Лекарственные средства и лекарственное растительное сырье: стандартизация и применение женьшеня

Размещено на http://www.allbest.ru/

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Учреждение образования

«БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Кафедра организации фармации

ЛР и ЛРС: стандартизация и применение женьшеня.

Кананович Наталия Николаевна

Научный руководитель: доцент Мушкина О.В.



ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬУСЛОВНЫХОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. Этимология названия, историческая справка

2. Систематическое положение ЛР

3. Ботаническая характеристика ЛРС

3.1 Ареал распространения, место обитания

4. Заготовка, сушка, хранение

5. Химический состав

6. Стандартизация ЛРС

6.1 Подлинность ЛРС

6.1.1 Макроскопические диагностические признаки

6.1.2 Микроскопические диагностические признаки

6.1.3 Исследование микроскопического строения вегетативных органов травы женьшеня

6.1.4 Качественный химический анализ

6.2 Показатели доброкачественности

6.3 Методы количественного определения действующих веществ

7. Применение ЛРС

7.1 ЛС содержащие женьшень

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ



ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

БАВ - биологически активные вещества;

БАД - биологически активная добавка;

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;

ГФ - государственная фармакопея;

МКЦ - микрокристаллическая целлюлоза;

ЛРС - лекарственное растительное сырье;

ЛС - лекарственное средство;

РФ - Российская Федерация;

РБ - Республика Беларусь;

США - Соединенные Штаты Америки;

ЦНС - центральная нервная система



ВВЕДЕНИЕ

Многие тысячелетия женьшень был овеян таинственным ореолом бесчисленных легенд и преданий. Нет, пожалуй, другого объекта живой природы, который бы пользовался столь огромной славой. И ни о каком ином растении в мире не сложено больше легенд и преданий, чем о женьшене.

Женьшень является одним из наиболее известных лекарственных растений восточной медицины. На протяжении тысячелетий он использовался человеком для излечения самых разнообразных недугов и для поддержания жизненных сил в старости. В настоящее время диапазон его применения расширился, а наши представления о механизме его действия легли на прочную основу знаний химического состава растения. Дикорастущие и культивируемые формы, биотехнологическое сырье и промышленные препараты вошли в необозримый арсенал женьшеневой терапии. Цель: фармакогностическое исследование женьшеня обыкновенного, стандартизация сырья данного растения, а так же современные способы применения лекарственного растительного сырья женьшеня. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

· Изучить основные диагностические признаки, характерные для строения женьшеня

· Изучить ареал распространения и экологические особенности растения;

· Рассмотреть особенности заготовки, сушки и хранения лекарственного растительного сырья в отечественной и зарубежных фармакопеях;

· Изучить химический состав растения;

· Изучить методы оценки подлинности и доброкачественности лекарственного растительного сырья по отечественной и зарубежной фармакопеям;

· Изучить фармакологическое действие, оказываемое растением;

· Рассмотреть основные ЛС отечественного и зарубежного производства, содержащие в составе женьшень.



1. Этимология названия, историческая справка

Родовое название растения Panax (производное от слова panacea, что обозначает «лекарство от всех болезней») дано К. Линнеем в 1753 году, когда до Европы уже дошла громкая слава всеисцеляющего средства. Panax происходит от имени панацеи дочери бога-врача Асклепия.

Видовой эпитет P. ginseng от китайского jen - человек и chen - корень, что отражает сходство корня с фигурой человека . Первое письменное упоминание о женьшене находится в древнейшем китайском сочинении о лекарственных средствах «Шень-нунбэн цао», относящемся к I в. до н.э., хотя в восточной медицине он применяется не менее 4-5 тысячелетий. В истории медицины не было более легендарного растения. Женьшеню приписывали свойство не только исцелять все болезни, но и вселять жизнь в умирающего человека. В народе его называли «корнем жизни», «чудом мира», «даром бессмертия». Считалось, что растение с такими исключительными свойствами не могло возникнуть обычным путем, и поэтому о происхождении женьшеня сложено много легенд. В одной из них утверждается, что растение рождает молния: если молния ударит в прозрачную воду горного источника, то источник уходит под землю, а на его месте вырастает растение, вобравшее в себя силу небесного огня [1].



2. Систематическое положение ЛР

Систематическое положение женьшеня: отдел покрытосеменных (Magnoliophyta), класс двудольных (Magnoliopsida), порядок Зонтикоцветные (Apiales), семейство аралиевых (Araliaceаe), род панакс (Panax).



3. Ботаническая характеристика ЛРС

Женьшень настоящий (P. ginseng С.A. Meyer) представляет собой травянистое многолетнее растение с зеленым или зеленобурым стеблем от 30 до 80 см (редко 86 см) высотой и около 0,7 см в диаметре. В большинстве случаев стебель одиночный, иногда встречается многостебельное растение. Низовые листья чешуевидные, срединные - в мутовке по 2-5, с длинными черешками, пальчато-сложные, из 5 эллиптических заостренных мелкопильчатых листочков. На вершине стебель несет мутовку из нескольких (2?6) пальчатосложных листьев на черешках до 10 см длиной. Листья взрослого растения насчитывают 5 листочков обратнояйцевидной или обратноланцетной формы; средний самый крупный, 4?20 см длиной и 2?8 см шириной, крайние существенно меньше.

Листочки по краю мелкопильчатые, голые или с очень редкими волосками. Расположены они на черешочках до 3,5 см длиной.

Зацветает в середине - конце июня (на восьмой-десятый год), продолжительность цветения около 2 недель. Соцветие - зонтик. Цветки мелкие, обоеполые, 5-членные, зеленовато-белые, 2?4 мм в диаметре. Чашечка с широко-треугольными зубцами. В зонтике насчитывается в среднем 16 цветков, но встречаются и многоцветковые экземпляры (более 40 цветков). Количество цветков увеличивается с возрастом растения. Плоды - ярко-красные сочные костянки. Размеры составляют в среднем 1,5Ч0,9Ч0,7 см, с желтой мякотью, сжатые сверху и с боков, содержат две плоские светло-желтые косточки, которые вдоль верхнего края имеют валик и ясно выраженные жилки по параллельно лежащим канавкам. Поверхность косточки покрыта мелкими бородавочками и такими же углублениями, на ощупь несколько шероховатыми. Длина косточки составляет 4?6 мм, ширина до 5 мм, оболочка плотная. Масса косточек увеличивается с возрастом растения. Плоды созревают в середине августа и держатся до октября. Распространяются птицами. Семена прорастают через 18-20 месяцев после опадения. Подземная часть побега («шейка») переходит в мясистый, сильно разветвленный стержневой корень, образующий корневище. Корневище длинное, с многочисленными стеблевыми следами, число которых примерно соответствует числу лет жизни растения. У корней культивируемых растений корневище сильно увеличено, у некоторых экземпляров сохраняется и имеет до 7-8 стеблевых следов. Корень (называемый корневщиками «тело») желтоватый, плотный, цилиндрический, до 3 и более см в диаметре, с многочисленными разветвлениями, твердый, относительно ломкий. Корни обладают способностью к изменению своей формы, в частности, к сокращению. Контрактильные, т.е. сокращающиеся, корни позволяют женьшеню втягивать в глубь почвы зимующую почку, тем самым защищая ее от зимних морозов. Сокращение корней приводит к образованию на главном корне (теле) поперечных морщин, число и глубина которых увеличиваются с возрастом. Многочисленные глубокие морщины ? верный признак того, что корень является диким и рос в тайге, а не культивированный.

Продолжительность жизни - до 200, возможно, до 400 лет. В течение нескольких лет может находиться в состоянии покоя и не развивать надземных органов. Размножается почти исключительно семенами. Вес подземных органов 20-25-летнего растения - 20-25 г, максимальный известный вес - 600 г. Ежегодный прирост подземных органов одного экземпляра - 1-1,5 г. .[2,3]

3.1 Ареал распространения, место обитания

В естественных условиях женьшень распространен в Приморском крае, на севере КНДР и северо-востоке КНР. Произрастает на горных склонах различной ориентации относительно сторон света, на высоте 200--700 метров над уровнем моря в многоярусных, разнообразных по составу хвойно-широколиственных лесах, где находит для себя оптимальные температурно-влажностные и почвенные условия. Почвы -- влажные бурые горно-лесные оподзоленные с комковато-зернистой структурой и большим количеством продуктов выветривания коренных пород (мелкий щебень), благодаря чему почва влаго- и воздухопроницаема. Женьшень чувствителен к весенним заморозкам. В период вегетации при температуре -2...-3 °С на почве поражаются не только молодые, но и взрослые растения, особенно ранимы генеративные органы (цветочные бутоны). Корни во время зимнего покоя переносят значительное охлаждение и сохраняют жизнеспособность даже в промерзшей почве, однако нуждаются в укрытии на зиму лесной подстилкой и снегом.

Женьшень - теплолюбивое растение. Об этом косвенно говорит его произрастание в средних частях горных склонов, где безморозный период длиннее, чем в низинах и на вершинах сопок. Однако температура почвы выше 25°С, что характерно для оранжерей и комнатных условий, неблагоприятно сказывается на растениях: листья теряют упругость, побеги поникают. Это, по-видимому, одна из причин, служащих препятствием для выращивания драгоценного дальневосточного реликта в жарком климате среднеазиатских республик. Другая причина -- требования к влажности. Являясь типичным мезофильным растением он, как и большинство аралиевых, не может существовать как вид в условиях низкой в период вегетации относительной атмосферной влажности, по-видимому, меньше 60%. Такая особенность женьшеня частично связана со слабым развитием устьиц. Имеющихся устьиц недостаточно, чтобы обеспечить необходимое испарение воды, а охлаждение листьев в сухом и жарком воздухе. Поэтому прямые солнечные лучи приводят к перегреву вегетативных органов, нарушению физиологических процессов, появлению ожогов и полной гибели побегов.

Природные запасы женьшеня никогда не были большими, и о полном покрытии потребности в нем путем сбора дикорастущего корня в настоящее время говорить не приходится, поэтому женьшень выращивают. Плантации женьшеня имеются в Японии, Китае, особенно большие - в Корее. Первый практический опыт по выращиванию женьшеня в культуре в Беларуси относится к 1957 году. Его осуществил в Толочинском районе женьшеневод-любитель А.К. Шестаков. Первые экспериментальные работы по изучению женьшеня начаты Центральным ботаническим садом в 1982 году под руководством М.А. Кудинова, когда была заложена опытная плантация. В результате многолетних исследований по женьшеню изучены биология, особенности роста и развития, требования к почвенным условиям выращивания, световому режиму, влажности почвы и воздуха, способам защиты от вредителей и болезней, обоснованы основные приёмы возделывания. По результатам работы подготовлены первые в республике научные рекомендации по возделыванию женьшеня «Разработка технологии плантационного выращивания женьшеня».[4]

С целью расширения сырьевой базы разработана также биотехнология культуры ткани и клеток женьшеня. Из каллусной ткани штамма БИО-2, полученной in vitro из корня женьшеня, производят сухую биомассу женьшеня. Она представляет собой округлые кусочки или кусочки неправильной формы, пористые, легкие, очень легко рассыпающиеся при растирании до состояния порошка. Цвет светло-желтого или светло- коричневого, слабый, специфический запах, солоновато-горький вкус[4,5,6].

женьшень лекарственный сырье заготовка



4. Заготовка, сушка, хранение

Для сохранения женьшеня, являющегося ценнейшим лекарственным растением, необходимо строго соблюдать сроки и способы его заготовки. Заготовку женьшеня начинают со времени созревания (покраснения) плодов, т.е. не ранее первой декады августа. Сбору подлежат только плодоносящие, хорошо развитые растения, имеющие не менее 3 листьев и корень массой более 10 г. Корни женьшеня выкапывают с максимальной осторожностью, очищают от земли мягкой щеточкой (мыть не рекомендуется), не допуская их повреждения [ 1, 7]. С найденного растения собирают зрелые плоды и высаживают их в почву в месте находки или в других частях леса с подходящими условиями [8, 9, 1]. Выкопанные корни укладывают в коробки, сделанные из коры кедра, выстланные умеренно увлажненным мхом и слоем легкой лесной почвы, взятой с места заготовки женьшеня и просеянной через решето [8, 7]. Корни женьшеня сушат на солнце или в сушилках при температуре не выше 50 °С, раскладывая тонким слоем [9]. В Корее и Китае корни женьшеня подвергают разнообразной специальной обработке. Красный женьшень получают при воздействии горячего водяного пара в течение 30 мин и более и последующем высушивании при 30 °С. В этом случае крахмал превращается в клейстер и сухие корни приобретают роговую консистенцию, становятся твердыми и тяжелыми, цвет снаружи и на изломе красновато-бурый. Белый женьшень получают в результате простой солнечной сушки. В Китае свежий корень варят в сахарном сиропе [10, 1].

По характеру и степени поврежденности корни делят на две группы [9, 1]. К первой группе относятся: а) корни, у которых поломан один дополнительный отросток; б) корни, имеющие естественные или искусственные повреждения до 5% поверхности основного тела или дополнительных отростков (царапины, срывы кожицы и др.); в) корни с поврежденной шейкой и головкой, но без поломов. Ко второй группе относятся: а) корни с поломкой более одного дополнительного отростка; б) корни, имеющие естественные или искусственные повреждения от 5 до 10 % поверхности основного тела или дополнительных отростков; в) корни без головки (почки).

Влажность корня должна приблизительно соответствовать его влажности в условиях естественного произрастания [1, 11]. Нормальная влажность характеризуется тем, что корень является плотным (на ощупь) и свежим (не вялым) по внешнему виду. Сырые корни женьшеня хранят при низких положительных температурах, не допуская их высыхания, упаковывая в деревянные ящики в количестве не более 3 кг в одном ящике. На первичных заготовительных пунктах сырые корни женьшеня хранят в легких деревянных ящиках, дно и стенки которых выстилают умеренно влажным мхом [1, 7]. (Монография куркин)



5. Химический состав

Из корня женьшеня выделено несколько классов соединений. Они включают: тритерпеновые сапонины, основные полиацетилены и сесквитерпены, полисахариды, пептидогликан и его аналоги, азотсодержащие органические соединения и другие, широко распространенные соединения, например, жирные кислоты, углеводороды и фенолы [12] .( анал химия)

Основное фармакологическое действие обусловлено гинзенозидами. Локализуются гинзенозиды в основном в паренхимных тканях - мезофилле листа, поверхностных паренхимных тканях черешка и стебля, коре и сердцевинных лучах корня и т.д. Максимальное содержание отмечается в мелких придаточных корнях.[13]

В последнее время пристальное внимание уделяется пептидам женьшеня. К этой группе веществ относятся сравнительно низкомолекулярные соединения, представляющие собой полимеры из небольшого числа аминокислот. Известны свободные пептиды и связанные, например, входящие в состав гликанов. Несмотря на свои малые размеры, пептиды часто обладают высокой биологической активностью. Например, пептид щелочного экстракта женьшеня показал в опытах с культурой клеток почек хомячка стимуляцию пролиферации клеток. Также невелика пептидная часть гликана панаксана А, она составляет всего 1,7% от общей массы молекулы, но имеет решающее значение для проявления его гипогликемической активности. Активному изучению подвергаются и другие группы биологически активных веществ из корней женьшеня - полисахариды и эфирные масла.

Содержание водорастворимых полисахаридов в корнях женьшеня доходит до 38,7%, что значительно больше, чем у других дальневосточных аралиевых (2,3-5,7%). . Для проявления биологического действия полисахаридов важно не только то, из каких простых сахаров они состоят, но и то, в каком порядке эти простые сахара следуют и каким образом они связаны друг с другом.

До 80% эфирных масел составляют сесквитерпены, из которых наибольшая доля (до 5-6%) приходится на фарнезол. Общее содержание эфирных масел у культивируемых растений может доходить до 0,96%.

В состав женьшеня входят также витамины (С, группы В, пантотеновая, никотиновая, фолиевая кислоты), слизи, смолы, пектин, аминокислоты. Свободные аминокислоты накапливаются в верхних слоях коровой паренхимы корня и корневища, в первичной коре, колленхиме, флоэме всех органов . Из макроэлементов представлены калий, кальций, фосфор, магний, из микроэлементов - железо, медь, кобальт, марганец, молибден, цинк, хром, титан. Изучение распределения в корнях женьшеня пяти микроэлементов (меди, железа, молибдена, марганца и цинка) показало явное повышение их содержания к концу вегетационного периода.[10,12,13]

Сравнительно недавно внимание исследователей было привлечено к содержанию в препаратах женьшеня металлического германия или его солей. Предполагается, что присутствие германия в препаратах женьшеня важно для проявления лекарственных свойств растения. [13]



6. Стандартизация

Корень женьшеня внесен в Государственные фармакопеи Республики Беларусь, Российской Федерации, Европейскую, Японии, США, Великобритании, Германии, Китая .

В РБ стандартизацию проводят по сумме панаксазидов Rg1 и Rb1 в перерасчете на сухое вещество не менее 0,4 %, по сумме панаксазидов в перерасчете на Rb1 не менее 1%.

Стандартизацию корней женьшеня по Европейской и Великобританской фармакопее проводят путем определения суммы гинзенозидов Rb1 и Rg1 методом ВЭЖХ /10/. В США определяют содержание гинзенозидов Rb1 и Rg1 отдельно друг от друга также методом ВЭЖХ . В фармакопее Германии стандартизацию корней женьшеня проводят по содержанию гинзенозидов Rg1 (не менее 1,5 %) методом тонкослойной хроматографии. В Японской фармакопее так же стандартизируют методом тонкослойной хроматографии по содержанию Rg1(не менее 0,10% в пересчете на сухой остаток) и Rb1(не менее 0,20% в пересчете на сухой остаток). В Китайской фармакопее пользуются методом ВЭЖХ для определения суммы Rg1 и Re, отдельно Rb1. [14,15,16,17,18,19].

6.1 Подлинность

Подлинность - это соответствие сырья тому наименованию, под которым оно поступило на анализ, а также определение того, принадлежит ли сырьё соответствующему виду производящего растения.

6.1.1 Макроскопические диагностические признаки

Цельное сырье. Корни стержневые, большей частью цилиндрические, с ответвлениями. Могут быть изогнутыми. Длина корней до 20 см, диаметр до 2,5 см. Поверхность от бледно-желтого до белого с желтоватым оттенком цвета (белый женьшень) или коричневато-красного цвета (красный женьшень) с продольными морщинами. В верхней части могут быть остатки побегов в виде короны. Излом ровный. На поперечном срезе видна широкая наружная зона с рассеянными смоляными каналами оранжево-красного цвета. В нижней части белого женьшеня имеются многочисленные мелкие корешки, которые обычно отсутствуют в красном женьшене. Запах специфический [17].

Резаное сырье. Пластины прямоугольной или треугольной формы в сечении, длиной до 10 см, шириной 0,2-1,8 см, толщиной 0,2-0,8 см. Имеются кусочки тонких нитевидных корешков.

Наличие "шейки" и "головки" видно также в резаном сырье.

Цвет желтовато - белый. Запах специфический. Вкус сладкий, жгучий, затем горьковатый /11/.

В соответствии с требованиями ГФ СССР XI издания, к медицинскому применению допускаются корни женьшеня корейского красные и белые.

Красный корень полупрозрачный, имеет роговидную консистенцию, очень твердый и тяжелый, поверхность -- продольно-глубокоморщинистая, а на поперечном разрезе - мелкоскладчатая; тонкие корешки хрупкие. «Тело» корня веретенообразное или почти цилиндрическое, «шейка» и «головка» обычно отсутствуют, у некоторых экземпляров на верхушке заметны следы от 1-3 стеблей. Ответвлений мало, в верхней части бывают 1-2 отростка, в нижней части имеются 2-3 отростка и более. Цвет снаружи и на изломе красновато-бурый, вкус сладковатый, затем горьковатый.

Белый корень отличается от красного по окраске, снаружи он беловато-желтый, на изломе белый, мучнистый [6].

6.1.2 Микроскопические диагностические признаки

При просматривании измельченного сырья (355) (светло-желтого цвета) с использованием раствора хлоралгидрата видны: многочисленные фрагменты тонкостенных паренхиматозных клеток и фрагменты крупных секреторных каналов, содержащих смолу желтовато-коричневого цвета; нелигнифицированные трахеиды и частично лигнифицированные сосуды со спиральной или сетчатой утолщенностью, по отдельности или группами; рассеянные друзы оксалата кальция.

При использовании 50 % раствора глицерина в измельченном сырье (355) видны многочисленные крахмальные зерна, простые или 2--6-сложные, диаметром от 1 мкм до 10 мкм. В красном женьшене крахмальные зерна часто деформированы и разрушены под действием пара или могут полностью отсутствовать [17]. (Рисунок 6.1.)

1 - пробка; 2 - вместилище схизогенного характера; 3 - клетки паренхимы, содержащие друзы оксалата кальция; 4 - сердцевинный луч; выстилающие клетки канала; 5 - вторичная кора; 6 - камбиальная зона; 7 - паренхима, содержащая пигмент.

Рисунок 6.1 - Женьшеня настоящего корни (поперечный срез главного корня).

6.1.3 Исследование микроскопического строения вегетативных органов травы женьшеня

Строение надземной части женьшеня, в фитомассе которой преобладают стебли и листья, с точки зрения анатомии и гистологии исследовано недостаточно. Морфологические признаки растительного сырья позволяют проводить диагностику растения лишь в цельном виде. Для более полной идентификации и характеристики надземной части женьшеня, а также для однозначного установления ее подлинности необходимы данные анатомии и гистологии вегетативных органов растения. Изучив литературные данные о строении надземной части растения можно выделить следующие диагностические признаки характерные для листа женьшеня: дорзовентральный тип листовых пластинок листочков; характерная форма поперечных сечений их жилок; выраженная паренхиматизация проводящих тканей центральной и боковых жилок; аномоцитный тип устьичных аппаратов, ладьевидная форма замыкающих клеток устьиц; наличие крупных трихом по типу эмергенцев на V-образных выступах краев листочков; особенности кутикулярного слоя верхнего и нижнего эпидермиса.

Основные морфолого-анатомические особенности строения стебля женьшеня.

Пучковый тип; редко встречающиеся лизигенные вместилища в паренхиме первичной коры; два типа пучков: открытые коллатеральные с крупной полостью рексигенного происхождения и гантелевидные пучки; наличие по периметру стебля мощного склеренхимного кольца волнообразной формы, образующего полукруг над каждым пучком.[20]

6.1.4 Качественный химический анализ

1. Тонкослойная хроматография

Испытуемый раствор. К 1,0 г измельченного сырья прибавляют 10 мл 70 % раствора метанола. Кипятят с обратным холодильником в течение 15 мин. Охлаждают, фильтруют и доводят метанолом до объема 10,0 мл.

Раствор сравнения. 5,0 мг эсцина и 5,0 мг арбутина растворяют в 1 мл метанола Р.

Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля (5--40 мкм) [или ТСХ пластинка со слоем силикагеля (2--10 мкм)]. Подвижная фаза: этилацетат -- вода -- бутанол (25:50:100, об/об/об), используют верхний слой после отстаивания в течение 10 мин. Камеру не насыщают парами подвижной фазы.

Наносимый объем пробы: по 20 мкл [4 мкл] в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 10 см [5 см] от линии старта.

Высушивание: на воздухе.

Проявление: пластинку опрыскивают раствором анисового альдегида Нагревают при температуре от 105°С до 110°С в течение 5--10 мин. Просматривают при дневном свете.

Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора [17]

2 . При нанесении на порошок корня женьшеня капли концентрированной серной кислоты через 1-2 минуты появляется кирпично-красное окрашивание, переходящее в красно-фиолетовое, а затем в фиолетовое (гликозиды).

В круглодонную колбу вместимостью 50 мл помещают 0,5 г порошка корня женьшеня, прибавляют 10 мл 95% спирта и нагревают с обратным холодильником на плитке в течение 1 часа, поддерживая умеренное кипение. Извлечение охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр; 0, 02 мл фильтрата микропипеткой наносят на стартовую линию пластинки “Cилуфол” и хроматографируют восходящим способом в системе растворителей хлороформ-метиловый спирт-вода (61:32:7). Насыщеннее камеры не менее 2 часа. Когда фронт растворителей пройдет до конца пластинки, ее вынимают, опрыскивают 20% спиртовым раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты и нагревают в сушильном шкафу при 100-110 С в течение 10 минут. На хроматограмме должны проявиться пятна розового цвета с Rf от 0,2 до 0,7 (панаксозиды)[11,17]. (Таблица 6.1.)

Таблица 6.1- Хроматографическая пластинка

Верх хроматографической пластинки
Арбутин: зона коричневого цвета Эсцин: зона серого цвета	Зона фиолетового цвета (панаксозид Rg1+Rg2) Слабая зона фиолетового цвета (панаксозид Rf) Зона фиолетового цвета (панаксозид Re) Зона фиолетового цвета (панаксозид Rd) Слабая зона фиолетового цвета Зона фиолетового цвета (панаксозид Rс) Зона фиолетового цвета (панаксозид Rb1+Rb2)
Раствор сравнения	Испытуемый раствор

6.2 Показатели доброкачественности

Доброкачественность ЛРС определяется его чистотой, нормативной влажностью и зольностью, отсутствием плесени и амбарных вредителей; в нём должно содержаться необходимое количество действующего вещества.

Числовые показатели корня женьшеня

Допустимые примеси. Сумма допустимых примесей: не более 2 %

Panaxquinquefolium. Просматривают хроматограмму, полученную после количественного определения, содержания суммы панаксозидов Rg1 и Rb1. В случае замены корней Panax ginseng на корни Panax quinquefolium на хроматограмме испытуемого раствора отсутствует пик, соответствующий панаксозиду Rf (рисунок 6.2).

1. Панаксозид Rg1; 2. Панаксозид Re; 3. Панаксозид Rf; 4. Панаксозид Rb1; 5. Панаксозид Rc; 6. Панаксозид Rb2; 7. Панаксозид Rd

Рисунок 6.2 - Хроматограмма испытуемого раствора

Потеря в массе при высушивании. Не более 10,0 %. 1,000 г измельченного сырья сушат при температуре от 100°С до 105°С по ГФ РБ, по фармакопее Великобритании и Европы не более 12%.

Общая зола. Не более 7,0 % по ГФ РБ, по фармакопее Великобритании не более 6,0%, в Европейской фармакопее не более 6%, Китая- 5%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 1,0 % /14,15,16,17,18,19/.

Влажность. Цельное сырье - не более 13 %; измельченное сырье - не более 13 %; порошок - не более 13% ,в фармакопее Китая не более 12 % /12/.

Экстрактивные вещества (извлекаемые 70% спиртом). Не менее 20%.

Корней, потемневших и побуревших с поверхности. Не более 10% /10,13/.

Действующие вещества. Не менее 0,40% суммы панаксозидов Rg1 и Rb1 в пересчете на сухое сырье или не менее 1,0% суммы панаксозидов в пересчете на панаксозид Rb1 в сухом сырье [ 11,17].

6.3 Методы количественного определения действующих веществ

Определение содержания суммы панаксозидов Rg1 и Rb1. Жидкостная хроматография.

50 г испытуемого сырья полностью измельчают. Испытуемый раствор. 1,00 г измельченного сырья помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 70 мл 50 % (об/об) раствора метанола, добавляют несколько кусочков пемзы и кипятят с обратным холодильником на одяной бане в течение 1 ч. Охлаждают, центрифугируют и собирают надосадочную жидкость. Остаток переносят в ту же круглодонную колбу и повторяют экстракцию. Надосадочные жидкости объединяют и выпаривают досуха при пониженном давлении при температуре не выше 60°С. Остаток растворяют в 20,0 мл смеси из ацетонитрила и воды Р (20:80, об/об). 2,0 мл полученного раствора разводят смесью из ацетонитрила и воды (20:80, об/об) до объема 10,0 мл и фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Раствор сравнения. 3,0 мг панаксозида Rg1, 3,0 мг панаксозида Re, 3,0 мг панаксозида Rf и 3,0 мг панаксозида Rb1 растворяют в метаноле и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем. Условия хроматографирования: - колонка длиной 0,125 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии с размером частиц 5 мкм;

- температура 35°С;

- подвижная фаза А: вода, доведенная кислотой фосфорной до рН 2;

- подвижная фаза B: ацетонитрил. (Таблица 6.2.)

Таблица 6.2 - Определение суммы панаксозидов методом жидкостной хромотографии

Время (мин)	Подвижная фаза А ( %, об/об)	Подвижная фаза В ( %, об/об)
0--8 8--40 40--45 45--47 47--52 52--55	80 80 > 60 60 > 40 40 > 0 0 0 > 80	20 20 > 40 40 > 60 60 > 100 100 100 > 20

- скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;

- спектрофотометрический детектор, длина волны 203 нм;

- время уравновешивания системы: 20 мин перед каждым вводом;

- объем вводимой пробы: 20 мкл.

Порядок выхода пиков: панаксозид Rg1, панаксозид Re, панаксозид Rf и панаксозид Rb1.

Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения:

- разрешение между пиками панаксозида Rg1 и панаксозида Re не менее 1,0.

Содержание панаксозида Rg1 и панаксозида Rb1 в процентах рассчитывают по формуле (1):



где

S1 -- площадь пика панаксозида Rb1 на хроматограмме испытуемого раствора;

S2 -- площадь пика панаксозида Rg1 на хроматограмме испытуемого раствора;

S3 -- площадь пика панаксозида Rb1 на хроматограмме раствора сравнения;

S4 -- площадь пика панаксозида Rg1 на хроматограмме раствора сравнения;

m1 -- масса навески испытуемого сырья, г;

m2 -- масса навески панаксозида Rb1 в растворе сравнения, мг;

m3 -- масса навески панаксозида Rg1 в растворе сравнения, мг;

Р1 -- содержание панаксозида Rb1 в реактиве, %;

Р2 -- содержание панаксозида Rg1 в реактиве, % [12]



7. Применение ЛРС

Механизмы фармакологического действия женьшеня еще полностью не раскрыты. Большинство ученых считают, что в основе разнообразных проявлений действия женьшеня лежит далеко не один механизм. Повышение умственной работоспособности человека свидетельствует о бесспорном влиянии женьшеня на кору большого мозга. С другой стороны, влияние женьшеня на реактивность организма, обмен веществ, гонадотропное и антидиуретическое действия говорит о воздействии женьшеня на промежуточный мозг - гипофиз, а тем самым и на другие железы внутренней секреции.

Как известно, традиционным лекарственным сырьем женьшеня является его корень. Но в тоже время ученые доказали, что в надземных частях растения содержится не меньше гликозидов, чем в его корне. В связи с этим в народной медицине Китая, Кореи и российского Приморья, помимо корня женьшеня, применяют его листья и стебли, а также цветки и семена.

Проведя многочисленные опыты, медики доказали, что настойка из листьев женьшеня оказывает сходное с настойкой корня фармакологическое действие. Ее вполне можно применять при лечении сахарного диабета I и II типа, осложняющих диабет некрозов и трофических язв, нейропсихических заболеваний, гипотрофии, синдрома хронической усталости, а также для восстановления организма после перенесенного стресса.

Женьшень является знаменитым тонизирующим, общеукрепляющим и стимулирующим средством. Препараты этого растения активно влияют на центральную нервную систему, повышают работоспособность, снижают физическую и умственную усталость, улучшают аппетит и стимулируют половые функции. Научно доказано положительное влияние женьшеня при депрессивных состояниях, неврастении. Кроме того, корень жизни улучшает функциональную деятельность сердечно-сосудистой системы и регулирует уровень артериального давления.

Препараты женьшеня принимают:

как тонизирующее, общеукрепляющее средство, повышающее работоспособность и сопротивляемость организма к стрессовым ситуациям, физическим нагрузкам, неблагоприятным воздействиям внешней среды;

в период восстановления организма после тяжелых заболеваний, операций;

при длительном физическом и психическом переутомлении;

при неврозах;

при бессоннице;

при половых расстройствах;

для стимуляции деятельности желез внутренней секреции;

при нарушении обмена веществ;

для снижения уровня сахара в крови;

для усиления репаративных процессов в организме;

в качестве кровоостанавливающего средства.

К самым важным открытиям последних десятилетий относительно целебных свойств корня относят тот факт, что спиртовые экстракты данного растения повышают кровяное давление, а водные снижают.

Одним из мало освещенных в научной литературе эффектов женьшеня является его способность не только препятствовать ожирению, но и вообще значительно понижать вес тела. В настоящее время изучением этого свойства корня жизни вплотную занимаются ученые из США.

Как известно, препараты женьшеня используют в качестве средства, предупреждающего старение. Однако до сих пор неизвестно, какие именно вещества, входящие в состав этого растения, предупреждают старение организма человека. При этом среди возможных "кандидатов" на роль эликсира бессмертия исследователи выдвигают мальтол, который возникает в ходе температурного воздействия на корень женьшеня.

Исследования, проведенные в последние годы, показали, что полисахариды, содержащиеся в листьях женьшеня, оказывают противоопухолевое действие. Таким образом, препараты из них могут применяться при лечении больных раком.[21]

7.1 ЛС содержащие женьшень

Тримунал

Форма выпуска. По 10 таблеток в контурной ячейковой упаковке; по 20 таблеток в банки. Каждую банку или одну, две контурные ячейковые упаковки вместе с инструкцией по применению помещают в пачку из картона.

Состав. Активные компоненты: трава эхинацеи пурпурной - 200 мг, корней солодки - 125 мг, корней женьшеня - 15 мг. Вспомогательные вещества: лактозы, моногидрат, кальция стеарат (Е-470), повидон К 25 (Е-1201), крахмал картофельный.

Фармакологические свойства и показания к применению. Обладает адаптогенными, иммуностимулирующими и общеукрепляющими свойствами. Повышает умственную и физическую работоспособность, способствует ее сохранению и восстановлению при выраженных нервно-психических и физических нагрузках. Женьшень усиливает процессы возбуждения в нейронах коры и в стволовых отделах головного мозга, активирует обмен веществ, повышает работоспособность. Применяется в качестве лечебно-профилактического, адаптогенного и общеукрепляющего средства при интенсивных и продолжительных нервно-психических и физических нагрузках, астенических проявления различного генеза, в период реконвалесценции после хронических заболеваний.

Противопоказания. Гиперчувствительность, артериальная гипертензия, нарушения сердечной деятельности, выраженный атеросклероз, повышенная нервная возбудимость, системные заболевания, при которых не рекомендуется применение иммуностимулирующих средств (туберкулез, лейкоз, СПИД, ВИЧ-инфекция, аутоиммунные заболевания), непереносимость лактозы, беременность, период лактации, детский возраст до 12 лет.

Страна - производитель. РУП «Белмедпрепараты», РБ.

Женьшеня настойка

Форма выпуска. Флаконы темного стекла по 30 мл, в коробке картонной 1 флакон.

Состав. Корней женьшеня измельченных - 100 г, спирта этилового 70% - достаточное количество до получения 1 л настойки.

Фармакологические свойства и показания к применению. В качестве тонизирующего и стимулирующего средства при повышенных физических и умственных нагрузках, для повышения работоспособности и сопротивляемости организма к неблагоприятным воздействиям среды, в период выздоровления после перенесенных заболеваний. При астенических состояниях, при комплексной терапии нарушений половой функции на почве неврастении.

Противопоказания. Гиперчувствительность, артериальная гипертензия, повышенная возбудимость, бессонница, кровоточивость, лихорадочный синдром на фоне острых инфекционных заболеваний, детский возраст, беременность, период лактации.

Страна - производитель. ОАО «Борисовский завод медицинских препаратов, РБ; НПУП «Диалек», РБ; РУП «Белмедпрепараты», РБ; ЗАО «БелАсептика», РБ; Фармацевтическая фабрика г.Житомир, ООО ДКП, Украина.

Регистрация в РБ. Зарегистрировано.

Эхингин

Форма выпуска. Таблетки в контурной ячейковой упаковке №10х1, №10х2 или во флаконах №20.

Состав. Корней женьшеня - 15 мг; травы эхинацеи пурпурной - 200 мг.

Фармакологические свойства и показания к применению. Оказывает стресспротекторное, ноотропное и анксиолитическое действие, повышает физическую выносливость, способствует сохранению и восстановлению работоспособности и иммунитета при больших физических нагрузках.

Противопоказания. Повышенная нервная возбудимость, гипертензия, нарушения сердечной деятельности, выраженный атеросклероз, бессонница, беременность, период лактации, системные заболевания, при которых не рекомендуется применение иммуностимулирующих средств, детям до 12 лет.

Страна - производитель. РУП «Белмедпрепараты», РБ.

Регистрация в РБ. Зарегистрировано.

Гинсана

Форма выпуска. Капсулы в блистере по 10 шт.; в пачке картонной 1 или 3 блистера.

Состав. Высокостандартизированный экстракт женьшеня G115, изготовленный из специально отобранного высококачественного корня женьшеня (Panax ginseng C.A.Meyer), по технологии, позволяющей сохранить максимальное количество активных веществ. Содержит 8 важнейших типов гинзенозидов: Rb1, Rb2, Rc, Rd, Re, Rf, Rg1, Rg2.

Фармакологические свойства и показания к применению. Стимулирует обмен веществ и энергии, клеточную активность, улучшает усвоение кислорода тканями, усиливает физическую и умственную работоспособность и повышает неспецифическую резистентность организма. Оказывает гипогликемическое действие. Понижение физической и умственной работоспособности, усталость, нарушение способности к концентрации внимания, период реконвалесценции.

Противопоказания. Гиперчувствительность, повышение АД, повышенная возбудимость, эпилепсия, судорожные состояния, расстройства сна, лихорадочные состояния, возраст до 12 лет.

Страна - производитель. Фарматон С.А., Швейцария.

Регистрация в РБ. Не ззарегистрировано

Гербион Женьшень Форма выпуска. Капсулы во флаконах темного стекла по 24 шт.; в пачке картонной 1 флакон.

Состав. Активные вещества: женьшеня корней экстракт сухой стандартизованный, с содержанием суммы гинсенозидов -- 21 мг в 350 мг экстракта. Вспомогательные вещества: лактозы моногидрат; тальк; крахмал кукурузный; кремния диоксид коллоидный безводный; желатин; пропилпарагидроксибензоат; магния стеарат, метилпарагидроксибензоат; бриллиантовый черный краситель; титана диоксид; оксид железа черный; оранжевый краситель; хинолиновый желтый.

Фармакологические свойства и показания к применению. Оказывает тонизирующее и психостимулирующее действие. Стимулирует ЦНС, уменьшает слабость, утомляемость, сонливость; повышает АД, физическую и умственную работоспособность, адаптационную способность организма; стимулирует половую функцию. Снижает содержание глюкозы и холестерина в крови, активирует деятельность надпочечников. Противопоказания. Артериальная гипертензия, повышенная возбудимость, бессонница, кровоточивость, нарушение сна, беременность, период лактации, лихорадочный синдром на фоне острых инфекционных заболеваний, эпилепсия, детям до 18 лет, повышенная чувствительность к компонентам препарата.

Страна-производитель. КРКА, Словения.

Регистрация в РБ. Не зарегистрирован.

Геримакс Женьшень

Форма выпуска. Таблетки в блистерах по 10 шт. В пачке картонной 1, 3, 6, 9, 12 или 15 блистеров.

Состав. Активные вещества: экстракт корня женьшеня. Вспомогательные вещества: гидрофосфат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, оксид железа, кукурузный крахмал, желатин, стеарат магния, макрогол 400.

Фармакологические свойства и показания к применению. Стимулирующее действие на ЦНС, повышение умственную и физическую работоспособность. Повышенные умственные и физические нагрузки, физическое переутомлении; повышение физической выносливости у спортсменов; в комплексной терапии при неврастеническом синдроме, в т.ч.: при ослаблении половой функции; при вегето-сосудистой дистонии по гипотоническому типу; при астенических состояниях в период выздоровления, для ускорения процесса восстановления после перенесенных тяжелых заболеваний и хирургических операций. Для повышения сопротивляемости организма к инфекциям.

Противопоказания. Артериальная гипертензия, повышенная возбудимость, острый период инфекционных заболеваний, беременность, период лактации, детям до 12 лет, повышенная чувствительность к компонентам препарата.

Страна - производитель. DANSK DROGE A/S, Дания.

Регистрация в РБ. Не зарегистрирован.

Доппельгерц Женьшень

Форма выпуска. Капсулы в блистерах по 20 шт. В пачке картонной 2 или 3 блистера.

Состав. Активные вещества : женьшеня корня порошок (180 мг в 1 капс.) Вспомогательные вещества: МКЦ, высокоцепочечный глицерид, желатин, железа оксид желтый, железа оксид красный, титана диоксид, натрия, вода очищенная.

Фармакологические свойства и показания к применению. Общетонизирующее, общеукрепляющее и психостимулирующее действие. Повышает тонус сосудов, ускоряет обмен аминокислот, липидов, гистамина. Улучшает функциональную деятельность сердечно-сосудистой и нервной систем. Повышает умственную и физическую работоспособность и адаптационную способность организма. Уменьшает вялость, сонливость, чувство усталости. Астенический и неврастенический синдром; длительное психическое и физическое переутомление; стресс; период выздоровления после перенесенных заболеваний. Противопоказания. Артериальная гипертензия, повышенная возбудимость, бессонница, эпилепсия, повышенная кровоточивоть, нарушение сна, лихорадочный синдром на фоне острых инфекционных заболеваний, детям до 12 лет, повышенная чувствительность к компонентам препарата.

Страна - производитель. Квайссер Фарма ГмбХ, Германия

Регистрация в РБ. Не зарегистрирован.

Доппельгерц Женьшень Актив

Форма выпуска. Эликсир во флаконах темного стекла по 200 или 250 мл, в коробке 1 флакон.

Состав. Активные вещества: женьшеня корня экстракт жидкий (3243 мгв расчете на 100 мл), никотинамид, пиридоксина гидрохлорид, кофеин Вспомогательные вещества : ароматическая настойка; инвертный сахар; мед; пропиленгликоль; натрия цитрата дигидрат; сахарный краситель; ликерное вино; этанол 96 об.%.

Фармакологические свойства и показания к применению. Стимулирующее действие на ЦНС, повышение умственной и физической работоспособности, общеукрепляющее действие. Астенические состояния различной этиологии; повышенные физические и умственные нагрузки; период восстановления после перенесенных заболеваний.

Противопоказания. Артериальная гипертензия, повышенная нервная возбудимость, острый период инфекционных заболеваний, судорожные состояния, детский возраст до 12 лет, повышенная чувствительность к данному препарату.

Страна - производитель. Квайссер Фарма ГмбХ, Германия.

Регистрация в РБ. Не зарегистрирован.[22,23]



ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Подводя итоги своей работы, хотелось бы отметить уникальность и ценность женьшеня. Ведь тот факт, что женьшень внесен в фармакопеи РБ, РФ, Германии, США, Европы, Японии, Китая доказывает неоспоримую медицинскую значимость растения. Его применяют при разных потологиях, начиная от заболеваний сердца и гипертензии, заканчивая импотенцией. На мой взгляд, это связанно с богатым химическим составом, который пополняется с каждым годом новыми элементами. Возрастает интерес к пептидам женьшеня, обладающие мощным фармакологическое действием, которое может быть использовано для борьбы с гипергликемией.

Изучив данные фармакопей, перечисленных выше, мы видим, что стандартизацию корней женьшеня по Европейской фармакопее проводят путем определения суммы гинсенозидов Rb1 и Rg1 методом ВЭЖХ, а по фармакопее США отдельно каждого. В Германии, Китае, РБ, РФ стандартизируют содержание Rb1 и Rg1 методом тонкослойной хроматографии, что на мой взгляд является более удобным, экономичным и правильным. Так как женьшень содержит 11 основных гинсенозидов, видовой состав которых может значительно варьировать.

Изучив литературные данные о анатомо- морфологическом строение надземных частей женьшеня и их химическом составе, считаю целесобразным разработку стандартизации ЛРС "Женьшеня трава" как источника БАВ, в рамках комплексного ресурсосберегающего использования растения.

Анализ ассортимента препаратов на основе женьшеня показал, что необходима разработка новых отечественных препаратов.



СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Куркин, В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармац. вузов. -Изд. 2-ое, перераб. и доп. / В.А. Куркин. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. - 1239 с.

2. Диагностика, оценка и идентификация корня женьшеня: Метод. рекомендации / Бурундукова О.Л., Журавлев Ю.Н., Красиков К.Н., Ляпустин С.Н. и др. Владивосток: НТЦ Море, 2003. 66 с.

3. Журавлев, Ю.Н. ARALIACEAE. Женьшень и другие / Ю.Н. Журавлев, А.С. Коляда / Владивосток : Изд-во «Дальнаука» ДВО РАН, БПИ, 1996. 280 с.

4. Государственное научное учреждение "Центральный ботанический сад Национальной академии наук Беларуси" [Электронный ресурс] /Основные результаты исследований лаборатории биоразнообразия растительных ресурсов - Режим доступа: http: // dissercat.com. Дата доступа: 22.05.2015.

5.Яковлев, Г.П. Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия: учебное пособие / Г.П. Яковлев, изд-во СпецЛит, 2006. 808 с.

6. Малышев, А.А. Женьшень- Изд. 3-ое, перераб. и доп. / А.А. Малышев. - Москва: ВО «Агропромиздат», 1991. - 146 с.

7. Шнытко, М.В. Инновационные разработки в области выращивания женьшеня в условиях Среднего Поволжья / М.В. Шнытко, Л.А. Клейн // Сборник материалов Всероссийской научно-практической конференции «Современная фармацевтическая наука и практика: традиции, инновации, приоритеты». - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2011. - С. 154.

8. Гранадский, Н.С. Выращивание женьшеня в комнатных и огородных условиях / Н.С. Гранадский - Чебоксары, 1983. - 32 с.

9. Игнатьев, А.Г. Корень жизни. Вопросы биологии, разведения и использования женьшеня /А.Г. Игнатьев, Г.В. Гуков. - Владивосток: Изд. ДВГУ, 1994. - 55 с.

10. Гуревич, К.Г. Женьшень: побочные эффекты и лекарственные взаимодействия / К.Г. Гуревич // Фарматека. - 2005. - № 2. - С. 58-61.

11. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11 изд. - М.: Медицина, 1990. - Вып. 2. - 398 с.

12. Ставрианиди А.Н. диссертация: Новые подходы к обнаружению физиологически активных компонентов женьшеня методом высокоэффективной жидкостной хромато-масс-спектрометрии Москва 2014.- 203 с.

13 Женьшень [Электронный ресурс]/ Режим доступа http://www.fegi.ru/PRIMORYE/BIOLOGY/jen.htm Дата доступа 22.02.2016

14. Japanese Pharmocopoeia, 31.03.2006, 1-1654р.

15. European Pharmocopoeia. - 6-th Ed. - Rockville: United States Pharmocopoeial Convention, Inc., 2008. - 1658-1659 p.

16. U.S. Pharmacopeia. The official Compendia of Standards. - The USP 30 NF 25. - Official May 1, 2007.

17. Государственная Фармакопея Республики Беларусь / под общ. ред. А.А. Шерякова. - Молодечно: Типография «Победа». - Т. 2 Контроль качества

18. GermanHomoeopaticPharmocopoeia,1993 - 401р.

19 Pharmocopoeia of the people's republuk of China, vol.1 2005

20. Куркин В.А., Акушская A.С., Петрухина И.К. "Женьшень настоящий: современный взгляд на стандартизацию и создание лекарственных препаратов"-монография Самара: Офорт, 2014. -- 152 с.

21. Женьшень. Лечебные свойства женьшеня. Медицинское применение женьшеня.[Электронный ресурс]/ Режим доступа http://www.e-pitanie.ru/zabytye_celiteli/scenschen.php Дата доступа 28.02.2016

22. Женьшень Режим доступа http:// http://www.medvestnik.ru/library- Дата доступа 23.02.2016

Размещено на Allbest.ru

...