Размещено на http://www.allbest.ru/

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ПЕРМСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

им. ак. Е.А. Вагнера »

Кафедра общей хирургии лечебного факультета

ГРУППЫ КРОВИ. Резус-фактор

Методические рекомендации для студентов III курса

2009

МОТИВАЦИЯ

Знания о группах крови, резус-факторе необходимы врачам любой специальности, ибо почти каждому из них приходится если не определять их, переливать кровь, то решать другие вопросы, связанные с применением и переливанием гемотрансфузионных средств. Ecтественно, знания о группах крови и резус-факторе лежат в основе учения о переливании крови Генетика человека и антропология не могут обойтись без использования групповых антигенов как генетических маркеров. Имеется связь групп крови с различными инфекционными и неинфекционными заболеваниями человека. Группы крови системы АВО имеют первостепенное значение в практике переливания крови, а также при подборе совместимых пар доноров и реципиентов при пересадке органов. Предполагается, что нормальные изоантигены и изоантитела системы АВО играют роль в поддержании постоянства внутренней среды организма, защитной роли пищеварительного тракта, семенной и околоплодной жидкости. кровь иммунология агглютинация резус

Группы крови широко используются в судебной медицине при решении вопросов о спорном отцовстве, материнстве, а также при исследовании крови на вещественные доказательства. Определяют обычно групповую принадлежность эритроцитов, групповые антитела сывороточных систем и групповые свойства ферментов крови.

Цель занятия

Научить студентов определять группы крови, резус-фактор, обозначать их. Оценить значение антигенной системы АВО при определении групп крови

а)Студент должен знать:

-антигенные системы крови, значение их при определении группы крови;

-антигенную систему АВО;

-группы крови;

-подгруппы крови;

-резус-фактор.

б)Студент должен уметь:

-определить годность цоликлонов для определения групп крови;

-определить годность универсальной антирезусной сыворотки "Д":

-взять кровь для определения группы крови;

-определить группу крови;

-определить резус-фактор;

-грамотно оценить реакцию цоликлонов с кровью и обозначить группу крови;

-грамотно оценить реакцию универсальной антирезусной сыворотки "Д" с кровью и обозначить её.

Базисные знания

Система кровообращения.

Значение крови, её функции.

Нормальные цифровые показатели состава крови.

Симптомы сгущения или разжижения её

Литература

Основная:

1. Общая хирургия под редакцией В.К. Гостищева 2006г.

2. Общая хирургия под редакцией С.В. Петрова 2006г.

3. Учебно-методическое пособие кафедры обшей хирургии ПГМА для студентов 111 курса лечебного факультета. Пермь, 1997.

4. Лекционный материал кафедры общей хирургии лечебного факультета ПГМА

Дополнительная:

1. Основы трансфузиологии (под ред. М.Ф. Заривчацкого. Пермь; Изд-во Пермь. ун-та.. 1995.-318 с.).

Вопросы для самоподготовки

1. Понятие об антигенных системах крови, агглютиногенах и агглютининах; группах крови. История открытия групп крови.

2. Понятие о подгруппах крови.

3. Методика определения групп крови цоликлонами.

4. Современное обозначение групп крови.

5. Понятие о резус-факторе. История открытия резус-фактора.

6. Методика определения резус-фактора.

СОДЕРЖАНИЕ ТЕМЫ

Группы крови - нормальные иммуногенетические признаки крови, позволяющие объединять людей в определенные группы по сходству антигенов (изоантигенов) их крови, которые содержатся в эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах и белках плазмы крови. Группы крови имеют первостепенное значение в практике переливания крови, а также трансплантации органов. К настоящему времени в крови человека обнаружено более 300 различных антигенов, образующих несколько десятков антигенных систем. Принадлежность человека к той или иной группе крови является его индивидуальной биологической особенностью, которая начинает формироваться уже в раннем периоде эмбрионального развития и не меняется в течение всей жизни. Строма каждого эритроцита вмещает в себя большое число антигенов, характеризующих специфические признаки организма людей. Все антигены объединены в группы, получившие различные названия: АВО, резус и другие.

Наука о группах крови возникла в конце XIX века как один из разделов общей иммунологии.

Группы крови системы АВО открыты в 1901 г. К.Ландштейнером. Смешивая эритроциты одних лиц с сыворотками крови других, он обнаружил, что при одних сочетаниях сывороток и эритроцитов наблюдается гемагглютинация (склеивание эритроцитов), при других - её нет. На основании этих факторов К.Ландштейнер привел к заключению, что кровь различных людей неоднородна и может быть условно разделена на три группы, которые он обозначил буквами А, В и С. Вскоре (1902) после этого Декателло и Штурм нашли людей, эритроциты и сыворотки которых отличались от эритроцитов и сывороток упомянутых трех групп. Эту группу они рассматривали как отклонение от схемы Ландштейнера. Однако Я. Янский в 1907 г. установил, что эта группа крови не является исключением из схемы Ландштейнера. а есть самостоятельная группа, и следовательно, все люди по иммунологическим свойствам крови делятся на четыре группы, т.е. Я.Янский открыл четвертую группу крови.

Таким образом, агглютинабельные свойства эритроцитов зависят от имеющихся в них определенных специфических для каждой группы веществ, то есть антигенов (изоантигенов), названных агглютиногенами АВО В соответствии с этим обозначением эритроциты одних людей не имеют агглютиногенов А и В. - группа крови будет соответствовать 0(1) группе; эритроциты других содержат только агглютиноген А, - группа крови - А(11); эритроциты третьих содержат агглютиноген В - группa крови - В(Ш); эритроциты четвертых содержат агглютнногены А и В - группа крови будет соответствовать AB(1V).

Групповые антигены системы АВО начинают обнаруживаться в эритроцитах плода на 2-м месяце эмбриональной жизни. Наибольшей активности и чувствительности к соответствующим антисистемам они достигают к третьему году жизни. Групповые антигены имеются во всех тканях человека, за исключением хрусталика. Агглютинабельностъ эритроцитов новорожденных составляет 1/5 часть агглютинабельности эритроцитов взрослых. Достигнув максимума, титр агглютиногенов эритроцитов в течение нескольких десятков лет сохраняется на постоянном уровне, а затем постепенно снижается в количественном отношении. В зависимое™ от наличия или отсутствия в эритроцитах групповых агглютиногенов А и В в плазме находятся нормальные (естественные) антитела- гемагглютинины по отношению к этим агглютиногенам У лиц группы крови 0(1) содержатся два типа групповых антител: Анти-А (а) и Анти-В ((в); у лиц группы крови А(П) - изоантитело Анти-В (в), у лиц группы крови В(Ш) изоантитело Анти-А (а) и у лиц группы крови АВ (IV) - оба гемагглютинина отсутствуют. Нормальные изоантитела (гемагглютинины) Анти-А и Анти-В (а и в) являются обычными иммуноглобулинами. Нормальные (естественные ) групповые антитела начинают появляться у человека в первые месяцы после рождения и достигают максимального титра к 5-10 годам. После этого титр антител держится на высоком уровне в течение многих лет, а затем с возрастом постепенно снижается. Титр гемагглютининов Анти-А варьирует в пределах 1:64 - 1:512, а титр Анти-В - в пределах 1:16 - 1:64. Групповые признаки крови передаются по наследству посредством двух независимых друг от друга генов А и В. По наследству передаются и гены гемагглютининов - а и р. Агглютиногены и агглютинины наследуются в коррелятивной связи в виде следующих трех генетических признаков; Оав, Ав, Ва. Антигены системы АВО неодинаково часто встречаются у различных народов. Группа крови, как и любой наследственный признак, развивается под влиянием двух генов: материнского и отцовского.

В большинстве случаев принято буквенное обозначение групп крови, исходя из системы АВО. в скобках дополнительно ставится цифровая принадлежность. Первая группа крови обозначается так - 0(1), вторая - А(11), третья - В(Ш) и четвертая - АВ (IV). то есть ведущим (на первом плане) в обозначении группы крови является агглютиноген.. на втором плане - цифровая принадлежность. В ряде случаев обозначение групп крови исходит из полного написания формулы, когда учитываются как агглютиногены эритроцитов, так и агглютинины сыворотки, в этом случае группы крови обозначаются так: первая группа крови - 0ав, Ав, Вв, АВО.

ПОНЯТИЕ О ПОДГРУППАХ КРОВИ

Групповой антиген А не является однородным и может быть подразделен на несколько подгрупп - А¹, А², А³, А⁴, А⁵, А, А⁰ и др. Чаще встречаются А¹, А². Групповой антиген В характеризуется большей однородностью, но описаны редкие варианты и этого антигена - В², В³, В, В, В^х и др. Несмотря на то, что они встречаются редко, при определении группы крови приходится с ними считаться только с помощью высокоактивных стандартных сывороток (в том числе и цоликлонов) можно выявить и эти слабо выраженные агглютиногены А и В.

Эритроциты группы 0(1) характеризуются отсутствием в них агглютиногенов А и В и наличием особых специфических Н и О. Они содержатся в эритроцитах не только группы 0(1), но и подгруппы А2 и менее всего - AI и AIB. Существует вариант группы "Бомбей", эритроциты которой не содержат антигены системы АВО, вместе с тем, в сыворотке имеются антитела анти-А, анти-В и анти-Н. Лица с группой крови 0(1) считались универсальными донорами, т.е. их кровь могла быть перелита людям всех групп без исключения. Однако это положение не является абсолютным, так как есть люди с группой крови 0(1), переливание крови которых может привести к летальному исходу вследствие наличия в крови иммунных гемолизинов и гемагглютининов с высоким титром (1:200 и более). Таким образом, среди универсальных доноров могут быть и опасные доноры, вот почему кровь этих лиц может быть перелита только пациентам с одноименной 0(1) группой крови.

В эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах, а также в плазме крови людей имеется много десятков изоантигенов. По-видимому, истинное число антигенов на поверхности мембран эритроцитов человека значительно превышает число открытых изоантигенов. Наличие или отсутствие в эритроцитах того или иного антигена, а также различные сочетания их создают большое разнообразие антигенных структур. Наряду с широко распространенными антигенами встречаются и крайне редкие (у 1 из 1000 и у 1 из 3000 обследованных людей).

Есть и лейкоцитарные группы - деление людей на группы в зависимости от наличия в лейкоцитах антигенов, независимых от антигенов системы АВО. и др. В практической работе при переливании крови эти группы не учитываются

Групповую дифференциацию имеют и белки сыворотки крови, однако в практической работе тоже не учитываются.

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУПП КРОВИ ЦОЛИКЛОНАМИ

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения группы крови человека по системе АВО взамен стандартных изогемагглютини-рующих сывороток. Антигены (агглютиногены) А и В определяются с помощью цоликлонов. У доноров же обязательно выявление не только антигенов (агглютиногенов) эритроцитов, но и агглютининов ,в сыворотке (плазме) с помощью стандартных эритроцитов

Цоликлоны анти-А и -В представляют собой разведенную асцитическую жидкость мышей-носителей, в которой содержатся специфические иммуноглобулины, направленные против антигенов А и В человека Неспецифическая полиагглютинация эритроцитов исключена, так как в цоликлонах нет антител иной специфичности. Метод надежен, время наступления реакции агглютинации, её выраженность выше, чем у изогемагглютинирующих сывороток, особенно при слабо выраженных антигенах эритроцитов.

Группа крови по системе АВО определяется в нативной крови, стабилизированной консервантами (глюгицир. цитроглюкофосфат, гепарин и др.); в крови, взятой из пальца, и без консерванта. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при высокой концентрации эритроцитов. Производится эта процедура в помещении с хорошим освещением при температуре от +15 до +25°С ( см. приложение № I). Перед определением группы крови цоликлоны необходимо растворить в специальном растворе в течение 1-2 мин. Растворенные цоликлоны хранятся при температуре от +2 до +8°С не белее трех месяцев. Для каждого цоликлона необходимо иметь маркированную пипетку. Определение групп крови проводится одной серией цоликлонов На планшет или пластинку наносится по одной большой капле (0,1 мл) цоликлона под соответствующими надписями "анти-А" и '"анти-В", Рядом с цоли-клоном наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше капли цоликлона (0,01 мл). Цоликлоны и кровь тщательно размешивают стеклянной палочкой. Наблюдение за реакцией проводится при покачивании планшета в течение не более 2,5 мин. Реакция в каждой капле может быть положительной или отрицательной. Положительная реакция выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютина-ты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро склеивающихся и образующих крупные хлопья, вплоть до одного большого агглютината. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация обычно наступает в первые 3-5 с. Наблюдение следует вести в течение 2.5 мин в виду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Возможные результаты

Агглютинации нет ни с одним из цоликлонов - кровь принадлежит к группе 0(1) - эритроциты не содержат антигенов (агглютиногенов) А и В. но есть агглютинины а и в.

Агглютинация только в капле с цоликлоном анти-А, кровь принадлежит к группе А(П). т.е. в эритроцитах есть антиген А,

Агглютинация есть только в капле с цоликлоном анти-В, кровь принадлежит к группе В(Ш). то есть в эритроцитах есть антиген В.

Агглютинация есть в обеих каплях - кровь принадлежит к группе АВ (IV), исследуемые эритроциты содержат оба антигена (агглютиногена) А и В.

Оценка результатов агглютинации

Контроль неспецифической агглютинации эритроцитов

Цоликлоны приготовлены на растворе хлорида натрия, который препятствует спонтанной агглютинации эритроцитов. Однако иногда возможна ауто-агглютинация эритроцитов ( у некоторых больных миеломной и ожоговой болезнью, в пуповинной крови новорожденных, при AB(TV) группе крови), для исключения её необходимо провести дополнительное контрольное исследование с изотоническим раствором хлорида натрия. Для этого смешивают одну большую каплю (0,1 мл) хлорида натрия с маленькой (0,01 мл) каплей крови. При отсутствии агглютинации в этой капле кровь принадлежит к группе АВ (IV). При наличии агглютинации рекомендуется повторить определение группы крови, используя отмытые эритроциты этой крови.

Понятие о резус-факторе. История его открытия

Группы крови системы Rh (Rhesus) занимают 2-е место по значению для медицинской практики. Это одна из самых сложных систем изоантигенной дифференцировки организма человека. Помимо 6 основных антигенов (Д, С, Е, д, с, е), в эту систему входят многочисленные варианты.

Резус-фактор - система антигенов крови человека независимая от факторов, обусловливающих группы крови (системы АВО) и других генетических маркеров. Резус-фактор человека был открыт в 1940 г. К. Ландштейнером и А.Винером. Название "резус-фактор" система антигенов получила в связи с тем, что её антиген был обнаружен у человека с помощью сыворотки кролика, иммунизированного эритроцитами обезьяны вида Macacus-rhesus Резус-фактор в наибольшей степени выражен в эритроцитах, меньше его в лейкоцитах и тромбоцитах, в плазме крови не обнаружен. Насчитывается шесть основных резус-факторов, для обозначения их используют две номенклатура. Согласно первой - антигены резус-фактора обозначают символами Rh₀, rh¹, rh², Hr₀, hr¹ , hr²; согласно второй - используются буквенные обозначения: Д, С, Е. д. с, е. Вообще вариантов антигенов резус-фактора насчитывают до 35. Антиген Rh (Д) - основной антиген в Rh-факторе, имеющий наибольшее практическое значение. Он содержится в эритроцитах 85% людей. На основании наличия в эритроцитах Rh (Д) выделят Rh-положительную кровь. Кровь людей, в эритроцитах которых нет этого антигена, относится к Rh-отрицательному типу. Их эритроциты не должны содержать ни одного из трех ангигенов - Rho (Д), Rh¹ (с), Rh² (е). Антиген (Д) распространен неравномерно среди представителей отдельных рас. Основные шесть антигенов могут встречаться в различных комбинациях. Самыми важными из них являются три антигена Rh-фактора: Rho (Д), Rh¹ (с), Rh² (e), обладающие наибольшей антигенной активностью. Антиген Rh (Д) обладает более выраженным иммунизаторным свойством, чем две другие его разновидности. С ним связано и большинство посттрансфузионных осложнений, обусловленных трансфузионной несовместимостью. В практике обычно ограничиваются определением у реципиента только антигена Rho (Д). Это связано с тем, что два других антигена присутствуют в эритроцитах в отдельности очень редко.

Существует несколько методов определения Rh-фактора крови как у реципиентов, так и у доноров. В настоящее время для этого используют антирезусную сыворотку (Д).

Определение Rh фактора экспресс-методом в пробирке без подогрева. Rh-фактор может быть определен в свежей крови, консервированной крови, а также в эритроцитах после сформирования сгустка и отстаивания сыворотки.

Техника определения: на дно пробирки вносят одну каплю антирезусной универсальной сыворотки, добавляют одну каплю исследуемой крови или эритроцитов. Пробирку встряхивают и несколько раз переворачивают, чтобы содержимое растеклось по стенкам, что ускоряет реакцию. Агглютинация наступает обычно в течение минуты, но наблюдение следует проводить не менее 3 минут. Для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического р-ра и перемешивают путем 1-2 кратного перевертывания пробирки, но не взбалтывают!

Результаты оценивают визуально:

1. Наличие агглютинации указывает на Rh-положительную кровь.

2. Отсутствие агглютинации свидетельствует о Rh-отрицательной принадлежности крови.

Rh-фактор может быть определен также и анти-Dig М моноклональным реагентом (эритротест ТМ-Цоликлон анти-Дсупер) - диагностические моноклональные антитела для определения Rh-фактора в крови человека.

Техника определения: на чашку Петри или пластинку со смачиваемой поверхностью наносится большая капля (около 0,1 мл) реагента. Рядом помещается маленькая капля (0,01-0*05 мл) исследуемой крови и смешивается с реагентом. Пластинка после смешивания реагента с кровью покачивается не сразу, а через 30-60 с, что позволяет развиться более полной крупнолепестковой агглютинации. Наиболее крупная четкая агглютинация наблюдается при наличии в крови эритроцитов в высокой концентрации. Реакция агглютинации начинается через 10-15 с, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 с. При применении подогретой до 37-40 С чашки Петри или пластинки время наступления агглютинации сокращается. Окончательный результат учитывается через 3 мин визуально:

1. Наличие агглютинации указывает на Rh-положительную кровь.

2. Отсутствие агглютинации свидетельствует о Rh-отрицательной принадлежности крови.

Примечания: Реагент хранится при температуре + 2 - +8 С, сыворотка хранится при температуре +5 - +8 С, хорошо укупоренная.

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В клинику поступил больной с ожоговой болезнью, имеющего AB(IV) группу крови. Проведите дополнительное контрольное исследование с целью исключения аутоагглютинации эритроцитов больного, ведущего к неправильному определению группы крови.

2. Исключите неспецифическую агрегацию эритроцитов при определении резус-фактора экспресс-методом в пробирке без подогрева.

ПРОГРАММИРОВАННЫЙ КОНТРОЛЬ

1 Групповые агглютиногены крови находятся: а) в плазме крови: б) в сыворотке; в) в лейкоцитах: г) в эритроцитах: д) в тромбоцитах.

2. Агглютинины (антитела) содержатся: а) в сыворотке, б) в плазме крови, в) в лейкоцитах, г) в эритроцитах, д) в тромбоцитах.

3. Наиболее частая разновидность подгруппового агглютиногена А: а) А¹; б) А²: в) А³; г) А⁴; д) А⁵.

4. Определение групп крови возможно в крови: а) нативной; б) стабилизированной; в) взятой из пальца; г) без консерванта; д) взятой из раны во время операции.

5. Для определения группы крови используют: а) стандартные сыворотки; б) стандартные эритроциты; в) цоликлон анти-А; г) цоликлон анти-В; д) плазму.

6. Оптимальная температура окружающей среды при определении группы крови: а) +10°С; б) +15°С; в) +20°С; г) +25°С; д) +30°С.

7. Оптимальная температура хранения растворенных цоликлонов: а) +2°С; б) +5°С; в) +8°С; г) +10°С; д) +15°С.

8. Объемные отношения крови и цоликлона при определении группы крови: а) 1:5; б) 1:10; в) 1:15; г) 1:20; д) 1:25.

9. Длительность наблюдения за реакцией агглютинации при определении группы крови: а) 1 мин; б) 2,5 мин; в) 3 мин; г) 4,0 мин; д) 5 мин.

10.Оценка результатов реакции агглютинации эритроцитов: а) агглютинации нет с анти-А и анти-В Цоликлонами - группа крови 0(1); б) агглютинация с цоликлоном анти-А, отсутствует агглютинация с цоликлоном анти-В - группа крови В(Ш); в) агглютинация с цоликлоном анти-В, отсутствие с цоликлоном анти-А - группа крови В(Ш); г) агглютинация с обоими Цоликлонами - группа крови 0(1); д) отсутствие агглютинации с цоликлоном анти-А. агглютинация с цоликлоном анти-В - группа крови А(И).

11 Количество основных антигенов резус-фактора: а) 2; б) 3; в) 4; г) 5; д) 6.

12.Наибольшая выраженность резус-фактора: а) в эритроцитах, б) лейкоцитах; в) тромбоцитах; г) плазме; д) сыворотке.

13.Основной антиген резус-фактора, имеющий наибольшее практическое значение: а) Д; б) С; в) Е; г) д; д) с.

14.Число людей в процентах, содержащих в эритроцитах основной антиген резус-фактора (Д): а) 40; б) 50; в) 60; г) 70; д) 85.

15.Резус-фактор определяется антирезусной сывороткой: а) I группы; б) II группы, в) Ш группы; г) IV группы: д) универсальной (Д).

16.В какой крови возможно определение резус-фактора: а) в свежей крови; б) консервированной, в) свертке-сгустке крови, г) взятой с операционного белья, д) взятой с предметов (пол. стекло и тд.)

17.Длительность наблюдения за реакцией агглютинации при определении резус-фактора: а) 1 мин; б) 2 мин; в) 3 мин; г) 4 мин; д) 5 мин.

18.Оптимальная температура хранения универсальной антирезусной сыворотки (Д) : а) +2°С; б) +5°С; в) +7°С; г) +8°С; д) + 10°С.

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

Учебная карта практическою навыка по теме: "определение группы крови"

ПРИЛОЖЕНИЕ 2

Учебная карта практического навыка по теме: ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС-ФАКТОРА

Размещено на Allbest.ru