Процессы перекисного окисления липидов, активность ферментов антиоксидантной защиты и морфологические изменения тканей глазного яблока на фоне лечения Перфтораном

Размещено на http://www.allbest.ru/

Процессы перекисного окисления липидов, активность ферментов антиоксидантной защиты и морфологические изменения тканей глазного яблока на фоне лечения Перфтораном

Каримова М.Х., Бахритдинова Ф.А.

Широкая распространенность поражений сосудистого тракта глаза, рецидивирующее течение и опасность развития тяжелых последствий, приводящих к инвалидизации больных, диктует необходимость углубленных исследований механизма развития патологического процесса, хронизации и поиска патогенетически обоснованных методов коррекции. Несмотря на большие успехи в лечении рецидивирующих воспалительных заболеваний глаза, поиск новых патогенетически обоснованных средств лечения является одной из актуальных проблем современной офтальмологии. Широко используемые в клинической практике для лечения острых воспалительных заболеваний глаз антибактериальные препараты хотя и оказывают выраженное положительное действие, однако не лишены недостатков [6,8,14].

В патогенезе развития воспалительного процесса ведущая роль принадлежит изменениям микрогемодинамики. Исследованиями последних лет [7,9,13] показана возможность применения Перфторана при патологических состояниях, сопровождающихся нарушениями микрогемодинамики. Установлены его антиоксидантные свойства, мембраностабилизирующее действие [2,12], что определяет возможность его использования в офтальмологии. Однако в литературе нет сведений о применении его при воспалительных заболеваниях глаза.

В этой связи целью настоящего исследования явилась оценка влияния перфторана на процессы ПОЛ, систему антиоксидантной защиты (АОЗ) и морфологические изменения в различных тканях глаза кроликов при экспериментальном увеите.

Материал и методы исследования

Исследования проводили на 12 половозрелых кроликах-самцах. Экспериментальный увеит воспроизводили введением в переднюю камеру обоих глаз кроликов по 0,05 мл взвеси суточной культуры стафилококка в физиологическом растворе [3]. Густота взвеси - 2 млрд. микробных тел в 1 мл. Прокол роговицы проводился у лимба на 12-2 часах. Экспериментальную фармакотерапию начинали на 2 сутки после воспроизведения модели и проводили в течение 10 дней. Животных разделяли на 3 группы в зависимости от проводимой фармакотерапии: 1 группа - нелеченная; 2 группа - получала гентамицин парабульбарно по 0,3 мл; 3 группа - получала перфторан парабульбарно по 0,3 мл. Исследования проводили через 10 суток от начала лечения. В крови и гомогенатах печени, роговицы, радужки, хрусталика определяли содержание малонового диальдегида (МДА) [1], активность каталазы [10] и супероксиддисмутазы (СОД) [15]. Для светооптических исследований из глазного яблока отпрепарировали ткани роговицы, радужной оболочки с цилиарным телом и переднюю часть сетчатой оболочки. Полученные кусочки фиксировали в течение суток в фиксаторе Буэна и уплотняли в спиртах, далее после соответствующей обработки кусочки заливали в парафин. Среды толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилинэозином и исследовали под микроскопом МБР-17.

Цифровой материал обработан методом вариационной статистики с использованием специального пакета программ.

Результаты и их обсуждение

Введение животным бактериальной взвеси уже через 24 часа приводило к развитию выраженного воспалительного процесса, который усугублялся развитием панофтальмита. Наряду с этим было выявлено значительное увеличение уровня МДА в гомогенатах исследуемых тканей глаза, особенно хрусталика.

Характерным было также повышение содержания МДА в сыворотке крови и в гомогенате печени экспериментальных животных. Активация ПОЛ в тканях глаза и в крови кроликов сопровождалась выраженным угнетением активности ферментов СОД и каталазы. Были отмечены отличительные особенности изменений изучаемых ферментов в различных отделах глаза. Для гомогенатов роговицы и радужки стало характерным более выраженное снижение активности СОД, в хрусталике - снижалась активность каталазы, а в крови - отмечалось снижение значений обоих ферментов. В отличие от них в гомогенате печени выявлена лишь тенденция к снижению активности СОД и активация каталазы.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что при воспалительных заболеваниях глаз печень также вовлекается в патологический процесс. Возможно, одним из механизмов вовлечения печени является выброс значительных количеств бактериальных токсинов и продуктов некроза в циркулирующую кровь, что приводит к активации мембранодеструктивных процессов. Ведущая роль печени в детоксикации экзо- и эндотоксинов обусловливает усиленное поступление токсикантов в печень. Это приводит, с одной стороны, к компенсаторной активации ферментов защиты, с другой - к интенсификации ПОЛ, что и наблюдалось в наших экспериментах.

Лечение экспериментального увеита гентамицином приводило к уменьшению воспалительного процесса в глазу, однако полного излечения не наблюдалось: сохранялось гнойное отделяемое в конъюнктивальной полости, смешанная инъекция сосудов, гнойная имбибиция роговицы, наличие гипопиона.

Положительные сдвиги отмечены при исследовании содержания МДА в различных тканях глаза. Так, уровень его в исследуемых тканях глаза и в печени снижался, однако значений контроля не достигал. Активность ферментов антиоксидантной защиты возрастала до контрольных значений в крови, гомогенатах радужки и хрусталика, тогда как в гомогенате роговицы этот показатель сохранялся ниже значений контроля. Следует отметить, что в печени активность ферментов АОЗ под влиянием гентамицина угнеталась как по сравнению с показателями нелеченной группы, так и у интактных животных. На наш взгляд, это было обусловлено токсическим действием препарата на печень, что подтверждается сохранением высоких значений МДА в гомогенате данного органа.

Экспериментальная терапия увеита перфтораном приводила к снижению гиперлипопероксидации в тканях глаза. Значения МДА в исследуемых органах приближались к аналогичным параметрам у интактных кроликов. Активизировались и ферменты антиоксидантной защиты, причем более выражено повышалась активность ферментов в тканях радужки и хрусталика. Такие положительные сдвиги приводили к существенному уменьшению воспалительных явлений в глазу. По сравнению с гентамицином перфторан давал больший клинический эффект. Вместе с тем отмечено снижение уровня МДА в сыворотке крови и в гомогенате печени экспериментальных животных. Однако значений контроля они не достигали. Повышалась активность СОД и каталазы в крови, а в гомогенате печени показатели СОД существенно возрастали и даже превышали контрольные значения, в то время как высокая активность каталазы у нелеченных животных снижалась до значений контроля.

При традиционном методе лечения обильная инфильтрация собственной пластинки роговицы нейтрофильными и эозинофильными гранулоцитами и мононуклеарными клетками сохранялась, отмечалась выраженная отечность и разрыхленность коллагеновых волокон межклеточного вещества. В условиях лечения гентамицином радужная оболочка была обильно инфильтрирована гранулоцитами и мононуклеарными лейкоцитами. Местами эти клетки образовывали плотные скопления по типу лимфоидных фолликулов и тяжей. Кровеносные сосуды в целом были сильно расширены, эндотелиальные клетки их деструктивно изменены, в просвете содержались некротические массы. Такая же тенденция отмечена нами при исследовании собственно сосудистой пластинки и ее взаимосвязи с сетчатой оболочкой глаза.

Несколько иная картина наблюдалась при коррекции перфтораном. В роговице глаза степень инфильтрации собственной пластинки гранулоцитами и мононуклеарными лейкоцитами была существенно ниже по сравнению с предыдущей группой, хотя очаговые отслоения и разрушения эпителиального пласта сохранялись. Межклеточное вещество в целом выглядело плотным с упорядоченно расположенными соединительноткаными пластинками. Участки отека и деструкции межклеточного вещества встречались редко. При коррекции перфтораном степень инфильтрации радужной оболочки лейкоцитами оказалась значительно ниже по сравнению с традиционным лечением. Отмечалось лишь умеренное расширение кровеносных сосудов, набухание их эндотелия. В просвете отдельных сосудов содержалось небольшое количество форменных элементов крови. Несмотря на умеренную инфильтрацию сосудистой пластинки мононуклеарными лейкоцитами, сетчатая оболочка в целом сохраняла свою обычную структуру. Признаков отслоения сетчатки практически не наблюдалось.

Более выраженный положительный эффект перфторана, на наш взгляд, связан с его уникальными свойствами, в частности, с восстановлением структуры биомембран. Положительный эффект перфторана в предотвращении мембранодеструктивных процессов связан с улучшением микрогемодинамики и транскапиллярного обмена, предотвращением развития гипоксии [4,11,16]. С другой стороны, в силу хорошей растворимости он адсорбирует большое количество цитотоксических компонентов фосфолипидов и свободных радикалов, препятствуя тем самым окислению полиненасыщенных жирных кислот фосфолипидов биомембран [5,12] . Совокупность этих эффектов и обеспечивает мембраностабилизирующее действие препарата.

Таким образом, сравнительные исследования показали выраженное противовоспалительное действие перфторана практически на все оболочки глаза в условиях экспериментального увеита. Это его действие, скорее всего, связано со значительным улучшением транспортировки кислорода в ткани, что, в свою очередь, повышает их сопротивляемость к микробному агенту. Устраняя гипоксию, перфторан тем самым повышает адаптивные возможности тканей увеального тракта и ускоряет регенераторные процессы в них.

перфторан увеит антиоксидантный микрогемодинамика

Выводы

1. При экспериментальном увеите наблюдается выраженная гиперлипопероксидация в пораженных тканях глаза на фоне угнетения активности ферментов СОД и каталазы. Интенсификация ПОЛ отмечена в сыворотке крови и в печени, причем если активность ферментов АОЗ в крови снижается, то в ткани печени компенсаторно активируется каталаза.

2. Экспериментальная терапия увеита гентамицином приводит к снижению гиперлипопероксидации, повышению активности ферментов АОЗ, однако полной их нормализации не наблюдается. В отличие от гентамицина фармакотерапия перфтораном более выраженно уменьшает гиперлипопероксидацию не только в пораженном органе, но и в сыворотке крови, и в гомогенате печени экспериментальных животных.

3. Перфторан, способствуя снижению воспалительных явлений в целом, препятствовал развитию более выраженных деструктивных изменений в сетчатке в условиях экспериментального увеита по сравнению с традиционным лечением гентамицином.

Литература

1. Андреева А.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. (1989). //Лабораторное дело.- Москва.- №1.- С. 41-49.

2. Ахмедов Р.Н. (1998). //Педиатрия. - Ташкент. -№1-2.- С.48-50.

3. Боровкова Н.Г., Кащеева Г.М. (1973). //Офтал.журнал. - Одесса. -№7.- С.544-547.

4. Воробьев С.И. (1994). //Физико-химические и клинические исследования перфторорганических соединений. - Пущино.- С.186-189.

5. Голубев А.М. (1993). //Перфторуглеродные активные среды в медицине и биологии. - Пущино.- С.82-93.

6. Даниличев В.Ф . и др. (2000). //Современная офтальмология.- С.-Петербург.- 666 с.

7. Иваницкий Г.Р.,Белоярцев Ф.Ф. (1993). //Медико-биологические аспекты применения эмульсий перфторуглеродов.- Пущино. ОНТИ НЦБИ АН СССР.- - С.7-38.

8. Катаргина Л.А., Хватова А. В. (2000). // Эндогенные увеиты у детей и подростков.- Москва - 319 с.

9. Ковеленов А.Ю., Лобзин Ю.В., Плужников Н.Н., Дьячков Д.Г. (2001). //Клиническая и экспериментальная фармакология.- Москва. - Т.64.- В.3.- С.41-45.

10. Коралюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. (1998). //Лабораторное дело.- Москва. - №1.- С.16-19.

11. Ладилов Ю.В., Исламов Б.И., Воробьев С.И., Иваницкий Г.Р. (1992). //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- Москва. - №6.- С.593-595.

12. Михайлов Г.М., Варыханов А.А., Воровский В.Е. и др. (1993). //Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии. Новые аспекты исследований. - Пущино. - С.141-144.

13. Мороз В.В., Крылов Н.Л., Иваницкий Г.Р. и др. (1999). //Анестезиология и реаниматология. Приложение.- Москва. - С.126-135.

14. Мустафина Ж.К., Краморенко Ю.С., Кобцева В.Ю. (1999). //Кли-ническая лабораторная диагностика.- Москва.- №5.- С.47-49.

15. Мхитарян В.Г., Бадалян Г.Е. (1978).//Журнал экспериментальной и клинической медицины.- Москва.- №6.- С.7-12.

16. Скорин В.И., Шилов В.В., Судус А.В., Зуев В.В. (1997). //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- Москва.- №10.- С.477-480.

Размещено на Allbest.ru