Размещено на http://www.allbest.ru/

Бюджетное образовательное учреждение Чувашской Республики среднего профессионального образования «Чебоксарский медицинский колледж» Министерства здравоохранения и социального развития Чувашской Республики

Тема лекции

Исследование эякулята

1. Исследование семенной жидкости

Исследование спермы - неотъемлемая часть в диагностике бесплодия. Ввиду относительной простоты, исследование спермы чаще всего проводят перед более сложным и дорогим обследованием женщины.

Сперма - семенная жидкость, вырабатываемая мужскими половыми органами и содержащая половые клетки. Сперма состоит из сперматозоидов, взвешенных в жидкой фазе (сперматозоид - это мужская половая клетка животного организма и некоторых растений).

Сперматозоиды составляют около 5% объема спермы, они образуются в яичках. Приблизительно 60% объема спермы образуется в семенных пузырьках. Это вязкая, нейтральная или слегка щелочная жидкость, часто желтая или даже сильно пигментированная из-за высокого содержания рибофлавина (рибофлавин поступает в организм с мясными и молочными продуктами.) эякулят семенной сперматозоид

Простата производит около 20% объема семенной жидкости. Это жидкость, похожая на молоко, имеет слабокислую реакцию (рН около 6,5), из-за высокого содержания лимонной кислоты. Менее 10-15% объема спермы образуется в придатках яичек, семявыносящих протоках, уретральных железах.

2. Получение эякулята

Для лабораторного исследования сперму получают при помощи специального вибрационного устройства в процедурном кабинете или при мастурбации в чистый сухой стеклянный сосуд. Допустимо получение спермы на дому, но при условии доставки ее в лабораторию не позже, чем через 40-50 мин после семяизвержения. Сперму для анализа рекомендуют получать после 3-5 дневного полового воздержания. (В эти дни не рекомендуют принимать алкоголь, лекарственные препараты, а также проводить массаж семенных пузырьков и предстательной железы.) не следует доставлять сперму в презервативе, т.к. вулканизированная резина за 15-20 мин вызывает полную некроспермию. Во время транспортировки проба не должна подвергаться большим колебаниям температуры (сперматозооны обладают очень малым запасом энергии и при активном движении в тепле быстро истощают его, становятся неподвижными. При низкой температуре они замедляют подвижность вплоть до полной остановки, таким образом, консервируют энергию, при подогревании восстанавливают подвижность, несмотря на это сперму в лабораторию следует доставлять не в охлажденном виде, а при температуре тела! Сперму после того, как она доставлена в лабораторию, помещают в термостат на 1 час при температуре 37?.

3. Определение физических свойств эякулята

Количество Объем спермы практически не изменяется в связи с половым воздержанием. Нормальный объем спермы составляет 3-3,5мл с колебаниями 1,5 до 5мл. Большое количество эякулята обладает высокой оплодотворяющей способностью только при высокой концентрации в ней сперматозоонов. Резкое повышение объема спермы более 10мл чаще связанно с бесплодием и является причиной понижения количества сперматозоидов.

Цвет Свежая семенная жидкость в норме имеет серовато-беловатый цвет с молочно-белой опалесценцией. При гематоспермии сперма окрашена в розоватый или коричневый цвет. Желтый цвет - при гнойном процессе предстательной железе.

Мутность Различная степень мутности не имеет большого значения кроме тех случаев, когда повышенная мутность обусловлена увеличенным содержанием лейкоцитов при воспалительном процессе. В эякуляте с резко выраженной молочно-белой мутностью, как правило, много сперматозоонов, а в стекловидно-прозрачном эякуляте сперматозоидов мало.

Запах Нормальной семенной жидкости обусловлен наличием в ней спермина из предстательной железы и напоминает запах цветов каштана. Отсутствие специфического запаха указывает на отсутствие или уменьшение секрета предстательной железы, что наблюдается при закупорке ее выводных протоков.

Консистенция В норме жидкая, но на воздухе под действием фермента сразу же желатинизируется, затем при комнатной температуре постепенно разжижается. Время разжижения учитывают от момента семяизвержения до полного разжижения (в норме20-30мин) что определяется при размешивании ее стеклянной палочкой. Если разжижение затягивается на часы или вовсе не происходит, это указывает на недостаточное содержание в секрете предстательной железы ферментов (фибринолизина и фиброгеназы), способствующих разжижению.

Вязкость Всегда определяют после полного разжижения. Стеклянной палочкой тщательно размешивают семенную жидкость, затем ее постепенно извлекают. Если нить, тянущаяся от поверхности жидкости за палочкой до разрыва составляет 1-5 мм то это нормальная вязкость, если она короче 1мм - пониженная вязкость, а если длиннее 5 мм - повышенная вязкость и характерна при наличии большого количества сперматозоонов. При уменьшении количества сперматозоонов вязкость понижается (олигоспермия, азоспермия).Повышение вязкости может препятствовать подвижности сперматозоидов и часто сочетается с увеличением разжижения и наличием большого количества слизи, которая появляется при воспалении предстательной железы.

Реакция В норме 7,0-7,6, но при стоянии рН снижается. Реакцию определяют сразу же после ее разжижения при помощи универсальной индикаторной бумаги. Щелочная реакция указывает на гипоспермию. Кислая реакция говорит о непопадании щелочного секрета семенных пузырьков в эякулят (может быть при закупорке).В таких случаях плазма семенной жидкости состоит из секрета предстательной железы, рН которого 6,6-6,8. (Оплодотворяющая способность такой семенной жидкости резко снижена из-за недостаточности щелочного резерва для нейтрализации кислого содержимого влагалища, в кислой среде сперматозооны теряют способность двигаться и гибнут.

4. Микроскопическое исследование семенной жидкости

Разжиженную семенную жидкость тщательно размешивают продуванием через нее воздуха при помощи пипетки, затем, этой же пипеткой на чистое предметное стекло наносят каплю исследуемой жидкости и покрывают покровным стеклом. Исследуют жидкость под микроскопом при увеличении 7 х 40.

Сперматозоон - представляет собой длинную в 58-67 мкм клетку со жгутиком. В нем различают: головку, тело и хвост. Форма головки овальная, сплюснутая в передне-заднем направлении, заостренная в переднем конце. Большая часть головки занята ядром. Цитоплазма - в виде тонкой оболочки окружает ядро. Головку со средней частью связывает шейка - наиболее тонкая часть сперматозоона. Хвост тонкий, его длина 50-60 мкм.

Если в нативном препарате сперматозооны не были обнаружены, то семенную жидкость центрифугируют при 3000-4000 об/мин в течение 5-10 мин. Из осадка готовят нативные препараты. В семенной жидкости могут быть обнаружены сперматогонии, сперматоциты, лейкоциты, эритроциты, эпителиоциты и др.

Эритроциты в норме отсутствуют, появление их называется гемоспермия.

Лейкоциты - единичные. Увеличение при гонорейном и туберкулезном воспалении (простатит, уретрит).

Эпителиоциты. В норме в небольшом количестве призматические из мочеиспускательного канала и единичные клетки придатка яичка. Форма клеток придатка - полигональная, 18-42 мкм, ядро круглое гиперхромное, много цитоплазмы. При патологических воспалительных процессах усиленно слущиваются эпителиальные клетки.

Гигантские клетки - обнаруживаются редко (диаметр их 16-23 мкм, 2-12 ядер появляются обычно при нарушении деления сперматид.

Сперматофаги - круглые большие 20-36 мкм со светлой, часто вакуолизированной цитоплазмой, с несколькими ядрами. В цитоплазме часто удается рассмотреть головки фагоцитированных сперматозоонов.

Семенные кристаллы Бетхера - бесцветные, удлиненной формы, образуются в охлажденной семенной жидкости из фосфатов. Чем сильнее выражена гипоспермия, тем быстрее и в большом количестве образуются эти кристаллы.

Слизь - в норме отсутствует. При простатите - большое количество густой, липкой слизи, уменьшающей подвижность сперматозоонов.

Лецитиновые зерна в норме много. При пиоспермии (резкое увеличение спермы) - отсутствуют.

Изучают аглютинацию сперматозоонов:

(+) если склеены единичные сперматозооны

(++) если склеены половина сперматозооны, но только головками

(+++) если склеена половина сперматозоонов, головками и хвостами.

(++++) склеены почти все сперматозооны.

5. Определение подвижности сперматозоонов

Кинезисграмма - это % соотношения сперматозоонов с различной подвижностью. Пользуясь окошком Фонио, подчитывают в нативном препарате 100 сперматозоонов, отмечая, сколько из них с нормальной подвижностью (нормакинезис), сколько с ослабленной (гипокинезис) и сколько неподвижных (акинезис).

Нормокинезис - сперматозооны совершают поступательные движения со значительной скоростью (в норме 80-90%).

Гипокинезис - поступательные движения, медленные (в норме 10-12%).

Акинезис - неподвижные(в норме 6-10%).

Дискинезис - отсутствие поступательных движений (сперматозооны совершают колебательные движения или вертятся на месте). В норме не наблюдаются.

Важно определение в эякуляте истинно мертвых сперматозоонов. С этой целью готовят 2 препарата. В нативном препарате подчитывают 100 сперматозоонов, среди которых отличают в процентах.

- активноподвижные (сперматозоиды совершают поступательные движения).

- малоподвижные (маятникообразные и манежные движения)

- неподвижные (нет движений)

Среди неподвижных могут быть истинно мертвые сперматозоиды (неподвижные, мертвые) и живые неподвижные. Для установления % тех и других необходимо приготовление второго препарата: на предметное стекло наносят каплю эякулята и каплю (чуть большую) 1% водного раствора эозина .Бережно перемешать и через несколько секунд накрыть покровным стеклом и микроскопировать. Живые сперматозоиды остаются неокрашенными, а мертвые окрашиваются в бело-розовый или розово-фиолетовый цвет. В норме количество живых сперматозоидов д. Б. 90-95%. Рекомендуется одновременно в этом препарате рассмотреть и описать патологические формы сперматозоидов. Количество живых и мертвых сперматозоидов определяют в %.

Пример:

В нативном препарате определено:

- активноподвижных сперматозоидов - 40%

- малоподвижных сперматозоидов - 30%

- неподвижных сперматозоидов - 30%

В окрашенном препарате установлено:

- живых сперматозоидов - 70%

- «мертвых» сперматозоидов - 30%

Процент истинно мертвых сперматозоидов определяется по формуле:

% неподвижных * % мертвых

100

В нашем примере: 30 * 30 = 9%

100

т.е. в нашем примере истинно мертвых - 9%.

- активноподвижных сперматозоидов - 40%

- малоподвижных сперматозоидов - 30%

- живых неподвижных сперматозоидов - 30 - 9 =21%

- мертвых сперматозоидов - 9%

Всего живых сперматозоидов 100 - 9 = 91%

Данные заносятся в карту (бланк) исследования.

Подчет сперматозоонов в 1 мл и во всем эякуляте.

Реактивы для обездвижения сперматозоидов:

1) 1,0 мл 40%нейтрального формалина растворить в 100 мл дист. воды.

2) 1,0 мл формалина, 5,0 г бикарбоната натрия, вода до 100 мл.

3) Жидкость Рубенкова:

0,1г основного фуксина

0,02 мл краски Романовского

0,2 мл концентрированной карболовой кислоты

0,1 мл глицерина

2 мл 96? этанола

100мл 9г/л хлорида натрия

Эта жидкость окрашивает сперматозоиды, что позволяет наряду с подсчетом общего количества сперматозоидов изучить их морфологию

Мазки спермы окрашивают по Паппенгейму-Крюкову.

Сок простаты - по Романовскому, метиленовым синим, по Граму и др.

Подчитывают в камере Горяева, используя разводящие жидкости (0,4 мл 1%раствора формалина, 0,02 мл спермы). При большом увеличении 7 х 40 микроскопа подсчитывают все сперматозооныв 5 больших квадратах, расположенных по диагонали (подчитывают только те, головки которых лежат внутри квадратов) и умножают на 1 000 000. Полученное число соответствует количеству сперматозоонов в 1 мл семенной жидкости. Количество во всем эякуляте определяют умножением количества сперматозоонов в 1 мл на количество эякулята (в норме оно превышает 150 000 000) до 450·10⁶

В 1 мл нормальной семенной жидкости содержится 60-120 млн до 150 млн, в среднем 100 млн\мл.

Подчет сперматограммы (в окрашенном препарате)

Для анализа каплю эякулята объемом 10-15 мкл равномерно распределяется по поверхности стекла, высушивают на воздухе и окрашивают используя несколько способов окраски: гематоксилин эозином и по Паннейгейму Гимзы.

Для сперматограммы в окрашенном препарате подчитывают не менее 200 сперматозоонов и различные морфологические формы выражения в %

Выделяют:

Нормальные формы сперматозоонов - составляет 80-85% в их число входят физиологические варианты, которые характеризуются или необычно суженной, или уменьшенной, и увеличенной головкой.

Молодые и незрелые формы сперматозоидов имеют остаток цитоплазмы «воротничок» вокруг головки и шейки наблюдается при частых половых сношениях и неспособности к оплодотворению.

Старые формы (гиперхромия, вакуолизация головки) появляются в семенной жидкости после продолжительного полового воздержания и непригодны для опрлодотворения.

К дегенеративным (патологическим) формам относятся сперматозооны с деформациями головки гигантоспермат, с двумя головками, но с одной шейкой и одним хвостом, мегалосперматозоиды без шейки с одним или несколькими хвостами, с петлей на конце хвоста. У здоровых мужчин обычно не встречаются патологические формы сперматозоонов.

Размещено на Allbest.ru