Микрометод определения активности трипсина в биологических жидкостях
Основные недостатки диагностики острого панкреатита по методу Эрлангера в модификации Шатерникова. Сущность этапов проведения расчета активности фермента класса гидролаз с помощью микрометода. Эффективность применения полиномиальной аппроксимации.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | статья |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 27.03.2014 |
| Размер файла | 19,0 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Курский государственный медицинский университет
Кафедра хирургических болезней, оперативной хирургии и топографической анатомии
Статья
Микрометод определения активности трипсина в биологических жидкостях
Алехин С.А.
Липатов В.А.
Определение активности трипсина является важным критерием в диагностике острого панкреатита. До настоящего времени основным методом определения активности трипсина был метод Эрлангера в модификации Шатерникова. Недостатками данного метода является его большая стоимость, погрешность связанная с нелинейностью зависимости изменения оптической плотности стандартного раствора р-нитроанилина от его концентрации используемого для построения калибровочного графика, сложность расчетов.
Целью нашей статьи являлось устранение вышеизложенных недостатков существующей методики.
Нами разработан микрометод определения активности трипсина в биологических жидкостях. Метод основан на расщеплении трипсином синтетического бесцветного субстрата - бензоиларгинин-р-нитроанилида - с образованием окрашенного р-нитроанилина, количество которого мы определяем на спектрофотометре BACKMAN-DU65 c микрокюветами при длине волны 410 нм.
Реактивы используемые в нашем методе такие, как и в методике Эрлангера в модификации Шатерника.
Калибровка проводится по описанной методике отличием является построение графика, которое проводится для автоматизации процесса и ведения базы данных в Microsoft Excel.
Поскольку калибровочный график не может иметь четкую линейную зависимость, то для выражения зависимости оптической плотности раствора от концентрации р-нитроанилина необходимо определить уравнение которое описывает данную график. Таким уравнением является уравнение полиномиальной аппроксимации, которое можно также вывести на калибровочный график в Microsoft Excel.
Ход определения:
В опытную и контрольную пробирку вносят по 0,4 мл. бензоиларгинин-р-нитроанилида и добавляют по 0,025 мл. физиологического раствора. Затем вносят по 0,025 мл. плазмы крови, в контрольную пробирку сразу после этого добавляют 0,05мл 0,5н раствора НCl. 0,5 мл. содержимого помещают в микрокювету и измеряют значение оптической плотности при длине волны 410 нм и обозначают это значение, как ЕК(410). Поскольку в некоторых случаях в ходе ферментативной реакции происходит помутнение раствора, для введения поправки на мутность следует определить оптическую плотность жидкости также и при длине волны 550 нм. Полученные данные помечают как ЕК(550). Далее опытную пробирку ставят в термостат при температуре 370С на 30 минут. После термостатирования определяют оптическую плотность раствора при длинах волн 410 и 550 нм в опытной пробирке и помечают полученные данные, как ЕОп(410) и ЕОп(550). Расчет активности трипсина производят в три этапа.
1. Расчет разницы оптических плотностей при разных длинах волн, она будет равна:
DЕ = (ЕОп(410) - ЕК(410)) - (ЕОп(550)- ЕК(550))
2. Расчет количества образовавшегося р-нитроанилина по полиномиальному уравнению, которое в общем виде будет выглядеть следующим образом:
y = b + c1 * x + c2 * x2 + ……. + c6 * x6
Где:
b и с - константы.
Пример полиномиального уравнения для расчета концентрации р-нитроанилина:
y = 874,45 * x1 + 84,94 * x2
В данном случае константа b равняется 0 и в связи с этим опущена, а у - количество образовавшегося р-нитроанилина. В каждой лаборатории должна быть проведена калибровка и расчет полиномиального уравнения для данных этой калибровки.
3. Непосредственно расчет активности трипсина.
Поскольку это микровариант методики определения трипсина, количества реактивов и плазмы крови пропорционально уменьшены по отношению к классической методике, то и коэффициенты перерасчета будут теми же, что и в классической методике. Количество р-нитроанилина высчитанное с помощью полиномиального уравнения, показывает сколько вещества образовалось в ходе ферментативной реакции в 0,5 мл. субстрата в течение 30 минут при добавлении 0,025 плазмы, а высчитываемое количество трипсина в единицах активности показывает сколько вещества образуется в 0,5 мл. субстрата при добавлении 0,1 мл. плазмы за 1минуту.
Следовательно А - количество трипсина в единицах активности будет равно:
панкреатит фермент аппроксимация
А = (у * 4) / 30
Таким образом расчет активности трипсина по данной методике значительно снижает расход реактивов (в 10 раз по сравнению с методикой Эрлангера в модификации Шатерникова) очевидна экономическая эффективность первой из них. В связи с отсутствием принципиальных отличий между двумя методиками, результаты измерений активности трипсина будут аналогичными (разница между результатами будет находится в области погрешности методики). Немаловажным является и снижение количества забираемой крови на исследование. Так по предложенной нами методике плазмы необходимо всего 0,05 мл. а по классической методике 0,5 мл. Использование автоматических микропипеток позволяет уменьшить погрешность связанную с работой с макроколичествами реактивов и биологических материалов. Еще одним положительным моментом нашей модификации является упрощение расчетов и построения калибровочного графика и их автоматизация. Использование уравнения полиномиальной аппроксимации позволяет снизить погрешность методики связанную с нелинейностью зависимости изменения оптической плотности раствора р-нитроанилина от его концентрации. В целом методика расчета более проста для понимания, чем классическая, а использование Microsoft Excel позволяет не только полностью автоматизировать расчет, но и вести базу данных.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Основные методы диагностики острого панкреатита. Клиническая картина острого панкреатита. Разлитой перитонит как одно из осложнений при остром панкреатите. Роль методов функционального исследования поджелудочной железы в диагностике панкреатита.
реферат [14,0 K], добавлен 20.05.2010Определение острого холецистита и острого панкреатита. Анатомические особенности, классификация, этиология, дифференциальная диагностика клиники и осложнения острого холецистита и панкреатита. Основные преимущества рентгенографического исследования.
презентация [2,9 M], добавлен 20.05.2016Этиология, клиника, анатомические особенности панкреатита. Классификация острого холецистита в зависимости от наличия или отсутствия камней в желчевыводящих путях. Дифференциальные диагностические исследования острого холецистита и острого панкреатита.
презентация [2,9 M], добавлен 15.05.2016Методы определения активности, изучение кинетических параметров ферментативных реакций. Методы выделения и очистки ферментов. Изучение субклеточной локализации. Использование ферментов в качестве аналитических реагентов. Определение активности трипсина.
учебное пособие [104,8 K], добавлен 19.07.2009Воспаление поджелудочной железы. Различные классификации и формы панкреатита. Проявление панкреатического синдрома. Основные причины возникновения панкреатита. Клинические проявления острого и хронического панкреатита. Основные осложнения болезни.
презентация [401,9 K], добавлен 12.05.2014Аналитические характеристики набора для определения активности лактатдегидрогеназы. Принцип метода, основные условия измерения. Пробоподготовка, характеристика оборудования, проведение наблюдения. Фотометрирование с помощью анализатора Stat Fax 1904+.
презентация [709,9 K], добавлен 06.12.2016Проблема "острого живота" во время беременности. Хирургические причины "острого живота" во время беременности. Этиологические факторы и клинические симптомы острого панкреатита. Предрасполагающие моменты к возникновению острого панкреатита у беременных.
презентация [824,1 K], добавлен 27.04.2016Понятие острого панкреатита, симптомы, причины возникновения. Виды кист поджелудочной железы: врожденные, приобретенные. Перфорация как прорыв язвы за пределы двенадцатиперстной кишки с выходом их содержимого. Анализ принципов лечения острого панкреатита.
история болезни [82,8 K], добавлен 18.01.2013Этиология, патогенез и классификация острого и хронического гломерулонефрита и пиелонефрита у детей. Клиническая картина заболеваний почек, возможные осложнения. Критерии определения активности и стадий пиелонефрита. Методы диагностики и способы лечения.
презентация [474,8 K], добавлен 31.03.2016Исследование давления по методу Короткова. Этиология и патогенез острого панкреатита. Скользящая глубокая методическая пальпация ободочной кишки по методу Образцова. Особенности исследования серологических реакций. Диффузные изменения паренхимы печени.
история болезни [44,9 K], добавлен 29.03.2010Распространенность сахарного диабета вследствие острого или хронического панкреатита. Возможные хронические осложнения при панкреатогенном сахарном диабете, его диагностика. Инсулинотерапия, ее особенности у больных с заболеваниями поджелудочной железы.
реферат [49,4 K], добавлен 19.06.2015Основные проявления взаимодействия антиген — антитело. Иммунологический анализ антигенов и антител с помощью меченых реагентов. Сущность активности комплемента. Методы определения эффекторных клеток. Трансгенные животные и направленная доставка генов.
реферат [20,3 K], добавлен 28.09.2009Симптомы острого живота при заболеваниях органов, расположенных вне брюшной полости. Методы первичного исследования. Клиника гнойных перитонитов. Симптомы острого холецистита. Классификация острого панкреатита. Лабораторно-инструментальная диагностика.
презентация [3,9 M], добавлен 25.05.2015Роль физической активности в жизни человека. Физическая активность и контроль массы тела. Понятие умеренной или выраженной физической активности. Рак и сердечно-сосудистые заболевания: факторы риска их развития при понижении физической активности.
реферат [30,5 K], добавлен 20.10.2009Ознакомление с особенностями анатомического расположения червеобразного отростка: этиологией и патогенезом. Исследование и анализ классификации, дифференциальной диагностики острого аппендицита. Характеристика методики лечения острого аппендицита.
курсовая работа [76,3 K], добавлен 12.05.2018Частота выявления острого панкреатита, его классификация. Эндокринная функция поджелудочной железы. Клинические особенности и морфологические признаки панкреатита. Особенности геморрагического панкреонекроза. Тактика хирургического лечения больных.
презентация [2,1 M], добавлен 05.03.2014Методы выявления неспецифических показателей тканевого некроза, воспалительной реакции и гиперферментемии для диагностирования острого инфаркта миокарда. Определение активности ферментов креатинфосфокиназы и лактатдегидрогеназы в сыворотке крови.
презентация [147,7 K], добавлен 09.07.2014Понятие двигательной активности и ее роль для здоровья человека. Влияние на организм недостаточной двигательной активности. Значение физической культуры для профилактики гиподинамии.
курсовая работа [38,3 K], добавлен 21.10.2005Функции поджелудочной железы. Этиология и патогенез острого панкреатита, его симптоматика. Способы диагностики панкреонекроза. Дифференциальная оценка тяжести состояния больного. Принципы консервативного лечения и показания к оперативному вмешательству.
реферат [26,4 K], добавлен 28.08.2010Панкреатит как группа заболеваний и синдромов, сопровождающих воспаление поджелудочной железы. Классификация по ряду признаков. Клиническая картина острого панкреатита, диагностика и лечение. Проявления хронической формы заболевания, профилактика.
творческая работа [16,9 K], добавлен 13.11.2016
