Основываясь на данных эксперимента для дальнейшей поисковой работы в отношении модулирующего действия ЛСК на адгезию ДПГ рода Candida в условиях in vivo был выбран гель - Hispagel.

Рисунок 12

2. Изучение модулирующего действия геля содержащего ЛСК на адгезию ДПГ вида Candida albicans к эпителиоцитам влагалища в условиях in vivo.

При введении во влагалище мыши 25 мкл Hispagel содержащего ЛСК в концентрации 6 мг/мл, на 39 и 42 день эксперимента, было получено снижение обсемененности слизистой влагалища ДПГ рода Candida уже на 48 день полня санация регистрировалась на 56 день (рис.13).

Рисунок13

В группе мышей, получающей внутривлагалищно гель, лишенный ЛСК, снижение обсемененности слизистой ДПГ рода Candida наступало лишь на 56 день эксперимента, а полное очищение на 62-ой (рис.14).

Рисунок14

С целью предупреждения рецидива влагалищного кандидоза мышам первой группы с 35 по 38 день эксперимента вводили по 25 мкл геля с ЛСК. Полученные результаты свидетельствую, что к статистически значимому предупреждению инфекции ЛСК введенное в гель не приводит. Но вместе с тем провоцирует снижение обсемененности слизистой влагалища ДПГ вида Candida albicans на 48 день (рис.15). Данный результат перекрывается с результатом, полученным в группе мышей, которых лечили гелем с ЛСК (группа 3).

Рисунок15

При комбинировании ЛСК, введенного в гель, с живой культурой Lactobacillus fermentum 90TS-4 (21) в группе мышей №5 было получено резкое увеличение обсемененности слизистой влагалища ДПГ рода Candida на 42 день эксперимента. На 48 день КОЕ Candida albicans в 1 мл снизилось почти в 20 раз до уровня КОЕ Candida albicans в 1 мл в группе мышей №3 (рис.16).

Данный результат может быть дополнительным подтверждением тому, что применение пробиотических препаратов на основе лактокультур в период обострения инфекции приводит к осложнению течения влагалищного кандидоза и способствует увеличению обсемененности слизистой терминальной ниши. Однако, использование в качестве терапевтического средства ЛСК в концентрации 6мг/мл сглаживает этот эффект, возникший на фоне применения живой культуры Lactobacillus fermentum 90TS-4 (21).

Рисунок16

3. Расчет дозы на единицу площади терминальной ниши.

При определении дозы исходили из экспериментальной модели вагинального кандидоза. Проведен расчет, позволяющий экстраполировать экспериментальные данные, полученные iv vitro и in vivo на животных, на терапевтические дозы лечения для человека. Исходили из следующего. Объем влагалища мыши - 25 мкл (25*10-6л). Лечебная терапевтическая доза, выведенная в эксперименте, составляла 6 мг лектинсвязывающего компонента в мл каждые два дня в течении 5 дней. Объем влагалища женщины 0,05 л. Соответственно, экстраполируя дозу на объем влагалища женщины получаем значение - 30 мг лектинсвязывающего компонента в мл (или грамм) носителя (гель, суппозитории, микрокапсулы).

Систематизируя и предварительно оценивая полученные результаты можно сказать, что использование при лечении ВК живых культур лактобактерий является не целесообразным вследствие углубления инфекционного процесс (увеличение обсемененности слизисто ДПГ Candida albicans). Лечение ВК комбинированным препаратом, в котором присутствует и культура и продукты жизнедеятельности лактобактерий (например, ЛСК), напротив может снижать обсемененность слизистой влагалища ДПГ Candida albicans за счет экранирования рецепторного аппарата эукариотических клеток ЛСК одновременно обогащая нишу транзиторными лактокультурами с последующим накоплением собственных представителей нормальной микрофлоры.

На данном этапе все задачи полностью решены и достигнутая цель соответствует поставленной:

1. Изготовлена мягкая лекарственная форма (гель) разного состава: - гель, содержащий ЛСК; - гель, содержащий ЛСК и Lactobacillus fermentum 90TS-4 (21).

2. Проведены экспериментальные исследования в условиях in vivo с использованием лабораторных животных, направленные на определение модулирующей активности Lactobacillus fermentum 90TS-4 (21) в отношении адгезивных свойств ДПГ Candida albicans.

3. Рассчитана доза ЛСК на единицу площади терминальной ниши.

В настоящее время лечение микотических инфекции урогенитального тракта проводится с помощью специализированных антибиотиков, которые усугубляют состояние нормальной микрофлоры влагалища. Данные исследования позволяют надеется на создание препарата, который на фоне терапевтического действия сможет стимулировать резидентную микрофлору и предупреждать развитие рецидива ВК.

Публикации результатов НИР

Заключение

Введение ЛСК в гель позволило оценить модулирующее действие компонента на адгезивную активность ДПГ Candida albicans по отношению к эпителиоцитам влагалища в условиях in vivo при остром и рецидивирующем ВК. Было установлено, что гель с ЛСК дает снижение обсемененности слизистой влагалища мышей уже на девятый день после первого применения препарата. В контрольной группе снижение обсемененности наступало лишь на 18 день.

Применения в качестве дополнительного компонента живой культуры лактобактерий спровоцировало усугубление течения процесса ВК. Данные эксперименты показали целесообразным применять в качестве терапевтического средства не сами культуры, а продукты их жизнедеятельности, например, лектинсвязывающий компонент в концентрации 6 мг/мл.

Дальнейшие поисковые исследования должны быть направлены на изучение адгезивной активности ДПГ, населяющими биотоп. Подобные эксперименты позволят в условиях in vitro составить представление о корреляционной зависимости между терапевтическим действием ЛСК и индивидуальным течением ВК.

Список использованных источников

1. Анохина И.В., Кравцов Э.Г., Яшина Н.В. и др. Характеристика поверхностных адгезинов лактобактерий, используемых при изготовлении препаратов пробиотиков.// Бюл.экспер.биол.- 2006.- Т.141. №6.- С.664 -667.

2. Анохина И.В., Кравцов Э.Г., Яшина Н.В. и др. Поверхностные адгезины лактобацилл, рыхло связанные с клеточной стенкой и элиминирующиеся во внешнюю среду при культивировании на жидких питательных средах // Бюл. Экспер. Биол. 2006. Т. 142, №11. С.557-561.

3. Анохина И.В., Кравцов Э.Г., Проценко А.В. и др. Бактерицидная активность компонентов культуральной жидкости Lactobacillus fermentum 90 TS-4 (21) клон 3 и их способность оказывать модулирующее действие на адгезию дрожжеподобных грибов Candida albicans к клеткам влагалищного эпителия // Бюл.экспер.биол.- 2007.- Т.143. №3.- С.330 -334.

4. Анохина И.В., Кравцов Э.Г., Яшина Н.В. и др. Лектинзависимый адгезин как перспективный компонент композитного пробиотика // Вестник РУДН. 2007. Т.35, №2. С. 52-57.

5. Кравцов Э.Г., Ермолаев А.В., Анохина И.В. и др. Адгезивные свойства лактобактерий как один из критериев выбора пробиотиков // Бюл.экспер.биол.- 2008.- Т.145. №2.- С.192 -195.

Приложение 1