболеваниях почек. Так, концентрация мочевины в плазме крови пациентов с хронической почечной недостаточностью может достигать 40,0 - 50,0 ммоль/л. Особенно высокое содержание мочевины (49,8 - 81,0 ммоль/л и выше) наблюдается при острой почечной недостаточности. При этом резко снижается выделение мочевины с мочой. Однако, следует заметить, что увеличение содержания мочевины не является ранним признаком нарушения функции почек. Установлено, что первоначально возрастает уровень мочевой кислоты, а затем мочевины и креатинина, что является угрожающим симптомом. При различных заболеваниях почек степень повышения содержания мочевины определяется характером повреждения нефрона, уровнем интоксикации, усиленным распадом белка в ткани (в связи с ограничением белка в пище почечных больных) и другими факторами. Повышение содержания мочевины в крови до 16,0 ммоль/л сочетается с нарушением функции почек средней тяжести, до 33,2 ммоль/л - тяжелым, свыше 49,8 ммоль/л - очень тяжелым нарушением с неблагоприятным прогнозом.

Увеличение содержания мочевины в крови, сопровождающееся синдромом интоксикации, называется уремией. Обычно считается, что мочевина не токсична и что сопровождающий увеличение ее содержания синдром интоксикации обусловлен накоплением в организме других продуктов. Вместе с тем следует иметь ввиду, что мочевина, относительно легко проходя через плазматические мембраны клеток, будучи осмотически активным веществом, увлекает в клетки паренхиматозных органов и воду. Это приводит к увеличению объема клеток (клеточной гипергидратации) и нарушению их функционального состояния.

Снижение уровня мочевины в крови.

Уменьшение содержания мочевины в крови наблюдается редко:

при беременности (вследствие физиологической гидремии);

при диете с низким содержанием белка и высоким содержанием углеводов, голодании;

при парентеральном введение жидкостей (вследствие гипергидратации);

после гемодиализа;

при пониженном катаболизме белков;

при приеме СТГ;

при нарушении всасывания в кишечнике, целиакии;

при повышенной утилизации белка (в поздние сроки беременности, у детей до 1 года, при акромегалии);

при врожденной недостаточности или отсутствии ферментов, участвующих в орнитиновом цикле мочевинообразования;

при особенно тяжелых поражениях печени (печеночная недостаточность), вызванных, в частности, отравлением фосфором, мышьяком и другими гепатотропными ядами; остром некрозе печени, печеночной коме, декомпенсированном циррозе, гепатитах (известно, что печень обладает большими функциональными резервами, способность ее к дезаминированию и синтезу мочевины сохраняется при исключении из процессов обмена до 85% ее ткани).

Мочевина в моче. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в моче

Определение концентрации мочевины в моче проводится значительно реже, чем определение уровня мочевины в крови и используется обычно при обнаружении повышенного уровня мочевины в крови и решении вопроса о состоянии выделительной функции почек. При этом определяют суточную экскрецию мочевины с мочой. Повышенное содержание мочевины крови при снижении суточной экскреции с мочой чаще свидетельствует о нарушении азотовыделительной функции почек. Однако не стоит забывать, что повышение уровня мочевины в крови с одновременным снижением ее экскреции встречается и при экстраренально возникающей функциональной почечной недостаточности, развивающейся при уменьшении почечного кровотока, что наблюдается при возникновении гиповолемии или в условиях застоя при сердечной недостаточности. Напротив, одновременное увеличение уровня мочевины в крови и экскреции ее с мочой свидетельствует о том, что азотовыделительная функция почек не нарушена, одновременное повышение содержания мочевины в крови и моче связано с избыточным образованием мочевины в организме и носит транзиторный характер. На уровень мочевины в моче, также как и в крови, могут влиять не только патологические, но и физиологические факторы (характер питания, физическая нагрузка и т. д.), а также прием лекарственных препаратов.

Экскреция мочевины с мочой (при диете со средним содержанием белка) в норме составляет у взрослых 333,0 - 587,7 ммоль/сут (20 - 35 г/сут). У детей суточная экскреция мочевины с мочой ниже и увеличивается с возрастом: 1-я нед - 2,5 - 3,3 ммоль/сут, 1 мес - 10,0 - 17,0 ммоль/сут, 6 - 12 мес - 33 - 67 ммоль/сут, 1 - 2 года - 67 - 133 ммоль/сут, 4 - 8 лет - 133 - 200 ммоль/сут, 8 - 15 лет - 200 - 300 ммоль/сут.

Повышение уровня мочевины в моче.

Увеличение экскреции мочевины с мочой наблюдается при:

злокачественной анемии (вследствие отрицательного азотистого баланса);

лихорадке;

после приема некоторых лекарственных препаратов (салицилатов, хинина, передозировке тироксина и др.);

гиперпротеиновой диете;

гиперфункции щитовидной железы;

введении в организм 11-оксикортикостероидов;

в послеоперационном состоянии.

Снижение уровня мочевины в моче.

Уменьшение экскреции мочевины с мочой наблюдается:

у здоровых растущих детей;

во время беременности;

при диете с низким содержанием белка и высоким содержанием углеводов;

при приеме СТГ, тестостерона, инсулина, анаболических гормонов (положительный азотистый баланс);

в период выздоровления;

при заболеваниях почек и почечной недостаточности любого происхождения;

при паренхиматозной желтухе, острой дистрофии печени, прогрессирующем циррозе печени (вследствие нарушения образования мочевины);

при врожденной недостаточности или отсутствии ферментов, участвующих в синтезе мочевины;

при токсемии.

Методы определения мочевины

Определение мочевины используется для диагностики, определения прогноза и тяжести течения заболевания, а также для контроля за лечением.

Определение мочевины в клинико-диагностических лабораториях проводится различными методами, однако все их многообразие можно разделить на три основные группы:

1. Газометрические;

2. Прямые фотометрические;

3. Ферментативные (уреазные).

Газометрические методы определения мочевины основаны на окислении мочевины гипобромитом натрия в щелочной среде. При этом мочевина подвергается окислению. В результате реакции образуются азот, углекислый газ, бромит натрия и вода. Углекислота поглощается раствором, а объем газообразного азота измеряется с помощью специального аппарата. Наиболее удобно для практических целей проводить определение мочевины в аппарате Бородина.

Недостатком этой реакции являются ее низкие специфичность и точность, так как гипобромит натрия реагирует не только с мочевиной, но и с другими соединениями, содержащими аминогруппы. Методы этой группы неточны, плохо воспроизводимы и неудобны при серийной работе, чувствительность их низкая. Кроме того, бром характеризуется высокой токсичностью.

В связи с вышеперечисленными недостатками газометрические методы определения мочевины в настоящее время практически не применяются в клинико-диагностических лабораториях.

Фотометрические методы определения мочевины основаны на реакции мочевины с различными веществами с образованием окрашенных соединений.

Среди фотометрических методов определения мочевины наиболее распространенными являются методы, основанные на реакции мочевины с диацетилмонооксимом (диацетилмонооксимная реакция, реакция Ферона), протекающей в два этапа.

На первом этапе диацетилмонооксим расщепляется до диацетила и гидроксиламина. На втором этапе диацетил в кислой среде вступает в реакцию конденсации с мочевиной с образованием окрашенного комплекса. Величину его поглощения регистрируют при 550 нм, либо по его способности к флюоресценции при 415 нм.

Изменению окраски и стабилизации комплекса способствует использование ряда соединений или удаление из реакции образующегося при гидролизе гидроксиламина. Для окисления гидроксиламина могут применяться следующие вещества: персульфат калия, мышьяковая кислота, хлорная кислота, катионы, феназон. Для интенсификации окраски и повышения ее стабильности применяются: тиосемикарбазид, фенилантраниловая кислота, глюкуронолактон, катионы, триптофан и нитриты.

Диацетилмонооксимную реакцию адаптировали для определения мочевины в моче и сыворотке крови. Основной недостаток этого метода - светочувствительность комплекса и быстрое снижение его окраски. Другим недостатком является токсичность реактивов для проведения данной реакции.

Однако, несмотря на имеющиеся недостатки, методы этой группы отличаются хорошей воспроизводимостью, высокой чувствительностью, большой специфичностью. В некоторых методах используется 20 - 50 мкл сыворотки, что позволяет применять их без депротеинизации сыворотки.

Диацетилмонооксимный метод определения мочевины утвержден в качестве унифицированного.

Ферментативные методы определения мочевины приобрели наибольшее распространение в современной клинико-лабораторной практике. Эти методы определения мочевины называются также уреазными, так как в них в качестве реактива используется фермент уреаза. Для уреазы мочевина является единственным физиологическим субстратом, поэтому уреазные методы высокоспецифичны.

При сборе материала для исследования следует помнить, что фторид ингибирует уреазную реакцию. В связи с этим методы, основанные на использовании уреазы, не могут использовать образцы крови с добавлением фторида. Кроме того, для уреазных методов не может использоваться в качестве антикоагулянта аммониевая соль гепарина.

Ферментативные методы определения мочевины достаточно многочисленны, но все состоят из двух этапов. Первый этап - общий для всех уреазных методов. Суть его заключается в том, что под действием уреазы происходит гидролиз мочевины до аммиака. На втором этапе определяется концентрация аммиака, образовавшегося на первом этапе. В зависимости от используемых способов регистрации концентрации аммиака, ферментативные (уреазные) методы определения мочевины можно разделить на следующие группы:

-колориметрические по конечной точке,

-методы с использованием сопряженных ферментативных реакций,

-потенциометрические,

-методы с использованием технологии "сухой химии".

Ферментативные колориметрические методы определения мочевины по конечной точке.

В данной группе методов на втором этапе аммиак взаимодействует с хромогенным комплексом с образованием окрашенного соединения, которое фотометрируют при длине волны 580 - 600 нм. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации мочевины в исследуемом материале.

К данной группе методов относятся:

фенолгипохлоритный метод,

салицилатгипохлоритный метод.

При фенолгипохлоритном методе аммиак на втором этапе реагирует с фенолом и гипохлоритом натрия, в результате чего образуется продукт синего цвета (индофенол). В случае салицилатгипохлоритного метода вместо фенола используется салицилат, а окрашенный продукт имеет зеленое окрашивание.

Уреазные методы определения мочевины с использованием сопряженных ферментативных реакций.

При этих методах определения мочевины уровень аммиака на втором этапе определяют с использованием сочетанных ферментативных реакций.

Наиболее популярный метод определения мочевины в сыворотке крови или моче основан на использовании в качестве индикаторного фермента глутаматдегидрогеназы. При этом на втором этапе происходит преобразование выделяющегося аммиака (ионов аммония) в L-глутамат путем взаимодействия с 2-оксоглутаратом, катализируемого ферментом глутаматдегидрогеназой. Поскольку вторая реакция сопряжена с окислением НАД·Н до НАД+, результаты реакции регистрируют по убыванию оптической плотности раствора при 340 нм. Существуют и некоторые модификации этого метода (используют альфа-кетоглутарат и получают L-глутаминат и др.), но конечный принцип регистрации результатов окисления НАД·Н включен во все указанные методы. Следует отметить, что многие ферменты, содержащиеся в сыворотке крови, способны конкурировать с глутаматдегидрогеназой за кофермент НАДН 2 и вмешиваться в результаты исследования. Кроме того, аммиак, который может содержаться в составе реактивов, может приводить к ложному завышению результатов. Реакция при использовании сопряженной реакции уреаза/глутаматдегидрогеназа, выполненная в кинетическом варианте, может использоваться для определения содержания мочевины в моче при нормальном уровне аммиака, поскольку эндогенный аммиак в моче быстро используется в начале реакции. Последующее изменение поглощения при 340 нм обусловлено образованием аммиака в уреазной реакции.

В другой ферментной системе аммиак, образующийся на первом этапе при участии уреазы, реагирует с глутаматом при участии аденозинтрифосфата (ATФ) в присутствии глутаминсинтетазы. Аденозиндифосфат (АДФ), образующийся в этой ферментативной реакции, определяют с использованием пируваткиназы и пируватоксидазы с образованием перекиси водорода. На заключительном этапе в реакции между пероксидом, фенолом и 4-аминоантипирином при участии фермента пероксидазы образуется окрашенный комплекс. Величину его поглощения оценивают фотометрически.

Был предложен ферментативный метод, основанный на использовании фермента лейциндегидрогеназы, позволяющий избежать вмешательства в реакцию эндогенного аммония. Метод основан на использовании фермента лейциндегидрогеназы, связывающей ионы NH₄+ в реакции с образованием L-изолейцина после гидролиза мочевины при участии уреазы. Метод проводят в два этапа. биохимический мочевина кровь ферментативный

Первый этап - связывание эндогенного NH₄+ . NH₄+, содержащийся в исследуемом образце (сыворотка крови или моча), реагирует с 2-кетоизокапроновой кислотой в присутствии НАДН 2 и лейциндегидрогеназы с образованием L-изолейцина.

Второй этап. Определение концентрации NH₄+ проводят с помощью той же реакции после добавления в среду инкубации фермента уреазы.

Для определения малых количеств мочевины в биологических жидкостях и микродиализатах был предложен кинетический люминометрический метод. Метод основан на использовании уреазы, расщепляющей мочевину в АТФ-зависимой реакции. Данный фермент катализирует две последовательно протекающие реакции: биотин-зависимое карбоксилирование мочевины (реакция 1) и гидролиз аллофаната, образующегося в первой реакции (реакция 2). Скорость гидролиза АТФ контролируют с помощью люминометра в люциферин-люциферазной реакции. Скорость гидролиза ATФ пропорциональна содержанию мочевины в исследуемом образце. Подобный подход использовался для контроля в реальном времени эффективности гемодиализа.

Потенциометрические методы определения мочевины.

Широко используются электрохимические методы определения мочевины. В этой группе методов скорость реакции оценивают по изменению электропроводности среды в ходе реакции гидролиза мочевины уреазой. Образующийся в уреазной реакции CO₂ и аммиак увеличивают электропроводность реакционной смеси. При кинетическом способе анализа можно анализировать и сыворотку крови, и образцы мочи.

Для регистрации скорости уреазной реакции в некоторых анализаторах используют ион-селективные электроды. В потенциометрическом методе используют аммоний-селективный электрод c иммобилизированной уреазой. Этот принцип был использован в различных анализаторах.

Потенциометрические методы определения мочевины экономичны, точны и быстры, однако требуют специального оборудования (ион-селективного анализатора или блока).

Методы определения мочевины с использованием технологии "сухой химии".

Данные методы определения концентрации мочевины в сыворотке крови заключаются в использовании реакции между аммиаком и pH-индикатором. Этот подход использован в технологии "сухой химии" в виде тест-полосок с последующей визуальной оценкой результатов с помощью отражательной фотометрии.

Образующийся на первом этапе аммиак диффундирует через полупроницаемый слой тест-полоски и реагирует с pH-индикатором, вызывая окрашивание сенсорной зоны.

Считается, что методы с использованием технологии "сухой химии" обладают высокой точностью, поскольку не испытывают существенных вмешательств со стороны посторонних соединений. Основное неудобство этих методов - их "закрытость", т. е. строгая адаптированность к определенным анализаторам.

Для современной автоматизированной лаборатории предпочтительнее использовать или электрохимический метод, или метод с ферментными системами типа уреаза/ГлДГ в кинетическом варианте, поскольку эти методы более специфичны, высокопроизводительны и точнее всех других. Они легко адаптируются к широкому диапазону анализаторов и по этой причине должны оставаться методами выбора.

Каждая из вышеперечисленных групп, в свою очередь, включает в себя разнообразные методы, объединяемые общим принципом, но отличающиеся друг от друга применяемыми реактивами, ходом исследования и т. д. При этом каждый метод имеет свои преимущества и недостатки и может предъявлять особые требования к сбору биологического материала для исследования.

Как правило, сейчас большинство лабораторий для определения мочевины использует готовые наборы различных фирм-производителей. В инструкциях к набору обычно указываются требования при сборе биологического материала, условия проведения исследования, влияющие факторы, а также референтные значения для данного метода. При переходе с одного набора (метода) для определения мочевины на другой, необходимо тщательно ознакомиться с инструкцией во избежание возможных ошибок на всех трех этапах лабораторного исследования.

Биологический материал, используемый для определения мочевины

Для определения мочевины используют кровь (сыворотку или плазму) и суточную мочу. Важное внимание должно уделяться правильному сбору и хранению образцов для исследования.

Кровь для исследования берут утром натощак. При заборе крови для определения мочевины в ряде случаев нельзя использовать фторидные или аммиачные антикоагулянты, а также цитрат натрия (при использовании уреазных методов). Концентрация мочевины в сыворотке или плазме крови устойчива в течение 1 недели при хранении при 4 °C или не менее 6 месяцев при -20°C.

Нежелательно использовать гемолизированную, хилезную, липемическую или иктеричную сыворотку. Однако в ряде источников указывается, что на результаты исследований, проводимых в кинетическом варианте с большими разведениями образца, билирубин, гемоглобин или липемия, как правило, не влияют.

Мочу для определения мочевины используют суточную, собирая ее соответственно основным правилам сбора суточной мочи. Хранить мочу до анализа следует при температуре 4-8 °C.

Использовать для анализа мутные образцы крайне нежелательно. Для устранения мутности образцы желательно отцентрифугировать при 1500-3000 об/мин. При мутности мочи, связанной с бактериальным загрязнением образца или денатурацией белковых компонентов вследствие нарушения условий хранения, от анализа следует отказаться.

Следует помнить, что концентрация мочевины в моче высокая, а потому образцы мочи необходимо разводить перед исследованием (обычно используется разведение в 20 - 50 раз), а после определения мочевины результат умножить на коэффициент разведения.

При оценке результатов исследования следует учитывать, что в ряде случаев на определение уровня мочевины в материале in vitro могут влиять некоторые лекарственные препараты, применяемые пациентом, что в свою очередь может приводить к ложному занижению или завышению результатов (химическое влияние).

Для биохимических исследований в современных условиях предлагается более ста наименований готовых к использованию наборов реагентов.

Реагенты производятся из современного сырья ведущих западных производителей. Все наборы сопровождаются наборами калибраторов, что позволяет проводить максимально точную калибровку при работе с набором.

В сегодняшних условиях многие лаборатории, работавшие ранее на импортных реагентах, переходят на реагенты отечественных производителей и наши специалисты производят настройку и адаптацию рядя моделей гематологических анализаторов к реагентам нашего производства и к растворам "Реамед".

В 2003 году Санкт-Петербургской компанией НПФ "Абрис+" была разработана и запущена в производство "Серия 300". "Серия 300" - это современные высококачественные наборы реагентов для биохимических исследований.

Серия разработана для лабораторий с различными потребностями и разным уровнем оснащенности, т.е. предполагается ее использование при наличии любых биохимических фотометров. Серия "300" может использоваться как при работе с фотоэлектроколориметрами, так и на полуавтоматических и автоматических анализаторах. Наборы реагентов просты в использовании. Все компоненты наборов для биохимии стабильны, а сами наборы просты в использовании.

Учитывая, что по Национальному проекту помимо полуавтоматических анализаторов, осуществлялись поставки автоматического анализатора "САПФИР 400", разработчик нашей биохимии - кандидат биологических наук - Попов Юрий Геннадьевич со своими сотрудниками разработал новую серию, которую так и назвали "Сапфир", она позволяет успешно работать на любых автоматических биохимических анализаторах открытого типа. Серия "Сапфир" выпускается с 2006 года и успела зарекомендовать себя как отличная альтернатива импортным реагентам.

К преимуществам серии "Сапфир" относительно "Серии 300" можно отнести очень удобную фасовку (т.е. при подготовке к работе анализатора смешивание реактивов производится приблизительно на один день работы и без использования дозаторов) в зависимости от ежедневных потребностей лаборатории в наличии имеются фасовки с различными объемами. Если б/х автомат временно выходит из строя, то реактивы этой серии могут быть использованы при работе на любых полуавтоматических анализаторах.

Литература

1. Комаров Ф.И., Коровкин Б.Ф., Меньшиков В.В. - Биохимические исследования в клинике - Элиста, АПП "Джангар", 1999 г.

2. Слепышева В.В., Балябина М.Д., Козлов А.В. - Методы определения мочевины

3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. - Биологическая химия - Москва, "Медицина", 1990 г.

4. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. - Биохимия человека - том 1 - Москва, "Мир", 1993 г.

5. Биохимия - под редакцией Северина Е.С. - Москва, ГЭОТАР-МЕД, 2004 г.

6. Клиническая оценка лабораторных тестов - под редакцией Н.У. Тица - Москва, "Медицина", 1986 г.

7. Папаян А.В., Савенкова Н.Д. - "Клиническая нефрология детского возраста", Санкт-Петербург, СОТИС, 1997 г.

8. Цыганенко А.Я., Жуков В.И., Мясоедов В.В., Завгородний И.В. - Клиническая биохимия - Москва, "Триада-Х", 2002 г.

9. Камышников В.С. - Карманный справочник врача по лабораторной диагностике - Москва, МЕДпресс-информ, 2007 г.

10. Маршалл Дж. - Клиническая биохимия - Москва, Санкт-Петербург, "Бином", "Невский Диалект", 2000 г.

Размещено на Allbest.ru

...