Гормональная регуляция беременности

Ложноотрицательная реакция при проведении иммуноферментного теста на беременность чаще всего может быть при слишком раннем сроке, когда количество выделяемого ХГЧ ниже пороговой чувствительности применяемого метода, а также при нарушенной беременности (маточной или внематочной) вследствие возможного некроза хориальной ткани с резким ограничением вплоть до полного отсутствия секреции гормона.

Особого внимания требует дифференциальная диагностика внематочной беременности и маточной прервавшейся беременности с дисфункциональными маточными кровотечениями или опухолями матки и придатков.

При этом, вследствие нарушения функции хориона, концентрация ХГЧ бывает ниже чувствительности метода (50 мМЕ/мл). В таких случаях отрицательный результат пробы не свидетельствует об отсутствии беременности, в то время как положительный результат всегда подтверждает этот диагноз.

Ложноположительная реакция может наблюдаться при гинекологических заболеваниях, связанных с повышенной секрецией лютеотропного гормона (особенно при использовании в иммунологических методиках антител с низкой специфичностью); при опухолях гипофиза или яичника; воспалительных заболеваниях половой системы и у женщин в климактерический период или в менопаузе.

При подозрении на эту патологию следует повторить исследование при разведении мочи в 2 раза. Отрицательная реакция в этом случае исключает беременность. Ложноположительный результат может быть связан с примесью крови в моче, а так же с выделением значительного количества лекарственных веществ при соответствующей терапии (алкалоиды, транквилизаторы, производные фенотиазина) [2].

1.4.2 Показания к количественному определению некоторых гормонов при патологии беременности

В развитии и поддержании беременности важнейшая роль принадлежит ФПС, который синтезирует ряд местных и гуморальных регуляторов, в том числе и гормональной природы. Плацента и плод синтезируют все гормоны, необходимые для нормального их развития.

Показания к определению содержания ХГЧ в крови [2]:

ранняя диагностика беременности;

нарушение функции плаценты при патологически протекающей беременности;

дифдиагностика пузырного заноса и хорионэпителиомы, контроль за эффективностью их лечения;

Показания к определению содержания ПЛ в крови:

диагностика плацентарной недостаточности, гипоксии и гипотрофии плода;

Показания к определению содержания Прл в крови:

для комплексной оценки функционального состояния ФПК;

нарушение лактации в послеродовый период;

Показания к определению содержания эстрогенов в крови:

контроль за течением беременности с целью диагностики состояния ФПК;

Показания к определению содержания ПГ в крови:

диагностика фето-плацентарной недостаточности в динамике беременности и родов;

Показания к определению содержания Кр в крови:

нарушение функционирования системы гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников;

диагностика болезней Аддисона и Иценко-Кушинга.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТА

С целью изучения функции и состояния ФПС нами определено содержание ряда гормонов в сыворотке крови у женщин (20-35лет) на разных сроках беременности. Работу проводили на базе ЦНИЛ Донецкого Медицинского университета им. М.Горького в отделе молекулярно-генетических исследований. Диагностика проводилась методами радиоиммунологического (РИА) и иммуноферментного (ИФА) анализа.

2.1 Принципы методов исследования

Для определения эстриола использовался метод конкурентного ИФА; плацентарного лактогена человека (ПЛ) - метод ИФА типа «сэндвич».

2.1.1 Принцип метода конкурентного ИФА

На твердой фазе сорбируют антитела к антигену, т.е. к эстриолу. Антиген-препарат метят ферментом (в данном случае эстриол меченый Horse Radish Peroxidase). При проведении анализа к твердой фазе добавляют испытуемую биологическую жидкость и меченый антиген. Последний конкурирует с антигеном в испытуемой пробе за иммобилизованные на твердой фазе антитела. В результате реакции ферментативная активность на твердой фазе оказывается обратно пропорциональной концентрации определяемого в пробе антигена.

2.1.2 Принцип метода «Сэндвич»-ИФА

«Сэндвич»-ИФА разработан для антигенов, на которых есть не менее двух неперекрывающихся эпитопов. Против обоих эпитопов получают в качестве реагентов специфичные антитела. Антитела к одному из эпитопов сорбируют на твердой фазе. Испытуемую пробу добавляют к твердой фазе, инкубируют, отмывают. После отмывки вносят конъюгат антител ко второму эпитопу с ферментом (Horse Radish Peroxidase). Ферментативная активность, остающаяся на твердой фазе, прямо пропорциональна содержанию антигена в пробе.

Эстрадиол и прогестерон определяли методом конкурентного РИА.

2.1.3 Принцип метода конкурентного РИА

Состоит в следующем. В аналитической пробирке, содержащей компоненты набора и образец сыворотки крови, во время инкубации устанавливается равновесие между [¹²⁵I]-гормоном (эстрадиолом или прогестероном) и эндогенным гормоном анализируемого образца сыворотки крови с антителами, иммобилизованными на стенках пробирки. Количество связанного антителами [¹²⁵I]-гормона находится в обратной зависимости от концентрации гормона в анализируемом образце. Разделение свободного и связанного антителами гормона осуществляют удалением инкубационной среды из пробирок с помощью водоструйного насоса.

2.2 Процедура определения эстрадиола и прогестерона

Аналитические пробирки поместить в штатив и каждую пару пробирок маркировать обозначением той величины, для измерения которой они предназначены: Т - для измерения общей активности меченого антигена в пробирке; В₀ - В₅ - для построения калибровочной кривой; В_кс - для пробирок с КС; В_x - для исследуемых образцов сыворотки крови пациентов.

Отобрать из каждого флакона с калибровочными пробами по 0,05 мл сыворотки и внести в пробирки В₀ - В₅. Из флакона с КС отобрать по 0,05 мл в пробирки В_кс. В пробирки В_х внести по 0,05 мл исследуемых образцов сыворотки крови пациентов.

Во все пробирки внести по 0,5 мл раствора меченого антигена.

Инкубировать все пробирки при температуре (20-25)°С в течение 1 ч при постоянном встряхивании (не менее 300 встряхиваний в минуту).

Из всех пробирок, кроме Т, полностью удалить содержимое с помощью водоструйного насоса.

Все пробирки поместить в гамма-счетчик и измерить связанную и общую активность меченого антигена в каждой пробирке в течение 1 мин.

Определение хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) проводили методом РИА типа «сэндвич».

2.3 Принцип метода «Сэндвич»-РИА

В наборе используется два вида мышиных моноклональных антител к различным эпитопам в-субъединицы ХГЧ, что позволяет определять общий ХГЧ, т.е. его интактную молекулу и (в-субъединицу. Исследуемые образцы, контрольные и калибровочные пробы инкубируют в пробирках, покрытых одним видом моноклональных антител совместно с раствором других антител, меченных ¹²⁵I. После окончания, инкубации удаляют жидкое содержимое, промывают пробирки и измеряют связанную активность ¹²⁵ I. Концентрацию общего ХГЧ, прямо пропорциональную связанной активности, определяют методом интерполяции по калибровочной кривой.

2.4 Процедура определения ХГЧ

В покрытые антителами пробирки последовательно внести:

а) 50 мкл калибровочных, контрольных и анализируемых проб в соответствии с маркировкой;

б) 200 мкл меченых антител;

Перемешать.

В две дополнительные пробирки внести по 200 мкл меченых антител для определения общей активности ¹²⁵I (Т).

Инкубировать 1 час при (18-25)°С и постоянном встряхивании.

Тщательно удалить содержимое пробирок (кроме проб Т).

Промыть пробирки 2 мл промывочного раствора.

Измерить связанную (В) и общую (Т) активность I в течение 1 мин на гамма-счетчике.

Расчёты и графические построения проводятся при помощи специальных программ на ПК. Результаты (определение содержания гормона) рассчитывают методом интерполяции по калибровочной кривой, полученной одновременно с анализом неизвестных проб.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Во время практики нами проводились анализы на подтверждение нормального протикания беременности на разных сроках у 36 женщин. Для этого полученные данные сравнивали с показателями нормы содержания данных гормонов на определенных сроках беременности (таб.3.1 и 3.2).

Количественное содержание эстрадиола было определено у 8 пациенток, прогестерона - у 25, ХГЧ - у 11 (таб.3.3).

При определении прогестерона содержание гормона в норме (показатели нормы на разных сроках см. табл.1) наблюдалось у 8 беременных, у 10 зарегистрированно повышенное и у - 14 пониженное.

При определении Е₂ содержание гормона в норме (см. табл.3.1) наблюдалось у 5ти пациенток, у 2х - повышенное и у 2х - пониженное.

При определении ХГЧ содержание гормона в норме (см. табл.3.2) наблюдалось у 1 беременных, у 12 -- повышенное и у 0 -- пониженное.

Таб.3.1 Содержание гормонов в сыворотке крови при физиологически протекающей беременности (в норме)

Таб.3.2 Содержание ХГЧ в сыворотке крови при физиологически протекающей беременности (в норме)

Таб.3.3 Содержание Е₂, Пг и ХГЧ у исследуемых

Содержание прогестерона в крови матери прогрессирующе растет, возрастая в 2 раза к 7-8 неделе, а затем постепенно повышается до 37-38 недель. Снижение уровня гормона указывает на наличие патологии беременности и требует заместительной терапии. Увеличение уровня гормона указывает на наличие почечной недостаточности (нарушение его выведения). Выработка прогестерона полностью прекращается лишь при далекозашедших дегенеративных изменениях в плаценте, например, при замершей беременности.

При беременности содержание эстрогенов прогрессивно растет, причем

происходит преимущественное образования Е₃ по сравнению с Е₂ и Е₁- Поскольку Е₃ образуется в плаценте, его уровень непосредственно характеризует функциональное состояние плаценты и плода. Недостаток синтеза Е₃ вызывает угрозу прерывания в 1-ой половине беременности и угрозу преждевременных родов - во 2- ой. В количественном отношении Е₃ начинает доминировать над другими эстрогенами после 12-15-й недели беременности. Содержание Е₂ в крови матери в начале беременности соответствует его уровню у небеременных женщин в период овуляции. При физиологически протекающей беременности резкий подъем его уровня отмечается к 9-10-й неделе, затем - постепенно увеличивается до конца беременности с тремя пиками более высокой концентрации - в 23-24, 35-36 и 39-40 недель [9].

Снижение уровня Е₃ в крови беременных наблюдается при гипоплазии надпочечников плода, анэнцефалии, синдроме Дауна, внутриутробной инфекции. Низкие значения Е₃ обнаруживаются также при приеме глюкокортикоидов, антибиотиков, что связано со снижением активности надпочечников плода. Снижение концентрации эстрогенов в плазме крови более чем на 35 % указывает на острую недостаточность функционирования ФПК и является сигналом угрозы для плода. Повышение уровня эстрогенов в крови беременных отмечено при многоплодной беременности или крупном плоде. Ложное повышение концентрации эстрогенов возможно при заболеваниях печени, что обусловлено снижением их конъюгации.

ХГЧ транспортируется преимущественно в кровь матери, где его уровень в 10-20 раз выше, чем в крови плода. Период полураспада - 27 часов, следовательно, при его определении получают истинную и сиюминутную характеристику состояния его секреции. В первые 4-6 недель беременности содержание ХГЧ в биологических жидкостях организма увеличивается в 2 раза каждые 2 дня, достигая максимума на 9-12 неделе. Во 2 триместре содержание ХГЧ стабилизируется на невысоком уровне, а затем несколько возрастает.

Гиперсекреция ХГЧ возникает как вариант нормы при многоплодной и пролонгированной беременности. Повышение уровня ХГЧ является неблагоприятным симптомом токсикоза беременных, врожденных пороков развития плода.

При определении понижения содержания в крови или экскреции ХГЧ у беременной на 20-30 % от недельной нормы необходимо повторить анализ. Если содержание ХГЧ окажется таким же или в пределах нормы при отсутствии иных признаков плацентарной недостаточности, то можно расценивать данный случай как вариант нормы. Прогрессирующее в динамике наблюдения снижение содержания ХГЧ в крови матери на 50 % и более указывает на формирование плацентарной недостаточности и требует дополнительного определения других гормонов плаценты и ФПК.

Как правило, одновременно со снижением уровня ХГЧ снижается уровень прогестерона и эстрогенов, секреция которых находится под контролем.

ВЫВОДЫ

Гормональный аспект физиологической беременности несмотря на многолетние исследования, обогатившие науку важными фактами, не нашел еще достаточно разностороннего и полного освещения в литературе. Это естественно, так как сама проблема поистине неисчерпаема. Новые экспериментальные и теоретические данные, новая клиническая информация, новые сведения, добытые в области эндокринологии беременности, биохимической динамики метаболических процессов и их гормональной регуляции при нормальном и патологическом гестационном процессе - все это вносит соответствующие коррективы в наши представления о гормональном фоне беременности, одновременно выдвигая перспективные направления проблемы. Особую биологическую и клиническую значимость имеет изучение как взаимосвязей между отдельными гормонами, так и корреляций, складывающихся между гормональным шунтом регуляции метаболического гомеостаза в системе мать-плацента-плод и другими биологическими регуляторами гестационного процесса.

В данном исследовании сделана попытка проанализировать и обсудить лишь некоторые простейшие аспекты проблемы. Одним из них явилось изучение гормонального фона при физиологически протекающей беременности, а также роли ФПС в развитии и поддержании беременности. Проведена диагностики ряда гормонов:

обеспечивающих не только становление морфофункционального статуса органов и систем плода, но и специфическое для беременности развитие репродуктивной системы матери (матка, вагина, молочные железы), имеющих определенную положительную динамику (эстрадиол, эстриол, прогестерон);

специфических гормонов, продуцируемых плацентой:

- плацентарного лактогена или соматомаммотропина, прямого регулятора метаболических процессов в организме матери и опосредованного - в организме плода, также имеющего позитивная направленность динамики;

-хорионического гонадотропина человека, регулятора эндокринной системы плода и фето-плацентарного метаболизма стероидов.

Полученные результаты показали, что у значительной части беременных имеет место или снижение уровня содержания гормонов, или и его повышение. Это может привести к различным патологиям, т. е. к осложнению течения беременности. Однако, для постановки достоверного диагноза необходимо более тщательное обследование, гормонодиагностика, учет биохимических показателей и определение сочетанного действия всех показателей.

Таким образом, количественное определение гормонов (женских половых и плацентарных) очень важно для понимания механизмов протекания беременности и своевременного выявления патологических отклонений, с целью их коррекции.

ЛИТЕРАТУРА

Биологическая химия: Учебник/ Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Под ред.акад. С.С. Дебова. - 2-е изд., -М.: Медицина, 1990.- 528с.: ил.

Практическая гормонодиагностика в акушерстве и гинекологии: Руководство для врачей/ С.В. Зяблицев, Э.Б. Яковлева, С.Б. Арбузова, М.И. Николенко. - Донецк, 1998. - 74с.

Гормональные аспекты физиологической беременности/ Минкина А.И., Рымашевская Э.П., Кургунова Л.С., Польщикова Л.А. - Ростов-на-Дону. Изд-во Рост. ун-та. - 1987, 128с.

Эндокринная регуляция беременности у человека./Доклад Научн. группы ВОЗ. М.: Медицина.- 1972, 40с.

Гинекологическая эндокринология./ Сольский Л.П., Михедко В.П., Фердман Т.Д., Борин А.Л.. - Киев: «Здоров'я».- 1976, 240с.

Иммунологическая гормонодиагностика в акушерстве и гинекологии: Обзор лабораторных анализов/ IMMUNOTECH. - 1997, 20с.

Репродуктивная эндокринология. В 2-х томах. Пер. с англ./ Под ред. С.К. Йена, Р.Б. Джаффе.- М.: Медицина.- 1998, 704с.: ил.

Основы эндокринологии: Учебник/ Розен В.Б.- 3-е изд., перераб. И доп. - М.: Изд-во МГУ, 1994. - 384с.: ил.

Молекулярные механизмы гормональной регуляции обмена веществ./ Кучеренко И.К., Германюк Я.Л., Васильев А.Н. -Киев: Вища школа. Изд-во при Киев. Ун-ве, 1986. - 148с.

Размещено на Allbest.ru