Деятельность службы клинической лабораторной диагностики

Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство здравоохранения РФ

Волгоградский государственный медицинский университет

Кафедра клинической лабораторной диагностики с курсом клинической лабораторной диагностики ФУВ

ДНЕВНИК

биохимической практики

2014 - 2015 учебный год

Студентки 4 курса 1 группы МБФ

Бусаровой Кристины

Вузовский руководитель: Загороднева Е.А.

Базовый руководитель: Соснин Д.А.

Волгоград 2015



15.06.15г. Освоение нормативной документации, регламентирующей работу лаборатории в ЛПУ

Нормативно-методические документы регламентирующие режим работы клиники КДЛ - это совокупность законов, нормативно правовых актов Минздрава России и методических документов, территориальных органов управления здравоохранением и собственные документы лаборатории, регламентирующие ее структуру, оснащенность и деятельность, и представляющие собой систему обеспечения качества исследований, выполняемых КДЛ. Хранения и использования документов в текущей деятельности, а также регламентирующих работу службы делопроизводства, ее структуру, функции, штаты, техническое обеспечение .

В настоящее время деятельность службы клинической лабораторной диагностики регламентируется следующими основными нормативными и методическими документами:

1.Постановление Правительства Российской Федерации от 11.09..98 № 1096 “О Программе государственных гарантий обеспечения граждан Российской Федерации бесплатной медицинской помощью” (Собрание Законодательства Российской Федерации).

2.Приказ МЗ РФ № 380 от 25.12.1997 г. “ О состоянии и мерах по совершенствованию лабораторного обеспечения диагностики и лечения пациентов в учреждениях здравоохранения Российской Федерации”.

3.Приказ МЗ РФ № 64 от 21.02.2000 г. “ Об утверждении номенклатуры клинических лабораторных исследований”

Современное развитие фундаментальных и прикладных научных дисциплин значительно расширило круг лабораторных исследований, выполняемых в целях диагностики болезней и контроля за состоянием пациентов, что потребовало существенного пересмотра и дополнения действующей Номенклатуры основных видов анализов, утвержденной Приказом МЗ СССР от 29 декабря 1970 г. N 851.

4.Приказ МЗ РФ № 45 от 07.02.2000 г. «О системе мер по повышению качества клинических лабораторных исследований в учреждениях здравоохранения Российской Федерации»

5.Приказ МЗ РФ № 233 от 05.06.1996 г. “ Об аккредитации клинико-диагностических лабораторий в качестве экспертных”.

6.Приказ МЗ РФ № 60 от 19.02.1996 “О мерах по дальнейшему совершенствованию Федеральной системы внешней оценки качества клинических лабораторных исследований”.

7.Положение о клинико-диагностической лаборатории.

Клинико-диагностическая лаборатория (в дальнейшем - КДЛ) является диагностическим подразделением лечебно-профилактического учреждения (ЛПУ) и создается на правах отделения. Централизованные КДЛ создаются по указанию соответствующих территориальных органов управления здравоохранением для выполнения как различных видов исследований, так и одного их вида: биохимические, иммунологические, цитологические, микробиологические и другие исследования (специализированные лаборатории). Организационная структура и порядок финансирования централизованных КДЛ устанавливается органом управления здравоохранением с учетом выполняемых ими задач и в соответствии с договором об участии лабораторий в осуществлении территориальных медицинских программ. КДЛ, независимо от подчиненности и формы собственности, должна иметь сертификат на избранный вид деятельности. Руководство КДЛ осуществляет заведующий, назначаемый и освобождаемый от должности руководителем учреждения здравоохранения в установленном порядке. Деятельность КДЛ регламентируется соответствующими нормативными документами и настоящим положением. Штаты КДЛ устанавливаются в соответствии с действующими нормативными документами с учетом местных условий или рассчитываются в соответствии с объемом работы. Оснащение КДЛ осуществляется в соответствии с профилем и уровнем лечебно-профилактического учреждения. КДЛ размещается в специально оборудованных помещениях, полностью соответствующих требованиям правил по устройству, эксплуатации и техники безопасности. Нагрузка персонала определяется задачами лаборатории, положением о его функциональных обязанностях, а также расчетными нормами времени на проведение лабораторных исследований. Основными задачами КДЛ являются:

· проведение клинических лабораторных исследований в соответствии с профилем ЛПУ в объеме согласно заявленной номенклатуре исследований при аккредитации КДЛ в соответствии с лицензией ЛПУ.

· внедрение прогрессивных форм работы, новых методов исследований, имеющих высокую аналитическую точность и диагностическую надежность;

· повышение качества лабораторных исследований путем систематического проведения внутрилабораторного контроля качества лабораторных исследований и участия в программе Федеральной системы внешней оценки качества (в дальнейшем - ФСВОК); -оказание консультативной помощи врачам лечебных отделений в выборе наиболее диагностически информативных лабораторных тестов и трактовке данных лабораторного обследования больных; обеспечение клинического персонала, занимающегося сбором биологического материала, детальными инструкциями о правилах взятия, хранения и транспортировки биоматериала, обеспечивающими стабильность образцов и надежность результатов. Ответственность за точное соблюдение этих правил клиническим персоналом несут руководители клинических подразделений;- повышение квалификации персонала лаборатории;

· проведение мероприятий по охране труда персонала, соблюдение техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима в КДЛ;

· ведение учетно-отчетной документации в соответствии с утвержденными формами.

В соответствии с указанными задачами КДЛ осуществляет:

· освоение и внедрение в практику методов клинической лабораторной диагностики, соответствующих профилю и уровню лечебно-профилактического учреждения;

· проведение клинических лабораторных исследований и выдачу по их результатам заключений.

КДЛ имеет право:

· проводить на договорной основе лабораторные исследования для других ЛПУ;

· участвовать в других системах внешней оценки качества клинических лабораторных исследований;

· принимать участие в научных разработках, проводимых с использованием полученных в лаборатории данных (результаты исследований, полученные в лаборатории, являются ее интеллектуальной собственностью и не могут быть использованы без ее согласия).

8.Инструкции по санитарно-противоэпидемическому режиму.

16. 06.15г. Знакомство с клинической базой практики

Виды деятельности ГБУЗ «ВОКГВВ».

Квалифицированная и специализированная лечебная помощь: терапия, хирургия, урология, неврология, психиатрия и психотерапия, реанимация и интенсивная терапия, стоматология, физиотерапия. Сейчас в госпитале 330 коек, 5 отделений - хирургическое, 2-терапевтических, неврологическое, психотерапевтическое. В ГБУЗ «ВОКГВВ» функционирует Волгоградский гериатрический центр. За год в госпитале получают лечение более 7000 ветеранов войны, делается более 500 операций. Виды медицинской помощи.

Диагностика.

Лабораторная (общеклинические, биохимические, гематологические, иммунологические, паразитологические методы исследования), лучевая (рентгенологическая, ультразвуковая), функциональная, эндоскопическая.

Клинико-диагностическая лаборатория.

Зав отделением: Соснин Дмитрий Андреевич

Сотрудники клинико-диагностической лаборатории:

Врач клинико-лабораторной диагностики высшей категории - 1 чел.Врач клинико-лабораторной диагностики второй категории - 2 чел.

Фельдшер-лаборант высшей категории - 2 чел.

Клинический лаборант первой категории - 1 чел.

Санитар клинико-диагностической лаборатории - 2 чел.

Клинико-диагностическая лаборатория проводит пациентам госпиталя ежегодно более 450000 лабораторных тестов по более 80 видам исследований. В клинико-диагностической лаборатории госпиталя работа ведется по направлениям: гематология, биохимия, общеклинические анализы биологических жидкостей, цитология, иммуноферментный анализ.

Работа КДЛ:

1. Гематологические исследования

2. Общеклинические исследования

3. Биохимические исследования

4. Серологические исследования

5. Коагулогические исследования

6. Молекулярно-биологические исследования

7. Микробиологические исследования

8. Токсикологические исследования

Работа с любым биологическим материалом предполагает отношение к нему как к условно зараженному.



17.06.15. Организация контроля качества лабораторных исследований

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации -- ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения».

1. Внутрилабораторный контроль в системе управления качеством клинических лабораторных исследований.

Общие положения

Настоящий стандарт разработан для нормативного обеспечения повседневных внутрилабораторных процедур контроля качества (оперативного контроля качества), направленных на выявление недопустимых случайных и систематических погрешностей на аналитическом этапе клинических лабораторных исследований, выполняемых количественными методами с помощью контрольных материалов.

Контроль качества аналитического этапа клинических лабораторных исследований является неотъемлемой частью системы взаимосвязанных мер по управлению качеством клинических лабораторных исследований.

Контроль качества аналитического этапа клинических лабораторных исследований существует в двух взаимодополняющих формах: внутрилабораторного контроля качества и внешней оценки качества.

Комплексную систему контроля качества клинических лабораторных исследований осуществляют путем:

установления единых требований к аналитическому качеству количественных методов;

ежесерийного выполнения процедур внутрилабораторного контроля качества с использованием контрольных материалов (оперативный контроль качества);

регулярного участия в программах внешней оценки качества.

3. В настоящем стандарте приведены единые требования к аналитическому качеству количественных методов измерения аналитов в биологических жидкостях (приложение А).

2. Общие принципы организации и проведения внутрилабораторного контроля качества в клинико-диагностических лабораториях.

Наличие системы внутрилабораторного контроля качества является необходимым условием получения достоверной аналитической информации.

Проверку наличия системы внутрилабораторного контроля качества в клинико-диагностических лабораториях осуществляют территориальные органы управления здравоохранением.

Внутрилабораторный контроль качества клинических лабораторных исследований выполняется сотрудниками каждой клинико-диагностической лаборатории для поддержания стабильности аналитической системы.

Порядок и технология проведения внутрилабораторного контроля качества измерений лабораторных показателей должны выполняться в соответствии с настоящим стандартом.

Рекомендуется использование лабораторией компьютерных программ для ведения внутрилабораторного контроля качества, разрешенных к использованию в установленном порядке в клинико-диагностических лабораториях Российской Федерации.

Отчеты о выполнении оперативного контроля качества должны оформляться в виде контрольных карт, таблиц, журналов на бумажных или электронных носителях и архивируются на срок не менее трех лет.

3. Правила проведения внутрилабораторного контроля качества количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов

Контрольные материалы

Контрольные материалы должны быть аттестованы, зарегистрированы и разрешены к использованию в установленном порядке федеральным органом исполнительной власти в сфере здравоохранения.

В настоящем стандарте рассматривают правила применения следующих контрольных материалов:

с аттестованными (принятыми, опорными) значениями контролируемых аналитов, которые должны использоваться для оценки прецизионности (воспроизводимости) измерений и расчета относительного смещения (правильности измерений) по результатам измерения аналитов в установочной серии;

аттестованных на наличие аналита и диапазон его значений (нормальный, патологический), которые должны использоваться для оценки прецизионности (контрольные материалы прецизионности).

Примечание -- Уровни исследуемых компонентов в контрольном материале должны соответствовать значениям показателей в нормальном и патологическом диапазонах; за нормальный принимается диапазон значений лабораторного показателя, соответствующий состоянию здоровья обследуемого, за патологический --диапазон, соответствующий состоянию болезни пациента.

В инструкции к контрольному материалу в соответствии с ГОСТ Р ИСО 17025 и ГОСТ Р ИСО 17511 должны быть указаны:

Аттестованное значение аналита и пределы неопределенности аттестованного значения аналита или наличие аналита и диапазон его измерений; перечень аналитов и методы их исследования; матрица контрольного материала; условия его хранения и срок годности и другие характеристики (по ГОСТ Р 53133.3).

4. Использование контрольных материалов.

Внутрилабораторный контроль качества с использованием контрольных материалов должен выполняться в течение достаточно длительного времени с использованием одного и того же контрольного материала (одного пула/лота) -- на протяжении не менее 200 аналитических серий (для гематологических анализаторов -- не менее 40 серий). Количество закупаемого контрольного материала зависит от стабильности, срока годности контрольного материала и числа исследований, подлежащих контролю в данной лаборатории.

Контрольные материалы должны исследоваться так же, как пробы пациентов, то есть в тех же аналитических сериях.

Контрольный материал нельзя использовать в качестве калибровочного материала.

Примечание -- Для экономного использования реконструированного контрольного материала допускается разлить содержимое флакона на аликвоты. Объем аликвот (не менее 0,5 миллилитра) должен помещаться в пробирки или флаконы соответствующей вместимости с герметичными крышками. Материал, из которого изготовлены пробирки, не должен адсорбировать компоненты контрольного материала (кальций, альбумин и др.). Хранение аликвот проводят в соответствии с рекомендациями изготовителя.

Построение контрольных карт.

Выполнение в стадии 2 двадцати измерений лабораторного показателя в контрольных материалах называют установочными сериями измерений, по результатам которых рассчитывают среднеарифметическое значение X, среднеквадратическое отклонение S и контрольные пределы для каждого контрольного материала.

Контрольные карты строят для каждого лабораторного показателя и для каждого контрольного материала, предназначенного для оперативного контроля качества.

Контрольные карты оформляют и архивируют в виде графиков, таблиц в бумажном или электронном виде.

18.06.15г. Научно-теоретические и научно-организационные основы стандартизации лабораторных исследований

Система менеджмента качества -- совокупность организационной структуры, методик, процессов и ресурсов, необходимых для общего руководства качеством. Она предназначена для постоянного улучшения деятельности, для повышения конкурентоспособности организации на отечественном и мировом рынках, определяет конкурентоспособность любой организации, в том числе и выполняющей научно-исследовательскую работу. Правильность и воспроизводимость являются основными характеристиками любого количественного биомедицинского теста. Однако, в терминологи иимеются некоторые расхождения в определениях по сравнению с классической метрологией.

Правильность или достоверность измерений (validity). Это соответствие результата измерения истинному значению. Другими словами правильность - качество измерений, отражающее близость к нулю систематических погрешностей. В биохимических исследованиях, учитывая многокомпонентность биологических матриц, практически это соответствие количественных результатов, полученных при измерении неким референтным методом результатам эталонного метода.

Точность, сходимость, воспроизводимость (reliability) это вероятность того, что при повторных измерениях некоего устойчивого явления, сделанных разными людьми, на разных приборах, в разное время и в разных местах, будет получен один и тот же результат. Воспроизводимость лабораторных показателей устанавливается путем повторных измерений, например, на одном и том же образце сыворотки или ткани, производимых разными специалистами или на разных приборах и в разные дни. Приемлемая для биохимических исследований воспроизводимость обычно составляет 2-5%. Сходимость количественного показателя устанавливается путем повторных измерений биологического образца на одном приборе одномоментно. Очевидно, что отклонения в правильности или достоверности можно объяснить систематической погрешностью, в то время как воспроизводимость отражает вклад случайных погрешностей. Таким образом случайная погрешность приводит к ухудшению воспроизводимости и является причиной аналитической вариабельности. Кроме того, всегда необходимо учитывать, что в биомедицинских исследованиях воспроизводимость зависит от диапазона измеряемых значений. Инструмент может не позволять регистрировать очень низкие или очень высокие значения измеряемого параметра, ограничивая получаемую исследователем информацию.

19.06.15г. Погрешности измерений

Количественной оценкой точности измерений является погрешность измерения - это отклонение результата измерения от истинного значения измеряемой величины. Погрешности или ошибки бывают систематические и случайные. Причинами систематических погрешностей могут являться: несовершенства приборов, неточная установка прибора, смещение шкалы, недостаточной чувствительностью прибора, неучет тепловых, электрических и магнитных полей, давления, влажности и других внешних факторов, влияющих на результат измерений; приближенный характер уравнений и констант, используемых для расчета определяемых величин и т.д. Систематические погрешности остаются постоянными или закономерно изменяющиеся при многократных измерениях одной и той же величины в одних и тех же условиях. Характерной их особенностью является то, что при любом измерении они оказывают влияние на результат измерений всегда в одном направлении, только увеличивая или только уменьшая его. Совершенствование методов измерения, изучение приборов (условий измерения), использование высококачественных материалов -- все это позволяет на практике устранить систематические погрешности настолько, что при обработке результатов наблюдений (измерений) их значением часто пренебрегают. Случайные погрешности вызываются неточностями расчетов (отчетов), которые невольно может допустить любой экспериментатор. Они обусловлены несовершенством наших органов чувств, посредством которых мы получаем сведения о внешнем мире. Кроме того, случайные погрешности вызываются многочисленными трудно учитываемыми кратковременными факторами, каждый из которых приводит к незначительному изменению результатов измерений. Случайные погрешности обнаруживаются путем повторных измерений и подчиняются законам математической статистики. Среди случайных погрешностей различают:

· абсолютную погрешность измерения - отклонение результата измерения от истинного значения, выраженная в единицах измеряемой величины.

· абсолютное значение погрешности - значение погрешности без учета ее знака (модуль погрешности). Необходимо различать термины абсолютная погрешность и абсолютное значение погрешности. Абсолютная погрешность характеризует величину и знак полученной погрешности, но не определяет качество самого измерения.

Чтобы иметь возможность сравнивать качество измерений, используют относительную погрешность. относительную погрешность измерения - погрешность измерения, выраженная отношением абсолютной погрешности измерения к действительному или измеренному значению измеряемой величины.

22.06. - 26.06.15г. Метод сухой химии в клиническом анализе мочи

Клиническое значение.

В настоящее время в клинической лабораторной диагностике, наряду с применением для определения физиологических и патологических компонентов мочи и крови методов «жидкой химии», все шире используются методология «сухой» химии. Они реализуются с применением специальных полосок, реагентные зоны которых содержат сухие реагенты, способные воздействовать на определенные метаболиты биологических жидкостей с изменением окраски индикаторной зоны.

Индикаторные тест-полоски применяются для полуколичественного и количественного определения диагностически значимых компонентов мочи, крови и других биосред. Их использование незаменимо для срочного анализа, выполняемого в присутствии пациента в поликлинике, приёмном отделении, в больничной палате или дома, на месте лечения пациентов.

Широкое применение во всем мире метода сухой химии в клиническом анализе мочи обусловлено:

· простотой аналитической процедуры

· низкой стоимостью анализа

· высокой воспроизводимостью метода

Полифункциональные тест-полоски предназначены для качественного и полуколичественного экспресс-определения: эритроцитов, гемоглобина, глюкозы, кетоновых тел, билирубина, белка, рН, уробилиногена, удельного веса, аскорбиновой кислоты, нитритов и лейкоцитов в моче. Данные полоски дают возможность контролировать уровень вышеперечисленных аналитов (биохимическое исследование мочи в КЛД), подобрать соответствующую диету, а также корректировать ход лечения.

В основе метода лежит:

· цветная реакция - образование окрашенного соединения, пропорционально концентрации аналита

· оценка результата реакции - визуально или с помощью отражательного фотометра

Свет рассеивается волокнами материала тестовой зоны и поглощается молекулами, растворенными в жидкости между волокнами. Коэффициент диффузного отражения света реакционной зоной зависит от содержания поглощающих свет молекул.

Принцип действия поли-теста:

1. Эритроциты и гемоглобин: гемоглобин и миоглобин катализируют реакцию окисления хромогена, содержащегося в тестовой зоне тест-полоски, за счет перекисей органического происхождения. Для эритроцитов и гемоглобина даны отдельные цветовые шкалы. Пятнистое окрашивание или отдельные зеленые точки на сенсорном поле указывают на наличие интактных эритроцитов. Присутствие гемоглобина, гемолизированных эритроцитов и миоглобина в моче указывает равномерное зеленое окрашивание реакционной зоны.

Шкала определяемых значений:0,0; 5-10; 25; 50; >=250 эри/мкл.

2. Глюкоза: в основе метода определения глюкозы лежит специфическая ферментативная реакция окисления глюкозы до глюконовой кислоты и перекиси водорода. Под действием последней в присутствии фермента пероксидазы происходит окисление хромогена и образование окрашенного соединения. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию глюкозы в исследуемых образцах мочи. результаты показаний не зависят от значения рН, относительной плотности и наличия кетоновых тел.

Шкала определяемых значений: 0,0; 2,8; 5,6; 14,0; 28,0; >=56,0 ммоль/л.

3. Кетоновые тела: в основе метода определения кетоновых тел лежит серия последовательных химических реакций между кетоновыми телами, нитроферроцианидом натрия и диамином, в результате которых происходит образование окрашенного соединения. Интенсивность окраски, полученная в ходе химической реакции, определяется степенью взаимодействия нитроферроцианида натрия и диамина с кетоновыми телами и пропорциональна содержанию кетоновых тел в моче.

Шкала определяемых значений: 0,0; 0,5; 1,5;4,0; 8,0; >=16,0 ммоль/л.

4. Билирубин: метод определения основан на образовании комплекса соли диазония с билирубином. Даже незначительное окрашивание сенсорной зоны теста свидетельствует о положительном патологическом результате.

Шкала определяемых значений: 0,0; 9,0; 17,0;>=50,0мкмоль/л.

5. Белок (альбумин): в основе метода определения лежит метод химических рН индикаторов. В зависимости от количества белка в моче изменяется константа диссоциации, а, соответственно, и интенсивность окраски. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка в моче. Тест высокочувствителен к наличию альбумина, реагируя на его присутствие в моче уже в концентрации от 0,1-0,15 г/л. На определение белка не влияет величина рН мочи, но в экстремально щелочной моче (с рН>8.0) или в моче с исключительно высокой буферной емкостью, полоски индикаторные могут давать ложнопложительные реакции при отсутствии белка. Ложноположительные результаты может давать моча пациентов, принимавших хининовые препараты или лекарства на базе производных хинолина.

Шкала определяемых значений: 0,0; 0,3; 1,0; 3,0; >=10,0 г/л.

6. Кислотность (рН): сенсорная зона содержит рН индикаторы - метиловый красный и бромтимоловый синий. В зависимости от значений рН мочи изменяется окраска рН индикаторов. У здоровых людей в свежесобранной моче значение рН чаще всего составляет от 5 до 6.

Шкала определяемых значений: 5,0; 6,0; 6,5; 7,0; 7,5;8,0; 9,0 ед.

7. Уробилиноген: определение основано на реакции уробилиногена с р-диметиламинобензальдегидом с образованием окрашенного комплекса красного цвета. В норме возможно или отсутствие изменения окраски сенсорной зоны или ее образование, свидетельствующее о наличии уробилиногена менее 1,0 мг/дл.

Шкала определяемых значений: 3,5; 17,5; 35,0; 70,0; 140,0; >=210,0 мкмоль/л. контроль качество иммуноглобулин лабораторный

8. Удельный вес (относительная плотность): тест основан на определении концентрации ионов в моче и хорошо коррелирует с рефрактометрическим методом при значении рН мочи 6,5ед. В присутствии катионов ионы водорода высвобождаются из комплексонов, что приходит к образованию окрашенного комплекса. Для правильного определения плотности при значениях рН мочи выше 7,0 ед. к полученному значению плотности необходимо прибавить коэффициент 0,005. При наличии в моче белка от 1,0 до 5,0 г/л или при кетоацидозе наблюдается тенденция к увеличению относительной плотности. Повышение относительной плотности вследствие повышения концентрации глюкозы свыше 1000мг/дл не определяется.

Шкала определяемых значений:1,000; 1,005; 1,015; 1,020; 1,025; 1,030.

9. Нитриты: определение основано на специфической для нитрита реакции по Гиссу. Реакция выявляет нитриты, что косвенно указывает на наличие бактерий в моче. Окраска реакционной зоны изменяется от бледно-розового до ярко-розового цвета. Появление незначительной розовой окраски зоны теста свидетельствует на существенную бактериурию. Длительная задержка мочи (4-8ч.) существенна для получения более точного результата анализа. исследование на нитриты желательно проводить спустя 10 часов после последнего употребления витамина С. За 3-4 дня до проведения анализа следует прекратить прием антибиотиков и химиотерапевтических лекарственных препаратов.

10. Лейкоциты: реакция основана на определении эстераз, находящихся в гранулоцитах. Эстеразы разлагают реагент, субструктура которого вступает в реакцию с солью диазония, что приводит к образованию окрашенного соединения. Изменение цвета сенсорной зоны при концентрации 15 лейкоцитов/мкл трудно однозначно оценить через 60секунд, но, как правило, это изменение легко определяется через 120 секунд. Наличие бактерий, трихомонад и эритроцитов в моче не оказывает влияние на реакцию. Наличие формальдегида и выраженной окраски мочи (вследствие присутствия билирубина или нитрофуранов) возможно более интенсивное окрашивание сенсорной зоны теста из-за наложения цветов. Шкала определяемых значений: 0,0; 15,0; 70,0; 125,0; 500,0 лейкоцитов/мкл.



Проведение определения.

Использовать только свежую нецентрифугированную мочу. Перед проведение анализа мочу тщательно перемешать. Для сбора мочи использовать только чистую посуду.

1. Открыть пенал, извлечь тест-полоску, пенал немедленно плотно закрыть крышкой.

2. Сенсорные зоны полоски полностью погрузить в мочу.

3. Через 2-3 секунды извлечь полоску и удалить избыток жидкости на сенсорных зонах осторожным прикосновение ребра полоски к сухой чистой фильтровальной бумаге на 2-3 секунды. Тест-полоску положить на ровную сухую поверхность сенсорными зонами вверх (вставить в соответствующее место анализатора мочи).

4. Визуальную оценку результатов биохимического анализа проводить через 60 секунд после погружения сенсорных зон тест-полоски в мочу, сравнивая интенсивность окраски каждой сенсорной зоны с соответствующей цветовой шкалой на этикетке упаковки при хорошем освещении (на анализаторе мочи результаты анализа выдает сам прибор).

29.06 - 1.07.15г. Методика количественного определения простата-специфического антигена в сыворотке крови с использованием ДС-ИФА-ПСА общий тест-системы иммуноферментной

Клиническое значение.

ПСА - гликопротеин, Mr=33 кДа, относится к калликреиновому семейству сериновых протеаз. Продуцируется эпителиальными клетками простаты, присутствует в семенной жидкости, а так же в сыворотке кроив и моче. Основная форма содержания ПСА в крови - комплексы с ингибиторами протеаз, доля свободного ПСА очень мала. Вместе они составляют общий ПСА.

Показатели содержания ПСА общего в сыворотке крови мужчин следующие:

Возраст, гг	Нормальная концентрация, нг/мл
40-49	<2,5
50-59	< 3,5
60-69	< 4,5
70-79	< 6,5

Повышение уровня общего ПСА свидетельствует о патологиях предстательной железы. Определение соотношения ПСА свободного к ПСА общему служит для разграничения доброкачественных и злокачественных новообразований простаты. < 10% - высокая доля вероятности злокачественной опухоли, > 25% рак простаты маловероятен, для доброкачественных новообразований характерно увеличение общего ПСА 4,0-10,0 нг/мл.

Принцип действия «сэндвич» - варианта твердофазного ИФА

Для реализации использованы два моноклональных антитела с разной специфичностью к двум доменам молекулы ПСА: первые антитела иммобилизированы на твердой фазе, вторые (меченные пероксидазой хрена) входят в состав конъюгата. В лунках планшета во время инкубации происходит одновременное связывание содержащегося в исследуемом образце ПСА с антителами, иммобилизированными на твердой фазе, и антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена.

Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству общего ПСА в образце сыворотки крови.

Во время инкубации с ТМБ-субстратным раствором происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству общего ПСА в образце сыворотки крови. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация общего ПСА в исследуемых образцах.

Используемые реагенты.

Иммуносорбент - планшет с иммобилизированными на дне лунок МА к общему ПСА.

Конъюгат - МА к общему ПСА, конъюгированные с пероксидазой хрена.

Калибровочные пробы 0, 1, 2, 3, 4, 5.

Контрольная сыворотка - сыворотка с известным содержанием ПСА.

ПР - промывочный раствор.

ТМБ - субстратный раствор, тетраметилбензидил.

Стоп - реагент - сильная кислота.

Характеристика метода.

Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая концентрация общего ПСА в сыворотке крови человека не превышает 0,1 нг/мл.

Специфичность. Оба МА демонстрируют эквимолярное взаимодействие, как со свободным ПСА, так и с ПСА-АХТ комплексом. Нет перекрестной реакции МА с калликреинуII человека.

Линейность. Зависимость концентрации общего ПСА имеет линейный характер в диапазоне концентраций калибровочных проб.

Точность. Проверяется тестом на «открытие» ПСА - соответствие измеренной концентрации общего ПСА, предписанной в пробе, полученной путем смешивания разных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы №1.

Коэффициент вариации результатов определения общего ПСА в одном и том же образце с использованием набора не превышает 8%.

Оборудование и материалы, используемые при осуществлении методики:

1. Спектрофотометр вертикального сканирования

2. Термостатируемый шейкер

3. Вошер

4. Термостат для инкубации

5. Дозаторы пипеточные полуавтоматические одноканальные с наконечниками

6. Дозатор пипеточный полуавтоматический восьмиканальный

7. Вода дистиллированная

8. Перчатки резиновые

Проведение анализа.

1. Внести по 25 мкл калибраторов и контрольной сыворотки в двух повторах, по 25 мкл исследуемых сывороток в двух повторах.

2. Внести по 100 мкл конъюгата во все лунки, кроме лунок с контролем ТМБ-сустратного раствора.

3. Встряхнуть.

4. Инкубировать в течение 30 минут в термошейкере при температуре 37°С.

5. Загрузить планшет в вошер, промыть 5 раз.

6. Внести по 100 мкл ТМБ-субстратного раствора во все лунки.

7. Инкубировать 20 минут, в темноте.

8. Внести по 150 мкл стоп-реагента.

9. Встряхнуть.

10. Загрузить планшет в ридер, произвести измерение оптической плотности при используемой длине волны 450 нм.

11. Вычислить концентрации, используя калибровочную кривую и измеренные оптические плотности.

A		С3	1	5	9	13
B		С3	1	5	9	13
C	С0	С4	2	6	10	14
D	С0	С4	2	6	10	14
E	С1	С5	3	7	11
F	С1	С5	3	7	11
G	С2	Q	4	8	12
H	С2	Q	4	8	12

2.07 - 3.07.15г. Определение общего иммуноглобулина класса E (IgE)

Клиническое значение.

Общий иммуноглобулин Е (IgE) считается лабораторным маркером атопических заболеваний (атопической астмы, дерматита и риноконъюнктивита). Атопический (IgE-зависимый) механизм может также лежать в основе гастроэнтероколита, крапивницы, других форм васкулитов (в том числе системных), холецистита, вульвовагинита и цистита. Часть лекарственной аллергии (преимущественно на пенициллины и белковые препараты) также развивается по IgE-зависимому механизму. При всех вышеперечисленных состояниях выработка высоких титров специфических антител класса IgE может приводить к повышению уровня общего IgE в сыворотке. Особенно высокий уровень общего IgE характерен для атопического дерматита. Кроме атопических заболеваний, общий IgE сыворотки крови значительно повышается при паразитарных инвазиях и микозах (особенно системных), редко - при системных аутоиммунных заболеваниях и иммунодефицитных состояниях (особенно при гипер-IgE синдроме). Снижение уровня общего IgE в сыворотке (ниже 15 МЕ/мл у взрослых) - явление редкое и малоизученное, описано при гипогаммаглобулинемиях, некоторых аутоиммунных заболеваниях, язвенном колите и первичном билиарном циррозе.

Принцип работы набора.

Определение общего иммуноглобулина класса E (IgE) основано на использовании «сэндвич»-варианта твердофазного иммуноферментного анализа. На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизованы мышиные моноклональные антитела к общему IgE человека. В лунках планшета, при добавлении исследуемого образца, происходит связывание общего IgE, содержащегося в исследуемом образце, с антителами на твердой фазе. Образовавшийся комплекс выявляют с помощью конъюгата кроличьих поликлональных антител к IgE человека с пероксидазой хрена. В результате образуется связанный с пластиком «сэндвич», содержащий пероксидазу. Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит окрашивание растворов в лунках. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации общего иммуноглобулина класса E (IgE) в исследуемом образце. Концентрацию общего иммуноглобулина класса E (IgE) в исследуемых образцах определяют по калибровочному графику зависимости оптической плотности от содержания общего иммуноглобулина класса E (IgE) в калибровочных пробах.

Проведение анализа.

1. Поместите в рамку необходимое количество стрипов - исследуемые образцы в 2 повторах и 12 лунок для калибровочных.

2. Внесите во все лунки планшета по 50 мкл ИФА буфера.

3. Внесите в соответствующие лунки в дубликатах по 50 мкл калибровочной пробы и контроль-ной сыворотки. В остальные лунки внесите в дубликатах по 50 мкл исследуемых образцов cыворотки (плазмы) крови. Внесение калибровочных проб, контрольной сыворотки и исследуемых образцов необходимо произвести в течение 5-10 минут

4. Аккуратно перемешайте содержимое планшета круговыми движениями по горизонтальной поверхности, заклейте планшет бумагой для заклеивания планшета. Инкубируйте планшет в течение 30 минут при температуре +37 °C.

5. По окончании инкубации удалите содержимое лунок аспирацией (например, с помощью водоструйного насоса) или декантированием и отмойте лунки 3 раза. При каждой отмывке добавьте во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора, встряхните планшет круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией или декантированием. Задержка при отмывке (замачивание лунок) не требуется. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки жидкости из лунок.

6. Внесите во все лунки по 100 мкл конъюгата.

7. Заклейте планшет бумагой для заклеивания планшета и инкубируйте его в

течение 30 минут при температуре +37 °C.

8. По окончании инкубации удалите содержимое лунок и отмойте лунки 5 раз.

9. Внесите во все лунки по 100 мкл раствора субстрата тетраметилбензидина. Внесение раствора субстрата тетраметилбензидина в лунки необходимо произвести в течение 2-3 мин. Инкубируйте планшет в темноте при комнатной температуре (+18...+25 °С) в течение 10-20 минут в зависимости от степени развития синего окрашивания.

10. Внесите во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и раствор субстрата тетраметилбензидина, по 100 мкл стоп-реагента, при этом содержимое лунок окрашивается в ярко-желтый цвет.

11. Измерьте величину оптической плотности (ОП) содержимого лунок планшета на фотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Измерение ОП содержимого лунок планшета необходимо произвести в течение 15 мин после внесения стоп-реагента. Бланк фотометра выставляйте по воздуху.

12. Постройте в линейных координатах калибровочный график: ось абсцисс (х) - концентрация общего IgE в калибровочных пробах (МЕ/мл), ось ординат (у) - оптическая плотность калибровочных проб (ОП 450 нм). Для алгоритма обсчета (аппроксимации) калибровочного графика используйте интервальный (кусочно-линейный, «от точки к точке») метод.

13. Определите по калибровочному графику содержание общего IgE в исследуемых образцах.

6.07 - 9.07.15г. Определение электролитов в крови

Клиническое значение.

Обмен электролитов - важнейшая составная часть общего метаболизма, направленная на поддержание постоянства внутренней среды организма. Основными катионами организма являются натрий, калий, кальций и магний; анионами - хлориды, бикарбонаты, фосфаты и органические кислоты. В системе СИ концентрация ионов выражается в ммоль/л; ранее это делали в миллиэквивалентах/л.

Среди электролитов особое место занимают ионы, формирующие основную часть внутри- и внеклеточного пула макроэлементов - натрий и калий.

Электролиты:

· отвечают за осмолярность плазмы крови и соответственно транспорт воды между кровеносными сосудами и тканями;

· определяют рН биологических жидкостей;

· участвуют в большинстве метаболи- ческих реакций организма, активируя ферменты;

· обладают множеством других биологических эффектов.

Принцип измерения.

В основе измерения электролитов лежит принцип прямой потенциометрии (ионселективный метод). Метод основан на установлении зависимости потенциала измерительного электрода от концентрации раствора и последующим ее использовании для анализа растворов неизвестной концентрации. Формируется разница электродного потенциала между ионселективным электродом и референсным электродом. Прибор измеряет концентрацию соответствующего иона при помощью расчёта разницы потенциалов.

Проведение анализа.

Ионометрия с использованием ионоселективных электродов (ИСЭ). Этот современный физико-химический метод основан на измерении межэлектродного потенциала, образующегося при контакте с исследуемым раствором калий- (натрий-) селективного электрода и электрода сравнения. Приборы позволяют проводить одновременное определение концентрации нескольких ионов в одной пробе. Ионометрия обладает принципиальными преимуществами перед другими методами:

· определяется ионизированная фракция на фоне общей концентрации элемента

· время установления потенциала ИСЭ составляет секунды, что позволяет ускорить проведение анализа;

· широкий диапазон измерений (от 1 моль/л до 10-6 моль/л), погрешность - около 2%;

· малый объем пробы (0,2-0,3 мл), простота и дешевизна анализа (не требуется дополнительных реагентов);

· измерения можно проводить в непрозрачных, мутных и окрашенных средах.



Натрий-селективные электроды изготавливаются из специального проницаемого для ионов Na⁺ стекла; внутрь заливается электролит с известной активностью ионов натрия и помещается хлорсеребряный электрод сравнения. Срок работы такого электрода измеряется месяцами - годами. В калий-селективных электродах с жидкостной мембраной используется диафрагма, поры которой заполнены раствором проницаемого только для ионов К⁺ активного вещества (ионофора) в органическом растворителе.

Размещено на Allbest.ru

...