Розробка технології та методів стандартизації препаратів протиалергійної дії на основі Apis mellifica

Размещено на http://www.allbest.ru/

НАЦІОНАЛЬНА ФАРМАЦЕВТИЧНА АКАДЕМIЯ УКРАЇНИ

УДК 615.451.16:615.453.3:615.218.3:615.32:638.1

АВТОРЕФЕРАТ

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата фармацевтичних наук

Розробка технології та методів стандартизації препаратів протиалергійної дії на основі Apis mellifica

15.00.01 -- технологія ліків та організація

фармацевтичної справи

Осипенко Сергій Юрійович

Харків -- 2002

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана на кафедрі аптечної технології ліків Національної фармацевтичної академії України, Міністерство охорони здоров'я України.

Науковий керівник: доктор фармацевтичних наук, професор

ТИХОНОВА Світлана Олександрівна

Національна фармацевтична академія України, професор кафедри фармацевтичної технології та клінічної фармації ІПКСФ.

Офіційні опоненти: доктор фармацевтичних наук, професор

ЧУЄШОВ Владислав Іванович

Національна фармацевтична академія України, завідувач кафедри заводської технології ліків

доктор фармацевтичних наук, професор

Печерський Петро Павлович

Запорізький Державний медичний університет,

професор кафедри технології ліків

Провідна установа: Державний науковий центр лікарських засобів, відділ таблетованих лікарських засобів

Захист відбудеться “ 18 ” квітня 2002 року о 1000 год. на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 64.605.01 при Національній фармацевтичній академії України за адресою: 61002, м. Харків, вул. Пушкінська, 53.

З дисертацією можна ознайомитись в бібліотеці Національної фармацевтичної академії України (61168, м. Харків, вул. Блюхера, 4).

Автореферат розісланий “16 ” березня 2002 р.

Вчений секретар

спеціалізованої вченої ради ГРИЦЕНКО І.С.

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

гомеопатичний apis настойка гранула

Актуальність теми. Погіршення екологічного стану навколишнього середовища, нераціональне харчування з великим вмістом алергізуючих домішок у харчових продуктах, безконтрольне використання ліків, безліч стресових ситуацій сприяють розвитку алергійних захворювань, які в останні роки набувають не тільки медичного, але і соціального значення.

На цей час накопичено великий досвід лікування алергійних захворювань гомеопатичним методом. Apis mellifica широко застосовується в гомеопатичній практиці як протиалергійний та протинабряковий засіб, що входить до складу багатьох гомеопатичних прописів і комплексних препаратів.

Але специфіка вихідної сировини та технології гомеопатичних ліків, використання високих розведень діючих речовин, а також відсутність вітчизняної нормативно-технічної документації на виробництво цих ліків обумовили те, що фармацевтичний ринок України насичений гомеопатичними препаратами іноземних фірм, хоча в той же час в Україні є достатньо сировини для їх виготовлення.

Тому дослідження, присвячені розробці та науковому обгрунтуванню технології та методів стандартизації гомеопатичних препаратів, які випускаються в умовах спеціалізованих аптек і промислового виробництва, набувають особливої актуальності в вирішенні завдань сучасної фармацевтичної науки.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота виконана згідно з планами науково-дослідних робіт Національної фармацевтичної академії України (№ держреєстрації 0198U007008) та проблемної комісії “Фармація” МОЗ України.

Мета і задачі дослідження. Метою роботи є розробка та науково-експериментальне обгрунтування технології протиалергійних гомеопатичних препаратів на основі Apis mellifica в умовах спеціалізованих аптек і промислового виробництва, а також розробка методів стандартизації на дані препарати, виготовлені з вітчизняної сировини.

Для досягнення поставленої мети необхідно було вирішити такі завдання:

проаналізувати й узагальнити сучасні дані літератури про медичні аспекти лікування алергійних захворювань алопатичним і гомеопатичним методом, а також про арсенал і механізми дії лікарських препаратів, що використовуються для лікування алергії;

провести дослідження з удосконалення та оптимізації технології процесу одержання настойок, гомеопатичних потенцій і гранул Apis в умовах спеціалізованих аптек і промислового виробництва;

вивчити фізико-хімічні і технологічні властивості настойки та гранул і розробити методики якісного та кількісного визначення основних та допоміжних речовин у препаратах;

вивчити стабільність настойки та гранул у процесі зберігання;

розробити нормативно-технічну документацію на препарати: технологічні інструкції до виготовлення гомеопатичної матричної настойки Apis і гомеопатичних гранул Apis C6 у аптечних умовах, технологічні регламенти, проекти аналітичної нормативної документації (АНД);

провести мікробіологічні та фармакологічні дослідження препаратів.

Об'єкти дослідження. Об'єктом дослідження є матрична настойка Apis mellifica та гранули протиалергійної дії на її основі.

Предмет дослідження. Предметом дослідження є розробка складу і технології лікарських форм у вигляді настойки та гранул з одержаної настойки.

Методи дослідження. Визначення фізико-хімічних та технологічних показників настойок та гранул проводили за загальновизнаними методиками. Для ідентифікації препаратів використовували методи тонкошарової та паперової хроматографії, УФ- та ІЧ-спектроскопії, кольорові та осадові реакції; для кількісного визначення основних та допоміжних речовин - фотометричні та гравіметричний методи.

Наукова новизна одержаних результатів. Розроблена технологія матричної настойки Apis та гомеопатичних гранул Apis C6, а також вивчені фізико-хімічні та технологічні властивості настойки, виготовленої з вітчизняної сировини та зміни даних характеристик в залежності від періоду її заготівлі і проведені дослідження гомеопатичних гранул Apis C6.

Якісними реакціями та методами паперової і тонкошарової хроматографії встановлено склад груп біологічно активних речовин матричної настойки Apis (амінокислоти, редуцюючі цукри, ліпіди, білки), а також її спектральні характеристики методами УФ- і ІЧ-спектроскопії.

З використанням сучасних фізико-хімічних методів аналізу розроблені методики якісної ідентифікації та кількісного визначення вмісту основних та допоміжних речовин у матричній настойці Apis і гомеопатичних гранулах Apis C6, а також обгрунтовані розділи аналітичної нормативної документації, що регламентують їх якість.

Практичне значення одержаних результатів. Створений протиалергійний гомеопатичний препарат на основі тіла бджоли у вигляді гранул - Apis C6 та базисний препарат для його виготовлення - матрична настойка Apis.

Розроблено та апробовано технологію гомеопатичної матричної настойки Apis і гомеопатичних гранул протиалергійної дії Apis C6 в умовах спеціалізованих аптек і промислового виробництва, що викладена в технологічних інструкціях і технологічних регламентах, на базі ТОВ “Гомеопатична аптека” і ТОВ “Арніка”.

Фрагменти роботи впроваджені у навчальний і виробничий процеси ряду вузів та організацій України. Впровадження підтверджені відповідними актами впровадження.

Особистий внесок здобувача:

У наукових працях опублікованих зі співавторами Тихоновим О.І., Тихоновою С.О., Будніковою Т.М., Яковенко Л.І, Соболєвою В.О., Назарук С.М. автором особисто проведено:

аналіз літературних даних стосовно основних положень гомеопатії, історії розвитку, механізмів дії гомеопатичних ліків, а також застосування гомеопатичних препаратів у терапії алергійних захворювань;

обгрунтована і розроблена технологія матричної настойки та гомеопатичних гранул Apis C6 для виготовлення в спеціалізованих аптеках і промислових умовах;

розроблені методики контролю якості матричної настойки Apis та гомеопатичних гранул Apis C6;

на підставі проведених експериментальних досліджень складені технологічні інструкції та технологічні регламенти на їх виробництво, а також проекти АНД на матричну настойку Apis і гранули Apis C6;

узагальнені результати експериментальних досліджень та сформульовані висновки.

Апробація результатів дисертації. Основні результати дисертаційної роботи доповідалися на I та III міжнародних конгресах гомеопатів України “Актуальні питання гомеопатичної медицини” (Одеса, 1998р., 2000р.), V Національному з'їзді фармацевтів України “Досягнення сучасної фармації та перспективи її розвитку у новому тисячолітті” (Харків, 1999р.); VIII Міжнародному симпозіумі “Нетрадиционное растениеводство, экология и здоровье” (Сімферополь, 1999р.), II Міжнародній науково-практичній конференції “Апитерапия сегодня - с биологической аптекой пчел в ХХI век” (Уфа, 2000р.), Республіканській науковій конференції, присвяченій 80-річчю ДНЦЛЗ “Наукові напрямки створення лікарських препаратів у фармацевтичному секторі України” (Харків, 2000р.); Всеукраїнській науково-практичній конференції “Вчені України - вітчизняній фармації” (Харків, 2000р.).

Публікації. За результатами дисертації опубліковано 6 наукових статей та 7 тез доповідей.

Структура дисертації. Дисертаційна робота складається зі вступу, огляду літератури (розділ І), об'єктів та методів досліджень (розділ 2), трьох розділів експериментальної частини, загальних висновків, списку літературних джерел, додатків. Робота викладена на 136 сторінках машинопису, містить 17 рисунків, 38 таблиць і 12 додатків. Список використаних джерел містить 137 джерел, у тому числі 56 іноземних.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

1. Розробка технології матричної настойки Apis mellifica

Сировину для виготовлення настойки збирали в періоди із квітня по жовтень у Харківській області та Криму. Бджіл відбирали за морфологічними ознаками, а також визначали такі показники, як середня маса бджоли та середній вміст води в її тілі. Дослідженнями встановлено, що з травня по вересень маса бджіл збільшується від 105 ± 5 до 108 ± 3 мг, а вміст води в тілі зменшується від 77,9 ±1,4 до 70,6 ± 1,4%.

Настойки з тваринної сировини виготовляли у лабораторних умовах за методом мацерації у співвідношенні 1:10 на 60% мас. розчині спирту етилового, як пропонують іноземні гомеопатичні фармакопеї, які дозволені для використання у нашій країні (офіційний лист Фармакопейного комітету України від 03.03.98 р. № 11/461).

Для дослідження процесу мацерації, готували 5 серій настойок. У процесі настоювання (16 діб) відбирали проби через кожні 24 години, фільтрували та визначали густину і сухий залишок. За допомогою регресійного аналізу одержаних даних нами виведені емпіричні рівняння залежності густини і сухого залишку від часу мацерації. Залежність густина-час мацерації можна описати рівнянням:

, (1.1)

де: с - густина розчину, г/см3;

T - час мацерації, діб;

- густина розчину в день виготовлення, г/см3;

та - коефіцієнти, визначені за методом найменших квадратів.

Рівняння залежності сухого залишку від часу мацерації має вигляд:

, (1.2)

де: Х - сухий залишок розчину, %;

T - час мацерації, діб;

- сухий залишок розчину в день виготовлення, %;

та - коефіцієнти, визначені за методом найменших квадратів.

Коефіцієнти кореляції між емпіричними і теоретичними значеннями для густини і сухого залишку становлять відповідно 0,992 та 0,990. На рис. 1 представлені знайдені рівняння у графічній формі, точки відображають експериментальні дані. Як видно з рис. 1 густина і сухий залишок настойок досягають граничних значень через 12 діб (керівництво В.Швабе пропонує 14 діб). Виходячи з цих експериментальних даних, можна зробити висновок, що це є оптимальним терміном мацерації при виготовленні настойки. Виведені рівняння можна застосовувати для контролю технологічного процесу.

Слід відзначити, що виготовлення настойки будь-яким іншим методом, наприклад методом перколяції недоцільно, бо це може призвести до руйнування біологічно активних речовин або змінювати їх співвідношення у розчині. Також при цьому розчинник змінює свою структуру чи агрегатний стан, втрачаючи лікувальну “інформацію”, що передається розчиннику при загибелі бджіл, і яка, на думку більшості дослідників (Ж. Бенвеніст, С.Ло,

П.С. Ендлер та ін.), передається водно-спиртовим розчинам електромагнітним випромінюванням та зберігається і посилюється у розчинах дуже високих розведень речовин в вигляді упорядкованих структур з молекул розчинника.

Виходячи з цього необхідно при виробництві та зберіганні запобігти контакту гомеопатичних препаратів та напівфабрикатів з матеріалами, що здатні поглинати електромагнітне випромінювання, наприклад: металеві поверхні, скло, що містить важкі метали та ін. У технологічному процесі неприпустимо використання високотемпературних режимів та перепадів тиску, а також обладнання, з властивостями електромагнітного випромінювання.

Таким чином, всі поверхні апаратів і пристроїв, трубопроводи, з якими контактує гомеопатичний препарат у процесі виготовлення, повинні бути виконані з матеріалів, що не поглинають електромагнітних випромінювань (наприклад, оранжеве скло, що не містить важких металів). Перемішування та механізоване потенціювання розчинів або сипучих матеріалів необхідно проводити за допомогою відцентрових сил. Двигуни обладнання, по можливості, повинні бути максимально віддалені від збірників і трубопроводів, а також мати ремінну передачу. Подачу розчинів та їх фільтрування необхідно проводити за допомогою різниці рівнів висоти між збірниками, не використовуючи вакууму та дрібно пористих фільтрів. Сипучі матеріали необхідно висушувати на повітрі при температурі не вище 40°С. Дезинфекція приміщень повинна здійснюватися відповідно НТД, обладнання - спиртом етиловим не менш ніж 60% мас. Тара та упаковка повинна бути світлонепрониклою.

На основі проведених літературних пошуків та експериментальних досліджень нами розроблена технологія одержання матричної настойки.

Наважку живих бджіл у дрібночарунковій сітці поміщають у 2 частини розчину спирту етилового 60% мас., через 30 с. бджіл віджимають та подрібнюють. До подрібненої сировини додають 8 частин спирту етилового 60% мас. і залишають на 12 діб для мацерації при температурі 15±2 °С, струшуючи кожного дня. Потім видаляють шрот, додають перші 2 частини спирту етилового 60% мас. і відстоюють, через 1 добу фільтрують та розливають у флакони з оранжевого скла по 25 мл. Одержана настойка відповідає гомеопатичній потенції Х1.

На відміну від загальновизнаної технології ми пропонуємо скоротити термін мацерації до 12 діб, а також першу порцію екстрагенту додавати після настоювання, що забезпечить усунення контакту частин тканин з “інформаційними структурами”, при яких останні можуть руйнуватися. При цьому, як показали проведені дослідження, фізико-хімічні властивості настойки, практично, не змінюються.

2. Розробка технології гомеопатичних гранул “Apis C6”

Для виготовлення гомеопатичного препарату протиалергійної дії на основі матричної настойки Apis ми обрали гранули, тому що така лікарська форма є найбільш поширеною в асортименті гомеопатичних препаратів, особливо в нашій країні, завдяки ряду переваг: простота технології, що не потребує коштовного апаратурного обладнання, зручність пакування та дозування, тривалий строк зберігання та ін. Потенцію Apis С6 найчастіше використовують у гомеопатичній практиці для лікування алергійних захворювань, а також як універсальний протинабряковий засіб.

Для одержання гранул Apis C6, з матричної настойки послідовно готували гомеопатичні потенції за десятичною шкалою (матрична настойка відповідає потенції Х1) до потенції Х10 (С5) на 60% мас. розчині спирту етилового вручну за допомогою струшуванням 10 разів зверху вниз у флаконі, що заповнений на 2/3 об'єму. Гранули зважували та поміщували у змішувач гранулятор об'ємом у 1,5 рази більше за їх об'єм, додавали зволожувач (спирт етиловий 60% мас.) та струшували зверху вниз 1 хвилину (35-40 стр./хв.). Потім додавали гомеопатичну потенцію Apis Х10 у співвідношенні 1:100 до маси гранул і проводили насичення вручну струшуванням зверху вниз протягом 10 хв.

Насичені гранули висушували при температурі 18 ± 2 °С. Після висушування гранули пакували у пластмасові пенали та пакети з ламінованого паперу по 7 та 10 г відповідно.

З метою покращання процесу насичення гранул досліджували вплив кількості зволожувача (спирт етиловий 60% мас.) на якість гранул та час їх висушування. Для цього виготовляли декілька серій по 50,0 г гранул, додаючи зволожувач у співвідношеннях 1:100; 2:100; 3:100; 4:100; 5:100 до їх маси. Паралельно замість гомеопатичній потенції додавали 0,01% розчин діамантового зеленого на 60% мас. спирті етиловому.

Слід відзначити, що гомеопатичні потенції Х4-Х9 нормативно-технічна документація регламентує на розчині спирту етилового 45% мас., а Х10 знов на 60% мас. При цьому перепад концентрації спирту етилового у розчині викликає подвійні зміни у структурі розчинника, що може знизити якість гранул, а також необхідно ввести операцію виготовлення розчину спирту етилового 45% мас. Ми пропонуємо не змінювати концентрацію спирту при виготовленні потенцій Х4-Х10, а попередні потенції готувати безпосередньо перед насиченням гранул.

Гранули оцінювали за такими показниками, як кількість конгломератів гранул та механічна міцність. Рівномірність розподілення гомеопатичної потенції оцінювали візуально по рівномірності забарвлення гранул у контрольному досліді з розчином діамантового зеленого. При збільшенні зволожувача до співвідношення 3:100 гранули практично не змінювалися за структурно-механічними властивостями, тільки збільшувався час сушки гранул з 42±2 хв. до 53±2 хв. В той же час при такому співвідношенні досягалося краще розподілення гомеопатичній потенції, якою насичували гранули. При подальшому збільшенні кількості зволожувача гранули змінювали структурно-механічні властивості, підвищувалася кількість конгломератів гранул та час їх сушки, а також знижувалася їх механічна міцність. Слід також відзначити, що при струшуванні довше 10 хв. знижувалася механічна міцність гранул, а кращого розподілення потенції не спостерігалося.

Отже, проведені нами дослідження свідчать, що для кращого розподілення лікарської речовини в об'ємі гранул необхідно збільшити кількість зволожувача до співвідношення 3:100 від традиційного 1:100, проводячи насичення протягом 10 хв. У промислових умовах гомеопатичні потенції та насичення гранул необхідно проводити вихровим перемішуванням. При цьому забезпечується проходження звукових хвиль крізь рідину або сипучий матеріал, викликаних збовтуванням або падінням останніх.

Для визначення розміру упаковки та вибору режиму роботи дозуючого пристрою при пакуванні гранул ми вивчали таки показники, як сипкість, кут природного відкосу, насипну масу та об'ємну густину. Дослідження показали, що гранули мають хороші технологічні властивості. Високе значення сипкості (7,6 ± 1 г/с) забезпечить текучість їх у бункері пакувального автомата, а досить близькі значення насипної маси (0,76 ± 0,05 г/см3) та об'ємної густини (0,75 ± 0,03 см3) дозволяють зробити висновок, що гранули не здатні ущільнюватися, зпресовуватись при зберіганні та транспортуванні.

3. Дослідження препаратів Apis та розробка методів стандартизації

Для оцінки якості та виявлення залежності фізико-хімічних властивостей настойки від часу збирання бджіл ми визначали параметри

Сухий залишок, густина, в'язкість, вміст спирту, питома електропровідність залежать від часу збору бджіл - осінню ці параметри збільшуються і відрізняються від відповідних параметрів розчинника. Настойки, приготовлені з сировини, зібраної в один місяць, мають близькі фізико-хімічні характеристики. В той же час pН настойок практично не відрізняється від рН розчинника, отже цей параметр не можна використовувати для характеристики настойки, це стосується і поверхневого натягу.

Нами вивчена можливість застосування УФ- та ІЧ спектрофотометрії для ідентифікації настойки та потенцій Apis. На УФ-спектрах препаратів відсутні максимуми або мінімуми поглинання в зв'язку з присутністю великої кількості речовин різних класів та накладенням їх спектральних характеристик. Тому УФ-спектроскопію не можна використовувати для ідентифікації препаратів Apis без попереднього розділення компонентів.

На ІЧ-спектрах суспензії сухого залишку настойки у краплі вазелінового масла з'являються смуги поглинання близько: 2936, 1684, 1624, 1460, 1376, 1048, 868, 820, 780, 608 см-1. Але їх місце та ширина залежать від зразку і можуть змінюватися, тому цей метод також не можна застосовувати для ідентифікації препаратів Apis. Дані смуги поглинання та їх ширина свідчать, що у настойках можуть міститися насичені та ненасичені вуглеводи, аміни, нітросполуки та ін. Але в зв'язку з накладенням групових частот різних фрагментів молекул точно стверджувати про наявність тих чи інших фрагментів не можливо.

Якісні реакції на основні групи біологічно активних сполук проводили з матричними настойками, десятичними потенціями Х2-Х4, а також для порівняння - зі спиртом етиловим концентрації 60% (мас.). Настойки та потенції Х2 давали позитивні реакції з усіма загальноалкалоїдними реактивами, з реактивами Лібермана, Манделіна, Зонненшейна та Шейблера реакції проходили також з потенцією Х3.

Наявність амінокислот підтверджували з'явленням фіолетового забарвлення з кристаликами нінгідрину при нагріванні. Реакція спостерігалась також в потенціях Х2 і Х3 і є самою чутливою. Для виявлення кислоти глутамінової проводили реакцію з резорцином у концентрованій кислоті сірчаній з наступним додаванням розчину аміаку. Слід відмітити, що при нагріванні препарату з резорцином у концентрованій сірчаній кислоті розчин набуває коричневого забарвлення, а не зелено-коричневого. Це пояснюється тим, що у реакцію вступають також присутні у настойці фруктоза та глюкоза. Але при додаванні розчину аміаку з'являється зелена флуоресценція, яка характерна для кислоти глутамінової. Присутність відновлюючих речовин підтверджували реакціями з реактивами Толенса, Фелінга, Несслера та 0,1% розчином калію перманганату в сірчанокислому середовищі.

На відновлюючі цукри, зокрема фруктозу та глюкозу, проводили реакцію Селіванова (нагрівання з резорцином у солянокислому середовищі) та реакцію з тимолом у концентрованій кислоті сірчаній, з'являлося відповідно червоно-фіолетове та темно-червоне забарвлення. Білки у препаратах виявляли 10% розчином таніну. При дії реагенту на матричні настойки спостерігалось утворення жовтуватої каламуті. Наявність ліпідів, зокрема, тригліцеридів, встановлювали непрямим методом. Сухий залишок після лужного гідролізу препаратів нагрівали з гідросульфатом калію. Акролеїн, що утворювався при розкладанні гліцерину, виявляли за допомогою фільтрувального паперу, змоченого реактивом Несслера.

Методами хроматографії в тонкому шарі та на папері вивчений склад амінокислот і цукрів у настойці. Хроматографію проводили з стандартними розчинами 4 цукрів та 22 амінокислот, використовували пластини “Silufol UV-254”, “Silufol UV-366”, хроматографічний папір марок “Б” і “С” Петербурзької фабрики №2 ім. Володарського та різні сорти паперу “Filtrak” виробництва Німеччини. Максимальне розділення амінокислот спостерігалось при двомірному хроматографуванні у системі н-бутанол-оцтова кислота-вода (БОВ, 4:1:1, перший напрямок) та фенол-вода (ФВ, 3:1 мас., другий напрямок), проявник - 0,2% розчин нінгідрину в н-бутанолі насиченому водою. Виявлялося до 15 плям, 12 з яких містилися на хроматограмах всіх настойок.

Аналіз двомірних та одномірних хроматограм з стандартними розчинами амінокислот, а також розмір плям та інтенсивність їх забарвлення свідчать про наявність у настойці великої кількості глутамінової кислоти. Також у всіх настойках виявлені кислота аспарагінова, пролін, лізин, аланін, фенілаланін, валін, лейцин, цистеїн, цистін, серін, метіонін. Для вивчення складу цукрів використовували одномірну хроматографію у тонкому шарі на силікагелі, попередньо обробленому 0,1М розчином кислоти борної у системі розчинників н-бутанол-оцтова кислота (БО, 1:1). Для виявлення цукрів застосовували реактив, що містить 0,5 г тимолу, 5 мл концентрованої кислоти сірчаної та 95 мл спирту етилового. На хроматограмах усіх настойок виявляються 5-6 плям, серед яких ідентифіковані фруктоза та глюкоза, які представлені у більшій кількості, а також у незначній кількості - галактоза та сліди сахарози.

Для оцінки кількісного вмісту біологічних речовин нами розроблені фотометричні методики визначення суми нінгідринактивних речовин та суми редуцюючих цукрів (реакцією з кислотою динітросаліциловою) у перерахунку на кислоту глутамінову та глюкозу відповідно, які містяться в настойці в найбільшій кількості за хроматографічними даними, а також екстракційно-гравіметричний метод визначення суми ліпофільних речовин, оснований на визначенні сухого залишку настойки після екстрагування гексаном.

За розробленими методиками визначали кількісний вміст біологічно активних речовин у настойках, виготовлених з сировини, зібраної у різні місяці (квітень-вересень). Дослідження показали, що вміст нінгідринактивних та ліпофільних речовин в настойках збільшується восени від 0,88 до 1,73 мг/мл та 9,42 до 12,06 мг/мл відповідно, вміст редуцюючих цукрів варіює від 0,92 до 1,29 мг/мл і досягає максимуму у серпні в період активного медозбору.

Одержані гранули стандартизували за показниками для порівняння вивчали також ці параметри для ненасичених гранул. Нами розроблені методики якісного та кількісного визначення лактози і сахарози у гранулах.

4. Вивчення стабільності препаратів Apis

Для встановлення терміну придатності матричної настойки Apis mellifica та гомеопатичних гранул “Apis C6” ми спостерігали дослідні зразки, виготовлені у лабораторних умовах, протягом двох років зберігання при двох температурних режимах 18±2°С і 4±1°С, проводячи визначення загальних фізико-хімічних характеристик препаратів кожні 6 місяців. Результати досліджень для настойки при 4±1°С наведені у табл. 2, а для гранул для обох температурних режимів

5. Фармакологічні та мікробіологічні дослідження препаратів Apis

Вивчений вплив різних потенцій Apis “in vitro” на лімфоцити донорської крові за допомогою тесту на лімфоцитотоксичність. В цілому спостерігається підвищення рівня аутоімунних антитіл по відношенню до контролю при додаванні потенцій Х3 та С3, у той час як потенція С6 підвищує життєздатність лімфоцитів, що вказує на її імунномодулюючі властивості.

Нешкідливість гранул Apis C6 підтверджена результатами вивчення гострої токсичності на лабораторних тваринах.

ВИСНОВКИ

1. Науково обгрунтовано та розроблено технологію виготовлення гомеопатичної матричної настойки Apis та гомеопатичних гранул Apis C6 в умовах спеціалізованих аптек і промислового виробництва, яка відображена в технологічних інструкціях та технологічних регламентах на їх виробництво.

2. На основі експериментальних даних виведені рівняння залежності густини та сухого залишку настойки Apis від терміну мацерації (с=0,9005+ +0,01833*Т2/(7,1146+Т2); X=0,05+1,59Т/(2,16+Т)) та встановлено оптимальний термін мацерації при виготовленні настойки Apis (12 діб), а також оптимальна кількість зволожувача при насичені гранул Apis C6 (спирт етиловий 60% мас. у кількості 3:100 до маси гранул).

3. Вивчено фізико-хімічні та технологічні характеристики матричної настойки (в залежності від періоду збирання сировини) потенцій та гранул. Встановлено, що сухий залишок, вміст спирту, густина, в'язкість та питома електрична провідність настойки зростають осінню, а рН та поверхневий натяг не змінюються, а також технологічні характеристики гранул Apis С6 не відрізняються від ненасичених гранул.

4. Розроблено методики якісного визначення основних класів біологічно активних сполук, що містяться у настойках та потенціях зокрема амінокислот, редуцюючих цукрів, ліпідів, білків за допомогою якісних реакцій. Встановлено, що краще розподілення амінокислот спостерігається при двомірному хроматографуванні на силікагелі у системах БОВ (4:1:1) та ФВ (3:1), цукрів - при одномірному на силікагелі, попередньо обробленому 0,1М розчину кислоти борної, у системі БО (1:1), а УФ- та ІЧ-спектри не можна використовувати для ідентифікації настойки та потенцій.

5. За розробленими методиками фотометрично визначено суму нінгідринактивних речовин у перерахунку на глутамінову кислоту (0,88-1,73 мг/мл) і редуцюючих цукрів у перерахунку на глюкозу (0,92-1,29 мг/мл) як речовини, що містяться в найбільшій кількості), а також екстракційно-гравіметричним методом визначено суму ліпофільних речовин (9,42-12,06 мг/мл) у настойках та гомеопатичних потенціях, виготовлених з сировини, зібраної у різні періоди. Встановлено, що вміст нінгідринактивних і ліпофільних речовин у настойках становить збільшується восени, а вміст редуцюючих цукрів досягає найбільших значень у періоди активного медозбору.

6. Розроблено методики якісного та кількісного визначення допоміжних речовин (лактози та сахарози) у гранулах.

7. На підставі проведених досліджень створені проекти аналітичної нормативної документації на настойку і гранули, та доведено їх стабільність протягом двох років зберігання.

ТЕМА ДИСЕРТАЦІЇ ВІДОБРАЖЕНА В ПУБЛІКАЦІЯХ

1. Тихонов О.І., Осипенко С.Ю., Буднікова Т.М. Гомеопатія як перспективний напрямок сучасної медицини і фармації // Клінічна фармація. - 1998. - №2. - Т.2. - С.55-58.

2. Осипенко С.Ю., Тихонова С.О., Тихонов О.І. Розробка технології та вивчення основних фізико-хімічних характеристик гомеопатичної матричної настойки Apis Mellifica // Вісник фармації. - 2000. - №1(21). - С.27-30.

3. Осипенко С.Ю., Тихонова С.О., Тихонов О.І. Хроматографічне дослідження амінокислотного складу та фотометричне визначення суми нінгідринактивних речовин препаратів Apis // Фізіологічно активні речовини. - 2000. - №1 (29). - С.39-41.

4. Осипенко С.Ю., Тихонов О.І., Тихонова С.О. Технологія та аналіз гомеопатичних гранул Apis // Вісник фармації. - 2000. - № 3 (23). - С. 33-35.

5. Наукові аспекти впровадження гомеопатії у фармацію та охорону здоров'я України / О.І.Тихонов, С.Ю.Осипенко, Т.Г.Ярних, В.О.Соболєва, С.О.Тихонова // Клінічна фармація. - 2000. -Т.4. - № 2. - С. 10-14.

6. Осипенко С.Ю., Тихонов А.И., Тихонова С.А. Исследование физико-химических свойств и состава свободных аминокислот матричной гомеопатической настойки апис // Теорія і практика створення лікарських препаратів: Мат.міжн.конф., присвяченої 75-річчю з дня народження ректора ХФІ (1970-1980 рр.), доктора фармацевтичних наук, професора Сала Дмитра Павловича. - Х.: Основа, 1998. - С. 383-388.

7. Исследование гомеопатических препаратов на кафедре аптечной технологии лекарств Украинской фармацевтической академии / А.И.Тихонов, С.А.Тихонова, В.А.Соболева, С.Ю.Осипенко, С.Н. Назарук // Материалы VIII Международного симпозиума “Нетрадиционное растениеводство, экология и здоровье”. - Симферополь, 1999. - С. 726-729.

8. Тихонов О.І., Осипенко С.Ю. Технологія та дослідження фізико-хімічних властивостей гомеопатичних препаратів на основі Apis mellifica // “Досягнення сучасної фармації та перспективи її розвитку у новому тисячолітті” Матеріали V національного з'їзду фармацевтів України. - Х.: Вид-во УкрФА, 1999. - С. 359.

9. Експериментальне вивчення матричної настоянки Апіс /Осипенко С.Ю., Тихонов О.І., Буднікова Т.М., Тихонова С.О. // Український гомеопатичний щорічник / за ред. О.П. Іваніва. - Одеса: Чорномор'я, 1988. - Т.1. - С.115-116.

10. Тихонов А.И., Тихонова С.А., Осипенко С.Ю. Физико-химическое исследование гомеопатической матричной настойки Apis mellifica // “Апитерапия сегодня - с биологической аптекой пчел в ХХI век” Материалы II Международной научно-практической конференции (5-6 июля 2000 года, г.Уфа, Россия). - Уфа, 2000. - С.35-39.

11. С.Ю.Осипенко, С.О.Тихонова, Л.І.Яковенко. “Изучение влияния гомеопатических потенций Apis на лимфоциты донорской крови” Український гомеопатичний щорічник/ За ред. О.П.Іваніва. - Одеса: Рекламсервіс. 2000. - Т. 3. - С. 81-84.

12. Тихонов А.И., Тихонова С.А., Осипенко С.Ю. Разработка технологии и стандартизация гомеопатических препаратов Apis // Научные направления в создании лекарственных средств в фармацевтическом секторе Украины: Тез.докл.республ.научн.-практ.конф, 26-28 сентября 2000 г., г. Харьков. - Харьков. - С. 95-96.

13. Осипенко С.Ю., Тихонова С.О., Тихонов О.І. Удосконалення технології та вивчення фізико-хімічних властивостей гомеопатичних препаратів Apis // Вчені України - вітчизняній фармації: Матер. Всеукраїнської наук.-практ.конф. - Х.: НФАУ, 2000. - С. 96-98.

Осипенко С.Ю. “Розробка технології та методів стандартизації препаратів протиалергійної дії на основі Apis mellifica”. - Рукопис.

Дисертація на здобуття вченого ступеня кандидата фармацевтичних наук за спеціальністю 15.00.01 - технологія ліків та організація фармацевтичної справи. Національна фармацевтична академія України, Харків, 2001.

У роботі теоретично та експериментально обгрунтовано параметри технологічного процесу і розроблена технологія виготовлення матричної настойки Apis та гомеопатичних гранул “Apis C6”, які викладені в технологічних інструкціях та технологічних регламентах. Розроблені доступні та чутливі методи якісного та кількісного визначення біологічно активних та допоміжних речовин у препаратах. Визначені фізико-хімічні властивості матричної настойки Apis в залежності від періоду заготівлі сировини. На основі проведених досліджень створені проекти аналітичної нормативної документації та доведено стабільність препаратів при зберіганні протягом 2 років. Нешкідливість препаратів підтверджена результатами вивчення гострої токсичності на лабораторних тваринах.

Ключові слова: технологія, настойка, гранули, стандартизація, продукти бджільництва, гомеопатія.

Осипенко С.Ю. “Разработка технологии и методов стандартизации препаратов противоаллергического действия на основе Apis mellifica”. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела. Национальная фармацевтическая академия Украины, Харьков, 2001.

Диссертация посвящена разработке технологии и методов стандартизации противоаллергических препаратов на основе тела пчелы медоносной: гомеопатической матричной настойки Apis и гомеопатических гранул Apis С6.

Для этого рассмотрена зарубежная нормативная документация, разрешенная к применению в Украине, а также современные теории о механизме действия гомеопатических препаратов. Согласно результатам экспериментальных исследований в данной области (работы Ж.Бенвениста, С.Ло, П.С. Ендлера и др.) вещества способны при потенцировании оставлять в растворителе (водно-спиртовом растворе) под воздействием звуковой волны "отпечатки" в виде волн определенной частоты (область инфразвука), которые способны храниться и передаваться растворителем рецепторам в организме.

Таким образом, при производстве гомеопатических препаратов необходимо учитывать, что при контакте с поверхностями, излучающими или поглощающими электромагнитное излучение, а также при высоких скачках температуры, давления и т.п. при производственном процессе, "информационные структуры", в виде электромагнитных колебаний, которые несет гомеопатический препарат, могут разрушаться, и гомеопатический препарат теряет свою биологическую активность.

Поэтому оптимальным методом для приготовления настойки Apis является метод мацерации с последующим отстаиванием и фильтрацией. Нами экспериментально установлено, исходя из значений сухого остатка и плотности, что оптимальный срок мацерации составляет около 12 суток при температуре 15±2 °С, а также с помощью методов наименьших квадратов выведены зависимости плотности и сухого остатка от времени настаивания, позволяющие контролировать прохождение технологического процесса.

Изучались также параметры исходного сырья и настоек, полученных из него в зависимости от времени сбора. Установлено, что от мая к сентябрю масса пчел увеличивается с 105 ± 5 до 108 ± 3 мг, а содержание воды в их теле уменьшается с 77,9 ±1,4 до 70,6 ± 1,4%. Значения плотности, сухого остатка, электропроводности, вязкости и процентное содержание спирта в настойках увеличиваются к осени, а значения рН и поверхностного натяжения, практически не отличаются от таковых для исходного растворителя (спирт 60% мас.).

При разработке технологии гомеопатических гранул изучалось количество увлажнителя - спирта этилового 60% мае. Качество гранул оценивалось по таким показателям, как истираемость, количество слипшихся гранул и время их высушивания, а также косвенно, по распределению 0,01% раствору бриллиантового зеленого (вместо гомеопатической потенции) по поверхности гранул. Установлено, что наиболее оптимальным является количество увлажнителя 3:100 к массе гранул, при насыщении гранул на протяжении 10 минут.

Основываясь на результатах проведенных исследований, нами были составлены технологические инструкции и технологические регламенты на производство гомеопатической матричной настойки и гранул Apis С6.

Для оценки качества полученных препаратов нами были разработаны доступные и чувствительные методы качественного и количественного определения биологически активных и вспомогательных веществ в препаратах.

Изучение настоек методами УФ- и ИК-спектроскопии показало, что в настойках содержится большое количество соединений, принадлежащих к различным классам веществ, и без предварительного разделения смеси данные методы нельзя использовать для идентификации данного препарата. С помощью качественных реакций было установлено наличие в настойке аминокислот, восстанавливающих сахаров, липидов (триглицеридов), белков. Методами хроматорафии на бумаге и в тонком слое сорбента со стандартными образцами был детально изучен состав аминокислот и сахаров в настойках. Было идентифицировано 12 аминокислот и 4 углевода, а также установлено, что в наибольшем количестве содержатся кислота глутаминовая и глюкоза. Были разработаны методы количественного определения в настойках суммы аминокислот (по киcлоте глутаминовой) реакцией с нингидрином и суммы сахаров (по глюкозе) реакцией с кислотой динитросалициловой фотометрическими методами. А также экстракционно-гравиметрический метод определения липидов. Установлено что содержание аминокислот и липидов в настойке увеличивается к осени от 0,88 до 1,73 мг/мл и от 9,42 до 12,06 мг/мл соответственно, а содержание редуцирующих сахаров варьирует от 0,92 до 1,29 мг/мл и достигает максимального значения в период активного медосбора.

При изучении физико-химических и технологических характеристик гранул (средняя масса, влажность, распадаемость, фракционный состав, количество слипшихся гранул) было установлено, что они, практически не отличаются от ненасыщенных гранул. Были разработаны качественные реакции на вспомогательные вещества, содержащиеся в гранулах - сахарозу и лактозу, а также их количественное определение по реакции с кислотой динитросалициловой. На основании проведенных исследований нами были разработаны проекты аналитической нормативной документации на данные препараты и доказана стабильность препаратов в течение 2 лет хранения.

Безвредность препаратов подтверждена результатами изучения острой токсичности на лабораторных животных.

Ключевые слова: технология, настойка, гранулы, стандартизация, продукты пчеловодства, гомеопатия.

Osipenko S.Yu. "Development of technology and methods of standardization of preparations with antiallergenic action of Apis mellifica". - Manuscript.

Thesis on competition of a scientific degree of the candidate of pharmaceutical sciences on a speciality 15.00.01 - technology of drags and organization pharmaceutical business. National pharmaceutical academy of Ukraine, Kharkiv, 2001.

Parameters of technological process in work are theoretically and experimentally proved and developed technology of manufacturing matrix tincture Apis and homeophatic granules Apis C6, which displayed in the technological instructions and technological rules also. The accessible and sensitive methods of qualitative and quantitative definition of biologically active and auxiliary substances in preparations are developed. The physical and chemical properties matrix tincture is certain, depending on the period of preparation of material. On the basis of the carried out researches the projects analytical-normatively documentation on preparations are created and the stability of preparations is proved at storage during 2 years. The harmlessness of preparations is confirmed by results by study sharp toxical on laboratory animals.

Key word: technology, tincture, granules, standardization, yields of beekeeping, homeopathy.

Размещено на Allbest.ru

...