Возбудители анаэробной инфекции

по ПМ.04. «Проведение лабораторных микробиологический исследований»

МДК.04.01. «Теория и практика лабораторных микробиологических исследований»

на тему: Возбудители анаэробной инфекции

Хабаровск 2014

Содержание

Введение

1. Классификация анаэробных микроорганизмов

2. Неклостридиальная анаэробная инфекция

2.1 Bacteroides fragilis

2.2 Пoрфиромонады (poд Porphyromonas)

2.3 Превотеллы (род Prevotella)

2.4 Лептотрихии (род Leptotrichia)

2.5 Фузобактерии (род Fusobacterium)

3. Клостридиальная анаэробная инфекция

3.1 Бактерии рода Clostridium - «газовая гангрена»

3.2 Возбудитель столбняка

3.3 Возбудитель ботулизма

4. Способы культивирования анаэробов

5. Среды и аппаратура для культивирования анаэробов

Заключение

Список используемой литературы

1. 

Введение

Цель: изучить возбудителей анаэробных инфекций.

Задачи:

- рассмотреть возбудителей неклостридиальных анаэробных инфекций;

- рассмотреть возбудителей клостридиальных анаэробных инфекций;

- рассмотреть основные понятия возбудителей анаэробных инфекций;

- ознакомится со средами для культивирования возбудителей анаэробных инфекций;

- ознакомится с методами посевов для культивирования возбудителей анаэробных инфекций.

Классификация всех микроорганизмов в клинической микробиологии строится по их отношениям к кислороду воздуха и двуокиси углерода Анаэробами называют микроорганизмы, способные существовать и размножаться при отсутствии в окружающей среде свободного кислорода, для их жизнедеятельности и размножения кислород не нужен.

Все известные анаэробные микроорганизмы очень часто могут становиться возбудителями целого ряда заболеваний. Среди них аппендицит, перитонит, абсцессы различной локализации, пневмония, эмпиема плевры и др. Они являются составной частью нормальной микрофлоры человека, обнаруживаются в кишечнике, органах мочеполовой системы, а также на поверхности кожи, слизистых оболочек.

Среди заболеваний вызываемых анаэробной микрофлорой наиболее тяжелыми являются столбняк и газовая гангрена.

2. 

1. Классификация анаэробных микроорганизмов

1. факультативные анаэробы

2. аэротолерантные анаэробы

3. микроаэротолерантные анаэробы

4. облигатные анаэробы

По этиологии:

1. Клостридиальные (образующие споры)

2. Неклостридиальные (не образующие споры)

Ш бактериоидные

Ш пептострептококковые

Ш фузобактериальные.

По характеру микрофлоры:

1. Моноинфекция - вызванная одним видом анаэроба

2. Полиинфекция - вызванная 2 или несколькими анаэробами

3. Смешанная инфекция - вызванная ассоциацией анаэроба и аэроба.

По источнику инфекции:

1. Экзогенная инфекция (столбняк, клостридиальный мионекроз, газовая гангрена и др.)

2. Эндогенная инфекция (послеоперационная ползучая флегмона, гангрена Фурнье и др.).

3. Анаэробы составляют абсолютное большинство нормальной микрофлоры человека. Они обитают:

· В ротовой полости - главным образом в десневых карманах, где флора на 99% состоит из анаэробов;

· В желудке - при гипо- и анацидных состояниях микробный пейзаж желудка приближается к кишечному;

· В тонкой кишке содержатся и аэробы, и в меньшей степени - анаэробы. Их число может значительно возрастать (например, при кишечной непроходимости);

· В толстой кишке имеются благоприятные условия для обитания анаэробов, это их основное место обитания. Так, в 1 грамме толстокишечного содержимого обнаруживается до 105 микробных тел, из них 97% - строгие анаэробы. Доля же кишечной палочки составляет, вопреки общепринятому мнению, всего лишь 0,1 - 0,4%.

2. Неклостридиальная анаэробная инфекция

Неклостридиальная анаэробная инфекция вызывается анаэробами, не образующими спор, чаще всего анаэробными стрептококками. Процесс развивается в виде анаэробного стрептококкового миозита (массивного поражения мышц) или в виде анаэробного стрептококкового целлюлита (воспаления клетчатки).

Начало невыраженное, затем появляются боль в ране, отек и гиперемия, выделяется серозный или серозно-геморрагический экссудат. Отсутствие гноя и четких местных признаков дает возможность заболеванию перейти в необратимую стадию. Даже при раскрытии раны можно не увидеть некроза мышц, будет иметь место незначительное серозно-геморрагическое отделяемое, мышцы слегка тусклые, сокращаются, что нередко приводит к диагностическим ошибкам. Неклостридиальная инфекция сопровождается выраженной токсемией, быстро приводит к бактериально-токсическому шоку с частым летальным исходом.

Неклостридиальная анаэробная инфекция может быть вызвана бактериоидами:

· Bacteroides fragilis;

· Пoрфиромонады (poд Porphyromonas);

· Превотеллы (род Prevotella);

· Bacteroides melanogenicus;

· Лептотрихии (род Leptotrichia)

· Фузобактерии (род Fusobacterium)

2.1 Бактероиды (род Bacteroides)

Грамотрицательные палочки, неподвижны, спор не образуют, образуют капсулу. Типовой вид - Bacteroides fragilis. Бактерии группы Bacteroides fragilis. Протеолитическая активность умеренная, лецитиназу не образуют, не вызывают гемолиза эритроцитов, образует H2S, образование кислоты при ферментации глюкозы, лактозы, сахарозы. Содержат соматический О-АГ, могут иметь Н- и К-АГ. Факторы патогенности: образуют капсулу и продуцируют супероксиддисмутазу, эндотоксин, нейраминидаза.

Колонизируют слизистые полости рта, верхних дыхательных пу­тей, гениталий и кишечника.

Культивирование: бактероиды культивируют на КА, тиогликолевой среде, на анаэробном кровяном агаре; лучше растут на комплексных средах. Образуют белые, прозрачные S-формы колоний. Оптимальны для роста анаэробные условия при 10% содержании С02 в атмосфере, температура 37 °С, рН 7,6-7,8.

2.2 Пoрфиромонады (poд Porphyromonas)

Короткие грамотрицательные палочки. Неподвижны, спор не образуют. Род представлен тремя видами: P. asaccharolytica (типовой вид), P. gingivalis и P. endodontalis. На анаэробном кровяном агаре образуют слизистые черные колонии. Для роста нуждаются в гемине и менадионе. Биохимическая активность очень низкая. Инертны по отношению к углеводам. Все виды образуют индол. P.gingivalis связывает и разрушает фибриноген, продуцирует коллагеназу, повреждающую дентин, а также агглютинирует эритроциты. Колонизируют слизистые полости рта и верхних дыхательных путей. Принципы микробиологической диагностики порфиромонад аналогичны таковым при поражениях, вызванных бактероидами. На КА образуют слизистые колонии с тёмно-коричневым или чёрным центром. При длинноволновом (365 нм) проходящем УФ-облучении колонии флюоресцируют красным, жёлто-зелёным или коралловым цветом, что обусловливает их название [греч. porphyros, багряно-красный, + monas, одноклеточный организм]. Культуры порфиромонад имеют гнилостный запах. Рост порфиромонад ингибируют жёлчные соли (20%); бактерии чувствительны к ванкомицину, но резистентны к колистину и канамицину.

2.3 Превотеллы (род Prevotella)

Полиморфные неподвижные аспорогенные палочки. Типовой вид - Prevotella melaninogenica. На кровяном агаре образуют светло-коричневые/черные колонии. Проявляют умеренную сахаролитическую активность. Основные продукты ферментации углеводов - сукцинаты и ацетаты. Основной фактор патогенности - эндотоксин, фосфолипаза А, нарушающая целостность мембран эпителиальных клеток. Колонизируют слизистые полости рта, верхних дыхательных путей, гениталий и кишечника.

Бактериологическое исследование: Посев производят на кровяные среды, обогащенные факторами роста (гемин, менадион). Посевы инкубируют в анаэробных условиях. Для выявления в исследуемом материале темнопигментированных превотелл, порфиромонад пробу исследуют в УФ лучах (микроколонии светятся красным светом).

2.4 Лептотрихии (род Leptotrichia)

Прямые неподвижные грамотрицательные палочки. Анаэробы. Для роста необходимо 5 % СО². Ферментируют глюкозу до кислоты без образования газа; главные продукты - молочная и уксусная кислоты; масляную кислоту не образуют. Не образуют сероводород и аммиак. Экологическая ниша - ротовая полость человека.

Существуют способы культивирования бактерий рода Leptotrichia, состоящие в использовании жидких и твердых питательных сред. Но известные способы обладают рядом недостатков, которые не позволяют их использовать для изоляции и культивирования Leptotrichia из клинического материала, взятого из ротовой полости в связи с высокой обсемененностью биотопа, а также в связи с недоступностью коммерческих питательных сред производства Швеции и США. Наиболее близким аналогом-прототипом является, например, изоляция и культивирование Leptotrichia на сердечно-мозговом агаре (Difco) с добавлением 0,2% дрожжевого экстракта или использование сердечно-печеночно-мозгового агара (Difco) с добавлением 0,2% дрожжевого.

Колонии Leptotrichia на пластинчатой среде «Уриселект» по морфологии мелкие, диаметром от 0,3 до 3 мм, как правило, яркого голубого цвета, матовые, в проходящем свете непрозрачные. R-формы колоний напоминают вросшие в агар фигуры цветов, колонии приподняты над поверхностью около 0,1-0,2 мм, не выпуклые, плоские, шероховатые, суховатые, бактериальная петля скользит по колонии, забор материала части колонии проводится с трудом. После снятия материала колонии с поверхности среды в агаре остается небольшое углубление. Край колонии неровный, фестончатый, структура колонии мелко волокнистая, при световой микроскопии колоний (увеличение 40) наблюдаются фигуры в форме окружности, по структуре и характеру напоминающие одуванчик голубого цвета. Примерно в 20% случаев колонии Leptotrichia имели красно-пурпурный цвет или его оттенки. При этом морфологические свойства колоний были идентичны как по макро-, так и по микроскопическим признакам. Красного цвета колонии чаще при микроскопическом исследовании имели схожесть с розовым одуванчиком, из центра которого исходили 3-4 извива.

При повторных посевах: культивировании изолятов лептотрихий, после идентификации Leptotrichia, выделенных из клинического материала, осуществляют посев части изолированной колонии калиброванной бактериологической петлей (0,2 мм) на поверхность пластинчатой среды «Уриселект» методом штрихования в чашки Петри и далее инкубируют посевы в микроаэрофильных (5%-10% CO2) и/или аэробных условиях, topt=+35+37°С в течение 48-72 часов.

При повторных посевах: культивировании изолятов лептотрихий, для временного сохранения чистой культуры, осуществляют посев части изолированной колонии стерильным ватным тампоном на поверхность пластинчатой среды «Уриселект» методом газона в чашки Петри и далее инкубируют посевы в микроаэрофильных (5%-10% СО2) и/или аэробных условиях, topt=+35+37°С в течение 48-72 часов.

2.5 Фузобактерии (род Fusobacterium)

Веретенообразные, неподвижные палочки. Облигатные анаэробы. На анаэробном кровяном агаре образуют мелкие выпуклые желтоватые колонии, окруженные зоной а-гемолиза. На жидких средах образуют осадок.

Биохимическая активность: утилизируют пептон и углеводы, ферментативная активность низкая. Факторы патогенности: фосфолипаза А, облегчает инвазию бактерий в глубокие ткани, и лейкоцидин, который обладает цитотоксическим действием на различные клетки. Колонизируют слизистые полости рта, верхних дыхательных путей, гениталий и кишечника.

В мазках фузобактерий располагаются одиночно, реже образуют короткие цепочки из 2, редко 3 клеток. Некоторые из них могут иметь эллиптические утолщения. В чистых культурах фузобактерий могут образовывать нитевидные или ветвящиеся формы. Фузобактерии растут на мясных и печёночных бульонах; рост стимулируют внесением в питательную среду сыворотки или асцитической жидкости. Рост фузобактерий сопровождается помутнением среды, образованием осадка, газообразованием и появлением «сырного» запаха. Утилизируют пептон и углеводы, но ферментативная активность в целом слабая.

Диагностика: газовая хроматография - для экспресс-диагностики анаэробной инфекции применяют метод ГЖХ, основанный на хроматографическом определении в материале от больных специфических продуктов метаболизма облигатных анаэробных бактерий -- летучих жирных кислот. Наличие жирных кислот - анаэробная этиология воспалительного процесса. Маркеры: изомасляная и масляная, изовалериановая и валериановая, изокапроновая и капроновая. Фузобактерии летучие жирные кислоты не продуцируют.

4. 

3. Клостридиальная анаэробная инфекция

3.1 Бактерии рода Clostridium - «газовая гангрена»

Бактериями рода Clostridium -«газовая гангрена» являются:

Ш Clostridium perfringens

Ш Clostridium oedematiens,

Ш Clostridium hystoliticum,

Ш Clostridium septicum.

Все клостридии являются строгими анаэробами и выделяют экзотоксины, приводящие к необратимым изменениям мышечной и соединительной ткани, обладают гемолитическим, тромбогенным, гепато-, нефро-, кардиотоксическим действием.

Наиболее активные фракции экзотоксина:

ь лецитиназа С

ь гемолизин

ь коллагеназа

ь гиалуронидаза

ь мутоксин (разрушает ДНК клеток)

ь фибринолизин

ь нейрамидаза

ь геммагглютинин

Этот вид раневой инфекции является наиболее опасным для жизни осложнением ран любого происхождения.

Морфология и культивирование

Возбудители газовой гангрены -- палочковидные грамположительные бактерии (отдел Firmicutes), образующие овальные споры, в диаметре превышающие поперечник вегетативной части. В пораженных тканях клостридии газовой гангрены формируют капсулу. Культивируются на жидких и плотных питательных средах в анаэробных условиях.

Факторы патогенности

Продуцируют экзотоксины, специфические для каждого вида, воздействующие на ЦНС; выделяют ферменты (коллагеназу, гиалуронидазу, дезоксирибонуклеазу), разрушающие соединительную ткань, а также гемолизин, разрушающий эритроциты.

Резистентность и экология

Вегетативные формы клостридии чувствительны к кислороду, солнечному свету, высокой температуре, кислотам, дезинфицирующим средствам. Споры в противоположность вегетативным формам устойчивы к высоким температурам, кислотам и другим физическим и химическим факторам.

Возбудители газовой гангрены, являясь нормальными обитателями кишечника животных и человека, с фекалиями попадают в почву, где споры длительное время сохраняются. В некоторых почвах клостридии могут размножаться.

Иммунитет

Перенесенная инфекция не создает иммунитета. Ведущая роль в защите от Токсина принадлежит антитоксическому иммунитету.

Микробиологическая диагностика

Бактериоскопическое исследование

Проводится путем микроскопии мазков, приготовленных из отечной жидкости или некротизированной ткани. Наличие в препаратах крупных грамположительных палочек, часть из которых образует капсулу, позволяет поставить предварительный диагноз.

Материал вносят в несколько пробирок со средой Китта--Тароцци, со средой Вильсона-Блера и молоком. Часть пробирок прогревают при 800С в течение 30 мин для уничтожения неспорообразующих бактерий. Посевы инкубируют в обычном термостате при 37°С. C. perfringens растет в глубине среды. В молоке уже через 3--4 часа после посева образуется губкообразный сгусток, содержащий пузырьки газа и отделившуюся прозрачную жидкость. На следующие сутки на среде Китта-Тароцци отмечается помутнение и газообразование, а на среде Вильсона-Блера несколько позднее появляются черные колонии в глубине агарового столбика. Из всех посевов делают мазки, окрашивают их по Грамму и микроскопируют.

При положительном результате обнаруживают крупные грамположительные палочки C. perfringens. Для получения чистой культуры делают пересевы на сахарно-кровной агар в чашки Петри, которые инкубируют в строго анаэробных условиях при 370С в течение 3-4 дней. Выросшие колонии пересевают в пробирки со средой Китта-Тароцци, затем производят идентификацию на основании дифференциальных признаков.

Для определении токсигености исследуемую культуру, выращенную на среде Кита-Тароцци, центрифугируют и надосадочную жидкость вводят морской свинке, которая при положительном результате погибает.

Для быстрого обнаружения токсина C. perfringens в раневом отделяемом определяют его лецитиназную активность. Положительная реакция на лецитиназу выявляется помутнением жидкости в пробирке. При отрицательной реакции, характеризующейся нейтрализацией фермента соответствующей антисывороткой, жидкость остается прозрачной.

Вследствие того, что токсины разных видов клостридий различаются по своим антигенным свойствам, их серологическую идентификацию проводят в реакции нейтрализации на лабораторных животных. С этой целью смесь исследуемого токсина с антитоксической сывороткой (C. perfringens или С. novyi) вводят подкожно морской свинке. В случае нейтрализации токсина животное остается живым; при отрицательной реакции морская свинка погибает через 30 мин--4ч после инъекции.

3.2 Возбудитель столбняка

Столбняк (tetanus) -- тяжелая раневая инфекция, вызываемая Clostridium tetani, характеризующаяся поражением нервной системы, приступами тонических и клонических судорог. Возбудитель столбняка открыт в 1884 г. Э. Николайером и С. Китазато.

Морфология и культивирование

Столбнячная палочка -- строгий анаэроб, грамположительна, ее размеры 0,5--1,7x2--18 мкм; перитрих, образует терминально расположенную круглую спору, продуцирует сильный экзотоксин при выращивании на жидких питательных средах. На плотных питательных средах формирует прозрачные или слегка сероватые колонии с шероховатой поверхностью; не расщепляет углеводов, обладает слабыми протеолитическими свойствами.

Антигенная структура

По Н-антигену С. tetani делят на 10 сероваров. О-Антиген является общим для всех представителей вида. Все серовары продуцируют однородный токсин, нейтрализующийся иммунной сывороткой против токсина любого серовара.

Факторы патогенности

Основным фактором патогенности является экзотоксин. Столбнячный токсин представляет собой белок с молекулярной массой около 150 кД. Состоит из тетанолизина и тетаноспазмина, оказывающих гемолитическое и спастическое действие. К столбнячному токсину чувствительны человек, мыши, морские свинки, кролики и другие животные.

Резистентность и экология

С. tetani распространен повсеместно. Являясь нормальным обитателем кишечника человека и животных, он попадает в почву, где в виде спор может сохраняться годами, десятилетиями. Столбнячная палочка весьма устойчива к дезинфектантам. При кипячении споры погибают через 50--60 мин.

Иммунитет

После перенесенной болезни иммунитет не вырабатывается. От матери, вакцинированной против столбняка, новорожденным передается непродолжительный пассивный антитоксический иммунитет.

Микробиологическая диагностика

Материал для исследования: кусочки ткани вокруг предполагаемых входных ворот инфекции, гной, перевязочный материал, кетгут. При подозрении на столбняк у женщин после родов или аборта -- выделения из матки.

Бактериологическое исследование

Материал засевают в среду Китта---Тароцци и инкубируют в анаэробных условиях при 37°С в течение 3--4 сут., наблюдая придонный рост бактерий. Затем делают посевы на сахарный агар в чашки Петри, в столбик сахарного питательного агара в пробирке. Посевы также инкубируют в анаэробных условиях.

На поверхности кровяного агара Cl. tetani образует нежные прозрачные колонии, окруженные малозаметной зоной гемолиза. Для получения чистой культуры подозрительные колонии пересевают в пробирки со средой Китта--Тароцци и сохраняют их под слоем вазелинового масла или в эксикаторе, заполненном смесью инертных газов.

Биопроба -- основной метод лабораторной диагностики столбняка. Проводится для обнаружения столбнячного токсина в исследуемом материале. С этой целью материал растирают в стерильной ступке с песком, заливают изотоническим раствором хлорида натрия для экстрагирования токсина и фильтруют через бумажный фильтр. Часть фильтрата смешивают с антитоксической сывороткой и внутримышечно вводят белым мышам (контрольная группа), подопытным животным вводят один фильтрат. Через 1--2 сут у мышей появляется ригидность мышц хвоста и задних конечностей. В результате резкого сокращения хвостовых мышц хвост поднимается в виде дуги. Затем подопытные животные погибают. Для определения токсигенности выделенной культуры белым мышам вводят надосадочную жидкость, полученную при центрифугировании этой культуры, выращенной на жидкой питательной среде.

Биохимические свойства

В отличие от других патогенных клостридий возбудитель столбняка характеризуется слабой биохимической активностью: не сбраживает моносахариды и многоатомные спирты. Однако некоторые штаммы могут ферментировать глюкозу в зависимости от концентрации в среде ионов железа. Столбнячная палочка обладает слабыми протеолитическими свойствами, вызывая медленную ферментацию протеинов и пептонов до аминокислот, которые затем разлагаются с образованием угольной кислоты, водорода, аммиака, летучих кислот и индола.

3.3 Возбудитель ботулизма

Ботулизм - инфекционная болезнь, характеризующаяся интоксикацией организма с преимущественным поражением ЦНС, возникающее в результате употребления пищевых продуктов, содержащих токсины Clostridium botulinum. Clostridium botulinum был выделен в 1896 г. Э. Ван-Эрменгемом из организма погибшего и остатков колбасы (лат. botulus -- колбаса), употребление которой привело к смерти.

Таксономия

Возбудитель ботулизма относится к отделу Firmicutes, роду Clostridium.

Морфология и тинкториальные свойства

Возбудители ботулизма имеют форму палочек длиной 3--9 мкм, шириной 0,6--1 мкм с закругленными концами. Палочки образуют субтерминально расположенные споры и имеют вид теннисной ракетки. Капсулы не образуют, перитрихи. Грамположительны.

Культивирование

С. botulinum -- строгий анаэроб. Оптимальная температура для роста 25--35 °С, рН среды 1,2--1,А. На кровяном агаре образует небольшие прозрачные колонии, окруженные зоной гемолиза. В высоком столбике сахарного агара колонии имеют вид пушинок или зерен чечевицы.

Ферментативная активность

С. botulinum обладает большим набором сахаролитических и протеолитических ферментов.

Антигенные свойства

Наиболее важными для идентификации возбудителя, обладает экзотоксин С. botulinum. Различают 7 сероваров возбудителя ботулизма -- А, В, С, D, E, F, G, из которых наиболее распространены А, В, Е.

Факторы патогенности

С. botulinum выделяет экзотоксин, самый сильный из всех биологических ядов. Смертельная доза для человека равняется 0,3 мкг. Ботулинический экзотоксин оказывает нейротоксическое, гемагглютинирующее действие. Его особенностью является высокая устойчивость к нагреванию (сохраняется в течение 10--15 мин при 100°С), кислой реакции, высоким концентрациям поваренной соли, замораживанию, пищеварительным ферментам.

Резистентность

Споры С. botulinum обладают очень высокой резистентностью к высоким температурам (выдерживают кипячение в течение 3--5 ч).

Эпидемиология

Возбудитель ботулизма широко распространен в природе. Его обнаруживают в организме животных, рыб, ракообразных, откуда он попадает в почву и воду. В почве С. botulinum долгое время сохраняется в виде спор и даже может размножаться, что позволяет отнести ботулизм к сапронозным инфекциям. Путь передачи инфекции -- пищевой. Чаще всего фактором передачи инфекции являются консервы (грибные, овощные, мясные, рыбные).

Микробиологическая диагностика

Материалом для выявления ботулотоксина служат сыворотка крови, моча, испражнения, промывные воды желудка больного, остатки пищи или подозреваемые продукты (колбасы, мясные, рыбные, фруктовые, овощные консервы и др.). Для обнаружения ботулотоксина в сыворотке крови больного ставят РПГА с эритроцитами, нагруженными моновалентными антитоксическими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е. В качестве контроля берут нормальную сыворотку крови. Обнаружение ботулотоксина в пищевых продуктах и определение токсигенности С. botulinum проводят в реакции нейтрализации токсина на белых мышах.

Для определения серотипа токсина реакцию ставят с моновалентными сыворотками типов А, В, Е. При нейтрализации токсина гомологичной антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.

4. Способы культивирования анаэробов

возбудитель анаэробный инфекция

- Механический;

- Химический;

- Биологический.

Механический способ

а) Удаление воздуха механическим путем. Удаление воздуха (а, следовательно, и кислорода) проводят в специальных приборах - анаэростатах путем выкачивания. Этот прибор может быть заменен эксикатором.

б) Механическая защита от кислорода воздуха. Делают посев по методу Вейон-Виньяля в пастеровских пипетках. Для посева в чашках делают посев по методу Перетца, для этого разведения исследуемого материала в расплавленном агаре выливают в чашки Петри, на дно которых положены на стеклянные палочки или спички стерильные стеклянные пластинки. Между дном чашки и стеклянной пластинкой образуется капиллярная полость, куда расплавленный агар быстро затекает. Высота слоя агара под стеклом 1-2 мм, в этом слое вырастают анаэробы, в то время как над стеклом растут аэробы.

в) Замена воздуха индифферентным газом. В этом случае в анаэростат после откачивания воздуха нагнетают азот или, присоединив анаэростат к аппарату Киппа, вытесняют воздух с кислородом образующимся водородом.

г) Наиболее простой способ - посев уколом в высокий столбик сахарного агара.

Химический способ

Основан на способности некоторых веществ (щелочной раствор пирогаллола, гидросульфит натрия), поглощать кислород из воздуха. Засеянные чашки, или пробирки помещаю в специальные аппараты: Аристовского, 0мелянского или микроанаэростат, эксикатор, туда же помещают поглощающие вещества в чашке Петри, аппарат плотно закрывают.

Биологический способ

Основан на совместном выращивании в чашке анаэробов и аэробов-метод Фортнера. После посева чашки закрывают, заливают парафином для герметичности. Выросшие аэробы используют кислород и создают бескислородные условия для роста анаэробов.

В некоторых случаях, когда не требуется низкого парциального давления кислорода, кислород из воздуха можно удалить, поместив в эксикатор горящую свечу.

5. 

5. Среды и аппаратура для культивирования анаэробов

Среда Китта-Тароцци - представляет собой питательный бульон с 0,5% глюкозы, в который погружены кусочки печени или мяса. Перед посевом среду кипятят 20 мин, быстро остужают до 45° С и засевают сразу же, после посева в пробирку на поверхность среды наливают стерильное вазелиновое масло, чтобы защитить посев от кислорода.

Анаэростат - прибор, служащий для создания и поддержания стабильно анаэробных условии. Промышленность изготовляет микроанаэростаты и макроанаэростаты.

Микроанаэростат - представляет собой толстостенный металлический стакан цилиндрической формы, который через вакуумную резиновую прокладку закрывают металлической крышкой. Но крышке расположены вакуумметр и патрубок для откачивания и нагнетания воздуха и газа. Крышку прижимают к краям стакана винтом с дугообразным хомутом.

Макроанаэростат - это водяной термостат, внутри которого вмонтирован анаэростат - толстостенный металлический котел цилиндрической формы, герметически закрывающийся крышкой со стеклом для наблюдения за ростом микробов. На верхней стенке анаэростата находятся вакуумметр и патрубок для откачивания воздуха. Рабочая камера имеет съемные полочки для чашек и пробирок. В макроанаэростате вакуум должен быть доведен до 3-10 мм ртутного столба.

Эксикатор - стеклянный толстостенный сосуд, закрывающийся крышкой, которую можно притереть к краям эксикатора. В крышке имеется патрубок с краном для откачивания или нагнетания воздуха.

Посев по Фортнеру

Кровяной питательный агар разливают в чашки Петри толстым слоем, после застывания по диаметру агар вырезают в виде узкой щели. На одну половину чашки засевают культуру аэробного микроба, жадно поглощающего кислород (кишечную палочку, чудесную палочку), а на другую половину засевают исследуемый материал. Чашку закрывают, заливают парафином. Аэробные бактерии быстро используют кислород воздуха в герметически закрытой чашке, затем начинают размножаться анаэробы, через 24-48 часов чашку открывают и из отдельных колоний анаэробов выделяют чистую культуру.

Посев по Вейон-Виньялю

В пастеровских пипетках. Пастеровские пипетки представляют собой длинные трубки (20-25 см) диаметром около 5 мм, приготовленные из легкоплавкого стекла. Один конец пипетки открыт, а другой вытянут в виде капилляра и запаян. Перед стерилизацией в широкий конец вставляют вату. Исследуемый материал разводят полужидким агаром с небольшим содержание глюкозы, затем из каждого разведения насасывают агар в стерильную пастеровскую пипетку, предварительно обломив запаянный конец капилляра, и избегая попадания пузырьков воздуха. Затем капилляр запаивают и пипетки помещают в термостат. Через 24-48 часов в среде можно обнаружить ясно видимые колонии бактерий в виде пушинок, комочков ваты, зерен чечевицы и т.д. Нужные колонии можно извлечь, распилив трубку.

Выделение чистых культур анаэробных бактерий:

1 этап. Накопление материала.

Исследуемый материал, предварительно прогретый в течение 15 мин при 80°С для уничтожения вегетативной флоры (споры анаэробов при этом не гибнут), засевают на среду Кита-Тароцци и ставят в термостат.

2 этап. Выделение чистой культуры.

После суточного инкубирования в результате роста микробов среда мутнеет, иногда в ней видны пузырьки газа. Выделение культуры проводят или по методу Цейсслера или по методу Вейнберга.

Метод Цейсслера

Каплю материала со среды Китта-Троцц помещают в чашку с кровяным сахарным агаром, тщательно распределяют его по поверхности среды шпателем, затем этим же шпателем делают посев во второй и третьей чашке. Сутки инкубируют чашки в термостате в анаэробных условиях. На следующий день по форме колоний и морфологии микробов, изученной в мазках, окрашенных по Граму, ориентировочно определяют вид бактерий, изученные колонии пересевают на среду Кита-Тароцци для выделения чистой культуры и точного определения виды микроорганизмов.

Метод Вейнберга

1-2 капли материала со среды Кита-Тароцци вносят в пробирку с МПБ для разведения. Затем пастеровской пипеткой с запаянным концом переносят материал последовательно в 3-5 узких пробирок с сахарным МПА, предварительно расплавленным и прокипяченным в течение 20 мин и остуженным до 50°С, погружая капилляр пипетки в расплавленный агар до дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают под струей холодной воды, при этом агар застынет и зафиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток. Инкубируют в анаэробных условиях. Через сутки отбирают колонии, на уровне колонии пробирку распиливают, колонию отсасывают пипеткой и переносят в среду Китта-Троцци для накопления и идентификации.

6. 

Заключение

В данной курсовой работе по теме: возбудители анаэробных инфекций, цель которой изучить возбудителей анаэробных инфекций, полностью раскрыта, были расписаны возбудители клостридиальных и не клостридиальных инфекций.

В ходе моей работе были выполнены все задачи поставленные в данной курсовой, были расписаны возбудители клостридиальных и не клостридиальных инфекций, был предоставлен материал по средам и методам, условиям культивирования анаэробных инфекций. Были даны, для ознакомления слушателей, основные понятия, применяемые в данной курсовой.

В Российской Федерации каждый год регистрируются много случаев заболевания анаэробных инфекций. Статистика для них неутешительна: заболеванием возбудителя ботулизма в год около 300 человек, причем около у 30 человек инфекционный процесс заканчивается летальным исходом.

Заболевание столбняком в России приходится на 15 - 17 случаев в год. Половина из этих случаев заканчивается летальным исходом.

Статистика заболевания гангреной, тоже неутешительна, в России в год приходится около 1000 человек , 200-300 из этих случаев заканчивается летальным исходом.

7. 

Список используемой литературы

1. http://bsmy.ru/4527.

2. http://www.neboleem.net/gazovaya-gangrena.php

3. http://meduniver.com

4. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, Санкт-Петербург «Специальная литература», 1998. - 592с.

5. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,-512с.

6. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. - Киев: Вища школа, 1992. - 431с.

7. Медицинская микробиология / Под редакцией В.И. Покровского. -М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.-768с.

8. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. Под ред. М.П. Зыкова. М. «Медицина». - 1977. - 288 с.

9. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес. - М.: Медицина, 1986. - 512 с.

10. Конспект лекции.

11. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология. Алма-Ата, «Казахстан», 1974. - 372 с.

12. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби. - К., 1995. - 321с.

13. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. - М.: Медицина, 1990. - 559 с.

14. БМЭ, Т. 1, 2, 7.

15. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов. - Мн.: Выш. шк., 1986. - 255 с.

Размещено на Allbest.ru