Резидентные иммунокомпетентные клетки

Размещено на http://www.allbest.ru/

Ушедшее тысячелетие не оставило сомнений в том, что лидерство био-технологических наук во второй половине закончившегося столетия поменяло взгляды на многие процессы, происходящие в организме человека. Свидетельство тому - множество серьезнейших открытий в области биологии, генетики и иммунологии. Эти открытия поставили на принципиально новый уровень исследования практически во всех областях биологии и медицины. Они позволили познать многие сложнейшие процессы, происходящие в различных клетках на молекулярном уровне, и дали возможность не только обосновать, но и уже разработать и внедрить многие виды терапии будущего, которая, как и сами открытия еще несколько десятилетий назад, представлялась научной фантастикой.

Процесс преждевременного и генетически запрограммированного старения кожи и всего организма давно волнует ученых. До сих пор нет четкого понимания процесса старения, он многогранен и соответственно, нет решения, как его победить. Неоднократно предпринимались попытки найти чудодейственное средство, которое остановит процесс старения или хотя бы замедлит его. В нашем веке, веке био-технологических открытий, приподнята завеса тайны над тем, как развивается старение. И только благодаря пониманию этого процесса, стало возможно найти подход к регуляции процесса старения. За последние 20 лет наука очень продвинулась в исследовании регуляции деления, созревания и жизнедеятельности клеток, открыты многие регулирующие механизмы, биологически активные молекулы, а открытие ещё начала прошлого века - стволовые клетки, наконец, получило заслуженное признание и применение. Кроме того, благодаря последним достижениям ученых в области биологии, биотехнологии и медицины, стало понятно, что экстракты растений, многочисленные антиоксиданты и витамины не могут пронести желаемого результата в этой области. Крайне важны открытия по пониманию функционирования клеток в организме, изучение механизмов межклеточного взаимодействия, регуляторных и сигнальных молекул, факторов роста и т.д. Осознание процесса происходящего в организме человека в результате старения помогло нам стать на правильный путь поиска средства против старения.

С детства мы знаем, что если поранились, то наша рана покрывается сгустком крови, который способствует заживлению и восстановлению поврежденного участка кожи. Биологический смысл сгустка крови - это повязка, которая помогает процессам восстановления. В организме человека есть весь необходимый набор факторов для осуществления процессов репарации, регенерации и ревитализации (омоложения) травмированных тканей, в том числе кожи. Эта мысль оказалась очень важной в поиске эффективной технологии борьбы со старением. Одни ученые открыли запас стволовых клеток в тканях, в том числе коже, другие открыли, что в клетках нашей крови, интерстициального пространства, лимфе и других жидкостях организма содержатся уникальные факторы заживления и восстановления поврежденных тканей кожи. Мы считаем эти два открытия основным ресурсом здоровья и молодости. Регенерация (позднелатинское regeneratio - возрождение, восстановление) - обновление структур организма в процессе жизнедеятельности и восстановление структур, утраченных в результате патологических процессов. Физиологическая регенерация - непрерывное обновление структур на клеточном (смена клеток крови, эпидермиса, печени и др.) и внутриклеточном (обновление клеточных органелл) уровнях, благодаря чему обеспечивается функционирование органов и тканей. Процесс регенерации происходит на всех уровнях - органном, тканевом, клеточном, внутриклеточном. Регенерацию, в процессе которой восстанавливается ткань, идентичная погибшей, называется полной регенерацией или реституцией. Регенерация тканей осуществляется путем обновления внутриклеточных структур и клеточного деления. А запускается и регулируется этот процесс биологически активными молекулами, цитокинами, факторами роста, сигнальными молекулами и т.д. Регенерация - это сложный процесс на который влияют множество факторов стимулирующих и угнетающих пролиферацию, влияющих на рост, дифференцировку и миграцию клеток. Очень важно подчеркнуть, что эти же процессы действуют и в процессах эмбрионального гистогенеза, и при росте тканей в постнатальном развитии.

За последнее десятилетие представления о коже как иммунно-компетентном органе прочно вошли в различные области медицинских знаний. Учитывая колоссальную базу накопленных знаний о клетках кожи, выполняющих определенные иммунные функции, о межклеточных взаимодействиях, осуществляемых посредством тонких механизмов с привлечением различных медиаторов и направленных на сохранение равновесия в системе защиты организма в целом, необходимо рассматривать кожу как комплекс разнонаправленных механизмов воздействия практически на всех уровнях иммунной регуляции.

Еще в 1930 г. впервые высказано предположение, что кожа является генератором и местом гиперчувствительности. Обосновано это классическими экспериментами, показавшими возможность воспроизведения гиперчувствительности замедленного типа при парентеральном введении антигена. Изучался вопрос о роли кожи как лимфоидного органа первого уровня в иммунных реакциях человека [1]. Сейчас кожа представляется как высокоорганизованный орган иммунной системы, который обладает необходимым составом иммуннокомпетентных клеток, кооперирующихся между собой как с помощью комплементарных структур на их поверхности, так и при участии иммунорегуляторных цитокинов. Подобная организация позволяет участвовать коже как в иммунных реакциях всего организма, так и осуществлять некоторые иммунологические процессы самостоятельно, in situ. Клеточный субстрат иммунной компетентности кожи представлен резидентными и рециркулирующими клетками костномозгового происхождения. К резидентным клеткам относятся гистиоциты, тучные клетки, клетки Лангерганса, клетки Грэнстейна, кератиноциты, эндотелиальные клетки, клетки Меркеля. Рециркулирующими являются u1083 лимфоциты и гранулоциты [2]. Причем есть мнение, что лишь определенные типы лимфоцитов способны поселятся в коже [3]. Предложено все локализованные в эпидермисе компоненты общей иммунной системы обозначать единым термином SALT (skin associated lymphoid tissue - ассоциированная с кожей лимфоидная ткань).

Одну из центральных ролей (не менее центральная роль у кератиноцитов) в инициации иммунного ответа в коже играют клетки Лангерганса, описанные Паулем Лангергансом в 1868 г. Это - субпопуляция дендритных клеток костномозгового происхождения, морфологическим маркером которых является наличие в цитоплазме специфических гранул - гранул Лангерганса или гранул Бирбека, обнаруженных и описанных в 1961 г. М. Бирбеком. Существуют доказательства, что клетки Лангерганса и дендритические клетки имеют общего предшественника - CD 34+ клетку периферической крови - гемопоэтическую клетку-предшественницу, из которой дифференцируются два фенотипа клеток по признаку наличия на их поверхности CLA (cutaneous lymphocyte-аssociated antigen - кожный лимфоцит-ассоциированный антиген). Под влиянием ГМ-КСФ (гранулоцитарно-макрофагальный колониистимулирующий фактор) и ФНО (фактор некроза опухоли) клетки CD34+/CLA+ дифференцируются в клетки Лангерганса (что доказывается наличием гранул Бирбека), а CD34+/ CLA-- в CD1a+ дендритические клетки [4]. Находящиеся в эпидермисе и составляющие 2 - 4 % всех эпидермальных клеток, клетки Лангерганса относятся к макрофагально-моноцитарно-гистиоцитарной линии. Установлено, что эпидермис человека содержит более 10⁹ клеток Лангерганса, образующих сложную, почти замкнутую систему разветвлений. Это - циркулирующие клетки с непродолжительным (примерно 3 недели) пребыванием в эпидермисе, постоянно мигрирующие через лимфатические сосуды в лимфатические узлы, где они способны превращаться в ретикулярные клетки Т-зоны лимфатического узла, а также мигрировать в тимус. Экспериментально доказан и тот факт, что клетки Лангерганса мигрируют под действием раздражителя через эпидермальную базальную мембрану в лимфатический узел и скапливаются там в виде иммуностимулированных дендритических клеток (DCs). Процесс миграции регулируется молекулами адгезии, в частности семейства интегринов -б-субъединицы. Среди антиген презентирующих клеток кожи необходимо отметить другой тип - клетки Гренстейна. В отличие от клеток Лангерганса, эти клетки устойчивы к ультрафиолетовому облучению и индуцируют супрессорный иммунный ответ. Эндотелиальные клетки при определенных условиях играют немаловажную роль в инициации иммунного ответа в коже. Они способны экспрессировать на своей поверхности HLA-DR антигены и молекулы адгезии. Наиболее важными считают группу б-v- интегринов, блокада рецепторов которых приводит к остановке репаративных процессов в коже за счет угнетения ангиогенеза [5].

Кератиноциты, составляющие основную часть эпидермальных клеток, также являются резидентными иммунокомпетентными клетками и участвуют в реализации иммунного ответа. Они продуцируют сеть цитокинов и различные гемопоэтические факторы роста, которые являются связующим звеном с клетками иммунной системы организма, а также тимопоэтинподобные и тимулинподобные тимотропные гормоны, которые воздействуют на Т-лимфоциты подобно микроокружению в тимусе на ранних стадиях созревания Т-лимфоцитов [6]. При действии на кожу различных факторов кератиноциты начинают продуцировать цитокины - особые белковые регуляторные молекулы. Доказан факт участия кератиноцитов в индукции иммунного ответа, а также в регуляции межклеточных взаимодействий посредством продуцируемых ими цитокинов. Доказано также, что кератиноциты, помимо факторов роста, продуцируют и гемопоэтические факторы, интерфероны, супрессорные факторы и интерлейкины.

Самое главное свойство иммунной составляющей кожи возможность влиять на пролиферацию клеток. Это важнейшее свойство иммунной системы. Оно реализуется каскадом тех же цитокинов, ростовых и транскрипционных факторов. В ответ на повреждение (или травму) клетки кожи - кератиноциты, фибробласты, клетки Лангерганса, макрофаги, Т-лимфоциты начинают выделять специальные молекулы - цитокины и ростовые факторы, причем их количество и состав зависят от характера повреждения и его величины. Важно подчеркнуть, что аналогичный механизм работает и в случае травм и повреждений других органов и тканей, например мышц и костей, а не только кожи. Принципиально лишь то, что откуда бы ни пришли стволовые клетки в место повреждения, они превращаются (дифференцируются) только в клетки того органа, в котором произошла поломка. Это так называемое «влияние микроокружения». Важно: эпидермис способен синтезировать каскад биологически активных молекул для активации клеточного деления (пролиферации) стволовых клеток. Это свойство позволило привлекать стволовые клетки для эффективной борьбы со старением = клеточным обеднением. Как привлекать? С помощью языка, на котором «разговаривают» между собой клетки в организме - языка биологически активных молекул (БАМ). БАМ - и есть вышеописанный каскад цитокинов, ростовых и транскрипционных факторов, относящихся к иммунной системе.

Стволовые клетки. В процессе развития эмбриона человека происходит ряд ключевых событий: за оплодотворением яйцеклетки следует дробление, суть которого сводится к быстрому накоплению тотипотентного (т. е. способного к созданию целого организма, повторению эмбриогенеза из одной клетки) клеточного материала. Примерно после 12 клеточных делений этот процесс замедляется, и нарушается синхронность делений. Начинается транскрипция генома зародыша, то есть реализация наследственной информации. Транскрипция завершается тем, что в цитоплазме этих уникальных первичных клеток накапливается информация в форме матричных РНК, которая определяет дальнейшее внутриутробное развитие. Реализация информации осуществляется в конечном итоге путем миграции, специализации клеток и формирования основных зародышевых листков -- эктодермы (источник клеток кожи, ЦНС и пр.), мезодермы (источник клеток мышц, костей, крови и пр.) и энтодермы (источник клеток желез, ЖКТ и пр.), что происходит в процессе гаструляции. Начиная с этого момента, в каждой ткани сохраняются определенные запасы неспециализированных клеток. Это и есть стволовые клетки и клетки-предшественники, их основная функция -- управление процессом создания организма в целом, перенос и реализация наследственных программ и восполнение по мере надобности клеточного состава. Как уже сказано выше, во взрослом организме во всех органах и тканях присутствуют стволовые клетки. Больше всего их в костном мозге. Они условно разделены на:

Тотипотентные - до 4-х суток развития эмбриона

Плюрипотентные - костный мозг взрослого организма, периферическая кровь

Мультипотентные - ткани и органы взрослого организма

Определяющей чертой стволовых клеток является способность к поддержанию и самовосстановлению - генерации дочерних клеток, имеющих такие же регенеративные свойства, как и родительские клетки. Существует убедительные доказательства того, что самообновление находится под внешним биологическим контролем in vivo. Цитокины, ростовые факторы и сигнальные молекулы влияют на самообновление в культуре и in vivo.

Известна взаимосвязь старения и микроокружения стволовых клеток. Описан факт возрастного снижения активации пролиферации стволовых клеток, что помимо клеточного обеднения зрелых клеток, способствует старению человеческих тканей. Доказано, что эти изменения напрямую зависят от свойств клеточного микроокружения, а именно от микроокружения стволовых клеток, в котором с возрастом развивается «дефицит» цитокинов, ростовых факторов, сигнальных, регуляторных молекул. Стволовые клетки не работают, не активизируются и не пролиферируют без молодого микроокружения, то есть без достаточного и необходимого каскада ростовых факторов, цитокинов и сигнальных молекул или биомолекул.

Т.о. основной функцией стволовых клеток во взрослом организме является физиологическая замена отслуживших свое дифференцированных клеток и восстановление клеточного состава поврежденных в силу тех или иных причин тканей - это «машины регенерации» для поддержания морфофункционального постоянства ткани. Наименее дифференцированные стволовые клетки находятся в организме в состоянии «ареста», им обязательно нужен каскад сигналов для запуска пролиферации. И тогда запускается процесс их поэтапного созревания в определенном направлении (дифференцировки), но при этом, в результате «ассиметричного деления» сохраняется запас стволовых клеток и в неизмененном виде [7-21].

Опубликованы результаты труда ученых из Института Стоуэрса, работающим под руководством доктора Тинга Кси (Ting Xie), ещё раз подтвердившие важность «молодого» микроокружения для пролиферации стволовых клеток. Кси считает, что неэффективное замещение изношенных клеток взрослых тканей из-за снижения пролиферации стволовых клеток - первоочередная причиной старения. А снижение пролиферации стволовых клеток - результат уменьшения синтеза каскада биоактивных молекул. Если мы научимся замедлять процесс старения клеток путем определенных манипуляций над самими клетками или их микроокружением, мы сможем замедлить старение всего организма и прогрессию ассоциированных с возрастом дегенеративных заболеваний. И подобных статей множество [22-24].

Не менее интересна и обратная регуляция. Мультипотентные стволовые клетки, помимо других функций, составляют кроветворное микроокружение лимфоидной и миелоидной ткани. Они продуцируют целый ряд необходимых для функционирования гемопоэтических и иммунных клеток ростовых факторов и цитокинов: интерлейкины -- 1, 3, 6, 7, 8, 11, 12, 14, колониестимулирующие факторы, LIF и ряд других [25]. В свою очередь иммунные клетки также вырабатывают ряд стимулирующих и ингибирующих факторов, которые оказывают воздействие на стволовые клетки. Таким образом, казалось бы, возможна обоюдная «корректировка» нарушений микроокружения. Но беда в том, что все клетки вырабатывают только базовый фон биоактивных молекул, недостаточный в стареющей коже, (которая страдает ещё и клеточным обеднением = некому производить биомолекулы) для активации пролиферации стволовых клеток. Именно поэтому возникает необходимость во внесении «внешнего» сигнала для активации пролиферации стволовых клеток. Как мы докажем ниже, наш пептид, Реновин как раз и создает недостающий в стареющей коже каскад биологически активных молекул. В этот процесс последовательно за кератиноцитами включаются фибробласты, моноциты, иммунные клетки кожи. Они все вместе и создают тот каскад цитокинов, ростовых факторов и сигнальных молекул, который активирует пролиферацию стволовых клеток.

Цитокины, ростовые факторы и моделирование сигнала для запуска активации пролиферации стволовых клеток. ИЛ-3 обеспечивает деление (пролиферацию) стволовых клеток и клеток-предшественников, обусловливает образование колоний смешанного и незрелого типов. ИЛ-3 -- преимущественно экстренный регулятор, проявляющий свое действие при стрессе или иммунном ответе, известно также, что ИЛ-3 способствует синтезу фактора стволовых клеток. Как и другие гемопоэтины, фактор стволовых клеток вырабатывается прежде всего стромальными клетками, особенно фибробластами, а его основные клетки-мишени -- стволовые клетки. Фактор стволовых клеток синергично с ИЛ-3 участвует в поддержании пролиферации стволовых клеток и наиболее юных форм предшественников в коже, на базальной мембране, в подкожной жировой клетчатке. цитокин пролиферация иммунный

ИЛ-6 -синтезируется мононуклеарными фагоцитами, фибробластами, лимфоцитами, гепатоцитами, эндотелиальными, мезангиальными клетками. Индукторами выработки ИЛ-6 являются ИЛ-1, ФНО-a, интерфероны, колониестимулирующие факторы. Это плейотропный цитокин, играющий центральную роль в торможении опухолевого роста. ИЛ-6 является мощным провоспалительным цитокином, как и ИЛ-1 и ФНО, но продуцируется несколько позже последних, ингибируя их образование и относится к цитокинам, завершающим развитие воспалительной реакции. ИЛ-6 обладает большим влиянием на регуляцию иммунного ответа: стимулирует пролиферацию и дифференцировку В-клеток, секрецию иммуноглобулинов, усиливает антителообразование, участвует в продукции мультипотентных колониестимулирующих факторов и дифференцировке стволовых клеток, необходим для поддержания жизнеспособности стволовых клеток. Он подавляет апоптоз нейтрофилов, обладающих высокой цитотоксической активностью в отношении опухолевых клеток, стимулирует гепатоциты к синтезу различных белков. ИЛ-6 является костимулятором Т-клеток и тимоцитов, индуцирует продукцию ИЛ-2, а также усиливает действие ИЛ-3 и колониестимулирующих факторов.

ИЛ-8 - хемоатрактант, индуктор молекул адгезии, нитрооксидсинтазы в микроциркуляции и ускоритель передвижения нейтрофилов, является противовоспалительным цитокином, без его участия не обходится неоангиогенез. [26-50].

Эпидермальный фактор роста - этот фактор является одним из самых активных «пролифераторов» среди известных полипептидных факторов роста. Совместно с фактором роста кератиноцитов он способен вырастить новый эпидермис. Он может играть важную роль в индукции регенерации печени, осуществляя свое регуляторное влияние вместе с другими полипептидными факторами роста, среди которых в первую очередь следует назвать инсулин и глюкагон. Эпидермальный фактор роста в комбинации с инсулином и стероидными гормонами коры надпочечников стимулирует пролиферацию фибробластов, хондроцитов.

Фактор роста фибробластов - стимулирует пролиферацию фибробластов, глиальных клеток, миобластов, хондроцитов, клеток надпочечников.

Факторы роста - это факторы, способствующие пролиферации и дифференцировке стволовых клеток, клеток - предшественников. Они направляют стволовые клетки по определенному пути дифференцировки (например, в кератиноцит, фибробласт), кроме того, они способствуют пролиферации зрелых клеток. Синтез таких факторов и есть моделирование сигнала для запуска пролиферации стволовых клеток. Эти факторы приводят к появлению новых клеток кожи из стволовых для борьбы со старением кожи. [51-82].

Исследование биологических свойств «полипептида 18 он же интерлейкин 1 бета». Исследование содержания цитокинов и ростовых факторов на культуре клеток кожи до и после внесения в культуру «полипептида 18».

Целью этого исследования является изучение механизмов действия «полипептида 18» на культуре клеток кожи, что является прямым отражением его действия на целостную ткань кожи человека.

Материалы и методы: Для изучения действия «полипептида 18» выбрана культура клеток кожи, так как, имея культуру клеток кожи, мы можем получить более полное представление о происходящем в организме человека под влиянием «полипептида 18». Важно оценить влияние и совместное действие всех клеток кожи. В культуре клеток кожи содержатся кератиноциты, фибробласты, мононуклеары, лейкоциты, клетки Лангерганса, иммунные клетки, тучные клетки и др.

Клетки кожи выделяли из кожи взрослых доноров по методу Рейнвальда (Rheinwald, 1980), модифицированному Юдинцевой и соавторами (Юдинцева и др., 1999). В качестве источника клеток использовали кожу лица, полученную в результате пластических операций. Кусочки кожи в течение ночи инкубировали в растворе диспазы II в концентрации 0.5 % (Roche Diagnostics GmbH Mannheim, Германия) и коллагеназы гидробионтов в концентрации 0.2 % (ОАО «Технология», СанктПетербург) при 4 °С. Для получения суспензии клеток кожи помещали в раствор трипсина в концентрации 0.125 % и версена в концентрации 0.02 % («Биолот», Санкт-Петербург) на 10 мин при 37 °С. Действие фермента ингибировали добавлением сыворотки. Полученную суспензию клеток осаждали при 1000 g в течение 5 мин, удаляли супернатант, затем осадок клеток ресуспендировали в смеси сред DMEM и F12 (3 : 1). Выделенные клетки промывали трижды смесью сред DMEM и F12 (3 : 1) без сыворотки с последующим их осаждением при 1000 g в течение 5 мин. Затем клетки суспендировали в среде без сыворотки и высевали в 96-луночные платы по 105 клеток на лунку. Добавляли антибиотики и культивировали. До начала эксперимента клетки проходили 15 пассажей. При постановке экспериментов использовали культуру клеток кожи с плотностью клеток 1х10⁵/мл среды. Измеряли базальный уровень цитокинов и ростовых факторов в культуре (по 15 измерений каждого фактора), затем вносили «полипептид 18» в концентрации 20 нг/мл в среде Игла в количестве 0,3 мл, инкубировали 6 часов и снова измеряли уровень цитокинов и ростовых факторов (по 15 измерений каждого фактора). В контроле - культура клеток кожи инкубировалась с сывороточным альбумином и измерялся уровень интересующих факторов (по 15 измерений каждого фактора). Для количественного измерения факторов роста и цитокинов использовали коммерческие ELIZA тест-системы и наборы моноклональных антител производства фирмы Biosource (Бельгия).

Измеряли количество следующих факторов роста и цитокинов:

ь фактор роста кератиноцитов, (keratincyte growth factor ),

ь фактор роста фибробластов, (fibroblast growth factor),

ь эпидермальный фактор роста, (epidermal growth factor),

ь эндотелиальный фактор роста, (endothelium growth factor),

ь ИЛ-3, (IL-3),

ь ИЛ-6, (IL-6),

ь ИЛ-8, (IL-8).

Результаты измерения (средние величины) количества цитокинов и ростовых факторов в культуре клеток кожи под воздействием изучаемого «полипептида 18» представлены на гистограммах. Все факторы измерены в международных единицах (система СИ) - пикограммах, кроме эндотелиального фактора роста - он измерен в нанограммах (система СИ).

В культурах клеток кожи наблюдали достоверное увеличение содержания измеряемых факторов (p<0.05). Т.о. «полипептид 18» достоверно увеличивает количество изучаемых цитокинов и ростовых факторов в культуре клеток кожи. Увеличение содержания ИЛ-3, ИЛ-6, ИЛ-8, фактора роста кератиноцитов, фактора роста фибробластов, эпидермального фактора роста и эндотелиального фактора роста - есть каскад цитокинов и факторов роста необходимый для активации процессов пролиферации и дифференцировки стволовых клеток с целью запуска эффективного клеточного обновления клеток кожи [51-54]. Синтез такого каскада является доказательством эффективности действия «полипептида 18».

Вывод

Именно такой каскад цитокинов и ростовых факторов приводит к пролиферации и дифференцировке стволовых клеток в зрелые, высокодифференцированные клетки кожи, восстанавливающие необходимое количество функционирующих клеток [51-54]. Т.о. пептид может быть использован в профилактике преждевременного старения кожи, а так же в лечении - борьбе с признаками старения кожи.

Список литературы

1. Скрипкин Ю.К., Лезвинская Е.М. Кожа - орган иммунной системы // Вест.дерматол.и венерол. - 1989. - №10. - с. 14-18.

2. Зимина И.В., Лопухин Ю.М. Кожа как иммунный орган: клеточные элементы и цитокины // Иммунология.- 1994. - №1. - с.8-13.

3. Воскобойников Н.М., Чижик О.П. Неинфекционная иммунизация при термических поражениях // Клин. хирургия. - 1974. - № 5. - с.28.

4. Strunk B., Egger C., Leither J. et al. A Skin Homing Molecule Defines the Langerhans Cell Progenitor in Human Peripheral Blood // J. Exp. Med. - 1997. - Vol. 185. - Р.1131-1136.

5. Bridges M., Christifidou - Solomidou M., Albelda S. Expression and function of endothelial cell alpha v integrin receptors in wound-induced human angiogenesis in human skin / SCID mice chimeras // Am. J. Pathol. - 1997. - Vol. 151. - P.975-983.

6. Хлыстова З.С., Калинина И.И., Хавинсон В.Х. Участие эпидермиса в системе иммуногенеза у человека // Иммунология. - 1994. - №3. - С.25-28.

7. Shamblott M.J.,J. Gaerhart et al.Derivation of pluripotent stem cells from cultured human primordial germ cells; Proc.Natl.Acad.Sci.US; 1998,v.95, P.13726-31

8. Evans, M.J., and M.H. Kaufman Establishment in culture of pluripotent cells from mouse embryos. Nature (Lond.). 1981, v.292: P. 154-156 ;

9. Geiger H., Sick S., Bonifer C. et al; Globin gene expression is reprogrammed in chimeras generated by injecting adult hemopoietic stem cells into mouse blastocyst; Cell, 1998 v.93: P.1055-65

10. Deacon T, Dinsmore J, Costantini LC, Blastula-stage stem cells can differentiate into dopaminergic and serotonergic neurons after transplantation, Exp Neurol 1998 v.149 P. 28-41

11. Bianco P., Robey P. Mesenchymal Stem Cell: clinical applications J. Clin. Invest. 2000,v.105, P.1663-68

12. Boeuf H.,C.Hauss, F.DeGraeve et al.; LIF factor dependent transcriptional activaton of embryonic stem cells; J.Cell Biol.,1997,v.138; P.1207-17

13. Deans RJ, Moseley AB , Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Exp Hematol, 2000, v. 28, P.875-84

14. Hauss R, Lange C, Weissinger EM, Kolb HJ, et al. Evidence of peripheral blood-derived, plastic-adherent CD34(-/low) hematopoietic stem cell clones with mesenchymal stem cell characteristics. Stem Cells, 2000; v.18, P. 252-60

15. Itskovitz-Eldor J, Schuldiner M, Karsenti D et.al. Differentiation of human embryonic stem cells into embryoid bodies compromising the three embryonic germ layers. Mol Med 2000 Feb;6(2):88-95.

16. Kelli D.L., Rizzino A.; DNA Microarray analysis of genes regulated during the differentiation of embryonic stem cells; Mol.Reprod.Devel.,2000, v.56, P.113-23.

17. Krebsbach P.H., Kuznetsov S.A., Bianco P. et al. Bone marrow stromal cells: characterization and clinical application.Crit Rev Oral Biol Med 1999; v.10: P.165-81

18. Lewis R. A stem cell legacy: Leroy Stevens; The Scientists, A Stem Cell Legacy: The Scientist, 2000, v.14:P.19-24.

19. O'Shea K.S. Embryonic Stem Cell Models of Development; Anat.Rec.,1999, v.257, P. 32-41

20. Pittenger, M.F.; Mackay, A. M.; Beck, S. C.; et al., Multilineage potential of Adult Mesenchymal stem cells Science, 1999, v. 284, P. 143-47

21. Robey P.G Stem cells near the century mark J Clin Invest, 2000,v.105, P.1489-1491

22. Lei Pan et al. «Stem Cell Aging Is Controlled Both Intrinsically and Extrinsically in the Drosophila Ovary» опубликована в журнале Cell Stem Cell от 11 октября;

23. «Decline in Self-Renewal Factors Contributes to Aging of the Stem Cell Niche in the Drosophila Testis» опубликовано Cell Stem Cell, Volume 1, Issue 4, 11 October 2007, Pages 470-478, Monica Boyle, Chihunt Wong, Michael Rocha and D. Leanne Jones;

24. «Aging within the Stem Cell Niche» опубликовано Developmental Cell, Volume 13, Issue 5, 6 November 2007, Pages 603-604 Matthew R. Wallenfang.

25. Haynesworth S., Baber M., Caplan A., 1996; Ballas C., Zeilske S., Gerson S., 2002.

Размещено на Allbest.ru