Размещено на http://www.allbest.ru/

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРАЇНИ

Запорізький Державний медичний університет

ФАРМАКОГНОСТИЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ БРАТКІВ САДОВИХ, ФІАЛКИ ФАРМАКОПЕЙНОЇ ЯКОСТІ ТА СТВОРЕННЯ СУБСТАНЦІЙ НА ЇХ ОСНОВІ

15.00.02 - фармацевтична хімія та фармакогнозія

Автореферат

дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата фармацевтичних наук

Мішнєва Катерина Дмитрівна

УДК 615.322:581.192:582.842.2

Запоріжжя - 2009

Дисертацією є рукопис.

Робота виконана на кафедрі ботаніки Національного фармацевтичного університету (м. Харків), Міністерства охорони здоров'я України.

Науковий керівник: доктор фармацевтичних наук, професор Хворост Ольга Павлівна, Національний фармацевтичний університет, професор кафедри ботаніки.

Офіційні опоненти:

доктор фармацевтичних наук, професор Мазулін Олександр Владиленович, Запорізький державний медичний університет, завідувач кафедри фармакогнозії, фармацевтичної хімії і технології ліків ФПО;

доктор фармацевтичних наук, доцент Сур Сергій Володимирович, корпорація «Артеріум», директор з досліджень і розробок.

Захист відбудеться 22.01.2010 р. о 12 годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 17.600.03 при Запорізькому державному медичному університеті за адресою: 69035, м. Запоріжжя, пр. Маяковського, 26.

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Запорізького державного медичного університету (69035, м. Запоріжжя, пр. Маяковського, 26).

Автореферат розісланий 18.12.2009 року.

Вчений секретар

спеціалізованої вченої ради ____________C. О. Васюк

Загальна характеристика роботи

Актуальність теми. Однією з найважливіших задач фармації є створення нових високоефективних лікарських препаратів. Незважаючи на значні досягнення хімії синтетичних препаратів, засоби рослинного походження привертають все більше уваги. Це пояснюється тим, що фітопрепарати, які містять натуральні речовини, не викликають ряду негативних явищ, характерних для синтетичних засобів. Актуальною задачею фармації України є пошук рослин, які можуть стати додатковим джерелом сировини та розширять базу офіцінальних видів рослин в світі зростаючої потреби в рослинній сировині.

В цьому аспекті нашу увагу привернули рослини роду Фіалка, які широко застосовуються як відхаркувальні, муколітичні, протизапальні, сечогінні та жовчогінні засоби.

Траву фіалки триколірної та фіалки польової, під назвою трава фіалки, введено до ряду фармакопей, зокрема Європейської та СРСР ХІ видання.

Трава фіалки триколірної та фіалки польової входить до складу багатьох зборів, біологічно активних добавок «Панкрен», «Бронхін», «Чиста шкіра плюс», ряду гомеопатичних засобів: «Ломіофлюр», «Здорова шкіра» та «Д-гран». На фармацевтичному ринку України не представлені вітчизняні лікарські препарати з цього виду сировини.

Ряд рослин роду широко культивуються як декоративні. Найбільш поширеним видом роду Фіалка, що культивується, є гібрид фіалки триколірної, фіалки жовтої та фіалки алтайської - фіалка Віттрока (братки садові). З 500 сортів братків садових найбільш поширеним на території України є сорт «Вінтерзонне». Дослідження хімічного складу культурних гібридів може сприяти розширенню бази офіцінальної сировини за їх рахунок.

Таким чином, фармакогностичне вивчення трави братків садових сорту «Вінтерзонне» в порівнянні з травою фіалки фармакопейної якості є актуальним.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами, темами. Дисертаційна робота виконана у відповідності з планом науково-дослідних робіт Національного фармацевтичного університету «Фармакогностичне вивчення біологічно-активних речовин (БАР), створення лікарських засобів рослинного походження» (№ держреєстрації 0103U000476) та Проблемної комісії «Фармація» МОЗ і АМН України (Протокол № 54 від 15.10.2008 р.).

Мета і завдання дослідження. Метою роботи було проведення порівняльного фармакогностичного аналізу трави братків садових сорту «Вінтерзонне» як альтернативного виду сировини та трави фіалки фармакопейної якості і створення нових субстанцій на їх основі. Для досягнення поставленої мети необхідно було вирішити наступні завдання:

ь провести дослідження хімічного складу трави братків садових сорту «Вінтерзонне» в порівнянні зі складом трави фіалки;

ь виділити з сировини БАР в індивідуальному стані і встановити їх структуру;

ь провести кількісне визначення основних груп БАР в траві братків садових сорту «Вінтерзонне», траві фіалки та субстанціях, одержаних з них;

ь визначити технологічні параметри сировини та розробити технологію одержання субстанцій; вивчити ознаки анатомічної будови сировини, створити проекти «Методи аналізу «Фіалки трава»» та «Методи аналізу «Екстракт фіалки густий»»;

ь провести дослідження біологічної активності субстанцій, одержаних з трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та трави фіалки.

Об'єкт дослідження. Трава братків садових сорту «Вінтерзонне», трава фіалки фармакопейної якості, одержані субстанції, виділені БАР - полісахариди, фенольні сполуки (похідні простих фенолів, кислоти гідроксибензойної та гідроксикоричної, гідроксикумарини, флавоноїди), сполуки тритерпенової природи, кислоти жирні, амінокислоти, макро- та мікроелементи, кислоти органічні.

Предмет дослідження. Виявлення, виділення БАР з сировини та одержаних субстанцій, встановлення структури фенольних сполук (простих фенолів, похідних кислоти гідроксибензойної та гідроксикоричної, гідроксикумаринів, флавоноїдів), сполук тритерпенової природи, визначення діагностичних ознак анатомічної будови трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та фіалки триколірної, фіалки польової, встановлення кількісного вмісту основних груп БАР, визначення технологічних параметрів сировини, вибір оптимальних умов одержання субстанцій, встановлення їх біологічної активності.

Методи дослідження. Для проведення запланованих досліджень використовували методи аналізу:

1) фізичні (визначення втрати в масі при висушуванні, розчинності, показника заломлення, відносної густини, температури плавлення, питомого обертання);

2) фізико-хімічні (хроматографія на папері та в тонкому шарі сорбенту, спектрофотометрія в ІЧ-, УФ- та видимій областях спектра, спектрофлюориметрія, газорідинна хроматографія, атомно-емісійна спектроскопія);

3) хімічні (проведення якісних реакцій, реакцій ацетилювання, лужного та кислотного гідролізу, лужної деструкції, лактонізації);

4) технологічні (визначення об'ємної маси, питомої ваги, насипної маси, пористості сировини, порозності шару, вільного об'єму шару, плинності сировини, вибір екстрагенту, співвідношення сировина - готовий продукт, часу та температури екстракції);

5) мікроскопічні (вивчення мікропрепаратів з поверхні та поперечних зрізів органів рослин);

6) біологічні (методи in vitro та in vivo);

7) статистичні (математичне планування експерименту, статистична обробка результатів).

Наукова новизна одержаних результатів. Вперше проведено порівняльне фармакогностичне вивчення трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та трави фіалки, встановлено якісний склад та кількісний вміст основних груп БАР в траві братків садових сорту «Вінтерзонне»: вуглеводів, фенольних сполук, в тому числі суми кислот гідроксикоричних, дубильних речовин, а також макро- та мікроелементів, кислот жирних, амінокислот, кислоти аскорбінової та хлорофілів. Вперше одержано ліпофільні фракції трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та трави фіалки, визначено їх числові показники. Вперше з трави братків садових сорту «Вінтерзонне» виділено 23 сполуки, а в траві фіалки вперше ідентифіковано 4 речовини. Визначено технологічні параметри сировини та розроблено оптимальну технологію одержання густих екстрактів з трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та трави фіалки. Вперше проведено стандартизацію сировини, що включає в тому числі траву братків садових, та одержаних субстанцій. Визначено діагностичні ознаки анатомічної будови трави братків садових сорту «Вінтерзонне». Доведено антимікробну, мембраностабілізуючу, сперміцидну дію одержаних субстанцій, а також позитивний вплив на клітинну ланку імунітету.

Новизну проведених досліджень підтверджено патентом України на винахід № 87066 (А61К) «Спосіб одержання комплексу полісахаридів з мембраностабілізуючою та імуномоделюючою дією».

Практичне значення одержаних результатів. На технологію одержання густого екстракту трави фіалки оформлено проект технологічного промислового регламенту. Технологію одержання густого екстракту трави фіалки апробовано в умовах ВАТ «Лубнифарм». За результатами досліджень розроблено проекти «Методи аналізу «Фіалки трава»» та «Методи аналізу «Екстракт фіалки густий»». Дані досліджень хімічного складу трави фіалки та трави братків садових сорту «Вінтерзонне», анатомічної будови сировини впроваджено в навчальний процес кафедр: фармакогнозії Запорізького державного медичного університету; фармакогнозії та ботаніки Тернопільського державного медичного університету ім. Горбачевського І. Я.; фармації Івано-Франківського державного медичного університету; технології біологічно активних сполук, фармації та біотехнології Національного університету «Львівська політехніка»; хімії природних сполук Національного фармацевтичного університету.

Особистий внесок здобувача. Дисертантом самостійно вивчені, проаналізовані та узагальнені дані літератури з питань, що стосуються теми дисертації, виконана експериментальна частина дисертаційної роботи, проведена графічна та статистична обробка одержаних результатів, сформульовані висновки та запропоновані практичні рекомендації. Постановка мети, завдань, обговорення результатів та формулювання висновків проведені з науковим керівником.

Апробація результатів дисертації. Матеріали дисертаційної роботи доповідались на науково-практичній конференції «Фітотерапія в реабілітації хворих» (Київ, 2003), науково-практичному семінарі «Перспективи створення лікарських препаратів різної спрямованості дії» (Харків, 2004), VІ з'їзді фармацевтів України (Харків, 2005), ІІ Міжнародній науково-практичній конференції «Створення, виробництво, стандартизація, фармакоекономіка лікарських засобів та біологічно активних добавок (Харків, 2006), Всеукраїнському конгресі «Сьогодення та майбутнє фармації» (Харків, 2008).

Публікації. За матеріалами дисертації опубліковано 20 робіт, у тому числі 7 статей, з яких 6 у фахових виданнях, 12 тез доповідей та 1 патент на винахід.

Структура та обсяг дисертації. Дисертаційна робота складається з вступу, огляду літератури, 4 розділів власних досліджень, загальних висновків, додатків та списку використаних джерел. Дисертація викладена на 212 сторінках (обсяг основного тексту - 138 сторінок), ілюстрована 13 рисунками та 33 таблицями. Список використаних джерел містить 182 найменування, з яких 65 - іноземні.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ

Представники роду Фіалка - перспективні джерела одержання субстанцій (огляд літератури)

Аналіз літературних даних показав, що за розповсюдженістю на території України, ступенем вивченості хімічного складу найбільш перспективними представниками роду Фіалка для фармакогностичного дослідження є фіалка триколірна, фіалка польова та культивований гібрид фіалки триколірної - братки садові. Трава фіалки триколірної та фіалки польової, під назвою трава фіалки, проявляє багатогранну фармакологічну дію, має широке застосування в офіцінальній і народній медицині як відхаркувальний, діуретичний, протизапальний та протиалергійний засоби. Широта культивування братків садових як декоративної рослини, в особливості сорту «Вінтерзонне», є підставою вважати цю рослину можливим альтернативним джерелом лікарської сировини. Тому, актуальним є порівняльне вивчення хімічного складу трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та трави фіалки з метою створення субстанцій на їх основі.

Обєкти, загальні методи та методики, застосовані в дослідженнях

В якості об'єктів дослідження було обрано траву братків садових сорту «Вінтерзонне» та траву фіалки фармакопейної якості, виділені з них сполуки в індивідуальному стані, а також субстанції, одержані на їх основі. Для проведення досліджень було використано сучасні фізичні, фізико-хімічні, хімічні, технологічні, мікроскопічні, біологічні та статистичні методи аналізу. Визначення кількісного вмісту основних груп БАР проводили на 5 серіях сировини.

Вивчення хімічного складу трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та трави фіалки з виділенням та встановленням структури природних сполук

За допомогою якісних реакцій та хроматографії на папері і в тонкому шарі сорбенту встановлено наявність вільних та зв'язаних вуглеводів, ряду фенольних сполук (кислот гідроксибензойних та гідроксикоричних, кумаринів, флавоноїдів, дубильних речовин), вільних та зв'язаних амінокислот, кислоти аскорбінової та суми кислот органічних, сполук тритерпенової природи, каротиноїдів та хлорофілів в траві братків садових сорту «Вінтерзонне» та траві фіалки. За допомогою методу тривимірної скануючої спектрофлюориметрії встановлено наявність пігментів в траві фіалки та траві братків садових сорту «Вінтерзонне» (див. рис. 1). Проведені дослідження якісного складу трави фіалки та трави братків садових сорту «Вінтерзонне» показали наявність однакових груп БАР. За допомогою адсорбційної колонкової хроматографії та рехроматографії на силікагелі і поліаміді з трави братків садових сорту «Вінтерзонне» виділено 24 сполуки. Використовуючи фізичні, фізико-хімічні та хімічні методи аналізу (в тому числі УФ- та ІЧ-спектроскопію, кислотний гідроліз, лужну деструкцію та ін.) встановлено структуру цих сполук, з яких 1 фенологлікозид, 1 похідне кислоти гідроксибензойної, 3 похідних кислоти гідроксикоричної, 1 гідроксикумарин, 16 похідних флавоноїдної природи та 2 кислоти тритерпенові.

Деякі фізичні властивості виділених речовин наведені в табл.1.

Таблиця 1

Деякі фізичні властивості виділених речовин

Ці ж 24 речовини були ідентифіковані в траві фіалки. З трави братків садових сорту «Вінтерзонне» вперше було виділено 23 речовини, наведені в табл. 1 (окрім рутину). Вперше в траві фіалки ідентифіковано 4 речовини: ціанідин-3-О-глюкозид, мальвідин-3-О-глюкозид, авікулярин та кислоту олеанолову.

Визначення кількісного вмісту основних груп БАР в траві братків садових сорту «Вінтерзонне», траві фіалки та одержаних субстанціях

Для вибору можливих критеріїв стандартизації сировини та субстанцій нами визначено кількісний вміст основних груп природних речовин.

За загальновідомою методикою з трави фіалки та трави братків садових сорту «Вінтерзонне» одержано полісахаридні фракції, а саме водорозчинні полісахариди, пектинові речовини, геміцелюлози та визначено втрату в масі при висушуванні, загальну золу та загальний білок у фракціях за методиками ДФУ І видання. Вихід водорозчинних полісахаридів з трави фіалки та трави братків садових сорту «Вінтерзонне» склав не менше 4,4% та 6,8%, пектинових речовин - не менше 7,3% та 7,9%, геміцелюлози - не менше 3,2% та 4,0% відповідно. Полісахаридні фракції з обох видів сировини характеризувалися значним вмістом загального білка та загальної золи. При вивченні елементного складу одержаних полісахаридних фракцій, було знайдено 13 елементів, серед яких домінуючими за вмістом були калій, кальцій, силіцій та натрій.

Результати визначення кількісного вмісту суми окиснюваних фенолів, суми кислот гідроксикоричних, суми флавоноїдів, дубильних речовин, кислоти аскорбінової та суми кислот органічних наведено в табл. 2.

Таблиця 2

Кількісний вміст БАР в траві фіалки, траві братків садових сорту «Вінтерзонне» та густих екстрактах, одержаних з них (%, m = 5)

ВИСНОВКИ

1. Вперше проведено порівняльний фармакогностичний аналіз трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та трави фіалки фармакопейної якості, доведено перспективність використання трави братків садових сорту «Вінтерзонне» як альтернативного виду сировини, створено нові субстанції на їх основі.

2. Вперше проведено дослідження якісного хімічного складу братків садових сорту «Вінтерзонне» в порівнянні з травою фіалки та ідентифіковані однакові групи БАР. Встановлено наявність вільних та зв'язаних вуглеводів, кислот гідроксибензойних та гідроксикоричних, кумаринів, флавоноїдів, дубильних речовин, кислоти аскорбінової та суми кислот органічних, сполук тритерпенової природи, каротиноїдів та хлорофілів.

3. З трави братків садових сорту «Вінтерзонне» було виділено в індивідуальному стані та встановлено структуру 24 сполук (з яких 23 речовини вперше), в траві фіалки ідентифіковано 24 сполуки (з яких 4 речовини вперше). Встановлено структуру фенологлікозиду - арбутину, похідного кислоти гідроксибензойної - кислоти саліцилової, похідних кислоти гідроксикоричної - кислоти п-кумарової, кислоти кофейної, кислоти хлорогенової, гідроксикумарину - скополетину, флавоноїдів - дельфінідин-3-О-глюкозиду, ціанідин-3-О-глюкозиду, мальвідин-3-О-глікозиду, апігеніну, лютеоліну, цинарозиду, кверцетину, авікулярину, гіперозиду, рутину, міріцетину, міріцитрину, вітексіну, ізовітексину, орієнтину, ізоорієнтину, кислот тритерпенових - кислоти урсолової та кислоти олеанолової.

4. Одержано вуглеводні фракції з трави братків садових сорту «Вінтерзонне» та трави фіалки: водорозчинні полісахариди, пектинові речовини та геміцелюлози. В цих фракціях визначено втрату в масі при висушуванні, загальну золу, загальний білок та вивчено елементний склад, який представлений 13 макро- та мікроелементами.

5. В траві братків садових сорту «Вінтерзонне» та траві фіалки визначено вміст суми окиснюваних фенолів (5,100,20% та 5,550,35% відповідно), суми кислот гідроксикоричних (1,670,06% та 1,930,06% відповідно), суми флавоноїдів (1,640,08% та 2,280,10% відповідно) та дубильних речовин (1,000,08% та 1,190,07% відповідно). В траві фіалки та траві братків садових сорту «Вінтерзонне» визначено кількісний вміст кислоти аскорбінової (0,0580,003% та 0,0670,004% відповідно), суми кислот органічних (1,000,05% та 1,090,06% відповідно). Вміст визначених груп речовин в густих екстрактах з трави фіалки та трави братків садових сорту «Вінтерзонне» був співставний.

6. Вивчено якісний склад та кількісний вміст макро- та мікроелементів в траві фіалки триколірної, фіалки польової та братків садових сорту «Вінтерзонне», густих екстрактів, одержаних з цих видів сировини в порівнянні з грунтом. Встановлено наявність 16 елементів, для більшості з яких їх вміст зменшувався в ряді грунт - трава - екстракт (виняток становили фосфор, калій та кальцій).

7. Проаналізовано амінокислотний склад сировини та густих екстрактів та знайдено не менше 16 амінокислот. В траві фіалки та траві братків садових сорту «Вінтерзонне» за вмістом домінував фенілаланін, в густих екстрактах - кислота глютамінова.

8. Вперше визначено відносну густину, показник заломлення, кислотне, ефірне, йодне числа, число омилення та жирнокислотний склад ліпофільних фракцій трави фіалки та трави братків садових сорту «Вінтерзонне», а також кількісний вміст суми хлорофілів та суми каротиноїдів. Так, вищий вміст суми хлорофілів був характерний для ліпофільної фракції трави фіалки (12,40±0,32%), каротиноїдів - для ліпофільної фракції трави братків садових сорту «Вінтерзонне» (1,95±0,05%).

9. Встановлено технологічні параметри сировини та визначено найкращий екстрагент (вода очищена) за виходом ряду БАР. За методом математичного планування експерименту при використанні комп'ютерної програми «Statgrafics Plus for Windows» обрано оптимальні умови екстракції БАР з сировини: співвідношення сировина - вода очищена - 1:15; час настоювання - 12 год; кратність зливів - 3; температура екстракції - 90oС. На основі цього розроблено оптимальну технологію одержання густого екстракту з трави фіалки.

10. Встановлено діагностичні ознаки анатомічної будови трави братків садових сорту «Вінтерзонне», фіалки триколірної та фіалки польової.

11. Встановлено антимікробну активність, доведено позитивний вплив на клітинний імунітет, виявлено мембраностабілізуючу та сперміцидну дію субстанцій, одержаних з трави фіалки та трави братків садових сорту «Вінтерзонне». Густий екстракт трави фіалки проявив противиразкову, протизапальну (антиексудативну) та діуретичну активність.

12. На підставі проведених досліджень розроблено проект «Методи аналізу «Фіалки трава»», що включає траву фіалки триколірної, фіалки польової та братків садових сорту «Вінтерзонне», а також проект «Методи аналізу «Екстракт фіалки густий»», проект технологічного промислового регламенту одержання густого екстракту трави фіалки. Технологію одержання густого екстракту трави фіалки апробовано в умовах ВАТ «Лубнифарм».

СПИСОК ОПУБЛІКОВАНИХ ПРАЦЬ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Мішнєва К. Д. Визначення кількісного вмісту аскорбінової кислоти та суми органічних кислот в траві деяких представників роду фіалка та екстрактах, отриманих з них / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Актуальні питання фармацевтичної та медичної науки та практики : зб. наук. ст. - Запоріжжя, 2006. - Т. 1, Вип. ХV. - С. 173-176. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці статті).

2. Мішнєва К. Д. Визначення вмісту фенольних сполук в траві та густих екстрактах фіалки та братків садових / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова // Запорож. мед. журн. - 2006. - №1. - С. 159-160. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці статті).

3. Мішнєва К. Д. Дослідження трави фіалки як перспективного виду лікарської сировини / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Медична хімія. - 2006. - Т. 8, № 4. - С. 35-37. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці статті).

4. Мішнєва К. Д. Елементний склад трави та густих екстрактів деяких представників роду Фіалка в порівнянні з грунтом / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Фітотерапія. Часопис. - 2007. - № 2. - С. 69-71. (Дисертант особисто брав участь підготовці проб для аналізу, узагальненні результатів та написанні статті).

5. Мишнева Е. Д. Фармакогностическое изучение анютиных глазок травы / Е. Д. Мишнева, Т. Н. Гонтовая, О. П. Хворост // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. ст. - Пятигорск, 2008. - Вып. 63. - С. 67-68. (Дисертант особисто брав участь підготовці проб для аналізу, узагальненні результатів та написанні статті).

6. Мішнєва К. Д. Дослідження ліпофільних фракцій трави деяких представників роду Фіалка / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Медична хімія. - 2008. - Т. 10, № 3. - С. 79-82. (Дисертант особисто брав участь підготовці проб для аналізу, узагальненні результатів та написанні статті).

7. Мішнєва К. Д. Вибір оптимальних умов технології отримання густого екстракту з трави фіалки / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Укр. журн. клініч. та лаб. медицини. - 2009. - Т. 4, № 1. - С. 29-31. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці статті).

8. Пат. 87066 Україна, (А61К) МПК А61К 36/86, А61К 127/00, А61Р 37/00 Спосіб одержання комплексу полісахаридів з мембраностабілізуючою та імуномоделюючою дією / Мішнєва К. Д., Гонтова Т. М., Хворост О. П.; заявник та патентовласник Національний фармацевтичний університет. - № u 2008 00491 ; заявл. 14.01.08 ; опубл. 10.06.09, Бюл. № 11. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці матеріалів).

9. Мішнєва К. Д. До фармакогностичного вивчення рослин роду Фіалка Viola L. / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова // Фітотерапія в реабілітації хворих : тез. доп. наук.-практ. конф., м. Київ, 14 жовт. 2003 р. - К., 2003. - С. 93-94. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

10. Мішнєва К. Д. Вивчення антимікробної активності трави фіалки / К. Д. Мішнєва, Л. Ф. Сілаєва, Т. М. Гонтова // Створення, виробництво, стандартизація, фармакоекономіка лікарських засобів та біологічно активних добавок : матеріали наук.-практ. конф. з міжнар. участю. - Тернопіль, 2004. - С. 389-390. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

11. Мішнєва К. Д. Перспективи використання препаратів з трави фіалки в лікувальній косметиці / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова // Лікувальна косметика: дійсність та майбутнє: тез. доп. матеріалів наук.-практ. конф., м. Харків, 18 берез. 2005 р. - Х., 2005. - С. 27-28. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

12. Мішнєва К. Д. Порівняльне фармакогностичне вивчення деяких представників роду Фіалка / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Досягнення та перспективи розвитку фармацевтичної галузі України : матеріали VI Нац. з'їзду фармацевтів України, м. Харків, 28-30 верес. 2005 р. - Х., 2005. - С. 752-754. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

13. Мішнєва К. Д. Дослідження жирної олії насіння братків садових / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Створення, виробництво, та стандартизацiя та фармакоекономiчнi дослiдження нових лiкарських засобiв та бiологiчно активних добавок : тез. доп. II мiжнар. наук.-практ. конф., м. Харкiв, 12-13 жовт. 2006 р. - Х., 2006. - С. 63-64. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

14. Мішнєва К. Д. Дослідження рослин роду фіалка з метою створення протиалергійного лікарського засобу / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Гендер. Екологія. Здоровя : тез. доп. І Міжнар. наук.-практ. конф., м. Харків, 23-24 жовт. 2007 р. - Х., 2007. - С. 115-116. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

15. Перспективи створення препаратів на основі вітчизняної рослинної сировини / О. С. Мала, К. Д. Мішнєва, Т. В. Опрошанська, О. П. Хворост. // Клінічна фармація в Україні : тез. доп. VII Всеукр. наук.-практ. конф. з міжнар. участю, м. Харків, 15-16 листоп. 2007 р. - Х., 2007. - С. 70. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

16. Мишнева Е. Д. Исследование анатомического строения растений рода Фиалка / Е. Д. Мишнева, Т. Н. Гонтовая, О. П. Хворост // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения : тез. докл. конф. с междунар. участ., посвящ. 25-летию фармац. фак. ЯГМА, г. Ярославль, 23-24 дек. 2007 г. - Ярославль, 2007. - С. 233-236. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

17. Мішнєва К. Д. Амінокислотний склад трави та густих екстрактів деяких представників роду Фіалка / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова // Актуальнi питання створення нових лiкарських засобiв : матерiали всеукр. наук.-практ. конф. студ. та молодих вчених, м. Харкiв, 16-17 квiт. 2008 р. - Х., 2008.- С. 72. (Дисертант особисто брав участь в проведенні експериментальних досліджень, в узагальненні результатів та підготовці тез доповідей).

18. Мішнєва К. Д. Флавоноїди братків садових / К. Д. Мішнєва, Т. М. Гонтова, О. П. Хворост // Фармакогнозія ХХІ століття. Досягнення та перспективи : тез. доп. ювілейної наук.-практ. конф. з міжнар. участю, присвяч. пам'яті канд. фармац. наук, доц. Михайла Івановича Борисова (до 80-річчя від дня народж.), м. Харкі...