Пошук пасток оксида азота в ряду S-заміщених хіназоліну і оцінка їх нейропротекторної дії

Размещено на http://www.allbest.ru/

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРАЇНИ

ОДЕСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ

ПОШУК ПАСТОК ОКСИДУ АЗОТУ В РЯДУ S-ЗАМІЩЕНИХ ХІНАЗОЛІНУ ТА ОЦІНКА ЇХ НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЇ ДІЇ

14.03.05 - фармакологія

АВТОРЕФЕРАТ

дисертації на здобуття наукового ступеня

кандидата біологічних наук

МОРГУНЦОВА СВІТЛАНА АНДРІЇВНА

Одеса - 2010

АНОТАЦІЯ

Моргунцова С.А. Пошук пасток оксида азота в ряду S-заміщених хіназоліну і оцінка їх нейропротекторної дії. - Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеню кандидата біологічних наук за спеціальністю 14.03.05 - фармакологія. - Одеський державний медичний університет МОЗ України, Одеса, 2010.

Дисертація присвячена дослідженню нейропротективної активності серед 30 нових S-заміщених хіназоліну. У дослідах in vitro та in vivo було виявлено сполуку NC-224 - 2-морфолiн-4-ілхіназолін-4-тіол, яка за силою дії перевищувала активність референс-препаратів. У результаті аналізу «структура-активність» було встановлено, що наявність та сила антиоксидантної та нейропроекторної активності залежить від характеру та положення замісника у хіназоліновому комплексі молекули. Курсове призначення NC-224 дозою 25 мг/кг внутрішньошлунково тваринам з гострим порушенням мозкового кровообігу за типом ішемічного інсульту підвищувало активність супероксиддисмутази, гальмувало накопичення маркерів окислювальної модифікації білка та нітрит-аніону, приводило до збільшення продукції АТФ у головному мозку щурів. Введення NC-224 зменшувало прояви неврологічного дефіциту та загибель нервових клітин сенсомоторної зони кори головного мозку.

Ключові слова: S-заміщені хіназоліну, гостре порушення мозкового кровообігу, антиоксиданти, нейропротекторна дія.

АННОТАЦИЯ

Моргунцова С.А. Поиск ловушек оксида азота в ряду S-замещенных хиназолина и оценка их нейропротекторного действия. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 14.03.05 - фармакология. - Одесский государственный медицинский университет МЗ Украины, Одесса, 2010.

Диссертация посвящена исследованию нейропротекторной активности среди 30 новых 2-[(2-R-хиназолин-4-ил)тио]-1-фенилэтанонов, (2-R-хиназолин-4-илтио)- и ([1,2,4]триазоло[1,5-с]хиназолин-2-илтио)алкилкарбоновых кислот, синтезирован-ных на основе химической модификации 2-R-(3Н)-хиназолин-4-тионов и [1,2,4]три-азоло[1,5-c]хиназолин-2-тиона. В опытах in vitro и in vivo было определено соединение NC-224 - 2-морфолин-4-илхиназолин-4-тиол, которое по силе антиоксидантного и нейропротекторного действия, особенно при индукции избытка NO, превышало активность референс-препаратов. В результате анализа «структура-активность» было доказано, что наличие и сила антиоксидантной и нейропротекторной активности зависит от наличия тильного и морфолинового заместителей в хиназолиновом комплексе молекулы.

Определена эффективная доза NC-224 (25 мг/кг), изучена острая токсичность соединения (2650 мг/кг при внутрижелудочном введении крысам). Соединение NC-224 в условиях нитрозирующего стресса in vitro в гомогенате головного мозга крыс снижало образование маркеров окислительной модификации белка - альдегидфенилгидразонов (АФГ) на 20 %, кетонфенилгидразонов (КФГ) на 37 %, нитротирозина на 42 %, повышало активность митохондриальной супероксид-дисмутазы на 28 %, концентрацию восстановленного глутатиона на 76 % и уменшало содержание его окисленной формы на 60 %.

Введение NC-224 (25 мг/кг) животным с экспериментальным нарушением мозгового кровообращения приводило к снижению летальности, уменьшению неврологических нарушений по шкале P.С. McGrow. По силе нейропротекторного действия NC-224 превосходило референс-препараты - N-нитроаргинин (100 мг/кг) и тиотриазолин (50 мг/кг). Полученные результаты демонстрируют преимущество скавенджеров оксида азота перед ингибиторами NO-синтаз в качестве нейропротекторов.

Показано, что нейропротекторное действие NC-224, как ловушки оксида азота заключается в нормализации энергетического обмена в зоне пенумбры за счет снижения токсического влияния дериватов оксида азота на митохондрии. Введение соединения NC-224 приводило к повышению содержания аденозинтрифосфатаз - на 201,81 %, изоцитрата - на 228,57 %, малата - на 292,86 %, снижению лактата - на 138,35 %, повышению активности сукцинатдегидрогеназы - на 221,65 %, цитохром-С-оксидазы - на 287,00 % по сравнению с контрольными значениями. NC-224 ограничивало интенсивность оксидативного стресса в головном мозге экспериметальных животных (уровень АФГ снижался на 53,34 %, КФГ - 49,88 %) на фоне повышения активности антиоксидантных ферментов - супероксиддисмутазы - на 252,55 %, каталазы - на 177,77 %.

Назначение NC-224 экспериментальным животным приводило к восстановлению тиол-дисульфидного равновесия, что подтверждается увеличением уровня восстановленного глутатиона на 42 %, повышением активности глутатионредуктазы на 65 % и глутатионпероксидазы на 49 % по сравнению со значениеями контрольной группы.

NC-224, будучи эффективным тиольным скавенджером оксида азота, демонстрирует нейропротекторное действие в острый период церебральной ишемии, ограничивая активность нитрозирующего стресса. Механизм действия NC-224 связан как с восстановлением тиол-дисульфидного равновесия, так и с ограничением гиперпродукции оксида азота. Следует отметить такой важный момент в действии NC-224, как модуляция экспрессии изоэнзимов NOS в условиях церебральной ишемии. Соединение NC-224, начиная с 1-х суток ишемии, снижало экспрессию индуцибельной и нейрональной форм NOS в нейронах сенсомоторной зоны коры, которые непосредственно принимают участие в развитии нитрозирующего стресса и нейродеструкции. Паралельно со снижением экспрессии указанных форм, наблюдалось повышение экспрессии eNOS, которая участвует в механизмах долгосрочной адаптации к ишемии.

NC-224, как эффективный тиольный скавенджер избытка оксида азота, проявляет значительную нейропротекторную активность в острый период церебральной ишемии за счет нормализации тиол-дисульфидного равновесия, снижения гиперпродукции оксида азота и уменьшения его деструктивного действия на нейроны.

Ключевые слова: S-замещенные хиназолина, острое нарушение мозгового кровообращения, антиоксиданты, нейропротекторное действие.

хіназолін антиоксидантний нейрон ішемія

SUMMARY

Morguntsova S.A. Search of nitric oxide traps in the S- replaced quinazoline series and evaluation of their neuroprotective activity.- The manucript.

Thesis for taking the scientific degree of the Кandidate of Biology in the speciality 14.03.05.- Pharmacology. - Odessa State Medical University, Ministry of Public Health of Ukraine, Odessa, 2010.

The thesis deals with the investigation of the neuroprotective activity of 30 new S-replaced quinazoline. In in vivo and in vitro tests NC-224 - 2-morpholin-4-ylquinazoline-4-thiol compound was found, which exceeded the the reference-preparation activity by strength of action. It was determined by “structure-activity” analysis, that the the antioxidant and neuroprotective activity and its strength depend upon the character and position of the substitute in quinazoline complex of the molecule. Course prescription of NC-224 in the dosage of 25 mg/kg by intragastric introduction to animals with acute cerebral circulation disorder of ischemic insult type increased the activity of superoxide dismutase, inhibited the accumulation of markers of protein oxidative modification and nitrite-anion, caused the rise of ATP production in the cerebrum of rats. Introduction of NC-224 disorder decreased manifestations of neurological deficiency and nerve cell loss of cerebral cortex sensomotor zone.

Key words: S-replaced quinazoline, acute cerebral circulation disorder, antioxidants, neuroprotective activity.

1. ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність теми. В останні роки відзначається поширення судинних захворювань головного мозку, зокрема гострих порушень мозкового кровообігу. У більшості країн інсульт посідає 2-3 місце в структурі загальної смертності населення [Гусев Е. И., 2003; Черний В. И., 2007]. Інсульт виходить на перше місце як причина стійкої втрати працездатності. У світлі сучасних уявлень про патогенез ішемічного пошкодження мозку головними його ланками є: дисфункція мітохондрій та енергетичний дефіцит, трансміттерний аутокоїдоз, шокове відкриття кальцієвих каналів, підвищене утворення активних форм кисню (АФК) у нетипових реакціях мітохондрій, підвищення активності NO-синтази і гіперпродукція оксиду азоту (NO), розвиток нітрозуючого стресу [Болдырев А.А. , 2003; Григорова И.А. , 2006; Кандыба Д.В., 2007; Кобылина О.В., 2008; Соловьев А.И., 2009; Губський Ю. І., 2010].

Не зважаючи на досить великий арсенал нейропротективних засобів (антагоністи NMDA-рецепторів, блокатори кальцієвих каналів, нейропептиди вазодилітатори, антиоксиданти та ін.), їх клінічне застосування при церебральному інсульті не завжди є успішним [Rothwell P. M., 2004; Віничук С. М., 2004; Бутылин А. А., 2007]. Вивчення ролі нітрозуючого стресу в ішемічному пошкодженні головного мозку підвищило зацікавленість фармакологів до модуляторів системи оксиду азоту. Показано нейропротективну дію блокаторів NO-синтази (N-нітро-аргінін, 7-нітроіндазол, 1-(2-флюорометилфеніл)-імідазол) [Скворцова В. И., 2003]. Вже встановлено, що при призначенні тіольних антиоксидантів - скавенджерів оксиду азоту (тіотриазолін, б-ліпоєва кислота, ацетилцистеїн) в умовах терапії мозкового інсульту спостерігається позитивний ефект [Черний В.И., 2007; Бєленічев І. Ф., 2009]. Тіольні антиоксиданти здатні підвищувати біодоступність оксиду азоту, зв'язуючи його цитотоксичні деривати та нормалізувати показники тіол-дисульфідної системи, зв'язаної з NO [Одинак М.М., 2005; Кузнєцова С.М., 2006; Гусев Е.И., 2007; Кругликова М.А., 2007, Беленичев И.Ф., 2010]. Дані характеристики дозволяють вважати тіольні антиоксиданти перспективними засобами вторинної нейропротекції [Chapman C. A., 2002].

Багатьма дослідженнями показана висока антиоксидантна, протиішемічна та нейропротективна активність серед N-заміщених хіназоліну [Мазур І. А., 2006; Коваленко С. І., 1992-2009; Бєленічев І. Ф., 1992-2009; Степанюк Г. І., 2007-2009; Губський Ю. І., 2002-2009; Чекман І. С., 2009; Левицький Є. Л., 2002-2009, Мамчур В. Й, 2010]. Отримані дані про антиоксидантну активність 4-тіохіназоліну [Бєленічев І. Ф., 2007; Коваленко С.І., 2009]. У зв'язку з цим обґрунтованим і перспективним є пошук високоефективних нейропротекторів з антиоксидантним механізмом дії серед нових похідних S-заміщених хіназоліну.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота виконана як фрагмент планової науково-дослідної роботи МОЗ України кафедри фармакології і медичної рeцeптури Запорізького державного медичного університету (ЗДМУ): «Вивчення механізмів нейропротекторної активності і її взаємозв'язку з параметрами молекулярної будови в ряду похідних N- та S-заміщених азогетероциклів у дослідах in vitro та в умовах моделювання ішемічних пошкоджень головного мозку» (№ державної реєстрації 0107U005112). Дисертант є співвиконавцем даної теми.

Мета і задачі дослідження. Мета роботи - на основі експериментальних досліджень виявити серед нових S-заміщених хіназоліну сполуку з найбільшою антиоксидантною активністю та оцінити її нейропротекторну дію.

Для досягнення зазначеної мети були поставлені такі задачі:

1. Провести скринінгові дослідження антиоксидантної активності в систeмах ініціювання активних форм кисню і оксиду азоту in viro серед 30 нових похідних S-заміщених хіназоліну. Виявити можливу закономірність «структура-активність».

2. Сполуку, яка проявляє найбільшу антиоксидантну активність в системі ініціювання оксиду азоту і за силою дії перевищує відомі референс-препарати (тіотриазолін, мeтіонін, ацетилцистeїн), вивчити в умовах модeлювання цeрeбральної ішeмії.

3. Оцінити дію найбільш активної сполуки на виживання і ступінь неврологічних порушень порівняно з тіотриазоліном і N-нітроаргініном у тварин з експериментальною церебральною ішемією.

4. Вивчити дію найбільш активної сполуки на показники енергетичного обміну порівняно з референс-препаратами у головному мозку тварин з експериментальною церебральною ішемією.

5. Вивчити вплив найбільш активної сполуки на показники оксидативного, нітрозуючого стресу і антиоксидантної системи порівняно з референс-препаратами у головному мозку тварин з експериментальною церебральною ішемією.

6. Оцінити вплив найбільш активної сполуки порівняно з референс-препаратами на морфофункціональні характеристики нейронів сенсомоторної зони кори головного мозку тварин з експериментальною церебральною ішемією.

Об'єкт дослідженння: фармакотeрапія гострого порушення мозкового кровообігу.

Предмет дослідження: особливості та виявленість нейропротективної дії нових S-заміщених хіназоліну у експерименті.

Методи дослідження: фармакологічні, токсикологічні, біохімічні, гістоімунохімічні, гістоморфометричні, статистичні.

Наукова новизна отриманих результатів. Вперше одержано дані про антиоксидантну активність 30 нових S-заміщених хіназоліну на різних моделях ініціювання оксиду азоту і активних форм кисню in vitro. Визначено, що 2-морфолін-4-іл-хіназолон-4-тіол (NC-224) у дослідженнях in vitro (ферментативне, неферментативне ініціювання вільнорадикального окислення, інгібування супероксидрадикалу, оксиду азоту, гальмування окислювальної модифікації білку в умовах оксидативного та нітрозуючого стресу) за виявленням антиоксидантної дії, особливо в умовах ініціювання оксиду азоту, перевищує референс-препарати (тіотриазолін, ацетилцистеїн, метіонін). Вперше на моделі церебральної ішемії вивчена нейропротекторна активність сполуки NC-224 та встановлено її перевагу перед тіотриазоліном і N-нітроаргініном. Доведено, що механізм нейропротекторної дії NC-224 полягає у зменшенні деструктивної дії нітрозуючого стресу (зниження нітротирозину, експресії і активності NO-синтази, збільшення вмісту відновленого глутатіону) і зниженні загибелі нейронів in vitro при дії токсичних концентрацій оксиду азоту і при моделюванні церебральної ішемії.

Практичне значення отриманих результатів. В результаті проведених досліджень виявлена сполука NC-224, яка проявляє виражену антиоксидантну та нейропротекторну активність, що перевищує по силі дії відомі референс-препарати (тіотриазолін, нітроаргінін). В результаті аналізу «структура - дія» були означені головні функціональні групи і структурні фрагменти молекули, які визначають наявність та силу антиоксидантної активності сполук при ініціюванні активних форм кисню і азоту in vitro. На основі експериментальних досліджень обгрунтовано доцільність подальшого вивчення нової сполуки NC-224 як потенційного нейропротектора в умовах гострого порушення мозкового кровообігу. Результати досліджень можуть слугувати експериментальним обґрунтуванням щодо оптимізації пошуку нових нейропротекторів в ряду похідних S-заміщених хіназоліну та доказом доцільності цілеспрямованого синтезу сполук даного класу, як потенційних засобів фармакокорекції в умовах ішемічного інсульту.

Результати досліджень запроваджено у навчальну та наукову роботу кафедри фармакології і медичної рецептури ЗДМУ, кафедри фармакології, клінічної фармакології та фармакоекономіки Дніпропетровської державної медичної академії, кафедри фармакології та клінічної фармакології Національного медичного університету ім. О. О. Богомольця та в науково-дослідну роботу відділу фармакології Новосибірського інституту органічної хімії ім. М. М. Ворожцова СВ РАН.

Особистий внесок здобувача. Дисертантом самостійно здійснений патентно-інформаційний пошук, аналіз наукової літератури з цієї тематики, визначені мета та завдання дослідження, освоєна та відтворена модель церебральної ішемії. Самостійно проведений пошук сполук з антиоксидантною активністю in vitro серед 30 нових похідних хіназоліну, синтезованих на кафедрі фармацевтичної хімії Запорізького державного медичного університету. Дисертант самостійно провів всі біохімічні дослідження з вивчення показників оксидативного і нітрозуючого стресу, антиоксидантної системи, енергетичного метаболізму головного мозку, дослідження гострої токсичності NC-224, неврологічного статусу тварин з церебральною ішемією, гістоморфометричні характеристики нейронів сенсомоторної зони кори. Самостійно проведена статистична обробка отриманих даних, узагальнені і проаналізовані результати дослідження, сформульовані висновки.

Гістоімунохімічні методи дослідження проведені за консультативної допомоги начальника ЦНДЛ д.м.н., професора А. В. Абрамова, за що автор роботи щиро вдячна.

Апробація роботи. Результати дисертаційної роботи доповідались на XІV Російському національному конгресі «Человек и лекарство» (Москва, 2007), XV Російському національному конгресі «Человек и лекарство» (Москва, 2008), XV міжнародній конференції і дискусійному науковому клубі «Нові інформаційні технології в медицині, біології, фармакології і екології» (Гурзуф, 2008), VІ міжнародній науковій конференції студентів і молодих вчених «Сьогодення та майбутнє медицини» (Вінниця, 2009), міжнародній науковій конференції студентів і молодих вчених «Молодь - медицині майбутнього» (Одеса, 2009), ІІ міжнародній науковій конференції «Сучасні проблеми біології, екології та хімії» (Запоріжжя, 2009).

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 13 наукових робіт, з них 6 статей у фахових виданнях, рекомендованих ВАК України, 1 патент України, 6 тез.

Структура та обсяг дисертації. Дисертація викладена на 180 сторінках комп'ютерного тексту і складається зі вступу, огляду літератури, розділу «Матеріали та методи дослідження», двох розділів власних досліджень, аналізу та узагальнення результатів досліджень, висновків та списку літературних джерел, який містить 347 найменувань (з них 265 - кирилицею, 82 - латиницею). Робота проілюстрована 4 рисунками та 33 таблицями.

2. ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

Матеріали та методи досліджень. Експериментальна частина виконана на 485 статевозрілих білих нелінійних щурах обох статей масою 170-220г. Тварин отримано з віварію Інституту фармакології і токсикології НАМН України. Тварини знаходилися на стандартному раціоні харчування, в умовах природної зміни дня та ночі. Всі експериментальні процедури здійснювалися відповідно до Методичних рекомендацій Державного фармакологічного центру МОЗ України [Стефанов О. В., 2001], вимог Європейської конвенції із захисту хребетних тварин (Страсбург, 1986) та відповідно до вимог Комісії з питань біоетики ЗДМУ (протокол №15 від 15.10. 2009 р.).

Робота виконана на базі Центральної науково-дослідної лабораторії Запорізького державного медичного університету (начальник ЦНДЛ - д.м.н., професор А. В. Абрамов) та на кафедрі фармакології і медичної рецептури (завідувач - д.б.н., професор І. Ф. Бєленічев) яка сертифікована Державним фармакологічним центром (ДФЦ) МОЗ України (посвідчення №19 от 29 .01.2009).

Вивчали 30 нових 2-[(2-R-хіназолін-4-іл)тіо]-1-фенілетанонів, (2-R-хіназолін-4-ілтіо)- і ([1,2,4]триазоло[1,5-с]хіназолін-2-ілтіо)алкілкарбонових кислот, отрима-них на основі хімічної модифікації 2-R-(3Н)-хіназолін-4-тіонів і [1,2,4]триазоло[1,5-c]хіназолін-2-тіону. Синтез сполук здійснено на кафедрі фармацевтичної хімії Запорізького державного медичного університету (завідувач кафедри, д.ф.н., проф. І. А. Мазур).

У дослідженнях використовувалися методи оцінки антиоксидантної (АОА) та антирадикальної активності (АРА) сполук в умовах in vitro [Губський Ю. І. та ін., 2002]. АОА сполук при неферментативному ініціюванні ВРО вивчали за ступенем гальмування малонового діальдегіду (МДА) [Клебанов Г. І. та ін., 2002; Губський Ю. І. та ін., 2002]. АОА сполук за інгібуванням нітроген-монооксиду вивчали за ступенем гальмування окиснення аскорбінової кислоти [Губський Ю. І. та ін., 2002]. АОА сполук за інгібуванням супероксидрадикалу вивчали за ступенем гальмування аутоокиснення адреналіну в аденохром [Губський Ю.І. та ін., 2002]. Антиоксидантну активність сполук за інгібуванням окисної модифікації білків (ОМБ), викликаної реактивом Фентона, вивчали за ступенем гальмування утворення 2,4-динітрофенілгідразонів - альдегідних та карбоксильних груп [Halliwel В., 1999]. АОА сполук в умовах «нітрозуючого стресу» вивчали за ступенем гальмування утворення маркерів окислювальної модифікації білка у супернатанті головного мозку білих щурів. Для моделювання нітрозуючого стресу використовували динітрозольний комплекс ферум (ІІ) - цистеїну (DNIC) (100 мкМ) [Ванін А.Ф., 1998]. Нейропротекторну активність сполук in vitro проводили у суспензії нейрональних клітин, в яку попередньо додавали досліджувані сполуки (10-100 мкМ у пробі), потім додавали 500 мкМ DNIC і оцінювали за ступенем зниження клітинної загибелі [Болдирєв О. О., 2000, Бєленічев І.Ф., 2008]. Мітопротективну дію сполук вивчали за здатністю попереджувати відкриття пори при додаванні 500 mkM DNIC та 50 мкМ СаСl₂ [Сагач В.Ф., 2004; Бєленічев І. Ф., 2009].

Як препарати порівняння при вивченні АОА та АРА сполук використовувались: тіотриазолін (виробництво АТ «Галичфарм»), ацетилцистеїн, метіонін (виробництво «Sigma»).

З метою оціки нейропротекторної дії досліджуваних сполук використовували модель незворотньої білатеральної оклюзії загальних сонних артерій, яку виконували під етамінал-натрієвим наркозом (40 мг/кг) [McGrow С. Р., 1977; Стефанов О. В., 2002]. Досліджувані сполуки вводили перорально у вигляді суспензії з Твіном-80 відразу ж після виходу тварин з наркозу один раз на добу, впродовж усього терміну експерименту. Як референс-препарати використовували тіотриазолін (50 мг/кг) та N-нітроаргінін (виробництва «Sigma») (100 мг/кг) Контрольна та псевдооперована групи отримували фізіологічний розчин з Твіном-80 по вище наведеній схемі. Вираженість неврологічного дефіциту визначали за шкалою stroke-index [McGrow С. Р., 1977].

Для оцінки ступеня ішемічного пошкодження тканин головного мозку у щурів та ефективності здійсненої фармакологічної корекції проводили біохімічні дослідження тканин. Для цього головний мозок гомогенізували в сольовому ізотонічному розчині. Після відділення ядер незруйнованих клітин методом диференційного центрифугування виділялася цитозольна фракція [Прохорова М. І., 1982].

Для оцінки інтенсивності вільнорадикального окислення (ВРО) в тканинах головного мозку щурів визначали ступінь окислювальної модифікації білка [Halliwel B., 1999] та рівень малонового діальдегіду (МДА) [Андрєєва Л. І., 1988]. Визначали вміст дієнових кон'югатів (ДК), вищих жирних кислот, трієнкетонів (ТК) [Аношина М. Ю., 1994; Камишников В. С., 2003]. Стан антиоксидантної системи вивчалася за показниками активності супероксиддисмутази (СОД) [Чеварі С., 1988], каталази [Королюк М.А., 1988], глутатіонпероксидази (ГПР) [Прохорова М.І., 1982], глутатіонредуктази (ГР) [Асатіані В. С.,1969], глутатіон-S-трансферази [Habig W. H., 1974], вмісту відновленого та окисленого глутатіону [Кулинський В. І., 2005], гомоцистеїну [Cavalca V., 2001].

Визначали рівень нітритів у головному мозку [Горбунов М. В., 1995] та активність NO-синтази [Колесник Ю. М., 2005]. Рівень нітротирозину визначали імуноферментним методом [Johnstone A.P., 1997]. Активність ВВ-креатинфосфокінази (ВВ-КФК) визначали після розділення на сефадексі ДЕАЕ-А-50 за допомогою оптичного тесту Варбурга [Камишников В. С., 2003]. Процеси вуглеводно-енергетичного обміну та окислення в циклі Кребса в тканинах головного мозку оцінювали за рівнем аденілових нуклеотидів (АТФ, АДФ, АМФ) [Захарова Н. Б., 1980], лактату, малату, ізоцитрату [Прохорова М. І., 1982], активністі сукцинатдегідрогенази (СДГ), цитохромоксидази (ЦХО) [Асатіані В. С., 1969].

Визначення гострої токсичності досліджуваних сполук проводили за методом Кербера в модифікації А.О. Лойта і М.Ф. Савченкова, використовуючи класифікацію К. К. Сидорова [Лойт А.О., Савченков М.Ф., 1996].

Для проведення морфометричних та гістоімунохімічних досліджень тканини головного мозку тварин використовували фіксатор Буена та після стандартної гістологічної проводки тканину вміщали у парафін [Пірс Е., 1962].

Для вивчення морфометрії нейонів зрізи фарбували за Л. Ейнарсоном [Пірс Е., 1962]. Морфометричні дослідження проводили на мікроскопі Axioskop (Ziess, Німеччина). Зображення нейронів, отримані на мікроскопі за допомогою високочутливої відеокамери COHU-4922 (COCHU Inc., США), вводили у комп'ютерну програмно-апаратну систему цифрового аналізу зображення VIDAS [Kоlesnik Y. M. et al., 2002].

Інтенсивність експресії індуцибельної (iNOS), ендотеліальної (eNOS), нейрональної (nNOS) NO-синтази досліджували гістоімунохімічно з використанням системи біопероксидази [Ignarro L. G., 1989]. Зображення імунопозитивних клітин, за допомогою високочутливої відеокамери вводили в комп'ютерну програмно-апаратну систему цифрового аналізу зображення VIDAS [Kоlesnik Y. M. et al., 2002].

Статистичну обробку результатів проводили методами математичної статистики. Нормальність розподілу перевіряли з використанням тесту Колмогорова-Смирнова. За умови відповідності нормальності розподілу різниць відносних величин оцінювали з використанням критерію ч². Статистичну обробку даних проводили з використанням параметричного критерію t-Стьюдента, непараметричного критерію Уітні-Манна в рамках програми MS Excell. Також застосовували методи однофакторного дисперсійного аналізу, обґрунтованість проведення якого перевіряли за критеріями W.G. Cochran і R. Bartlett [Ллойд Э., 1989; Hobson P.R., 2007; Corder G.W., Foreman D.I., 2009].

Результати досліджень та їх обговорення. Пошук речовин, які мають властивості «пасток» оксиду азоту і здатні виявляти нейропротекторні властивості, проводили серед 30 нових 2-[(2-R-хіназолін-4-іл)тіо]-1-фенілетанонів, (2-R-хіназолін-4-ілтіо)- і ([1,2,4]триазоло[1,5-с]хіназолін-2-ілтіо)алкілкарбонових кислот (рис.1).

2-R-4(3Н)хіназолінтіони 2-R-4-фенацилтіохіназоліни

(Хіназоліл-4-сульфаніл)алкіл карбонові кислоти

2-метил-(хіназоліл-4-сульфаніл)алкіл-карбонові кислоти

2-R-(хіназоліл-4-сульфаніл)оцтові кислоти [1,2,4]

Триазоло[1,5-с]хіназолін-2-ілсульфанілкарбонові кислоти

Рис. 1. Структурні формули 2-[(2-R-хіназолін-4-іл)тіо]-1-фенілетанонів, (2-R-хіназолін-4-ілтіо)- і ([1,2,4]триазоло[1,5-с]хіназолін-2-ілтіо)алкілкарбонових кислот

Фармакологічний скринінг in vitro виявив наявність АОА серед 30 нових S-заміщених хіназоліну (ферментативне, неферментативне ініціювання ВРО, інгібування активних форм кисню, монооксиду азоту та нітрозуючого стресу) у концентрації 10^-6 М). Найбільшу АОА досліджувані S-заміщені хіназоліну демонстрували у системах ініціювання NO.

Дослідами in vitro була виділена найбільш активна сполука - NC-224 - 2-морфолін-4-іл-хіназолон-4-тіол, яка належить до класу 2-R-4-(3Н)хіназолінтіонів (рис.1). В результаті аналізу «структура - дія» були означені головні функціональні групи і структурні фрагменти молекули, які визначають наявність та силу АОА при ініціюванні активних форм кисню і азоту in vitro - тіольна група, морфолін, тіоацетат, метильна група.

Аналіз «структура - дія» довів, що головними чинниками, які впливають на прояв АОА, є замісники в молекулі хіназоліну, які беззаперечно зумовлюють ряд характерних фізико-хімічних властивостей досліджуваних речовин (константи іонізації, константи комплексоноутворення, ліпофільність, рН-залежна ліпофільність та ін.) та концентрація. Відзначені фізико-хімічні характеристики речовин зумовлюють здатність речовин потрапляти до біологічних мішеней шляхом пасивної дифузії.

За силою дії in vitro сполука NC-224 перевищувала показники АОА препаратів порівняння - тіотриазолін, метіонін і ацетилцистеїн. Найбільший антиоксидантний ефект сполука NC-224 виявляє на моделі нітрозуючого стресу in vitro.

Сполука NC-224 (10^-5М) в умовах нітрозуючого стресу in vitro зменшувала утворення маркерів ОМБ - альдегідфенілгідразонів (АФГ) на 20 %, кетонфенілгідразонів (КФГ) на 37 %, концентрацію нітротирозину на 42 %, підвищувала активність мітохондріальної СОД на 28 %, концентрацію відновленого глутатіону на 76 % та зниження його окисленої форми на 60 %. При цьому у пробах, які містили сполуку NC-224, спостерігалося підвищення активності ферментів тіол-дисульфідної системи - Г-S-Т і ГР на 60 % та 43 % відповідно.

Здатність NC-224 обмежувати NO-опосередковану модифікацію білкових макромолекул, особливо за рахунок S-перетворень, обумовлює його здатність, більш переконливо, ніж тіотриазолін знижувати явища мітохондріальної дисфункції, гальмуючи відкриття мітохондріальної пори та зберігаючи таким чином заряд мітохондрій (рис.2).

Підтвердженням нейропротекторної дії NC-224 in vitro є нижча кількість апоптично змінених нейронів ( більш ніж на 77 %) по відношенню до контрольних зразків, при цьому статистично вірогідно (p?0,05) перевищуючи вказані показники тіотриазоліну на 30 %.

При вивченні гострої токсичності було встановлено, що ЛД₅₀ сполуки NC-224 знаходиться в межах 500-5000 мг/кг, що дозволяє встановити її належність до IV класу токсичності (малотоксичні речовини) за класифікацією К. К Сидорова при внутрішньошлунковому введенні щурам (ЛД₅₀ при внутрішньошлунковому введенні щурам 2650 мг/кг).

Примітка: * - p?0,05 щодо контролю;

** - p?0,05 щодо тіотриазоліну.

Рис. 2. Вплив NC-224 на показники мітохондріальної дисфункції у суспензії нейронів, преінкубованих з DNIC (500 мкМ)

На моделі односторонньої перев'язки загальної сонної артерії було визначено ефективну дозу сполуки. Введення NC-224 у всіх дозах (10,0; 25,0; 50,0; 100,0; 250,0 мг/кг маси тварини) знижувало інтенсивність нітрозуючого стресу та пошкодження мембран нейронів.

Найбільш позитивна дія спостерігалася при введенні NC-224 дозою 25,0 мг/кг маси. Порогова терапевтична доза складає 12,5 мг/кг маси. Оптимальний терапевтичний ефект (ОД₅₀) отримано при введенні сполуки NC-224 дозою 25,5 мг/кг маси тварини. Індекс специфічної терапевтичної дії дорівнює 50,0. «Широта ефективної дії» утворює діапазон від 12,5 до 50,0 мг/кг маси тварини.

Введення внутрішньошлунково сполуки NC-224 (25 мг/кг) протягом усього експерименту тваринам з гострим порушенням мозкового кровообігу (ГПМК) приводило до вірогідного збільшення кількості тварин, які вижили, до 80 % щодо контрольної групи тварин, послаблювало розвиток неврологічного дефіциту (на 3-11 балів за шкалою С. Р. McGrow) (табл. 1).

Введення сполуки NC-224 дозою 25 мг/кг мало вищий нейропротекторний ефект порівняно з препаратами порівняння - N-нітроаргініномом (100 мг/кг) і тіотриазоліном (50 мг/кг).

За ступенем послаблення неврологічного дефіциту у гострий та відновлювальний періоди експериментальної патології сполука NC-224 значно перевищувала препарати порівняня - тіотриазолін, нітроаргінін.

Таблиця 1

Вплив досліджуваних препаратів на виживання і розвиток неврологічного дефіциту у тварин з ГПМК

Групи тварин	Середній бал за шкалою McGrow С. Р.	Кількість тварин, які вижили, %
	4-а доба	18-а доба
Псевдооперовані тварини (інтакт)	0,88±0,11	0,00±0,00	100
Тварини з ГПМК (контроль)	19,7 ± 2,15	7,3 ± 0,77	30
Тварини з ГПМК + NC-224	11,0 ± 1,00*	3,0 ± 0,25*#	80*
Тварини з ГПМК + нітроаргінін	14,0 ± 1,77	6,5 ± 0,85	50
Тварини з ГПМК + тіотриазолін	14,8 ± 2,8	4,6 ± 0,72*	70*

Примітки: * - вірогідність різниці (p<0,05) щодо контрольної групи;

# - р < 0,05 щодо N- нітроаргініну.

Введення NC-224 дозою 25 мг/кг приводило до активації окислювальної продукції енергії у циклі Кребса та дихальному ланцюгу. Рівень АТФ збільшувався порівняно з контрольним значенням на 201,81 %, ізоцитрату на 228,57 %, малату на 292,86 %, рівень лактату знижувався на 138,35 %, підвищувалася активність СДГ на 221,65 %, цитохром-С-оксидази на 287,00 %, зростала АТФ-азна активність. Це свідчить про здатність забезпечувати окислювальну продукцію АТФ в умовах ішемії та її утилізацію.

Введення NC-224 дозою 25 мг/кг приводило до зниження вмісту нітритів у головному мозку на 44,89 % при паралельному зниженні активності NO-синтази на 52,06 %. Введення тіотриазоліну, як тіольного скаведжера оксиду азоту, показувало подібну за спрямуванням, але меншу за силою дію. Призначення тваринам з ГПМК нітроаргініну призводило до значного зниження активності NO-синтази та вмісту нітритів у головному мозку експериментальних тварин.

Встановлено інгібуючий вплив NC-224 на інтенсивність окислювальної модифікації білка у тканинах головного мозку тварин. Це виявлялося у зниженні рівня альдегідфенілгідразонів на 53,34 %, кетонфенілгідразонів на 49,88 %. Сполука NC-224 позитивно впливала на стан ферментів антиоксидантного захисту, підвищуючи їх активність порівняно з показникамии контрольної групи тварин: СОД - на 252,55 %, каталази - 177,77 %.

Доведено позитивну дію сполуки NС-224 на показники ВРО, яка виявлялася у зниженні рівня МДА - на 55,47 %, ДК - на 38,91 %, ТК - на 59,57 %, в тканині головного мозку тварин з гострим порушенням мозкового кровообігу.

Застосування NC-224 при ГПМК демонструвало нейропротекторну дію, спрямовану на збереження морфофункціональних показників нейронів і гліоцитів, зниження їх загибелі. Позитивний вплив NC-224 на функціональну активність нейронів і гліоцитів виявлявся у підвищенні вмісту РНК на 4-у і 18-у добу ішемії. Введення NC-224 приводило до збільшення на 105,30 % щільності нейронів у гострий період та на 121,95 % у відновлювальний період ГПМК.

NC-224 вірогідно підвищувало вміст РНК у клітинах на 4-у та 18-у добу експериментальної ішемії, знижувало кількість деструктивних та апоптичних клітин у корі головного мозку з максимальним проявом ефекту на 18-у добу експерименту - 59,61 %. Частка апоптичних клітин зменшувалася у 2,48 раза.

За силою нейропротекторної дії сполука NC-224 перевищувала показники референс-препаратів - N-нітроаргінін (100 мг/кг) і тіотриазолін (50 мг/кг). Отримані результати дозволяють свідчити про перевагу скавенджерів оксиду азоту перед інгібіторами NO-синтаз у якості препаратів, які слугують для лікування церебральної ішемії та мають нейропротекторні властивості.

Курсове призначення NC-224 (25 мг/кг) тваринам з експериментальною ішемією приводило до відновлення тіол-дисульфідної рівноваги, що підтверджується збільшенням рівня відновленого глутатіону в головному мозку більш ніж на 42 % (p?0,05), з максимальним ефектом на 6-у добу експерименту. Також спостерігалося підвищення активності ГР - на 65 %, ГПР - на 49 % щодо контрольної групи тварин (табл. 2).

Введення сполуки NC-224 приводило до нормалізації активності NOS, зменшенню щільності iNOS і nNOS позитивніх клітин і підвищенню щільності eNOS клітин у сенсомоторній зоні кори, починаючи з 1-ї доби гострої церебральної ішемії.

Таблиця 2

Вплив досліджуваних препаратів на показники тіол-дисульфідної системи головного мозку тварин з ГПМК

Група тварин	Глутатіон відновлений мкм/г	Глутатіон окислений ьмкм/г	ГР, мкм/мг/хв	ГПР, мкм/мг/хв
Псевдооперовані тварини (інтакт)	4,0±0,64	0,14±0,022	13,5±1,6	58,1±1,92
Тварини з ГПМК (контроль)	2,14±0,14&	0,42±0,04&	7,31±0,73&	29,8±1,12&
Тварини з ГПМК + тіотриазолін	3,22±0,17*	0,23±0,16*	12,7±0,43*	44,6±3,0*
Тварини з ГПМК + NC-224	3,72±0,32**	0,16±0,081**	21,2±1,53**	57,9±2,5**

Примітки у табл. 2 -3: 1. & - p?0,05 щодо інтакту;

2. * - p?0,05 щодо контролю;

3. ** - p?0,05 щодо групи, яка отримувала тіотриазолін.

Сполука NC-224 демонструвала здатність значно обмежувати деструктивну дію нітрозуючого стресу, про що свідчить вірогідне зниження нітротирозину в головному мозку, починаючи з 1-ї доби розвитку гострої церебральної ішемії. Тіотриазолін демонстрував подібну дію тільки починаючи з 6-ї доби патології. Таким чином, NC-224, являючись ефективним тіольним скавенджером NО, виявляє переконливу нейропротекторну дію у гострий період церебральної ішемії, обмежуючи активність нітрозуючого стресу.

Виявлений нами механізм дії NC-224 пояснюється здатністю сполуки до відновлення тіол-дисульфідної рівноваги та обмеження гіперпродукції NO. Важливо зазначити такий важливий факт у дії NC-224, як модуляція експресії ізоензимів NOS в умовах церебральної ішемії.

Сполука NC-224 починаючи з 1-ї доби гострої церебральної ішемії, обмежувала експресію iNOS і nNOS, які безпосередньо беруть участь у розвитку нітрозуючого стресу. Паралельно з цим сполука NC-224 підвищувала експресію eNOS, яка бере участь у механізмах довгострокової адаптації до ішемії та нейропротекції. Нейропротекторна дія NC-224 спрямована на зниження загибелі нейронів та підвищення їх функціональної активності (табл. 3).

Таблиця 3

Вплив досліджуваних препаратів на активність NOS, експресію індуцибельної, ендотеліальної, нейрональної NOS, вміст нітротирозину в головному мозку тварин з ГПМК

Група тварин	Щільність iNOS-позитивних клітин	Щільність eNOS- позитивних клітин	Щільність nNOS- позитивних клітин	Нітротирозин нм/г білку	Активність NOS, нм/г/хв
Псевдооперовані тварини (інтакт)	137,6± 27,11	332,5± 18,6	90± 10,5	9,86± 0,73	23,4± 1,73
Тварини з ГПМК (контроль)	299,7± 21,5&	128,5± 17,4&	110,4± 10,6&	37,6± 0,41&	70,6± 3,11
Тварини з ГПМК + тіотриазолін	233,2± 18,5*	220,1± 15*	91± 9,5*	28,4± 0,47*	57,4± 2,10
Тварини з ГПМК + NC-224	166,8± 17,3**	289,4± 13,9**	78,4± 7,5**	22,6± 0,31**	38,4± 1,87**

Нейропротекторну дію тіотриазоліну в умовах експериментальної ішемії можна пояснити наявністю у його хімічні й структурі тіоацетату, який, конкуруючи з SH-групами цистеїнзалежних ділянок клітинних білків за пероксинітрит, створює з останніми стійкі комплекси, що дозволяє деякою мірою обмежувати нейротоксичну дію дериватів оксиду азоту [Чекман І. С., 2008; Мазур І. А., 2009]. Більшу нейропротекторну активність сполуки NC-224 порівняно з тіотриазоліном можна пояснити, на нашу думку, не тільки здатністю звязувати цитотоксичні деривати оксиду азоту, але й обмежувати гіперекспресію індуцибельної NOS.

Отже, отримані результати свідчать про те, що механізм дії NC-224 пов'язаний як з відновленням тіол-дисульфідної рівноваги, так і з обмеженням гіперпродукції оксиду азоту. Нейропроткторна дія сполуки NC-224 - 2-морфолін-4-іл-хіназолон-4-тіола дозою 25 мг/кг при моделюванні ГПМК за типом ішемічного інсульту спрямована на обмеження дії нітрозуючого стресу з нормалізацією усіх ланок, яких торкається дана патологія.

ВИСНОВКИ

У дисертації, наведено теоретичне обґрунтування та нове експериментальне вирішення актуальної проблеми сучасної фармакології, спрямованої на підвищення ефективності фармакотерапії порушень мозкового кровообігу шляхом застосування нового похідного тіохіназоліну NC-224 (2-морфолін-4-іл-хіназолін-4-тіол). Вперше у дослідах in vitro та in vivo встановлено наявність високої нейропротекторної активності з антиоксидантним механізмом дії у NC-224, що експериментально доводить доцільність поглибленого вивчення його фармакологічних властивостей.

1. Похідним тіохіназоліну притаманна антиоксидантна активність, яка в найбільшій мірі проявляється у сполуки NC-224. За величиною антиоксидантної активності (ферментативне, неферментативне ініціювання вільно радикального окислення, інгібування активних форм кисню, монооксиду азоту та нітрозуючого стресу) NC-224 переважає тіотриазолін, метіонін та ацетилцистеїн. Найбільший антиоксидантний ефект сполука NC-224 виявляє на моделі нітрозуючого стресу in vitro.

2. Аналіз взаємозв'язку «структура-дія» серед 30 конденсованих тіохіназоліну показав, що наявність та сила антиоксидантної активності залежить від характеру замісника у хіназоліновому фрагменті молекули. Так, наявність у другому положенні молекули тіохіназоліна морфолінового радикала призводить до підсилення активності.

3. Пероральне введення NC-224 (25 мг/кг, внутрішньошлунково) протягом 4 діб щурам з двобічною оклюзією загальних сонних артерій приводило до вірогідного зниження рівня альдегідфенілгідразонів (на 53,34 %), кетонфенілгідразонів (на 49,88 %), значного підвищення активності супероксиддисмутази (на 252,55 %), підвищення окислювальної продукції аденозинитрифосфату (на 201,80 %), вмісту малату (на 292,86 %), сукцинатдегідрогенази (на 221,65 %) в головному мозку щурів.

4. Введення NC-224 (25 мг/кг, внутрішньошлунково) протягом 18 діб щурам з двобічною оклюзією загальних сонних артерій призводило до вірогідного збільшення кількості тварин, які вижили - до 80 %, зменшення неврологічного дефіциту (зниження на 3-11 балів за шкалою С. Р. McGrow), підвищення щільності нейронів у гострий та відновлювальний періоди (на 105,30 % та 121,95 % відповідно), зниження кількості апоптично та деструктивно змінених нейронів (на 59,61 %) у сенсомоторній зоні кори мозку.

5. Сполука NC-224 знижувала експересію індуцибельної NOS (на 59,07 %), рівень нітротирозину (на 95,92 %), підвищувала активність глутатіонредуктази (на 65,0 %), глутатіонпероксидази (на 49,0 %) та вміст відновленого глутатіону в головному мозку тварин з гострим порушенням мозкового кровообігу (на 42,0 %).

6. За силою нейропротективної дії сполука NC-224, вірогідно, перевищувала тіотриазолін за такими показниками як зниження нітротирозину та експресії iNOS, загибель нейронів, а N-нітроаргінін - за зниженням неврологічних порушень, загибель нейронів, активність супероксиддисмутази та глутатіонпероксидази.

7. Механізм нейропротективної дії NC-224 при експериментальному порушенні мозкового кровообігу, швидше за все, зумовлений здатністю обмежувати деструктивну дію нітрозуючого стресу (зниження нітротирозину, експресії iNOS, підвищення рівня відновленого глутатіону) і відтак, зменшувати загибель нейронів.

ПЕРЕЛІК ОПУБЛІКОВАНИХ РОБІТ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Моргунцова С.А. Вплив похідного тіохіназоліну NC-224 на морфофункціональні характеристики нейронів сенсомоторної зони кори головного мозку у щурів з незворотньою білатеральною оклюзією загальних сонних артерій / С.А. Моргунцова, І.Ф. Бєленічев, А.В Абрамов // Досягнення біології та медицини. - 2009. - № 2(14). - С. 67-70. (Внесок здобувача - аналіз літератури, проведення експериментальних досліджень, статистична обробка, аналіз і узагальнення результатів, підготовка матеріалів до друку).

2. Моргунцова С.А. Влияние NC-224 и тиотриазолина на соотношение систем оксида азота и глутатиона в головном мозге при острой церебральной ишемии / С.А. Моргунцова, И.Ф. Беленичев, С.В. Павлов, Е.Л. Левицкий, Н.В. Бухтиярова // Нейронауки : теоретичні та клінічні аспекти. - 2009. - Т. 5, № 1-2. - С. 103-107. (Внесок здобувача - проведення досліджень, статистична обробка та інтерпретація результатів, написання та оформлення статті).

3. Моргунцова С.А. Антиоксидантна активність S-заміщених хіназоліну в умовах інгібування супероксидрадикала in vitro / С.А. Моргунцова, І.Ф. Бєленічев // Вісник Запорізького національного університету. - 2009. - № 1. - С. 161-165. (Внесок здобувача - огляд літератури,проведення досліджень, статистична обробка та узагальнення результатів, написання статті).

4. Моргунцова С.А. Влияние производного тиохиназолина NC-224, тиотриазолина и нитроаргинина на показатели оксидативного стресса и неврологического статуса животных с экспериментальным нарушением мозгового кровообращения / С.А. Моргунцова, И. Ф. Беленичев // Вісник Луганського національного університету імені Тараса Шевченка. - 2009. - № 24(187). - С. 45-51. (Внесок здобувача - підбір та аналіз літератури, виконання експерименту, статистична обробка та описання результатів, оформлення статті).

5. Моргунцова С.А. Вплив похідного тіохіназоліну NC-224, тіотриазоліну і N-w-нітро-L-аргініну на вміст продуктів окислювальної модифікації білка у головному мозку щурів з експериментальними порушеннями мозкового кровообігу / С.А. Моргунцова // Актуальні питання біології, екології та хімії : електронне наукове видання / Запорізький національний університет. - 2009. - № 2. - С. 85-90. - http://sites.znu.edu.ua/bio-eco-chem-sci/. (Внесок здобувача- аналіз та підбір літератури, проведення досліджень, обробка результатів, написання статті).

6. Моргунцова С.А. Вплив S-заміщених хіназоліну на показники окислювальної модифікації білка in vitro за умов токсичної дії активних форм NО / С.А. Моргунцова // Медична хімія. - 2009. - Т. 11, № 4. - С. 29-33. (Внесок здобувача - аналіз джерел літератури, виконання досліджень, статистична обробка та інтерпретація результатів, написання і оформлення статті).

7. Пат. 40918 Україна, МПК С07D 235/00. ([1,2,4]триазоло[1,5-c]хіназолін-2-ілсульфаніл)карбонові кислоти, що проявляють антирадикальну, антиоксидантну, гепатопротекторну та протигрибкову активність / Антипенко Л.М., Коваленко С.І., Карпенко О.В., Бєлєнічев I.Ф., Моргунцова С.А. - № u200814448 ; заявл. 15.12.08 ; опубл. 27.04.09, Бюл. № 8. (Внесок здобувача- дослідження активності синтезованих сполук, статистична обробка результатів, участь у написанні патенту).

8. Моргунцова С.А. Исследование антиоксидантных свойств производных S-замещенных хиназолина по ингибированию пероксинитрита / С.А. Моргунцова, И.Ф. Беленичев, С.И. Коваленко // Человек и лекарство : XV Рос. нац. конгресс, 14-18 апр. 2008 г., Москва : тезисы. докл. - Москва, 2008. - С. 670. (Внесок здобувача - огляд літературних джерел, проведення досліджень, оцінка та аналіз результатів, оформлення до друку).

9. Моргунцова С.А. Поиск веществ модуляторов оксида азота в ряду S-замещенных хиназолина и 1,2,4-триазола и оценка их нейропротективного действия / И.Ф. Беленичев, С.А. Моргунцова, С.И. Коваленко, Н.В. Бухтиярова // Новые информ. технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии : XVІ междунар. конф., 31 мая - 9 июня 2008, г. Гурзуф : тезисы докл. - Гурзуф, 2008. - С. 100 - 102. (Внесок здобувача - огляд літературних джерел, проведення досліджень та статистичної обробки та аналізу, підготовка матеріалу до друку).

10. Моргунцова С.А. Дослідження антиоксидантної активності S-заміщених хіназоліну в умовах токсичної дії активних форм NO / С.А. Моргунцова, І.Ф. Бєленічев // Сьогодення та майбутнє медицини : VІ міжнар. наук. конф. студентів та молодих вчених, 9-10 квітня 2009 р., Вінниця : тези. доп. - Вінниця : ВНМУ, 2009. - С. 195-196. (Внесок здобувача - огляд літературних джерел, проведення досліджень та статистичної обробки та аналізу, оформлення до друку).

11. Моргунцова С.А. Дослідження S-заміщених хіназоліну та оцінка їх нейропротекторної дії / С.А. Моргунцова // Молодь медицині майбутнього : міжнар. наук. конф. студентів та молодих вчених, 23-24 квіт. 2009 р., Одеса : тези. доп. - Одеса : ОДМУ, 2009. - С. 84. (Внесок здобувача - огляд літературних джерел, проведення досліджень та статистичної обробки і аналізу, написання тез).

12. Моргунцова С.А. Влияние S-замещенных хиназолина на окислительную модификацию белка in vitro / С.А. Моргунцова, И.Ф. Беленичев, С. И. Коваленко // Человек и лекарство : XVІ Рос. нац. конгресс, 6-10 апр. 2009 г., Москва : тезисы докл. - Москва, 2009. - С. 548. (Внесок здобувача - огляд літературних джерел, проведення досліджень та статистичної обробки та аналізу,редагування та оформлення до друку).

13. Моргунцова С.А. Поиск веществ, обладающих нейропротекторным эффектом при моделировании острого нарушения мозгового кровообращения / С.А. Моргунцова // Сучасні проблеми біології, екології та хімії : ІІ міжнар. конф., 1-3 жовтня 2009 р., Запоріжжя : тези. доп. - Запоріжжя : ЗНУ, 2009. - С. 126-128. (Внесок здобувача - огляд літературних джерел, проведення досліджень та статистичної обробки та аналізу, оформлення до друку).

Размещено на Allbest.ru

...