Методика количественного определения простата - специфического антигена в сыворотке крови
Показатели содержания общего простатического специфического антигена в сыворотке крови мужчин. Процесс измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика. Использование, сущность иммуносорбента и калибровочных проб.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | реферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 19.09.2015 |
| Размер файла | 13,7 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Методика количественного определения простата-специфического антигена в сыворотке крови
Клиническое значение
ПСА - гликопротеин, Mr=33 кДа, относится к калликреиновому семейству сериновых протеаз. Продуцируется эпителиальными клетками простаты, присутствует в семенной жидкости, а так же в сыворотке кроив и моче. Основная форма содержания ПСА в крови - комплексы с ингибиторами протеаз, доля свободного ПСА очень мала. Вместе они составляют общий ПСА.
Показатели содержания ПСА общего в сыворотке крови мужчин следующие:
|
Возраст, гг |
Нормальная концентрация, нг/мл |
|
|
40-49 |
< 2,5 |
|
|
50-59 |
< 3,5 |
|
|
60-69 |
< 4,5 |
|
|
70-79 |
< 6,5 |
Повышение уровня общего ПСА свидетельствует о патологих предстательной железы. Определение соотношения ПСА свободного к ПСА общему служит для разграничения доброкачественных и злокачественных новообразований простаты. < 10% - высокая доля вероятности злокачественной опухоли, > 25% рак простаты маловероятен, для доброкачественных новообразований характерно увеличение общего ПСА 4,0-10,0 нг/мл.
Определение уровня ПСА общего - диагностика заболевания и контроль эффективности терапии/
Принцип действия «сэндвич» - варианта твердофазного ИФА
Для реализации использованы два моноклональных антитела с разной специфичностью к двум доменам молекулы ПСА: первые антитела иммобилизированы на твердой фазе, вторые (меченные пероксидазой хрена) входят в состав коньюгата. В лунках планшета во время инкубации происходит одновременное связывание содержащегося в исследуемом образце ПСА с антителами, иммобилизированными на твердой фазе, и антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена.
Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству общего ПСА в образце сыворотки крови.
Во время инкубации с ТМБ-субстратным раствором происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству общего ПСА в образце сыворотки крови. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочного графика рассчитывается концентрация общего ПСА в исследуемых образцах.
Используемые реагенты
Иммуносорбент - планшет с иммобилизированными на дне лунок МА к общему ПСА. кровь иммуносорбент антиген сыворотка
Конъюгат - МА к общему ПСА, конъюгированные с пероксидазой хрена.
Калибровочные пробы 0, 1, 2, 3, 4, 5.
Контрольная сыворотка - сыворотка с известным содержанием ПСА.
ПР - промывочный раствор.
ТМБ - субстраный раствор, тетраметилбензидил.
Стоп - реагент - сильная кислота.
Характеристика метода
Чувствительность. Минимальная достоверно определяемая концентрация общего ПСА в сыворотке крови человека не превышает 0,1 нг/мл.
Специфичность. Оба МА демонстрируют эквимолярное взаимодействие, как со свободным ПСА, так и с ПСА-АХТ комплексом. Нет перекрестной реакции МА с калликреину II человека.
Линейность. Зависимость концентрации общего ПСА имеет линейный характер в диапазоне концентраций калибровочных проб.
Точность. Проверяется тестом на «открытие» ПСА - соответствие измеренной концентрации общего ПСА, предписанной в пробе, полученной путем смешивания разных объемов контрольной сыворотки и калибровочной пробы №1.
Коэффициент вариации результатов определения общего ПСА в одном и том же образце с использованием набора не превышает 8%.
Оборудование и материалы, используемые при осуществлении методики:
1) Спектрофотометр вертикального сканирования
2) Термостатируемый шейкер
3) Вошер
4) Термостат для инкубации
5) Дозаторы пипеточные полуавтоматические одноканальные с наконечниками
6) Дозатор пипеточный полуавтоматический восьмиканальный
7) Вода дистилированная
8) Фильтровальная бумага
9) Перчатки резиновые
10) Дезинфицирующий раствор для наконечников
Проведение анализа
1. Внести по 25 мкл калибраторов и контрольной сыворотки в двух повторах, по 25 мкл исследуемых сывороток в двух повторах.
2. Внести по 100 мкл конъюгата во все лунки, кроме лунок с контролем ТМБ-сустратного раствора.
3. Встряхнуть.
4. Инкубировать в течение 30 минут в термошейкере при температуре 37°С.
5. Загрузить планшет в вошер, промыть 5 раз.
6. Внести по 100 мкл ТМБ-субстратного раствора во все лунки.
7. Инкубировать 20 минут, в темноте.
8. Внести по 150 мкл стоп-реагента.
9. Встряхнуть.
10. Загрузить планшет в ридер, произвести измерение оптической плотности при используемой длине волны 450 нм.
11. Вычислить концентрации, используя калибровочную кривую и измеренные оптические плотности.
|
A |
С3 |
1 |
5 |
9 |
13 |
||
|
B |
С3 |
1 |
5 |
9 |
13 |
||
|
C |
С0 |
С4 |
2 |
6 |
10 |
14 |
|
|
D |
С0 |
С4 |
2 |
6 |
10 |
14 |
|
|
E |
С1 |
С5 |
3 |
7 |
11 |
||
|
F |
С1 |
С5 |
3 |
7 |
11 |
||
|
G |
С2 |
Q |
4 |
8 |
12 |
||
|
H |
С2 |
Q |
4 |
8 |
12 |
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Причины дефицита железа в организме. Исследования крови при анемии. Клинические проявления железодефицитной анемии. Определение содержания креатинина в сыворотке крови. Общий белок и белковые фракции. Определение содержания мочевины в сыворотке крови.
дипломная работа [226,6 K], добавлен 10.11.2015Поджелудочная железа и ее роль в обмене веществ. Механизмы нарушения функциональной деятельности поджелудочной железы при панкреатите. Определение билирубина в сыворотке крови у больных панкреатитом. Показатели активности альфа-амилазы в сыворотке крови.
дипломная работа [72,7 K], добавлен 20.02.2016Медико-биологические показатели организма, больных реактивным артритом. Возникновение, развитие реактивного артрита и инфекции вызывающие заболевание. Метод интервальных оценок. Различие показаний уровня CD-антигена между группой женщин и мужчин.
курсовая работа [137,9 K], добавлен 10.08.2010Основные показатели биохимического анализа крови. Гестозы второй половины беременности. Оценка степени их тяжести. Определение и динамика содержания общего белка, мочевины, креатинина, глюкозы, фибриногена и трансаминаз в сыворотке и плазме крови.
дипломная работа [50,5 K], добавлен 10.11.2015Классификация белков - высокомолекулярных органических азотсодержащих соединений, состоящих более чем из 20 видов альфа-аминокислот. Физиологическая функция белков плазмы крови: альбумины, глобулины. Методы определения общего белка в сыворотке крови.
реферат [25,8 K], добавлен 19.01.2011Креатинин и процесс его обмена в организме, его концентрация в крови. Алгоритм проведения исследования содержания креатинина в сыворотке крови на биохимическом анализаторе "ClimaPlus" с использованием биохимических диагностических наборов фирмы "Диакон".
методичка [17,4 M], добавлен 05.02.2011Простата – железисто-мышечный орган мужской половой системы, выполняющий эндокринную функцию. Методы диагностики рака предстательной железы: определение иммунного статуса, пальцевое исследование прямой кишки, выявление простат-специфического антигена.
презентация [253,9 K], добавлен 22.05.2012Эпидемиология, этиология и патогенез острого и хронического пиелонефрита. Изменения биохимических показателей крови, показателей азотистого и белкового обмена. Морфологическое исследование элементов осадка мочи. Определение креатинина в сыворотке крови.
курсовая работа [166,8 K], добавлен 03.11.2015Хронический и острый панкреатит. Активность амилазы, липазы, трипсина. Глюкоза крови при остром и хроническом панкреатитах. Маркеры печеночной недостаточности. Определение активности альфа-амилазы, билирубина в сыворотке крови, гаммаглутаминтрансферазы.
курсовая работа [338,7 K], добавлен 01.12.2014Формирование артериальной гипертензии. Прогрессирование ремоделирования сердца и сосудов, развитие эндотелиальной дисфункции артерий. Оценка содержания ростовых факторов в плазме крови больных. Оценка антигипертензивной активности телмисартана.
статья [137,0 K], добавлен 01.09.2013Исследование роли свободнорадикальных процессов в патогенезе ряда бактериальных инфекционных болезней. Определение содержания церулоплазмина в сыворотке крови у больных рожей в зависимости от периода заболевания и степени тяжести патологического процесса.
статья [15,4 K], добавлен 01.09.2013Несовместимость крови матери и плода как наличие в крови матери антител, направленных против эритроцитарного антигена или несовместимость групп крови по системе АВО матери и ребенка. Основные повреждающие факторы при гемолитической болезни новорожденных.
презентация [846,5 K], добавлен 26.11.2014Особенности распределения глюкозы в крови. Краткая характеристика сути основных современных методов определения глюкозы в крови. Методики усовершенствования процесса измерения уровня глюкозы в крови. Оценка гликемии при диагностике сахарного диабета.
статья [24,8 K], добавлен 08.03.2011Исследование активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови кроликов при однократном введении четыреххлористого углерода и процессе лечения токсических поражений с использованием традиционных и нетрадиционных методов детоксикации организма.
дипломная работа [1,1 M], добавлен 15.07.2012Сущность группы крови и особенности методов ее определения у людей. Классификации группы крови человека — система AB0 и резус-система. Роль агглютиногенов и агглютининов. Использование стандартных сывороток и процесс определение группы крови человека.
лабораторная работа [205,0 K], добавлен 15.05.2012Гиперпролактинемия - повышенное содержание гормона пролактина в сыворотке крови у женщин вне беременности и у мужчин. Виды, распространенность, причины и патогенез ГПРЛ. Биологические эффекты пролактина: клинические проявления, диагностика, лечение.
презентация [2,2 M], добавлен 08.02.2017Анамнез жизни пациента и проведение клинических исследований: анализ крови и мочи, определение уровня гормонов в сыворотке крови, допплерэхокардиография, УЗИ органов мошонки. Постановка диагноза: нарушение формирования пола, двусторонний крипторхизм.
история болезни [18,1 K], добавлен 05.06.2014Выявление антител или компонентов комплемента, фиксированных на поверхности эритроцитов. Типы проб Кумбса. Трактовка результатов прямой пробы Кумбса. Выявление изоантител в сыворотке крови человека. Лекарственная иммунная гемолитическая анемия.
презентация [643,6 K], добавлен 20.11.2014Использование крови с лечебными целями. Первое переливание крови от человека человеку. Показания к переливанию крови, ее компонентов. Типология групп крови. Диагностика ВИЧ-инфекции. Сравнение количества переливаний крови в г. Находка и других городах.
курсовая работа [3,4 M], добавлен 26.10.2015Изучение действия перелитой крови на организм. Показания и противопоказания к переливанию. Понятия о группах крови и резус факторе, способы их определения, проведение проб на индивидуальную и биологическую совместимость. Определение годности флакона.
презентация [2,9 M], добавлен 11.10.2014
