Исследования системы крови у животных

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство Науки и Образования

Республики Казахстан

Алматинский аграрный колледж

РЕФЕРАТ

Тема: Исследования системы крови у животных

г.Алматы 2015 год



Содержание

1. Правила взятия крови у животного

2. Определение СОЭ

3. Определение гемоглобина

4. Общий анализ крови

5. Определение свёртываемости крови

6. Морфология лейкоцитов крови у животных разных видов

7. Лейкограмма крови и ее диагностическая значимость

8. Видовые лейкоцитозы и лейкопении, их клиническая оценка

9. Изменение содержания эозинофилов и базофилов

10. Нейтрофилия и нейтропения

11. Увеличение или уменьшение содержания лимфоцитов и моноцитов

12. Синдромы нарушения лейкопоэза

13. Определение функциональной способности кроветворных органов

Список литературы



К специальным методам исследования крови прибегают в тех случаях, когда необходимо и возможно установить диагноз на уровне изучения морфологических характеристик клеток в мазке или изменения их функциональных свойств под воздействием различных факторов. В первом случае исследования ведут с использованием цитохимических красителей, специфически реагирующих с определенными включениями или компонентами клеток; функциональные свойства клетки определяют как ответ на физико-химические воздействия [6].

1. Правила взятия крови у животного

кровь животное лейкоцит гемоглобин

Условия взятия крови и ее сохранность до начала лабораторных исследований имеют важное значение при получении достоверных результатов. Во многом эти результаты зависят от техники взятия крови и используемых при этой инструментов. В организме различает артериальную, венозную и капиллярную кровь, которая имеет незначительные цитологические и биохимические отличия. Для морфологических исследований пользуются почти исключительно капиллярной кровью, а при биохимических - венозной.

Капиллярную кровь берут из внутренней поверхности ушной раковины. Шерсть на месте взятия крови выстригают, очищают место укола ватным тампоном, смоченным спиртом-эфиром. Укол делают на глубину до 2 мм. Первую каплю крови стирают, т.к. она содержит случайные примеси и лимфу, а последующие берут для исследования. Очень важно, чтобы кровь вытекала из ранки без надавливания на ткани, иначе она смешивается с лимфой и изменяет свой клеточный и биохимический состав. Истечение крови можно ускорить, если предварительно прогревать место укола в теплой воде или источником сухого тепла (фен, электролампа).

При венепункции прокол окружающих вену тканей и стенки вен делают в один прием. Иглы для взятия крови должны быть с коротким срезом и достаточно большим диаметром, чтобы не травмировать противоположную стенку вены и не вызвать повреждения эритроцитов. Предварительно иглы стерилизуют кипячением в 1%-ом растворе бикарбоната натрия, место вкола обрабатывают аналогично получению капиллярной крови.

При взятии крови из яремной вены иглу вкалывают на границе перехода верхней трети шеи в среднюю. Чтобы вызвать достаточное наполнение вены и уменьшать ее подвижность, вену сдавливает в середине шеи резиновым жгутом или пальцем. При проколе вены необходимо держать иглу в руке так, чтобы направление ее совпало с линией хода вены и чтобы срез иглы был направлен вверх, к голове. Иглу вкалывают под острым углом - в 20-30°. При попадании в вену из иглы вытекает кровь.

Кровь должна стекать по стенке пробирки по избежании разрушения эритроцитов и при необходимости немедленно смешиваться с достаточным количеством антикоагулянта.

Перед извлечением иглы из вены резиновый жгут снимают, пережимают вену пальцем выше места вкола, иглу извлекают, а место вкола некоторое время сдавливают тампоном для предотвращения образования гематомы. В заключении область венепункции дезинфицируют настойкой йода и заливают Колодием [3].

В зависимости от характера исследований готовят определенное количество пробирок. Стенки стеклянной посуды способны обмениваться ионами с кровью, а следы моющих средств и поврежденные пробирки влияют на активность, ферментов. Это можно исключить, если использовать пластмассовые, пробирки одноразового пользования; для некоторых исследований стенки стеклянных пробирок покрывают слоем парафина или силиконового масла.

В зависимости от задач исследования анализу подвергают цельную кровь, плазму или сыворотку.

В цельной крови определяют морфологические показатели, а также содержание глюкозы, кетоновых тел, меди, цинка, кобальта, марганца, селена и др., т.е. веществ, равномерно распределенных между плазмой и эритроцитами. Для исследования веществ, неравномерно распределенных между клетками и жидкой частью крови, следует использовать сыворотку или плазму. В сыворотке, например, исследуют общий белок и его фракции, остаточный азот, мочевину, свободные аминокислоты, липиды, холестерин, билирубин, кальций, неорганический фосфор, магний, йод, связанный с белком (СБЙ), каротин, витамины, ферменты и др. В плазме - резервную щелочность, содержание натрия, калия, неорганического фосфора, магния, каротина, витаминов А, С и др.

Для получения пробы цельной крови или плазмы ее стабилизируют, т.е. в пробирку вносят противосвертывающее вещество - антикоагулянт. Антикоагулянты лучше применять в виде растворов.

Для получения сыворотки пробирки с кровью рекомендуется в процессе взятия крови помещать в термостат с температурой до 38°С. При массовых обследованиях животных таким импровизированным термостатом может быть достаточная емкость с водой указанной температуры. После завершения работ по взятию крови, свернувшиеся пробы обводят тонкой спицей из нержавеющей стали для лучшего отделения сыворотки и ставят в термостат при 37-38°С на 1-2 часа для окончательного отделения сыворотки. Сыворотку сливают и центрифугируют 20 минут при 2000-3000 об/мин.

Для получения плазмы кровь с антикоагулянтом центрифугируют 20-30 минут при 2000-3000 об/мин. Плазма крови отличается от сыворотки наличием фибриногена.

Цельную кровь, плазму и сыворотку для непродолжительного хранения помещают в холодильник (+2…+4°С), длительное хранение сыворотки требует температуры - 20°С.

Нарушение условий хранения проб может стать причиной погрешностей анализа. В результате длительного стояния сыворотки, над эритроцитами могут наступить сдвиги в концентрации ряда компонентов: повышается концентрация калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы, понижается содержание глюкозы вследствие гликолитических процессов. При температуре около 20°С в цельной крови возрастает содержание аммиака, многие ферменты даже при температуре холодильника быстро теряют свою активность (креатинкиназа, кислая фосфатаза), в лактатдегидрогеназа, напротив, быстрее теряет активность при низких температурах [3].

Возникший при взятии или хранении гемолиз эритроцитов приводит к повышению концентрации калия, активности кислой фосфатазы, аминотрансфераз, лактатдегидрогеназы, гидроксибутиратдегидрогеназы. Неумелое встряхивание проб при перемешивании их содержимого или при транспортировке также может вызвать гемолиз эритроцитов.

При проведении специальных исследований нужно внимательно следить за выполнением особых, оговоренных в описании методик правил взятия, консервации и хранения проб крови [5].

2. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) - неспецифический лабораторный показатель крови, отражающий соотношение фракций белков плазмы; изменение СОЭ может служить косвенным признаком текущего воспалительного или иного патологического процесса. Проба основывается на способности эритроцитов в лишенной возможности свёртывания крови оседать под действием гравитации. В норме величина СОЭ у собак не превышает 2-5 мм/час, а у кошек - 6-10 мм/час.

Принцип метода заключается в следующем. Удельная масса эритроцитов превышает удельную массу плазмы, поэтому они медленно оседают на дно пробирки. Скорость, с которой происходит оседание эритроцитов, в основном определяется степенью их агрегации, то есть их способностью слипаться вместе. Из-за того, что при образовании агрегатов уменьшается отношение площади поверхности частиц к их объёму, сопротивление агрегатов эритроцитов трению оказывается меньше, чем суммарное сопротивление отдельных эритроцитов, поэтому скорость их оседания увеличивается. Агрегация эритроцитов главным образом зависит от их электрических свойств и белкового состава плазмы крови. В норме эритроциты несут отрицательный заряд и отталкиваются друг от друга. Степень агрегации (а значит и СОЭ) повышается при увеличении концентрации в плазме так называемых белков острой фазы - маркеров воспалительного процесса. В первую очередь - фибриногена, C-реактивного белка, церулоплазмина, иммуноглобулинов и других. Напротив, СОЭ снижается при увеличении концентрации альбуминов.

Определение СОЭ проводят методом Панченкова (в капилляре). В методе Панченкова в качестве антикоагулянта используют цитрат натрия. В капилляр набирают 2,5 мкл цитрата и в тот же капилляр добирают 7,5 мкл крови или в заранее раскапаные пробирки с цитратом добавляют 7,5 мкл крови, кровь с цитратом перемешивают в пробирке, снова набирают в капилляр и устанавливают в специальный штатив на 1 час. По методу Вестергрена (в пробирке).

В градуированный на 100 делений капилляр Панченкова набирают до метки «Р» 5%-ый раствор цитрата натрия и переносят его на часовое стекло. Затем в тот же капилляр набирают дважды кровь до метки «К» и оба раза выдувают её на часовое стекло. Кровь, тщательно перемешанную с цитратом натрия, вновь набирают в капилляр до метки «К». Капилляр ставят в штатив строго вертикально. СОЭ учитывают через 1 час, при необходимости через 24 часа и выражают в миллиметрах.

Более ста лет данный лабораторный тест применяется для количественного определения интенсивности разнообразных воспалительных процессов. Так, чаще всего увеличение СОЭ связано с воспалительными процессами, отравлениями, инфекциями, инвазиями, опухолями, гемобластозами, кровопотерей, травмами, оперативными вмешательствами.

Хотя воспаление и является наиболее частой причиной ускорения оседания эритроцитов, увеличение СОЭ также может обусловливаться и другими, в том числе и не всегда патологическими, состояниями [9].

Несмотря на свою неспецифичность определение СОЭ все еще является одним из наиболее популярных лабораторных тестов для установления факта и интенсивности воспалительного процесса.

3. Определение содержания гемоглобина

Определение содержания гемоглобина в крови животных является одним из самых важных и массовых показателей. Для определения гемоглобина чаще всего анализируют производные гемоглобина, образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к гену различных химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора [3].

Для рутинных лабораторных исследований наиболее предпочтительны колориметрические методы, как наиболее дешевые, простые и

быстрые в исполнении. Кровь животного - это нормальная смесь производных гемоглобина с различными спектрами поглощения. При количественном определении гемоглобина колориметрическими методами возникает проблема в выборе реагента, который превращал бы все производные гемоглобина только в одну форму перед фотометрическим анализом. Лучшими методами, количественно превращающими гемоглобин в его производные, оказались гемиглобинцианидный (HbCN), гемихромный (HbChr) и гемиглобиназидный (HbN3), которые при фотометрировании дают наименьшую ошибку определения среди других методов анализа [1].

Повышение: некоторые формы гемобластозов, в частности эритремия, обезвоживание организма.

Понижение (анемия): различные виды анемий, в том числе вследствие кровопотери.

Принцин гемиглобинцианидного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в одну - гемиглобинцианид. Перевод гемоглобина в гемиглобинцианид осуществляется при его взаимодействии с трансформирующим раствором, содержащим феррицианид калия, цианид калия, дигидрофосфат калия и неионный детергент. Дигидрофосфат калия поддерживает уровень рН, при котором реакция проходит за 3-5 минут. Детергент усиливает гемолиз эритроцитов и предотвращает мутность, связанную с белками плазмы. Феррицианид калия окисляет все формы гемоглобина в метгемоглобин, который образует с цианистым калием гемиглобинцианид, имеющий красноватый цвет, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе.

Принцип гемихромного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в одну - гемихром. При взаимодействии гемоглобина с трансформирующим раствором, содержащим жирные кислоты с феррицианидом калия или додецилсульфат натрия, происходит его превращение в окисленную низкоспиновую форму - гемихром (HbChr), имеющую красноватый цвет, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе.

При широкомасштабных испытаниях гемихромного метода было показано, что в интервале концентраций гемоглобина от 40 до 200 г./л калибровочные графики гемиглобинцианида и гемихрома представляют прямую линию, выходящую из начала координат, а близкие углы наклона прямых указывают на сопоставимость обоих методов.

При определении гемоглобина двумя методами Ахрем А.А. с соавторами показали, что большую точность (и меньшую s) дает гемихромный метод. Авторы предполагают, что SDS способствует солюбилизации мембранных частиц и препятствует адсорбции белка на стекле пробирок и кювет, тем самым обеспечивается высокая точность анализа [7].

Сравнительная оценка результатов определения гемоглобина в крови двумя методами показала, что результаты сопоставимы, а коэффициент корреляции методов составляет 0,99. Таким образом, гемихромный метод определения гемоглобина в крови обладает всеми достоинствами гемиглобинцианидного метода, которые дополняются отсутствием в составе трансформирующего реагента высокотоксичных цианидов и других ядовитых веществ.

Выполнение. В сухие чистые пробирки дозатором внести по 5 мл трансформирующего раствора, к ним прилить по 20 мкл крови поверенной пипеткой Сали или механическим дозатором со всеми предосторожностями, перечисленными в предыдущем разделе. Пробу тщательно перемешать на микровстряхивателе или вручную до достижения гомогенного раствора. Растворы выдержать при комнатной температуре время, указанное в инструкции к набору, и измерить оптическую плотность растворов на поверенном, калиброванном приборе в кювете, имеющей нулевое поглощение дистиллированной воды относительно аналогичной контрольной (с длиной оптического пути 10 мм). Окраска растворов устойчива до 5 час и более, что позволяет проводить измерения в любое удобное время в этом временном интервале. Расчет содержания гемоглобина в крови произвести по калибровочному графику или фактору, определенному на данном приборе. Если соблюдены все перечисленные условия подготовки и проведения анализа, описанные выше, погрешность определения гемоглобина в крови не будет превышать ±2%. Кратко суммируем источники возможных ошибок при определении гемоглобина: использование некалиброванных пипеток и несовершенная техника дозирования проб крови; применение неповеренного оборудования, не обеспечивающего линейную зависимость оптической плотности от концентрации гемоглобина в требуемой области измерений; нестабильность прибора; отсутствие внутрилабораторного контроля качества; недостаточная чистота кювет, особенно проточных; ошибки при построении калибровочных графиков и расчете факторов; использование контрольных растворов гемоглобина низкого качества; ошибки оператора, ошибки, допускаемые на преаналитической фазе [6].

4. Количественные характеристики клеток крови

Определение количества клеток крови проводится различными методами: с помощью счетных камер, в мазках крови (подсчет тромбоцитов на определенное количество эритроцитов), с помощью автоматических устройств. Во всех случаях результаты представляются в виде количества клеток в единице объема крови. По международной системе единиц (СИ) число форменных элементов в крови выражают в расчете на 1 л [2].

Подсчет клеток с помощью счетных камер является наиболее распространенным микроскопическим методом. Он основан на использовании разведенной крови, внесенной в счетную камеру. Все форменные моменты подсчитывается по единому принципу, различие заключается в степени разведения крови и применения, различных по составу разбавителей для эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов.

Использование счетных камер делает метод достаточно трудоемким для лабораторных исследований. На точности метода сказывается ошибки при взятии крови, разбавлении ее, неравномерности заполнения камер, нарушение правил подготовки камер к работе и подсчета клеток. Метод требует большого и постоянного напряжения при работе с микроскопом и особенно утомителен при подсчете эритроцитов и тромбоцитов. В то же время камерный метод может быть применен в любых условиях, не требует сложного оборудования и дефицитных реактивов [8].

Подсчет тромбоцитов в мазках крови объясняется их малыми размерами и недостаточной четкостью контуров при подсчете в счетной камере. Тромбоциты считаются на определенное количество эритроцитов в мазке (чаще на 1000 эритроцитов) с последующим пересчетом на 1 л крови.

Использование фотометрических или кондуктометрических принципов позволило создать автоматические счетчики и гематологические автоматы для лабораторных исследований. Форменные элементы крови либо перекрывают световой луч специального сканирующего микроскопа, либо изменяют сопротивление между электродами капилляра, по которому протекает разбавленная кровь, при этом возникает импульс, регистрируемый счетным устройством [2].

Гематологические счетчики и автоматы значительно повышают производительность труда и точность исследований, позволяют определять параллельно 7-8 параметров. В то же время высокая стоимость таких аппаратов, специальные требования к качеству реактивов, высокая производительность и жесткость программ делают рентабельным их использование лишь в условиях крупных лабораторий и стационаров.

Количество эритроцитов и лейкоцитов в крови здоровых животных колеблется в широких пределах (табл. 1).

Таблица 1. Общий анализ крови

	Гемоглобин %	Эритроциты, млн./мкл	Цветной показатель	Лейкоциты, тыс./мкл	Лейкограмма
					Б	Э	М	Ю	П	С	Л	Мо
Собаки	120 - 180	5,0 - 8,0	0,9 - 1,1	8 - 17	0-1	2-10	-	-	1-3	43-71	12-30	3-10
Кошки	90 - 167	5,2 - 10,9	0,9 - 1,1	4 - 17	0-1	2-12	-	-	3-6	40-45	20-55	1-4
СОЭ собаки 2-5 мм/ч; СОЭ кошки 6-10 мм/ч

Уменьшение числа эритроцитов ниже нормативных показателей является одним из основных лабораторных симптомов малокровия (анемии) [5]. Необходимо отметить, что при анемиях не всегда наблюдается уменьшение количества эритроцитов в крови, т. к. анемия - это уменьшение концентрации гемоглобина в единице объема и, следовательно, при нормальном количестве эритроцитов возможно снижение концентрации в них гемоглобина. Для уточнения характера анемии, кроме анамнеза и клинических данных, необходимы сведения о количестве эритроцитов, концентрации гемоглобина, величине гематокрита, количестве ретикулоцитов, расчетных индексах эритроцитов, морфологии эритроцитов, их объеме и диаметре [8].

Увеличение числа эритроцитов (эритроцитоз, полицитемия) может наблюдаться при уменьшении объема циркулирующей плазмы (гемоконцентрационный, относительный эритроцитоз), а также при активации эритропоэза (абсолютный эритроцитоз) [2].

5. Определение времени свертываемости крови по способу Бюркера

На часовое стекло наносят каплю прокипяченной дистиллированной воды и к ней прибавляют каплю крови, добытую уколом из мякоти пальца (следует взять вторую каплю, так как к первой примешивается тканевая жидкость, замедляющая свертывание). Точно отмечается время взятия крови. Тонкой стеклянной палочкой смешивают обе капли. Затем часовое стекло помещают в чашку Петри, на дне которой лежит кусочек смоченной водой фильтровальной бумаги; чашка Петри играет роль влажной камеры. Лучше всего производить исследование при температуре 25°С. Каждые полминуты к краю капли приставляют тоненький кончик вытянутой в нить стеклянной палочки, продвигают к центру капли и, сделав внутри капли несколько все более увеличивающихся спиральных завитков от центра к периферии, вынимают затем из капли. Каждый раз палочку моют и тщательно вытирают досуха. Началом свертывания считается тот момент, когда вслед за вынутым из крови кончиком стеклянной палочки потянется нить фибрина. В норме это происходит через 5-9 мин после взятия капли крови [4].



6. Морфология лейкоцитов крови у животных разных видов

В зависимости от свойств цитоплазмы и характера зернистости лейкоциты разделяют на гранулоциты (зернистые) -- базофилы, эозинофилы и нейтрофилы, и агранулоциты (незернистые) -- лимфоциты и моноциты.

Базофилы круглой или немного овальной формы, имеют величину 10-14 мкм. У зрелых форм ядро полиморфное, плохо заметное, с неясными очертаниями, окрашено в слабо-фиолетовый цвет с бордовым оттенком или в фиолетовый цвет. Цитоплазма слабо окрашена в розовый или бледно-фиолетовый цвет вследствие выхождения вещества гранул, которые разрушаются при окраске мазка. Гранулы круглой или расплывчатой формы, окрашены в темно- фиолетовый, темно-синий или черный цвет, они обычно разрушены с образованием вакуолей.

Эозинофилы круглой формы, величиной 10-25 мкм. Цитоплазма слабоголубая, содержит розово-красную или ярко-красную зернистость круглой или слегка овальной формы. Характер ядра зависит от степени зрелости клетки: у зрелых форм оно сегментированное, у молодых -- округлое; окрашено в фиолетовый цвет. У лошадей, крупного рогатого скота и свиней ядро чаще состоит из двух сегментов, а у овец, коз и собак -- из трех. Наиболее крупные гранулы у лошадей и собак. У кошек гранулы расположены в цитоплазме зозинофилов очень густо и нередко имеют палочковидную форму неодинаковой величины. При растворении гранул на месте их образуются вакуоли, в раздавленных клетках гранулы лежат свободно, «рассыпавшись».

Нейтрофилы имеют круглую форму, размером 10-15 мкм. По степени зрелости различают миелоциты, юные (метамиелоциты), палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы.

Миелоциты (М) характеризуются неравномерно окрашенным в фиолетовый цвет круглым или овальным ядром, расположенным часто эксцентрически. Цитоплазма окрашена или в бледно-синеватый или розовый цвет, в ней содержится мелкая зернистость розового цвета. В крови здоровых животных не встречаются.

Юные нейтрофилы имеют бобовидные или колбасовидное ядро, неравномерно окрашенное в фиолетовый цвет (светлые участки перемежаются с темными) Цитоплазма розового цвета, иногда плохо прокрашеная, содержит мелкую, нежную зернистость розового цвета. У взрослых здоровых животных в периферической крови они, как правило, не обнаруживаются.

Палочкоядерные нейтрофилы относятся к зрелым формам и у здоровых животных постоянно встречаются в крови. Ядро вытянуто в виде палочки, которая может быть изогнута в виде подковы, дужки, латинской буквы S, на концах булавовидно вздуто, в отдельных местах наблюдаются перехваты, окрашивается неравномерно в темно-фиолетовый цвет. Цитоплазма розового цвета с мелкой розоватой зернистостью (часто плохо видна).

Сегментоядерные нейтрофилы отличаются от палочкоядерных лишь характером ядра, которое состоит из 2--5 сегментов, между которыми имеются перемычки; окрашивается в темно-фиолетовый цвет.

Лимфоциты по величине разделяют на малые (до 10 мкм), средние (10-- 14 мкм) и большие (15-25 мкм). Они имеют круглое ядро темно-фиолетового цвета. Цитоплазма слабо-голубого цвета, вокруг ядра имеет зону просветления (перинуклеарная зона); у малых лимфоцитов ее может быть очень мало («голоядерные» лимфоциты); иногда в цитоплазме содержатся азурофильные зерна ярко-красного цвета. У здоровых животных в переферической крови преобладают малые лимфоциты, а средние и большие составляют не более 5--6%; в отдельных случаях они могут даже отсутствовать.

Моноциты являются самыми крупными клетками периферической крови (15-25 мкм), округлой или нередко неправильной формы. Ядро разнообразной формы -- в виде подковы, бабочки, трилистника, бобовидное с выбухтовываниями, но может быть сильно лопастным и грубосегментированным, неравномерно окрашивается в слабо-фиолетовый цвет с темно-фиолетовыми пятнами («пятнистое»). Цитоплазма серо-дымчатого, серо-синеватого, голубовато- серого цвета, со светлофиолетовым оттенком, вблизи от ядра содержит мелкую пылевидную зернистость.

Морфологические особенности клеток крови у животных.

У овец и коз кровь лимфоцитарная. Но у коз может быть нейтрофильной. Чрезвычайно большая сегментированность сегментоядерных клеток - 8-12 сегментов. Базофилы мелкие. Эритроциты мелкие, мельче, чем у крупного рогатого скота,"густо расположены в мазке.

У лошадей кровь нейтрофильная, гранулы эозинофилов крупные (их бывает порядка 60-70), часто наслаиваются на ядро, густо расположены в клетке, малинового цвета. Количество сегментов в сегментоядерных клетках от 3 до 5. Базофилы крупные, имеют крупные гранулы. Монощиты относительно бедны цитоплазмой. Лимфоциты часто с малым содержанием цитоплазмы. Эритроциты крупные, располагаются в мазке в виде цепочек или монетных столбиков. У рысистых пород лошадей они более крупные.

У взрослых свиней кровь смешанная, у молодняка - лимфоцитарная. Базофилы крупные, с крупными яркими темно-фиолетовыми гранулами. Встречаются ядра, похожие на лист клевера. Эозинофилы небольших размеров, с ярко- красными, довольно крупными гранулами. В лимфоцитах встречаются азурофильные гранулы. У моноцитов ядро мало расчленено, обычно вытянутой или слегка скрученной формы. Эритроциты в мазке часто имеют звездчатую форму. Нередко встречаются ядерные и полихромные эритроциты.

Кровь собак резко нейтрофильная. У базофилов часто выражены контуры ядра. Гранулы неодинаковой величины с четкими границами. Гранулы у зозинофилов самые крупные, но несколько меньше, чем у лошади. Ядра в нейтрофилах располагаются по кольцевому типу. Количество сегментов в сегментоядерных клетках от 4 до 6. Ядра моноцитов и других клеток часто колбасовидной формы с булавидными утолщениями на концах. Лимфоциты с крупными псевдоподиями. Эритроциты крупные и имеют кольцевую форму (центральная часть не окрашивается).

У кошек, в отличие от других животных, гранулы зозинофилов часто имеют палочковидную форму и расположение их густое.

Кровь кроликов лимфоцитарная. Вместо нейтрофилов у них псевдоэозинофилы, которые биологически сходны с нейтрофилами. Псевдоэозинофилы, в отличие от зозинофилов, меньше по размеру. Гранулы в цитоплазме также мельче и располагаются реже, неправильной округлой формы, порой угловатые, не преломляют свет (не блестят). Ядро имеет округленную форму. У зозинофилов гранулы крупные, густо расположены в цитоплазме. Эритроциты крупные, часто принимают звездчатую форму и встречаются незрелые формы.

Кровь птиц лимфоцитарная. У кур вместо нейтрофилов псевдоэозинофилы. Гранулы их в цитоплазме располагаются реже, чем у зозинофилов, палочковидной, веретенообразной формы, иногда они бывают и в виде крупных круглых образований. Края гранул несколько размыты, нерезкие. Гранулы не преломляют свет. Ядро окрашивается слабее, чем у зозинофилов. Для дифференциации ПЭ от Э (по Л. М. Лебедеву) мазок окрашивают 0,5% раствором эозина, обрабатывают раствором уксусной кислоты в спирте (в равных частях). При этом крупные зерна зозинофилов сохраняют красный цвет, а гранулы псевдоэозинофилов, обесцвечиваются.

При окраске мазка по Паппенгейму гранулы зозинофилов окрашиваются в розово-красный цвет, а гранулы псевдоэозинофилов - в ярко-красный, иногда в коричнево-красный цвет.

Лимфоциты у птиц в основном малые, с псевдоподиями, цитоплазма ярко выражена. Эритроциты крупные ядерные эллипсоидной формы. Встречаются полихромные эритроциты и фигуры распада («тени» ядер). У других домашних, птиц картина крови близка по морфологии крови кур, но имеет некоторые отличительные особенности. У уток псевдоэозинофилы не имеют, как у кур, веретенообразных зерен. Они у них в виде неправильной формы коротких палочек неравной длины. У индеек эозинофилы более крупные, чем псевдоэозинофилы. Ядро большое бледно-красное. У гусей наоборот, псевдоэозинофилы больше зозинофилов и их гранулы по форме напоминают зерна риса. Кровь гусей и уток более устойчива к воздействию внешних факторов, поэтому «теней» ядер в мазках бывает меньше.

7. Лейкограмма крови и ее диагностическая значимость

При микроскопии мазков крови, наряду с морфологической оценкой форменных элементов, проводят дифференцированный подсчет лейкоцитов или выводят лейкограмму. Лейкограмма - это процентное соотношение различных видов лейкоцитов, записанное в определенном порядке. В клинической ветеринарной диагностике общепринятым является следующая последовательность записи лейкоцитов: Б, Э, Н (М, Ю, П, С), Л и Мн.

Технику микроскопии мазка крови и выведения лейкограммы вы подробнее рассмотрите на ЛПЗ. Остановимся только на следующих моментах. Существует несколько способов выведения лейкограммы: одно-, трех- и четырехпольный. Установлено, что наиболее точным и воспроизводимым является четырехпольный способ.

Если при анализе крови не установлено отклонений в количественном отношении клеток и при исследовании лейкоцитов не обнаружено значительных изменений ни в процентом соотношении, ни в их морфологии, то ограничиваются подсчетом 100 клеток. В противном случае считают не менее 200 лейкоцитов. Лейкоциты регистрируют или в сетке Егорова, или посредством 11-клавишного счетчика.

Лейкограмма в комплексе с клиническим исследованием животного и другими анализами крови имеет большое диагностическое и прогностическое значение. Вместе с тем, должен отметить, что лейкограмма дает представление только о процентном соотношении между видами лейкоцитов, но не позволяет судить об абсолютном их содержании в крови.

Увеличение процента клеток одного вида в лейкограмме снижает процент других видов лейкоцитов, хотя абсолютное их количество может быть в пределах нормы. Поэтому, зная общее количество лейкоцитов крови и процентное соотношение их видов в лейкограмме, рассчитывают абсолютное число клеток каждого вида по формуле:

Л(10⁹/л) = Л(%)хА(10⁹/л):100,

Вот такое выражение лейкограммы в абсолютных единицах называется лейкоцитарным профилем, он предложен Ш.Д.Мошковским.

При морфологической оценке клеток крови и выведении лейкограммы у животных при различной патологии можно выявить следующие изменения:

увеличение или уменьшение процента или абсолютного числа отдельных видов лейкоцитов (видовые лейкоцитозы и лейкопении);

появление молодых, незрелых форм клеток;

патологические изменения в ядре и цитоплазме лейкоцитов. 3. Видовые лейкоцитозы и лейкопении, их клиническая оценка

Увеличение или уменьшение содержания отдельных видов лейкоцитов могут быть относительными или абсолютными. Если наряду с процентным увеличением или уменьшением какого-либо вида лейкоцитов происходит и количественное их изменение, то в этом случае говорят об абсолютном видовом лейкоцитозе или лейкопении. Если же изменяется только процент каких-либо лейкоцитов, то нарушение носит относительный характер.

При ряде заболеваний в периферическую кровь могут попадать незрелые формы лейкоцитов. В отличие от зрелых форм молодые клетки чаще крупнее, в основном неправильной формы. Чем моложе клетка, тем больше размер ядра и ядерно-цитоплазматическое отношение. Форма ядра у молодых клеток круглая или слегка вогнутая, структура его более нежная, рыхлая и сглаженная (у зрелых ядро компактное). Чем моложе клетка, тем меньше сегментировано ядро.

Зрелые клетки не содержат нуклеол в ядре, а бласные формы имеют округлые ядрышки светло-синего или светло-фиолетового цвета. При наличии в ядре очень крупных ядрышек (нуклеол), превышающих по размеру треть диаметра ядра, клетка расценивается как патологическая.

8. Изменение содержания зозинофилов и базофилов

Эозинофилия - это увеличение содержания Э в крови. Наблюдается в основном при паразитарных заболеваниях (фасциолез, эймериоз, аскароз, трихинеллез, поражениях кожи, в т.ч. и грибами и др.). Также типична эозинофилия при аллергических состояниях у животных, при хронической альвеолярной эмфиземе у лошадей. При роже свиней количество Э может достигать 45%, а при эозинофильном миозите у собак - до 60%. Эозинофилия появляется при переходе острого процесса в хронический, кетозах, суставном ревматизме, заболеваниях печени, иногда после применения антибиотиков, введения сыворотки.

Эозинопению наблюдают при сильных интоксикациях, острых инфекционных, протозойных, нагноительных заболеваниях, при атональном состоянии. Если эозинопения отмечается на фоне лейкоцитоза с нейтрофильным ядерным сдвигом, то это свидетельствует о прогрессировании процесса. Если же после исчезновения Э (анэозинофилия) при интоксикации или инфекционном заболевании отмечается увеличение их количества, то это указывает на начавшийся период выздоравления и является благоприятным симптомом.

Базифилию у животных наблюдают относительно редко. Она типична в основном при миелоидном лейкозе, аллергии, диабете, гипотиреозе, после парентерального введение сывороток. Базофилия может сопровождать эозинофилию при гельминтозах.

Базопения в ветеринарной медицине не получила диагностического подтверждения и считается, что количество Б уменьшается параллельно с уменьшением количества Э.

9. Нейтрофилия и нейтропения

Наиболее часто при заболеваниях у животных изменения в лейкограмме происходят среди нейтрофилов в сторону повышения незрелых форм клеток (сдвиг ядра влево) или увеличения количества сегментоядерных Н при одновременном уменьшении палочкоядерных (сдвиг ядра вправо). Индекс сдвига ядер нейтрофилов рассчитывается по формуле:

ИС=(М+Ю+П)/С.

ИС имеет диагностическое значение при нейтрофилии (нейтрофилез, нейтрофильный лейкоцитоз), которая встречается наиболее часто и условно делится на несколько типов:

нейтрофилия с простым регенеративным (гипорегенеративным) сдвигом ядра влево. Характеризуется увеличением количества П не более 10-13% при нормальном или несколько уменьшенном содержании С. Его наблюдают при хронических, скрыто протекающих инфекциях (туберкулез, и др.), легком течении острых инфекций, протозойных заболеваниях, гнойных местных процессах (нагноение ран, артрит, ограниченный тендовагинит идр.).

нейтрофилия с регенеративным сдвигом ядра характеризуется увеличением П с одновременным появлением Ю в небольшом количестве. При этом лейкоцитоз умеренный. Его наблюдают при острых инфекционных заболеваниях, эндокардите, септических процессах, у лошадей - после продолжительной тяжелой работе.

нейтрофилия с резким гиперрегенеративным сдвигом ядра характеризуется увеличением числа П, Ю и появлением М. Этот сдвиг указывает на резкое раздражение кроветворных органов. Если одновременно с этим отмечается лейкопения, то это результат угнетения функции костного мозга и является неблагоприятным признаком.

Такой сдвиг в картине крови наблюдают при тяжелом течении инфекционных и протозойных заболеваний, септических процессах, острых желудочно-кишечных заболеваниях у молодняка, начальной стадии миелолейкоза, отравлениях солями ртути и свинца, лизолом и др.

нейтрофилия с гипопластическим (дегенеративным) сдвигом ядра Н вправо характеризуется увеличением содержания С без увеличения процента незрелых клеток. При этом появляются измененные формы лейкоцитов, которые заключаются в появлении гиперсегментации ядра (до 20 и более сегментов), ядро может быть представлено отдельными округлыми частями без связи между собой, в цитоплазме появляются вакуоли, изменяется размер клеток (чаще увеличение). Вакуолизация не только цитоплазмы, но и ядра свидетельствует о тяжелом течении патологического процесса. Иногда отмечается в цитоплазме патологическая (токсическая зернистость), что является результатом интоксикации организма - чем сильнее интоксикация, тем более выражена зернистость. Такой сдвиг в крови отмечается при тяжело протекающих инфекционных и незаразных заболеваниях с ярко выраженной интоксикацией органима, отравлениях, заболеваниях органов кроветворения, лучевой болезни.

Нейтропения - уменьшение количства нейтрофилов. Она сопровождается уменьшением числа лйкоцитов и часто гипопластическим сдвигом ядра нейтрофилов. Нейтропения свидетельствует об угнетении и истощении функции гарнулопоэза костного мозга в результате алиментарной дистрофии, инфекционных заболеваний, после радиационных поражений.

Смена нейтропении нейтрофилией, а лейкопении лейкоцитозом говорит о возникновении осложнении (пневмонии, плеврита, перикардита и т.д.). Нейтропения может отмечаться при применении антибиотиков, сульфаниламидов, препаратов преднизолонового ряда.



10. Увеличение илиуменьшение содержания лимфоцитов и моноцитов

Лимфоцитоз может быть физиологический (физическая нагрузка для лошади, после приема корма моногастричными животными, при их нахождении в высокогорной местности, облучении УФЛ и др.) и патологический. Последний отмечатеся при скрытых, латентно протекающих заболеваниях без лихорадки, энцефаломиелите, КЧС, пироплазмозе, алиментарной дистрофии, анемии и некоторых др.

Лимфоцитоз на фоне уменьшения количества эритроцитов отмечается при усилении интоксикации организма. Лимфоцитоз же с одновременным возрастанием количества зозинофилов и моноцитов при снижении числа нейтрофилов, считается благоприятным признаком.

При лейкозе, особенно лимфолейкозе, в крови появляются лимфобласты и пролимфоциты. Лимфобласты размером порядка 12-15 мкм и более, с большим округлым или овальным ядром, которое неравномерно окрашено и имеет рыхлую структуру. В ядре содержится 1-3 нуклеолы, цитоплазмы в клетке мало, она базофильная, имеет перинуклеарную зону. Пролимфоциты размером немного меньше чем лимфобласты, ядро компактное, грубой структуры, имеет 1-2 нуклеолы.

При тяжелых патологических процессах появляются измененные или патологические лимфоциты. Наиболее частые из них это увеличение размеров клеток и ядра. Так, если у здоровых животных преобладают в основном малые лимфоциты (средних и больших до 5%), то при инфекционных заболеваниях - большие (более 15 мкм). Из других, более тяжелых изменений, могут быть: цитоплазма серого цвета, ядро разнообразной формы, рыхлой структуры, в стадии деления, тени ядра (тени Боткина-Гумпрехта) и др.

Лимфопения нередко бывает при значительной нейтрофилии, что характерно для ряда инфекционных, гнойных и септических процессов в организме. Резкая лимфопения с абсолютной нейтропенией возникает при значительном воздействии на животное ионизирующей радиации (лучевая болезнь). Прогрессирующая лимфопения с лейкопенией является неблагоприятным, даже угрожающим признаком. Смена лимфопении на лимфоцитоз указывает на наступление выздоровления.

Моноцитоз является признаком раздражения РЭС инфекционными или токсическими агентами, часто свидетельствует о развитии иммунных процессов в организме. Моноцитоз наблюдают чаще при инфекционных и инвазионных заболеваниях у животных в стадию выздоровления (затухание инфекционного процесса - моноцитарная защитная фаза). Резкий моноцитоз отмечается при лучевой болезни, лучевых ожогах, при моноцитарном лейкозе.

Из морфологических изменений у моноцитов может быть увеличен размер клеток, нарушена структура ядра, изменен цвет цитоплазмы (диффузно- серая с желтоватым оттенком). Из незрелых форм в крови могут появляться монобласты и промоноциты. Монобласты - родоночальные клетки моноцитарного ростка размером до 20 и более мкм. Цитоплазма выражена незначительно, голубого цвета. Ядро имеет нежную структуру, содержит 2-3 нуклеолы. Промоноциты имеют более голубое ядро, у них нет нуклеол.

Моноцитопения вплоть до отсутствия в периферической крови моноцитов в сочетании с нейтрофилией бывает при острых и тяжелых септических заболеваниях в разгар болезни. Отсутствие Мн является неблагоприятным симптомом.

Синдромы нарушения лейкопоэза.

Лейкемический синдром проявляется увеличением лимфоузлов в размере, увеличением количества лейкоцитов появлением их патологических форм, абсолютным лимфоцитозом (у крупного рогатого скота % лимфоцитов составляет 75-90 и более).

Лейкемоидные реакции - такое нарушение лейкопоэза, при котором в крови возрастает количество лейкоцитов, главным образом, за счет нейтрофи- дов (65-70%). Развивается при хронических гнойных процессах, туберкулезе.

11. Определение функциональной способности кроветворных органов

О функциональной способности кроветворных органов судят по результатам исследования периферической крови и органов кроветворения-- костного мозга и лимфоидной ткани. Кровь -- это наиболее подвижная среда в организме, быстро и тонко реагирующая на самые незначительные физиологические и тем более патологические сдвиги.

Оценка функции эритропоэза основана на определении количества эритроцитов, гемоглобина и подсчете ретикулоцитов (гранулоцитов) в периферической крови. Увеличение количества молодых форм эритроцитов (ретикулоцитов) свидетельствует о функциональной полноценности эритропоэза. Если же наряду с появлением молодых форм снижается количество гемоглобина и эритроцитов, то это указывает на функциональную слабость органов эритропоэза.

При оценке лейкопоэза учитывают количество лейкоцитов в периферической крови и данные лейкограммы. Результаты определения лейкограммы позволяют судить о наличии реакции со стороны того или иного отдела лейкопоэза (гранулоцитарного, моноцитарного и лимфоцитарного), а также о степени регенерации (по сдвигу ядра нейтрофилов влево или вправо, количеству и характеру молодых клеток) и дегенерации лейкоцитов.

Тромбопоэтическую функцию кроветворных органов оценивают по количеству тромбоцитов в периферической крови и качественному составу кровяных пластинок (юные, зрелые, старые, дегенеративные -- вакуолизированные, незрелые юные формы -- голубые и гигантские пластинки).



Список литературы

Березов, Т.Т., Коровкин, Б.Ф. Биологическая химия // Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. - М.: Медицина, 1990 г.

Долгов, В.В., Морозова, В.А. Клинико-диагностическое значение лабораторных показателей // В.В. Долгов, В.А. Морозова. - М.: Медицина, 1997 г.

Козлов, А.А., Берковский, А.Л., Простакова, Т.М. Клиническая лабораторная диагностика // А.А. Козлов, А.Л. Берковский, Т.М. Простакова. - М.: Мир библиографии. - 1997, №9., - с. 19-20

Мейер Д., Харви Д. Ветеринарная лабораторная медицина. Интерпретация и диагностика // Д. Мейер, Д. Харви. - М.: Сфоион, 2007 г.

Клинический диагноз - лабораторные основы / Под ред. В.В. Меньшикова, И.И. Дедова. - М.: Медицина, 1987 г.

Справочник по клиническим методам исследования / Под ред. Е.А. Кост. - М.: 2е изд., 1975 г.

Медицинские лабораторные технологии и диагностика / Под ред. А.М. Карпиценко. - С - Петербург.: Справочник, Т.1, 1998 г.

Энциклопедия клинических лабораторных тестов / Под ред. М. Тица. - М.: Династия, 2007

Размещено на Allbest.ru

...