Бактериологические посевы мочи

Размещено на http://www.allbest.ru/

Курсовая робота

на тему: Бактериологические посевы мочи



Содержание

Введение

1. Преимущества и недостатки бактериологического исследования мочи

2. Показания для бактериологического посева

3. Требования к обеспечению выполнения технологии

3.1 Требования к специалистам и вспомогательному персоналу

3.2 Условия выполнения технологии бактериологического анализа мочи и функциональное значение

3.3 Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии: приборы, средства измерения, лабораторное оборудование

3.3.1 Питательные среды

3.3.2 Реагенты и средства дезинфекции

3.3.3 Лабораторная посуда и расходные материалы

3.3.4 Оборудование

4. Технологический поток бактериологического исследования мочи

4.1 Преаналитический этап

4.1.1 Взятие образцов мочи

4.1.2 Методы взятия образцов мочи

4.1.3 Хранение и транспортировка проб мочи

4.1.4 Идентификация образца

4.1.5 Оценка пригодности образца для исследования

4.2 Аналитический (лабораторный) метод

5. Методы предварительной оценки наличия бактерий в моче

5.1 Микроскопическое исследование мочи

6. Минимальные идентификационные признаки бактерий, наиболее часто встречающихся в моче

Заключение

Библиографический список



Введение

Бактериологические посевы мочи заключаются в том, чтобы идентифицировать микроорганизмы (обычные бактерии), которые вызывают инфекцию мочевых путей. Инфекции мочевых путей чаще вызываются у женщин и у девочек. Если посев мочи положителен, то для этого проводят тест определения чувствительности к антибиотикам. Чтобы определить какой антибиотик лучше подходит для лечения.

При выделении определенных микроорганизмов проводится еще один немаловажных анализов - антибиотикограмма - определение чувствительности обнаруженных патогенов к антибактериальным препаратам и бактериофагам.

Целью моей курсовой работы является:

- Изучить литературу и методики по бактериологическому исследованию мочи.

Задачи поставленные при написании курсовой работы:

- Выявить микроорганизмы при бактериологическом исследовании мочи;

- Сравнить какими средами пользуются для определения в бактериологическом исследовании мочи;

- Раскрыть методики взятия образцов для бактериологического исследования мочи.

бактериологический посев моча

1. Преимущества и недостатки бактериологического исследования мочи

Преимуществами бактериологического посева мочи являются:

- Высокая специфичность метода (то есть перекрестных ложных реакций не наблюдается).

- Возможность исследовать исследовать любую биологическую жидкость человека.

- Лечебная цель - определение чувствительности выявленного микроба к тому или иному лечебному средству (антибиотикограмма) , что позволяет с достаточно высокой точностью проводить лечебные назначения.

- Позволяет не только определить возбудителя, но и выяснить его количество в полученном материале.

Недостатки бактериологического посева мочи:

- Результат анализа приходится ждать в среднем 5 дней, а в отношении некоторых возбудителей до нескольких недель (микобактерия туберкулеза).

- Высокие требования к забору материала.

- Определенные требования к квалификации персонала бактериологической лаборатории.

- Иногда может давать ложный результат.

2. Показания для проведения бактериологического исследования мочи

Применение микробиологического исследования достаточно широко распространено в медицинской практике, в частности, в инфекционных болезнях, гинекологии, урологии, хирургии, отоларингологии, онкологии и других. Безусловным показанием для необходимости проведения бакпосева являются воспалительное заболевание органов и систем органов и систем человека, подозрение на септический процесс.

Основными показаниями проведения бактериологического исследования мочи служит наличие заболевания у пациента мочеполовой системы. В случае неосложненных ИМП при отсутствии структурных и функциональных нарушений мочеполовой системы, а так же сопутствующих заболеваний, которые могут повышать риск их развития, или неэффективности лечения, стартовая терапия может быть назначена эмпирически без проведения бактериологического исследования мочи. Выбор препарата в этом случае проводится на основании имеющихся данных локального эпидемиологического мониторинга чувствительности к антимикробным препаратам основных возбудителей ИМП.

Бактериологическое исследование мочи следует проводить в следующих случаях:

- Подозрение на пиелонефрит;

- Подозрение на ИМП, связанную с проведением медицинских манипуляций (цистоскопия, катетеризация), а так же с оказанием медицинской помощи (в т.ч. нозокомиальные ИМП);

- Наличие симптоматики ИМП у мужчин;

- Наличие симптоматики ИМП у беременных женщин;

- Осложненные и/ или рецидивирующие ИМП у женщин старше 65 лет;

- Клинические признаки ИМП у лиц с иммунодефицитами, почечной недостаточностью, сахарным диабетом, аномалия развития мочеполовой системы, мочекаменной болезнью, после трансплантации почки;

- Повышение температуры тела у пациентов с постоянным катетером;

- Наличие у детей клинических проявлений ИМП или лихорадка при отсутствии видимых причин в течении симптомов ИМП;

- Неэффективность предшествующей антибиотикотерапии ИМП;

Скрининговое бактериологическое исследование мочи рекомендуется проводить двум группам пациентов повышенного риска развития осложненных ИМП:

- беременным женщинам (при первом или последующих посещении женской консультации, а в случае проведения лечения ИМП - 1-4 недели после его завершения);

- пациентам, которым планируется проведение хирургических операций на органах мочевой системы.



3. Требования к обеспечению выполнения технологии

3.1 Требования к специалистам и вспомогательному персоналу

В выполнении данной технологии принимают участие:

- врач-бактериолог, в обязанности которого входит контроль всего технологического процесса и непосредственное выполнение этапов бактериологического анализа мочи, требующих высокой квалификации и специальной подготовки (учет результатов посева проб мочи на питательные среды и проведение при необходимости дополнительных исследований направленных на идентификацию выделенных микроорганизмов).

- специалист со средним медицинским образованием ( медицинский технолог, лабораторный техник, фельдшер-лаборант, лаборант). В его обязанности входит прием поступающих в лабораторию проб мочи и сопроводительных документов, проведение технических манипуляций, не требующих высокой квалификации: подготовка стерильных комнат, ламинарных боксов, расходных материалов, включая приготовление реагентов и питательных сред (при наличии такой необходимости), посев проб мочи на питательные среды, культивирование посевов в термостате, количественный учет выросших в посевах колоний бактерий, утилизацию использованных расходных материалов и остатков исследованных проб.

3.2 Условия выполнения технологии бактериологического анализа мочи и функциональное значение

Комплекс исследований «Бактериологический анализ мочи» выполняется в бактериологических лабораториях амбулаторно-поликлинических и стандартных учреждений здравоохранения (любой формы собственности), имеющих лицензию на осуществление медицинской деятельности по разделу «Бактериология».

Функциональное назначение услуги: диагностика и мониторинг течения ИМП, определение чувствительности возбудителей ИМП в антимикробным препаратам, профилактические обследование групп повышенного риска возникновения бактериальных ИМП.

3.3 Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии: приборы, средства измерения, лабораторное оборудование

Для выполнения микробиологического исследования мочи пользуются стандартными для микробиологической лаборатории оборудованием, реагентами и материалами, имеющие надлежащий сертификат качества и действующий срок годности.

3.3.1 Питательные среды

Стандартные питательные среды для культивирования микроорганизмов:

- универсальные (например, кровяной агар, CLED);

- селективные (Эндо, Маккони, колумбийский CNA агар, и др.);

- дифференциально-диагностические (хромогенные и др.);

Питательные среды приобретают в готовом для применения виде или в форме сухих смесей, предназначенных для самостоятельного приготовления. Среды готовят в строгом соответствии инструкциям изготовителя.

3.3.2 Реагенты и средства дезинфекции

В зависимости от используемых методов выполнения данной технологии следует применять соответствующие реагенты с не истекшим сроком годности.

Для дезинфекции и утилизации остатков проб и контаминированных пробами объектов следует использовать зарегистрированные в России и рекомендованные к применению в медицинских учреждениях и лабораториях дезинфицирующие средства в концентрации и времени экспозиции, указанных в рекомендациях по использованию.

3.3.3 Лабораторная посуда и расходные материалы

При проведении бактериологического анализа мочи к перечисленным ниже расходным материалам предъявляют такие же требования, как и при бактериологическом исследований других биологических материалов.

Одноразовые стерильные контейнеры для сбора и транспортировки мочи с устойчивым основанием, изготовленные из прозрачного материала, (желательно из пластика, что предотвращает поломку, облегчает дезинфекцию и утилизацию контейнера), инертного к компонентам мочи. Крышка должна герметично закрывать контейнеры и легко открываться; она может быть сплошной или содержать специальные закрывающие прорези для вакуумных пробирок и специальных приспособлений типа «дипстрик».

Секла предметные и покровные стандартных размеров для микропрепаратов.

Чашки бактериологические (Петри) для выращивания культур микроорганизмов на питательных средах.

Штативы и переноски для пробирок, контейнеров, чашек Петри.

Кюветы и штативы-рельсы для фиксации и окрашивания мазков.

Петли бактериологические калиброванные на 1, 5 и 10 мкл.

Дозаторы переменного объема полуавтоматические и стерильные наконечники на них.

Пипетки градуированные и пастеровские.

Шпатели Дригальского стерильные.

Посуда мерная лабораторная.

Диски (таблетки) с антибиотиками, Е-тесты, планшеты и стрипы с лиофилизированным бульоном и серийными разведениями антимикробных препаратов для определения чувствительности к ним выделенных из мочи культур уропатогенов.

Перчатки резиновые.

4.3.4 Оборудование

Ламинарный бокс

Микроскоп бинокулярный (с набором объективов и окуляров) и осветитель для обнаружений бактерий в моче и изучения морфологии культур бактерий.

Цинтрифуга лабораторная для осаждения бактерий.

Термостаты электрические для выращивания посевов на питательных средах, поддерживающие температуру в пределах + 35^оС

Весы лабораторные общего назначения.

Десятилятор

Автоклав электрический.

Холодильник поддерживающий температуру -4-6^оС для хранения проб мочи, культур и реагентов.

Спиртовки и газовые горелки.

Счетчики колоний автоматические и полуавтоматические для подсчета колоний.

Анализаторы для бактериологического анализа мочи, идентификации микроорганизмов и определения их чувствительности к антимикробным препаратам.

4. Технологический поток бактериологического исследования мочи

Технологический поток бактериологического исследования анализа мочи состоит из преаналитического и аналитического (лабораторного) этапов.

4.1 Преаналитический этап

При проведении преаналитического этапа необходимо учитывать требования ГОСТ Р 53079.4- 2008 и МУ 4.2.2039-05

4.1.1 Взятие образцов мочи

Необходимость определения точного количества микроорганизмов в 1 мл исследуемой мочи для диагностики ИМП определяет особые требования к сбору и технике посева образцов мочи.

В условиях стационара средний медицинский персонал отделения отвечает за подготовку пациента, правильный сбор самим пациентом, соблюдения режима хранения и доставки проб в лабораторию. Специалистами лаборатории должна быть составлена для медицинского персонала клинических отделений письменная инструкция по правилам взятия, регистрации, хранении и первичной подготовки мочи для бактериологического анализа. При необходимости сбора мочи через катетер, дренаж или пункцией мочевого пузыря эти процедуры выполняет врач или обученный средний медицинский персонал с использованием специального оборудования и инструментов.

В амбулаторных условиях пациент собирает мочу дома без наблюдения медицинского персонала. В связи с этим его необходимо обеспечить письменными инструкциями (памятками), подготовленными специалистами лаборатории, для обеспечения унифицированных условий сбора материала. Так же, как и в стационаре, при сборе мочи в амбулаторных условиях пациентам рекомендуется предоставлять специальные стерильные контейнеры для сбора образца и приспособление для полуавтоматического посева мочи типа «дипстрик». Использование этих устройств позволяет проводить посев мочи не только в лабораторных условиях, но и непосредственно на месте сбора проб (у постели больного, поликлиниках и лечебных учреждениях). С их помощью можно к минимуму свести преаналитический период, что исключает получение завышенных результатов оценки тяжести бактериурии, обусловленных размножением бактерий в пробах мочи в процессе их хранения и транспортировке в лабораторию.

По возможности, взятие проб материала для исследований следует выполнять до начала антимикробной терапии или в интервалах между курсами лечения. Для контроля эффективности лечения ИМП процедуру проводят после его окончания. Наиболее достоверные результаты могут быть получены при исследовании средней порции мочи (3…20 мл), собранной после ночного отдыха до завтрака.

Случайный образец собирают в любое неустановленное время. Такая необходимость обычно возникает при бактериологическом анализе мочи грудных детей, т.к. у этой категории пациентов невозможно собрать образец за длительный или строго определенный промежуток времени, а также в экстренных случаях. Не следует форсировать диурез посредством приема пациентом жидкости, т.к. при этом происходит разбавление мочи, ведущее к снижению титра бактерий.

Катетеризацию мочевого пузыря для рутинного исследования не применяют из-за риска инфицирования и возможности травмирования слизистой оболочки мочевых путей. В некоторых случаях к ней прибегают для уточнения того, где локализуется инфекция -- в мочевом пузыре или почках. В особых случаях (новорожденные и грудные дети, пациенты с заболеваниями предстательной железы или отсутствием контроля мочеиспускания, а также при необходимости определения локализации инфекции) проводят пункцию мочевого пузыря.

Риск колонизации мочевого пузыря микроорганизмами при правильно выполненной надлобковой пункции ниже, чем при катетеризации мочевого пузыря.

Однако, инвазивный характер процедуры не позволяет использовать ее в качестве рутинной. Для сбора мочи у грудных и маленьких детей используют специальные мешки с гипоаллергенным адгезивным средством, обеспечивающим плотное прилегание приспособления к коже. Их проверяют каждые 15 мин, собранный образец переливают в контейнер для сбора мочи, который маркируют и транспортируют в бактериологическую лабораторию. В каждом конкретном случае способ взятия мочи определяет врач-клиницист.

4.1.2 Методы взятия проб мочи

1. Средняя порция свободно-выпущенной мочи:

- руки вымыть с мылом и насухо вытереть;

- провести тщательный туалет наружных половых органов теплой водой без применения

антисептиков и просушить их салфеткой;

- открыть стерильный контейнер, не дотрагиваясь до внутренних его поверхностей;

- при мочеиспускании собрать в контейнер среднюю порцию мочи (первая порция не собирается, т.к. всегда контаминирована микрофлорой уретры; мочеиспускание завершается в туалет);

- плотно закрыть крышку контейнера со взятым образцом.

Примечание. Не следует собирать мочу для бактериологического анализа у женщин в период менструации. Нельзя использовать для бактериологического анализа мочу из мочеприемника и подкладного судна.

2. Катетеризация мочевого пузыря:

- выполняется врачом или обученным медицинским персоналом;

- с учетом правил асептики/антисептики и правильного положения пациента после обработки наружного отверстия уретры установить стерильный катетер в мочевой пузырь, при необходимости предварительно смочив его стерильным вазелиновым маслом;

- выпустить первые 15-30 мл мочи;

- собрать для исследования следующую порцию, при необходимости надавливая левой рукой на переднюю брюшную стенку над лобком; - после прекращения выделения мочи осторожно извлечь катетер.

3. Моча, полученная из эпицистосомы, дренажа или установленного постоянного мочевого катетера.

Отбор пробы проводит врач или обученный медицинский персонал после замены дренажа/катетера или путем стерильной пункции. В этом случае с соблюдением правил асептики/антисептики после обработки спиртом наружного порта катетера необходимо собрать достаточное количество мочи с помощью стерильного шприца.

Примечание. Нельзя использовать для бактериологического анализа мочу из мочеприемника, соединенного с дренажем/катетером.

4. Надлобковая пункция

- выполняется врачом или обученным медицинским персоналом;

- перед процедурой аспирации мочевой пузырь должен быть наполнен и пальпироваться над лоном;

- при необходимости следует выбрить переднюю брюшную стенку в предполагаемом месте пункции;

- провести пункцию стерильным шприцом с иглой путем аспирации мочи из мочевого пузыря и перенести мочу в стерильный контейнер.

5. Моча, полученная при цистоскопии

Сбор проб мочи проводит врач-уролог в специально оборудованных цистоскопических комнатах лечебно-профилактических учреждений с помощью инструментов, необходимых для проведения цистоскопии.

4.1.3 Хранение и транспортировка проб мочи

Образец мочи необходимо доставить в лабораторию в течение 2 ч после взятия. При невозможности доставки проб мочи в лабораторию в указанный срок разрешается хранить их при +4°С в течение 24 ч с момента взятия. Образцы нельзя замораживать! В случае если хранение в охлажденном виде и доставка проб в лабораторию в течение суток невозможны, допускается их сбор и хранение в контейнерах или вакуумных пробирках с борной кислотой, стабилизирующей концентрацию бактерий.

Пробы с указанным консервантом можно хранить при комнатной температуре в течение срока, не превышающего 24 ч. Для избежания чрезмерной ингибиции уропатогенов следует применять борную кислоту в концентрации, не превышающей указанную, или применять коммерческие транспортные системы с этим консервантом. Кроме того, следует учитывать, что борная кислота снижает жизнеспособность и высеваемость псевдомонад.

Возможен экспресс-посев мочи в специальные приспособления типа «дипстрик» непосредственно в месте сдачи проб мочи пациентами. Устройства отправляют в лабораторию сразу после засева или в течение последующих 24 ч (их хранят не в холодильнике, а при комнатной температуре!).

При наличие термостата в месте сбора проб мочи рекомендуется также инкубировать в них засеянные устройства в течение 18-24 ч и отправлять в лабораторию только те из них, в которых по истечению указанного срока появились признаки роста микроорганизмов.



4.1.4 Идентификация образца

Маркировка. Контейнеры и тест-системы с пробами мочи маркируют любым способом (несмываемым маркером, этикетками и пр.), обеспечивающим точную идентификацию проб.

Заявка (направление) на исследование. Каждый образец мочи должен поступать в лабораторию в сопровождении направления (заявки) на исследование, составляемого врачом-клиницистом.

В направлении указывают ФИО пациента, пол, возраст или год рождения, способ получения пробы мочи (например, взятие мочи катетером), время ее сбора, характеристику образца (утренний или случайный), наличие в пробах консерванта (если его использовали, то указывают название реагента и его концентрацию), предварительный клинический диагноз, использованные для лечения пациента антимикробные препараты, фамилию и инициалы назначившего исследование лечащего врача.

Сопроводительный документ. К каждой партии образцов мочи и засеянных ими устройств прилагают сопроводительный документ, в котором перечисляют количество направляемых в лабораторию материалов, их маркировку и соответствие заявкам на исследование.

4.1.5 Оценка пригодности образца для исследования

После доставки образцов мочи в лабораторию ее сотрудник, принимающий материал, должен проверить правильность оформления направления на исследование, маркировку (код или ФИО пациента должны быть идентичны данным, указанным в бланке-направлении), целостность контейнеров и зарегистрировать поступивший материал.

Непригодными для бактериологического исследования являются образцы:

- немаркированные или несущие неверную маркировку;

- для которых не указаны дата, время и место сбора мочи;

- собранные ранее 24 ч до момента доставки в лабораторию;

- при нарушении целостности и/или герметичности контейнеров (в т.ч. пролитые пробы);

- имеющие посторонние включения.

В случае непригодности доставленного образца необходимо в кратчайшие сроки уведомить врача, назначившего исследование, и рекомендовать повторное взятие материала с соблюдением всех перечисленных выше правил. До получения уточнений образцы можно хранить в холодильнике (4…6°С) до 24 ч с момента их взятия.

В случаях, когда повторное взятие образцов мочи у пациента невозможно, то при оформлении результатов бактериологического анализа необходимо отразить возможность влияния нарушения регламента преаналитического этапа на полученный результат.

4.2 Аналитический (лабораторный) этап

Методы предварительной оценки наличия бактерий в моче пациента используют для быстрого получения информации о наличии, количестве и типе микроорганизмов в моче. К ним относятся: микроскопические методы и методы обнаружения продуктов метаболизма бактерий.

Выполняются по запросу лечащего врача в экстренных ситуациях как первый этап специфической диагностики, а также в качестве скрининга отдельных категорий пациентов и определения показаний для дальнейшего обследования. При рутинном бактериологическом анализе мочи они не обязательны.

Экспресс-методы не требуют участия высококвалифицированного персонала и применения специализированного оборудования, поэтому ими можно пользоваться не только в микробиологических лабораториях, но также в лечебных учреждениях и клинико-диагностических лабораториях. Методы бактериологического (культурального) исследования мочи.

Целью бактериологического анализа мочи является: выделение и идентификация возбудителя ИМП и определение его концентрации в образце мочи (степени бактериурии).

Если сопоставление полученных результатов с данными анамнеза и клинического обследования пациента позволяет констатировать этиологическую значимость выделенного микроорганизма в заболевании, далее определяют его чувствительность к антимикробным препаратам. Для выделения бактерий из мочи применяют универсальные, селективные и дифференциально-диагностические среды.

Универсальные питательные среды (кровяной агар, среда CLED) поддерживают рост как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий.

Кровяной агар пригоден для культивирования как неприхотливых, так и прихотливых бактерий, но при высокой концентрации многие быстро растущие микроорганизмы дают на нем газонный рост, ингибируют формирование колоний других микроорганизмов и маскируя их.

На среде CLED ингибируется феномен роения протеев и одновременно по изменению цвета среды можно судить о способности изолятов ферментировать лактозу.

Колумбийский CNA агар предназначен для селективной изоляции грамположительных микроорганизмов. Из числа селективных сред для грамотрицательных бактерий чаще всего применяют среды МакКонки и Эндо, позволяющие проводить первичную дифференциацию выросших культур по способности ферментировать лактозу).

Хромогенные среды облегчают и ускоряют идентификацию изолятов бактерий на основании выявления у них специфической ферментативной активности,обеспечивающей их специфическое окрашивание.

1. Титр бактерий в моче определяют в автоматическом режиме (на специальных анализаторах в соответствии с инструкциями по их эксплуатации) и описанными ниже ручными методами на неселективных средах (питательном и/или кровяном агарах).

Посевы инкубируют в условиях обычной атмосферы при 35-37 °С в течение 18-24 ч, после чего проводят учет результатов. В ряде случаев срок инкубации продлевают до 48 ч:

- образец мочи получен посредством надлобковой пункции;

- после суточной инкубации рост микроорганизмов проявляется настолько слабо, что невозможно оценить морфологию культур и выделить их в чистом виде;

- результат не соответствует информации, полученной при микроскопии мазков, клиническим данным и пр.;

- исследуемый образец получен от пациентов с тяжелыми нарушениями иммунной системы (например, у реципиентов трансплантированных органов);

- если необходимо исключить наличие в образце грибов.

А. Несекторный метод

- В чашку Петри с питательной средой вносят строго определенный объем исследуемого образца (таблица 1): пробы, полученные пункцией мочевого пузыря в объеме 10 или 100 мкл, взятые другими способами -- в объеме 1 или 10 мкл. Процедуру осуществляют тарированной на определенный объем стерильной бактериологической петлей или полуавтоматическим микродозатором со сменными стерильными наконечниками. Перед посевом образцы хорошо перемешивают, но не центрифугируют;

- Распределяют материал по поверхности питательной среды несколькими вертикальными, а затем перпендикулярными им горизонтальными штрихами, отстоящими друг от друга на небольшое расстояние.

В качестве альтернативы ее распределяют по поверхности среды шпателем Дригальского (вручную или в процессе вращения чашки Петри на платформе).

Для определения титра бактерий в моче при ее посеве несекторным методом в объеме 1, 10 и 100 мкл число колоний умножают на коэффициенты 10³, 10² и 10.

Б. Метод секторных посевов.

Метод стандартизирован для исследования объема мочи, равного 0,005 мл.

- Дно чашки Петри делят на 4 равные сектора, обозначаемые буквами А, Б, В и Г;

- Стерильной микробиологической петлей, тарированной на объем 0,005 мл, выполнить посев мочи 30-40 штрихами в секторе А;

- Прожечь петлю и провести 4 штриховых посева из сектора А в сектор Б, а затем аналогичным путем засевают остальные секторы, каждый раз прожигая петлю.



5. Методы предварительной оценки наличия бактерий в моче

5.1 Микроскопические методы исследования мочи

1. Нанести на предметное стекло 10 мкл хорошо перемешанной, но

нецентрифугированной мочи. Обвести место расположения капли маркером и высушить на воздухе.

2. Окрасить препарат по Граму стандартным методом.

3. Микроскопировать препарат при увеличении Ч1000.

Учет результатов: 1 бактериальная клетка соответствует концентрации бактерий в моче, равной 105 клеток/мл .

Слайд-планшетный центрифужный метод

Наиболее надежный метод предварительной оценки степени бактериурии: его чувствительность и специфичность при концентрации бактерий в моче 108КОЕ/мл составляют 98 и 90 %, а при концентрации 106 КОЕ/мл -- 63 и 91 %, соответственно.

7. Минимальные идентификационные признаки бактерий, наиболее часто встречающихся в моче.

Для идентификации грамположительных и грамотрицательных бактерий, наиболее часто изолируемых из мочи людей, пользуются приведенными ниже идентификационными критериями. Их следует считать «минимальными», поскольку они являются основными, но не абсолютными: из-за вариабельности свойств для окончательной идентификации изолятов ряда видов бактерий требуются дополнительные тесты (биохимические, иммунологические и др.).

Грамположительные бактерии

1. Стафилококки

Грамположительные каталазопозитивные кокки, формирующие в мазках грозди.

1.1. S. Saprophyticus культуральные свойства: на CLED формирует желтые колонии, на кровяном агаре -- колонии цвета слоновой кости;

- наличие каталазы;

- отсутствие ДНК-азы;

- отсутствие коагулазы (тест проводят в пробирках с плазмой крови кролика в случаях, когда получены сомнительные результаты ДНК-азной пробы);

-резистентность к новобиоцину (при использовании дисков с 5 мг антибиотика зона задержки роста не превышает 16 мм).

1.2. S. aureus

- культуральные свойства: на CLED и кровяном агаре формирует желтые, крупные колонии (менее вариабельные по размеру, чем у коагалазонегативных стафилококков);

-наличие коагулазы;

-наличие ДНК-азы;

-положительная реакция агглютинации со специфической антисывороткой (дополнительный тест).

1.3. Другие коагулазонегативные стафилококки:

-морфология колоний: на CLED и кровяном агаре белые или желтые;

-несоответствие идентификационным критериям S. saprophyticus и S. aureus.

2. Стрептококки

Грамположительные, каталозонегативные кокки, формирующие в мазках цепочки.

2.1. Энтерококки

-морфология колоний: на кровяном агаре -- серовато-белые без признаков гемолиза, с б- или в-гемолизом, на CLED -- желтоватые;

- способность расти в средах с высоким (? 6,5%) содержанием NaCl;

- E. faecium в отличие от E. faecalis ферментирует арабинозу;

- пониженная чувствительность к цефалоспоринам.

2.2. S. agalactiae

- морфология колоний: на кровяном агаре -- голубые или серовато-белые колонии, окруженные узкой зоной в-гемолиза, иногда вызывающие б-гемолиз или негемолитические; на CLED -- мелкие, бесцветные колонии, иногда становящиеся заметными через 48 ч после посева;

- положительная реакция агглютинации со специфической антисывороткой к

стрептококкам группы В или положительный CAMP-тест;

- чувствительность к цефалоспоринам

2.3. Другие в-гемолитические стрептококки

- морфология колоний: на кровяном агаре -- в-гемолиз, на CLED плохо растут;

- положительная реакция агглютинации со специфическими антисыворотками к соответствующим группам стрептококков .

2.4. б-стрептококки

- морфология колоний: на кровяном агаре -- б-гемолиз, на CLED не растут или формируют мелкие колонии;

- зона задержки роста оптохином не превышает 14 мм.

3. Lactobacillus spp.

Грамположительные, каталазонегативные палочки с типичной морфологией

- морфология колоний: на кровяном агаре -- б-гемолиз, на CLED не растут или формируют мелкие колонии, иногда ферментирующие лактозу (пожелтение среды);

- отсутствие каталазы.

4. Bacillus spp.

- культуральные свойства: на кровяном агаре формируют крупные сухие гемолитические колонии, сходные с колониями энтеробактерий и псевдомонад; морфология бактерий: крупные грамположительные палочки правильной формы, иногда содержат споры;

- наличие каталазы;

- наличие/отсутствие оксидазы.

1. Corynebacterium urealyticum

- культуральные свойства: на кровяном агаре растут медленно, формируя мелкие блестящие колонии;

- наличие каталазы;

- наличие уреазы;

- резистентны ко многим антимикробным препаратам.

6. «Дифтероидные» палочки

- культуральные свойства: на CLED растут плохо;

- морфология бактерий: часто конические, в мазках образуют скопления в форме буквы V или частокола;

- наличие каталазы.

Перечисленные критерии не исключают, что отвечающий им изолят не является листерией.

Грамотрицательные бактерии

1. Энтеробактерии

Грамотрицательные, оксидазонегативные палочки, ферментирующие глюкозу, растущие на среде МакКонки.

A. Энтеробактерии, ферментирующие лактозу (в средах CLED или МакКонки)

- индольный тест на кровяном агаре: положительный результат дает E. coli, отрицательный -- другие энтеробактерии;

- наличие в-глюкуронидазы (определяют биохимическими тестами или в хромогенных средах типа Uriselect) подтверждает принадлежность изолята к E. coli;

- для дифференциации неэшерихиозных энтеробактерий проводят тест Фогес-Проскауера: положительный результат дают бактерии родов Klebsiella и Enterobacter, отрицательный -- другие энтеробактерии;

Б. Энтеробактерии, не ферментирующие лактозу (в средах CLED или МакКонки)

- при наличие феномена роения на кровяном агаре проводят только индольный тест: положительный результат дает Proteus vulgaris, отрицательный -- Proteus mirabilis;

- при отсутствии феномена роения на кровяном агаре проводят тесты Фогес-Проскауера, ONPG и индольный:

- изоляты, давшие отрицательный результат в тесте Фогес-Проскауера и положительный - в индольном тесте и ONPG, идентифицируют как E. coli (дополнительным подтверждением этого служит наличие в-глюкуронидазы);

- изоляты, давшие отрицательный результат в тестах Фогес-Проскауера и ONPG, идентифицируют на основании дополнительных биохимических исследований.

2. Неферментирующие глюкозу грамотрицательные палочки

- культуральные свойства: хороший рост на агаре МакКонки;

- наличие оксидазы, отсутствие способности ферментировать глюкозу.

Идентифицируют до рода/вида только изоляты Pseudomonas aeruginosa, Stenotrophomonas maltophilia и Acinetobater. Остальные изоляты данной группы обозначают как «грамотрицательные палочки, не относящиеся к сем. Enterobacteriaceae».

2.1. Pseudomonas aeruginosa

- культуральные свойства: способна расти при 42°С, колонии и среда окрашиваются в зелено-синий цвет и издают характерный запах (земляники, жасмина), часто проявляет феномен радужного лизиса;

- наличие оксидазы;

- наличие аргинин-дигидролазы;

- отсутствие лизин-декарбоксилазы (тест проводят с положительным и отрицательным контролями).

2.2. Stenotrophomonas (Pseudomonas) maltophilia

- особенности роста на питательных средах: колонии формируются в течение 2 дней, при росте на кровяном агаре издают запах аммиака;

- отсутствие оксидазы;

- наличие ДНК-азы;

2.3. Acinetobacter spp.

- культуральные свойства: формируют выпуклые, круглые, гладкие, слизистые, полупрозрачные или мутные, непигментированные колонии; на кровяном агаре через 48 ч после посева может проявляться гемолиз;

- морфология бактерий: кокковидные палочки.

- отсутствие оксидазы;

- отсутствие ДНК-азы.



Заключение

Изучив литературу и различные методики по бактериологическому исследованию мочи я сделала вывод, что можно определить ,что этот анализ имеет достаточное количество преимуществ такие как высокая специфичность метода и возможность исследовать любую биологическую жидкость и некоторые недостатки.

Пробы мочи имеют высокую диагностическую ценность, но не являются полностью универсальными, поэтому их результаты следует интерпретировать с учетом клинической картины и объективных данных. Однако простота и оперативность проведения анализов мочи позволяет применять их очень широко, в том числе для скрининговых обследований больших групп людей.

Бактериологическое исследование мочи позволяет определить количество бактерий в моче, тем самым, выявив заболевание мочевыводящих путей, так же посев мочи показывает чувствительность выявленных бактерий к антибиотикам.

Так же при изучении и сравнении питательных сред можно сказать, что во все микробиологических лабораториях пользуются тремя основными группами сред:

- Универсальные;

- Селективные;

- Дифференциально-диагностические.

Эти группы сред наиболее эффективны при исследовании.

При написании курсовой работы для себя можно сделать вывод, что микробиологическая лаборатория является неотъемлемой частью медицины.



Библиографический список

1.ГОСТ Р ИСО 15189-2006. Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности.

2. Набер К., Бишоп M., Бперклунд-Иохансеи Т. и соавт. Рекомендации по ведению больных с инфекциями почек, мочевых путей и мужских половых органов. Смоленск. 2008г.

3. МУК 4.2.189004. Определение чувствительности микроорганизмов к антибак- териальным препаратам.

4. Приказ Минздрава СССР от 22.04.1985 от 535 Об унификации микробиологи- ческих (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико- диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений.

5. Методики клинических лабораторных исследовании: Справочное пособие. Том 3. Клиническая микробиология. Бактериологические исследования. Миколо- гические исследования. Паразитологические исследования. Инфекционная иммунодиагностика. Молекулярные исследования в диагностике инфекцион- ных заболеваний / Под ред. В. В. Меньшикова. М.: Лабора. 2009.

6. ГОСТ Р 53079.4-2008. Технологии лабораторные медицинские. Обеспечение качества клинических лабораторных исследовании. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа.7. МУ 4.2.2039-05 Техника сбора и транспортировки биоматериалов в микробио- логические лаборатории.

Размещено на Allbest.ru

...