Размещено на http://www.allbest.ru/

Организация работы лаборатории клинической бактериологии



План

Введение

1. Общие положения организации внутреннего контроля качества санитарно-микробиологического исследования воды

2. Контроль температурных режимов инкубации и хранения. Процедура контроля температуры в термостатах

3. Процедура контроля температуры в холодильниках

4. Контроль качества стерилизации и дезинфекции Процедура контроля режимов паровой и суховоздушной стерилизации

5. Процедура контроля микробной обсемененности воздуха

6. Процедура исследования микробной обсемененности поверхностей

7. Оценка эффективности ультрафиолетового бактерицидного излучения

8. Процедура контроля стерильности фильтровальных установок

9. Процедура контроля обсемененности флаконов для отбора проб

10. Контроль качества дистиллированной воды



Введение

В разработке и осуществлении действенных санитарных и противоэпидемических мероприятий важная роль принадлежит бактериологическим лабораториям санитарно-эпидемиологических станций.

Несмотря на значительные силы и в общем большой объем выполняемой работы бактериологические лаборатории районных санитарно-эпидемиологических станций сельских районов в значительной части еще не полностью удовлетворяют требованиям, предъявляемым к организации их работы.

В целях повышения производительности труда и качества исследований, более эффективного использования кадров, а также специального оборудования и других материально-технических ресурсов в ряде республик бактериологические лаборатории районных санитарно-эпидемиологических станций сельских районов централизовано проводят исследования для нескольких районов.

Изучение опыта работы таких лабораторий санитарно-эпидемиологических станций в РСФСР, Белорусской ССР, Молдавской ССР, проведенного Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии Министерства здравоохранения СССР, позволяет дать некоторые рекомендации по организации работы указанных лабораторий.

Численность должностей районных санитарно-эпидемиологических станций, в которых централизовано проведение бактериологических исследований, определяется Приказом Министра здравоохранения СССР от 29 апреля 1969 г. N 300.

В соответствии с указанным Приказом при объеме работы бактериологической лаборатории более 20 тысяч лабораторных единиц в год численность персонала увеличивается из расчета одна должность врача-бактериолога на каждые последующие 20 тысяч лабораторных единиц в год и одна должность лаборанта со средним образованием по бактериологии на каждые последующие 10 тысяч лабораторных единиц в год на непосредственное проведение анализов. Одна лабораторная единица равняется 10 минутам основной работы, затрачиваемой на выполнение анализов.

Например, в санитарно-эпидемиологической станции, обслуживающей население в 55 тысяч человек, штатами бактериологической лаборатории предусматривается 1 врач-бактериолог и 2 лаборанта со средним образованием по бактериологии. Если объем работы такой лаборатории окажется равным 50 тыс. лабораторных единиц, то разрешается дополнительно ввести 1 должность врача и 3 должности лаборанта. Следовательно, в штат лаборатории вводятся 2 должности врача и 5 лаборантов.

Для организации успешной работы бактериологические лаборатории должны иметь необходимый набор помещений:

- кабинет заведующего бактериологической лабораторией;

- регистратуру (прием материала на анализы и выдача ответов);

- посевную с вытяжным шкафом, где должны производиться посев на кишечную микрофлору и готовиться препараты для паразитологических исследований;

- рабочие комнаты для проведения исследований на кишечные инфекции, на капельные инфекции с боксом, комнату для работы по санитарной бактериологии с боксом, комнату для серологических исследований;

- средоварную с боксом для розлива сред;

- моечную, препараторскую, автоклавную чистую.

При лаборатории необходимо иметь помещения для забора проб на бактерионосительство от декретированных контингентов, оборудованные кабинами (при заборе проб с тарелок) или кушетками (при заборе материала ректальными трубками), а также помещение для посетителей (ожидальная), подсобные кладовые, санитарные узлы (отдельные для персонала и посетителей).

Необходимо предусмотреть отдельные входы в лабораторию для сотрудников и посетителей.

В отдельных случаях, в виде исключения, до решения вопроса о предоставлении санитарно-эпидемиологической станции необходимого помещения допускается совмещать в одной комнате моечную и препараторскую; одну рабочую комнату использовать для выполнения исследований по серологии, санитарной бактериологии и капельным инфекциям.

Помещения лаборатории должны располагаться по ходу производственного процесса и при этом должна обеспечиваться наибольшая рациональность в отношении основных потоков.

Регистратуру и помещение для забора проб целесообразно разместить при входе в лабораторию; помещения посевной и рабочей комнаты на кишечные инфекции следует размещать смежно. Автоклавную, моечную, препараторскую и средоварную необходимо сгруппировать в один узел.

В каждом функциональном подразделении аппаратура и мебель должны быть размещены таким образом, чтобы обеспечить наибольшие удобства в работе и наименьшие затраты времени на переходы.

В бактериологических лабораториях, располагающих достаточной площадью, вместо термостатов целесообразнее оборудовать термальную комнату.

Эта комната оборудуется в изолированном темном помещении и включает термальную камеру (площадью 7 - 8 кв. м) и предбоксник (3 - 4 кв. м); стены термальной камеры должны быть покрыты теплоизоляционным материалом. Вдоль стен рабочей камеры устанавливаются стеллажи, покрытые легко дезинфицирующимся материалом.

Для достижения и поддержания заданной температуры термальная камера оснащается двумя термостатирующими устройствами. Термостатирующее устройство обеспечивает температуру воздуха в камере 37 °С при напряжении 220 V, частоте в 50 Гц.

Для организации ритмичной работы в лаборатории необходимо осуществлять тщательное планирование всей ее деятельности.

Для этого целесообразно иметь перспективный план работы лаборатории на текущий год и планы работы на месяц. Правильно составленный годовой план работы лаборатории служит основой для расчета необходимых сил и средств, для составления заявок на имущество, питательные среды и бактерийные препараты и позволяет также более равномерно распределить нагрузку на лабораторию по месяцам с учетом эпидемиологической обстановки.

План работы лаборатории составляется совместно со специалистами районных санитарно-эпидемиологических станций обслуживаемых сельских районов и должен быть подписан главными врачами этих учреждений.

План должен содержать вопросы производственной (аналитической) работы, организационно-методической (в т.ч. работы по освоению новых методик) и вопросы повышения квалификации специалистов.

В плане следует выделить мероприятия по охране труда работников лаборатории и вопросы снабжения и обеспечения необходимыми реактивами, аппаратурой и пр.

Основанием для составления плана является анализ лабораторных исследований за предыдущий год и данные о санитарно-эпидемиологической обстановке на обслуживаемой территории.

Определяется перечень инфекций, в отношении которых потребуется проводить исследования. По каждой из них рассчитывается ожидаемое число больных (исходя из уровня заболеваемости за предыдущий год), число больных с хроническими процессами и число переболевших, которые состоят на учете. Рассчитывается ожидаемая численность лиц, контактировавших с больными, и численность контингентов, которые будут обследоваться в порядке профилактического надзора.

По каждой нозологической форме устанавливается кратность обследования контингентов в соответствии с действующими положениями и с учетом эпидемической обстановки.

Для лаборатории, централизованно проводящей бактериологические исследования, может быть значительно расширен перечень проводимых исследований (см. Приложение).

При планировании исследований определяется перечень объектов, подлежащих обследованию, число и кратность забора проб.



1. Общие положения организации внутреннего контроля качества санитарно-микробиологического исследования воды

Ведущим аспектом деятельности современной лаборатории является разработка Системы качества и обеспечение ее функционирования.

Система качества - это совокупность организационной структуры, методик, процессов и ресурсов, необходимых для осуществления общего руководства качеством ( ISO 8401 : 1994-04-01 ).

Система качества охватывает широкий спектр позиций, начиная от нормативно-методической документации, всесторонне регламентирующей деятельность лаборатории, ее планировки и технического оснащения, квалификации, численности и расстановки кадров - до организации внутреннего контроля качества выполняемых анализов.

Согласно МУ 2.1.4.682-97 по внедрению и применению СанПиН 2.1.4.559-96, внутрилабораторный (внутренний) контроль качества является обязательным звеном в обеспечении качества исследований воды.

Внутренний контроль качества микробиологических исследований - это комплекс выполняемых лабораторией мероприятий и процедур ,направленных на обеспечение и контроль стабильности требуемых условий развития искомого микроорганизма, а также предупреждение неблагоприятного воздействия факторов, возникающих в процессе подготовки, выполнения и оценки результатов анализа, способных повлиять на достоверность результата.

Особенностью санитарно-микробиологических исследований воды является необходимость количественной оценки полученного результата.

Специфика объекта микробиологических исследований, живого микроорганизма, обладающего индивидуальными (родовыми, видовыми, штаммовыми) свойствами и особенностями жизнедеятельности в условиях водной среды, создает независящие от исследователя проблемы в оценке точности количественного результата и обусловливает погрешность микробиологических методов, достигающую сотен процентов.

К наиболее значимым объективным факторам, влияющим на результат анализа, относятся следующие:

· Неравномерность распределения микроорганизмов, обусловливающая разброс данных при анализе двух одинаковых объемов одной пробы воды.

· Способность адсорбироваться на взвешенных веществах с образованием трудноразделимых в процессе взбалтывания комплексов, которые при посевах могут регистрироваться как один микроорганизм.

· Влияние сопутствующих микробов-антагонистов, тормозящих развитие искомых микроорганизмов при их наличии в анализируемой пробе воды.

· Возможное присутствие в исследуемой воде посторонних химических веществ либо образование их соединений с компонентами питательной среды, которые могут угнетать/стимулировать/рост исследуемых микроорганизмов, а также влиять на изменение видовых биохимических идентификационных признаков.

· Нахождение микроорганизма в «стрессовом» состоянии под воздействием неблагоприятных условий водной среды, в результате которого затормаживается его способность к развитию.

· Исходя из этого, основной задачей микробиологических исследований является создание оптимальных условий для развития выделяемого микроорганизма в целях получения надежных, сопоставимых количественных результатов.

· Организация внутреннего контроля качества на всех этапах выполнения микробиологического анализа воды является основной получения качественного результата.

Основные направления организации внутреннего контроля качества:

1. Контроль за соблюдением требований к условиям проведения анализа: (лабораторные помещения, воздушная среда, температурные режимы инкубации и хранения, режимы дезинфекции и стерилизации и т.д.).

2. Выполнение регламентированных процедур ведения тестовых культур.

3. Контроль качества питательных сред.

4. Контроль качества мембранных фильтров.

5. Контроль качества дистиллированной воды.

6. Оценка достоверности качественного результата путем использования заведомо положительных и отрицательных конт ролей.

7. Оценка доверительных границ полученного количественного результата. микробиологический вода инкубация бактерицидный

8 . Систематический анализ результатов контрольных процедур в целях совершенствования руководства по качеству.

Структура организации внутреннего контроля качества, периодичность и частота выполняемых процедур представлены в пр ил . 1, 2.

Описание процедур контроля соблюдения требований к условиям проведения анализа, ведения эталонных бактериальных культур, контроля качества питательных сред и мембранных фильтров, постановки положительных и отрицательных контролей и др. представлены в тексте методических указаний и иллюстрированы в приложениях.

Документальное оформление результатов проведенных контрольных процедур осуществляется в произвольной форме, удобной исполнителю и наглядной для других специалистов, привлекаемых к участию в различных комиссиях по проверке работы лаборатории (по аттестации , аккредитации и др.). При этом могут быть использованы журнальные формы учета или формы отдельных контрольных листов, которые впоследствии брошюруются за определенный период времени (месяц, квартал, год) в зависимости от кратности и вида контроля.

Регистрация и хранение контрольных результатов могут осуществляться на электронных носителях.

Приведенные в приложении к методическим указаниям некоторые учетные формы носят информационный характер и даны в качестве возможного варианта учета результатов. Исключение составляют прил. 4 и 8.1, в которых приведены формы учета, утвержденные Минздравом России.

В информационном прил. 11 представлен перечень современного оборудования, применение которого будет способствовать повышению качества выполняемых санитарно-микробиологических исследований воды и надежности получаемых результатов.

Обязательным разделом внутреннего контроля качества является проведение периодического, но не реже 1 раза в год, анализа результатов выполненных контрольных процедур, с учетом которого осуществляется корректировка руководства по качеству испытательной лаборатории.

Обеспечение качества выполняемых исследований возможно только при наличии квалифицированного персонала. К работе по выполнению санитарно-микробиологических анализов воды допускаются специалисты с высшим и средним специальным медицинским/биологическим (микробиологическим) образованием, проходящие не реже 1 раза в пять лет курс повышения квалификации в объеме, определенном Минздравом России для бактериологов, с выдачей удостоверения установленного образца.

Требования к набору помещений и их размещению, организации и безопасности работ микробиологических лабораторий с патогенными биологическими агентами изложены в санитарных правилах «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами». СП 1 .2 .731-99 .

Требования к процедурам выполнения исследований и метрологическому обеспечению оборудования представлены в соответствующих нормативных документах и не являются предметом рассмотрения данных методических указаний.

Вопрос оценки достоверности количественных результатов микробиологических исследований воды на сегодняшний день в России остается не решенным. Действующий ГОСТ 27384-87, представляющий нормы погрешностей для бактериологических исследований воды, не обеспечивает возможности оценки получаемых результатов, так как входит в противоречие с реальными методиками анализа.

В случае возникновения проблем сопоставимости и достоверности результатов санитарно-микробиологических исследований воды ориентировочную оценку можно получить обращением к табл. ГОСТ 51446-99 «Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований», разработанного на основе международного документа ИСО 7218-96.

2. Контроль температурных режимов инкубации и хранения. Процедура контроля температуры в термостатах

Контроль температуры в термостатах проводят ежедневно перед началом работы.

Для контроля используют проверенные термометры.

Цена деления термометра не должна превышать половины величины допустимого отклонения температуры инкубации, определенного нормативно-методической документацией. Например: для температуры 37 °С допустимое отклонение температуры составляет ±1 °С . Для контроля температуры в термостате, поддерживающем данную температуру, необходимо использовать термометры с ценой деления не более 0 ,5 °С. Соответственно, для температуры 44 °С, при допустимом отклонении температуры ±0 ,5 °С, цена деления контрольного термометра не должна превышать 0 ,25 °С.

Подготовительный этап. Для устранения искажения показаний термометра из-за быстрого изменения температуры в термостате при открывании дверцы, термометр помещают в пробирку с глицерином либо с расплавленным парафином. После застывания парафина подготовленный термометр можно размещать в горизонтальном положении.

Методика контроля. Термометр размещают в центре камеры. При выявлении в процессе аттестации термостата экстремальных точек, термометры размещают в экстремальных точках.

Ежедневно перед началом работы снимают показания контрольного термометра, результаты измерений заносят в журнал (контрольный лист) и заверяют подписью исполнителя (прил. 3).

В журнале для каждого термостата должно быть отмечено допустимое отклонение температуры с учетом требований методов, для исполнения которых используется конкретный термостат.

В случае превышения допустимых отклонений температуры сотрудник, проводящий регистрацию, должен немедленно сообщить об этом руководителю подразделения для принятия мер.

3. Процедура контроля температуры в холодильниках

Контроль температуры в холодильниках проводят один раз в неделю. Температура в холодильнике должна быть в пределах ( 4 - 8 ) °С. Для контроля используют проверенные термометры, подготовленные как указано в п. 5.1.

Термометр помещают в центр камеры холодильника.

Один раз в неделю перед началом работы снимают показания контрольных термометров, результаты измерений заносят в журнал (контрольный лист) и заверяют подписью исполнителя (прил. 3).

В случае превышения допустимых отклонений температуры сотрудник, проводящий регистрацию, должен поставить в известность руководителя подразделения и провести регулировку для компенсации выявленных отклонений. Регулировку проводят переводом регулятора температуры холодильника в нужное положение. После приведения температуры до уровней допустимых значений, двукратно, через 4 часа и на следующий день, проводят регистрацию температуры.

После приведения к норме режима работы холодильника переходят к обычной схеме контроля температуры.

4. Контроль качества стерилизации и дезинфекции Процедура контроля режимов паровой и суховоздушной стерилизации

Для контроля режимов стерилизации необходимо использовать три вида контроля.

Термический и химический контроль режима стерилизации проводится оператором парового стерилизатора, прошедшим курс специальной подготовки по безопасной эксплуатации автоклавов.

Биологический контроль осуществляется бактериологом лаборатории, проводящей санитарно-бактериологические исследования воды, или дезинфекционными станциями по заказу лаборатории.

Химический контроль проводят при каждом рабочем цикле. Для контроля используют бумажные индикаторы стерилизации (НПО « Винар» ) или тестовые химические вещества, рекомендованные в прил . 7.6 Санитарных правил 1 .2 .731-99 .

Методика контроля паровой стерилизации. В контрольных точках рабочей камеры укладывают герметично запаянные ампулы с химическим тестовым веществом или индикаторные полоски ИС длиной 2 - 3 см, которые прикрепляют к стерилизационны м коробкам или стерилизуемым изделиям.

Число контрольных точек зависит от емкости камеры. Для стерилизатора объемом до 100 л точки 1 и 2 находятся: для горизонтального автоклава 1 -я - у загрузочной двери, 2 -я - у противоположной стенки, для вертикального автоклава - в верхней и нижней части камеры, соответственно. В точках 1 и 2 тесты располагают вне стерилизуемых изделий. В остальных точках тесты располагают в центре стерилизационных коробок или внутри стерилизуемых упаковок.

Для стерилизаторов больших объемов тесты располагают согласно схеме, приводимой в инструкции по использованию индикаторов стерилизации.

Методика контроля суховоздушной стерилизации. В контрольных точках рабочей камеры укладывают герметично запаянные ампулы с химическим тестовым веществом или индикаторные полоски ИС длиной 2 - 3 см, которые прикрепляют к упаковкам или стерилизуемым изделиям.

Число контрольных точек зависит от емкости камеры.

Термический контроль проводят 2 раза в месяц. Для контроля используют поверенный максимальный термометр с ценой деления не более 1 °С и диапазоном измерений, превышающим контролируемую температуру. Термометр размещают в середине стерили заци онно й камеры. После окончания цикла стерилизации и остывания термометра до комнатной температуры, снимают показания. Для определения истинного значения максимальной температуры цикла стерилизации к снятому с термомет ра показанию прибавляют соответствующую поправку, указанную в паспорте на данный термометр.

Результаты заносят в журнал по регистрации режимов стерилизации и заверяют подписями исполнителя и ответственного бактериолога (прил. 4 ).

Биологический контроль осуществляется 2 раза в год. При выполнении биологического контроля используют биотесты, в том числе коммерческие, предназначенные для конкретного вида паровой или суховоздушной стерилизации, разрешенные к применению Минздравом РФ.

Методика контроля (на примере использования коммерческого набора Испытательного лабораторного центра Московского городского центра дезинфекции). Процедуру контроля осуществляют в соответствии с паспортом биотеста. Пронумерованные пакеты с биотестами размещают в контрольных точках стерилизатора. Количество контрольных точек и правила размещения тестов указаны в п. 6.1.1. После завершения процесса стерилизации в пробирки с биотестами асептически вносят 0 ,5 мл цветной питательной среды, начиная со стерильной пробирки для контроля питательной среды и заканчивая контрольным гестом, не подвергавшимся стерилизации (контроль культуры). Далее осуществляют инкубацию пробирок согласно паспорту на набор.

После термостатирован и я проводят учет изменения цвета питательной среды. В отрицательном контроле (стерильная пробирка) цвет среды не должен измениться. В пробирке с контролем культуры цвет среды должен измениться на цвет, указанный в паспорте, что свидетельствует о наличии жизнеспособных спор.

Работа парового стерилизатора считается удовлетворительной, если цвет питательной среды во всех биотестах, подвергавшихся стерилизации остался неизменным. Если цвет изменился хотя бы в одном тесте, стерилизация признается неэффективной.

Результаты заносят в журнал по регистрации режимов стерилизации и заверяют подписью исполнителя (прил. 4).

Раздел составлен на основе:

СП 1 .2 .731-99 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами»;

Методических рекомендаций по контролю стерилизации с использованием индикаторов стерилизации НПФ « Винар» № 11-8 \03-54 от 11.06 .93 Министерства здравоохранения Российской Федерации.

5. Процедура контроля микробной обсемененности воздуха

В производственных лабораториях бактериологические исследования воздуха на обсемененность предусматривают определение общего содержания микроорганизмов в 1 м³ воздуха.

Контроль воздуха на микробную обсемененность проводят в посевных комнатах, боксах или в ламинарных укрытиях перед началом проведения работ.

Контроль выполняет ответственный исполнитель.

Для контроля используют плотную полноценную неселективную среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.) проверенной ранее серии. Проверка среды осуществляется как указано в разделе 11 .

Питательный агар разливают в чашки Петри диаметром 90 - 100 мм слоем не менее 2 мм. Для контроля стерильности среды одну чашку из приготовленной и разлитой партии среды инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 часов. Учитывают наличие /отсутствие/ пророста среды. При обнаружении роста микроорганизмов среду выбраковывают.

Контроль воздуха на обсемененность проводят сед и мен тационны м или аспирационным методом.

Седиментационный метод. В двух точках посевной комнаты, бокса и (или) ламинарного шкафа ставят открытые чашки Петри с питательным агаром на 15 мин. После экспозиции чашки закрывают, переворачивают и помещают в термостат. Посевы инкубируют при температуре (37 ± 1 ) °С в течение (24 ± 2 ) часов. После инкубации проводят учет количества выросших колоний микроорганизмов.

Аспирационный метод. Отбор проб воздуха проводят с помощью пробоотборных устройств для бактериологического анализа, зарегистрированных в Госстандарте Российской Федерации. Отбор пробы воздуха в количестве 100 л проводят согласно инструкции к пробоотборнику. После отбора пробы снимают чашку Петри и термостатируют при температуре (37 ± 1 ) °С в течение (24 ± 2 ) часов. После инкубации проводят учет количества выросших колоний микроорганизмов.

Использование аспирационного метода не допускается для контроля воздуха укрытий с ламинарным потоком.

Результат заносят в журнал регистрации микробной обсемененности воздуха и заверяют подписью исполнителя (пр ил . 5).

Допускается пророст не более 3 колоний на чашке при исследовании седи ментационным методом и не выше 500 КОЕ/м³ при использовании аспирационного метода. При превышении указанных уровней общего содержания микроорганизмов немедленно извещают руководителя подразделения. Работы в боксах приостанавливают. Проводят внеплановую генеральную уборку бокса с обработкой всех поверхностей с использованием дезинфицирующих средств и обеззараживанием воздуха ультрафиолетовым облучением. После окончания мероприятий контроль микробной обсемененности воздуха повторяют. При повторном получении неудовлетворительных результатов производят оценку эффективности применения ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха как указано в разделе 6.4.

Лаборатории центров Госсанэпиднадзора для контроля микробной обсемененности воздуха руководствуются соответствующими приказами Минздрава ( № 720 и др.).

Раздел составлен на основе:

МУК 4.2.734-99 «Микробиологический мониторинг производственной среды»;

приказа МЗ СССР № 720 от 31 .07 .78 «Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией».

6. Процедура исследования микробной обсемененности поверхностей

В производственных лабораториях бактериологическое исследование микробной обсемененности поверхностей помещений и оборудования проводится с целью проверки эффективности их дезинфекции и направлено на обнаружение общих и термотолерантных кол и формных бактерий.

Исследование проводят перед работой методом смыва, н е реже одного раза в месяц. Смывы проводят с поверхности рабочих столон на каждом рабочем месте, с дверных ручек, наружных деталей приборов, со стен бокса.

Подготовительный этап

Для контроля используют:

пробирки с 5 мл стерильной 1 % -н ой пеп тонной воды, в пробки которых вмонтированы стерильные ватные тампоны на палочках. Тампоны не должны смачиваться питательной средой;

· среду Энд о проверенной ранее серии (раздел 11) .

1 % -ную пептонную воду предварительно проверяют на стерильность. Для этого 2 пробирки от приготовленной партии среды инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 часов. Учитывают наличие (отсутствие) пророста среды.

В зависимости от применяемого дезинфицирующего агента в качестве нейтрализатора используют стерильные растворы следующих химических веществ:

· тиосульфат натрия ( 0 ,5 % -ны й раствор) - при использовании для дезинфекции хлорсодержащих, перекисных, йодосодержащих препаратов. Препарат может быть добавлен в 1 %-ный раствор пептонной воды;

· сульфонол с молоком (на 1 л раствора используют 200 г сульфонола, 100 мл обезжиренного молока и 700 мл дистиллированной воды) - при использовании четвертичных аммониевых соединений;

· мыло банное ( 0 ,5 %-ный раствор) - при использовании препаратов на основе анионных поверхностно активных веществ, гибитана;

· водопроводная вода - при использовании препаратов на основе фенола, глютарового альдегида;

· аммиак ( 0 ,5 %-ный раствор) - при использовании формальдегида или препаратов на его основе.

Стерильный тампон, вмонтированный в пробку пробирки, погружают в 1 %- ную пептонную воду. Смоченным тампоном тщательно про ти рают исследуемую поверхность. При контроле мелких предметов смывы проводят с поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят с площади не менее 100 см².

После взятия смыва тампон помещают на 10 - 15 мин в пробирку с раствором нейтрализатора, затем переносят в пробирку с питательной средой, погрузив тампон в пептонную воду.

Контрольные смывы инкубируют при температуре ( 37 ± 1 ) °С в течение 18 - 24 часов.

После инкубации проводят высев из 1 %- ной пептонной воды на среду Эндо.

Посевы на среде Эндо и незасеянную чашку среды этой же партии (отрицательный контроль) инкубируют при температуре ( 37 ± 1 ) °С в течение 18 - 24 часов.

При отсутствии роста на контрольной чашке и наличии роста в посевах смывов, дальнейшее исследование проводят согласно МУК по санитарно-микробиологическому анализу воды.

Результат заносят в журнал по регистрации микробной обсемененн ости поверхностей и заверяют подписью исполнителя.

Обнаружение микроорганизмов в смывах с исследуемых поверхностей свидетельствует об их неадекватной дезинфекции. В этом случае, извещают руководителя подразделения и выясняют возможные причины неэффективной дезобработки поверхностей.

Лаборатории центров Госсанэпиднадзора для контроля микробной обсеменен н ости поверхностей руководствуются соответствующими приказами Минздрава (№ 720 и др.), согласно которым предусматривается выявление стафилококка, синегнойной палочки, бактерий группы кишечной палочки и, строго по показаниям, аэромонад.

Раздел составлен на основе: МУК 4.2.734-99 «Микробиологический мониторинг производственной среды»;

руководства Минздрава России Р 3.1 .683-98 «Использование ультрафиолетового излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях»;

приказа МЗ СССР № 720 от 31 .07 .78 «Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией».

7. Оценка эффективности ультрафиолетового бактерицидного излучения

Качество обеззараживания воздуха ультрафиолетовым облучением зависит от мощности бактерицидного излучения. Мощность бактерицидного излучения определяется количеством облучателей и эффективностью их функционирования.

В связи с тем, что количество облучателей определяют при организации лаборатории согласно требованиям, предъявляемым к помещениям данного назначения, методика расчета количества установок для ультрафиолетового облучения в настоящем документе не рассматривается. Правильность расчета можно проверить по паспорту на используемый бактерицидный облучатель ( У Ф- лампы ) или согласно руководству МЗ РФ Р.3.1.683-98 «Использование ультрафиолетового излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях»

В процессе работы мощность потока бактерицидного излучения лампы снижается. В связи с этим при выработке 1 /3 ресурса (ресурс лампы указан в паспорте на лампу) время экспозиции необходимо увеличить в 1 ,2 раза, а после 2 /3 номинального срока службы - в 1 ,3 раза. При выработке гарантированного срока службы лампа подлежит замене, даже если она функционирует.

Для обеспечения качественной работы ультрафиолетовых ламп необходимо:

· фиксировать дату начала эксплуатации, вести учет времени работы лампы, вносить коррективы времени экспозиции и осуществлять замену согласно отработанному ресурсу лампы;

· не менее 1 раза в месяц протирать лампы от пыли. Эффективность ультрафиолетового облучения помещения оценивают по результатам микробной обсемененности воздуха.

Применение ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха считают эффективным, если уровень микробной обсемененности после облучения не превышает допустимых пределов - пророст не более 3 колоний на чашке при использовании седиментационного метода и не выше 500 КОЕ/м³ при использовании аспирационного метода.

В случаях пророста на чашках более 3 колоний или обсемененности воздуха > 500 КОЕ/м³ выполняют внеплановую генеральную уборку бокса с обработкой всех поверхностей с использованием дезинфицирующих средств и обеззараживанием воздуха ультрафиолетовым облучением.

После окончания мероприятий контроль микробной обсемененности воздуха повторяют.

Если при повторном определении уровень обсемененности воздуха снова превышает нормативы, определяют бактерицидную эффективность облучения.

Бактерицидная эффективность является процентным выражением степени снижения микробной обсемененности воздуха после ультрафиолетового облучения.

Методика контроля. Для расчета бактерицидной эффективности производят определение микробной обсемененности воздуха аспирационн ы м методом, как указано в п. 6.2, до и после облучения. Бактерицидную эффективность рассчитывают по формуле:



БЭ = (( N _д - N _п )/ N _д ) Ч 100 %

где БЭ - бактерицидная эффективность облучения в данном помещении;

N _д - число микроорганизмов до облучения;

N _п - число микроорганизмов после облучения.

· Применение ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха считают эффективным, если бактерицидная эффективность составляет не менее 99 % .

При получении неудовлетворительных результатов контроля ставят в известность руководителя лаборатории и принимают меры по выяснению причин недостаточной эффективности обеззараживания.

Если установленная бактерицидная эффективность ультрафиол ет ового облучения в пределах нормы, а микробная обсемененность воздуха превышает нормативы, необходимо выяснить источник контаминации воздуха.

Раздел составлен на основе:

руководства Минздрава России Р 3.1 .683-98 «Использование ультрафиолетового излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях».

8. Процедура контроля стерильности фильтровальных установок

Контроль стерильности фильтровальных установок проводят перед началом посева методом мембранной фильтрации.

Для контроля используют:

· плотную полноценную неселективную среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.) проверенной ранее серии (раздел 11);

· стерильные мембранные фильтры (нитрат- или ацетат-целлюлозные) для микробиологических целей с диаметром пор 0 ,45 мкм, проверенной ранее партии (раздел 12);

· стерильную водопроводную воду;

· спирт ректификат 96 °-ный.

Накануне исследования питательный агар проверенной серии разливают в чашки Петри слоем не менее 2 мм и проверяют на стерильность. Для этого одну чашку из приготовленной среды инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 часов. При наличии роста микроорганизмов приготовленную среду выбраковывают.

Методика контроля

Фильтровальные воронки устанавливают в гнезда фильтровальных столиков. Внутренние поверхности воронки фильтровальной установки смачивают 96°-ным спиртом и фламбируют. После сгорания спирта и остывания воронок одну из воронок снимают. С помощью стерильного пинцета помещают мембранный фильтр на основание держателя фильтра, затем снова присоединяют фильтровальную воронку.

При отключенном вакууме воронку заполняют стерильной водой таким образом, чтобы вода обмыла внутренние стенки воронки. Объем стерильной воды должен составлять не менее половины максимального объема воронки.

Включают вакуум и отфильтровывают содержимое воронки. Вакуум отключают, снимают фильтровальную воронку и стерильным пинцетом переносят мембранный фильтр с основания на чашку со средой. Между мембранным фильтром и поверхностью агара не должно быть пузырьков воздуха. Чашки с посевами переворачивают и инкубируют в термостате при (37 ± 1 ) °С в течение (24 ± 2 ) часов.

Рост микроорганизмов свидетельствует о неэффективной обработке фильтровальной установки. Результаты заносят в журнал контроля стерильности фильтровальных установок и визируют подписью сотрудника, выполнившего контроль (прил. 6). Обо всех случаях нестерильности фильтровальных установок ставят в известность руководителя подразделения.

9. Процедура контроля обсемененности флаконов для отбора проб

Контролю подвергаются все виды флаконов, используемые для отбора проб: стеклянные многоразового использования после стерилизации и пластиковые одноразового использования, поступающие стерильными от производителя.

Условия проведения испытаний в значительной мере обусловливают качество данного вида контроля. В этой связи его неотъемлемой частью является следующий комплекс мероприятий.

1. Анализ проводят в боксе для разливки сред или в посевных комнатах (боксах) для посева питьевой воды.

2 . Непосредственно перед исследованием проводят дезинфекционную обработку помещения (мытье бокса). После дезобработки включают дополнительно бактерицидные лампы на 1,5 - 2 часа.

Спецодежду для проведения анализа (халат, шапочку, четырехслойную марлевую маску) стерилизуют. Режим стерилизации спецодежды: автоклавирование при температуре (120 ± 1 ) °С в течение 45 минут или при температуре (132 ± 2 ) °С в течение 20 минут.

Перед входом в бокс сотрудник, проводящий испытания, тщательно моет руки теплой водой с мылом и щеткой, вытирает стерильно полотенцем, одевается в стерильный халат, шапочку, маску, надевает перчатки, обрабатывает их 70 % -ны м этиловым спиртом.

При наличии ламинарного укрытия исследование выполняют в спецодежде с использованием стерильных перчаток.

Во время испытаний проводят кон т роль воздуха на обсемененность в соответствии с процедурой, описанной в п. 6.2. Результаты контроля заносят в протокол испытания.

Контроль обсемененности стеклянных флаконов для отбора проб. Целью проведения данного вида контроля является выборочный контроль качества подготовки посуды в отношении различных по устойчивости микроорганизмов, учитываемых при проведении анализа питьевой воды: контроль на общую обсемененность, контроль на наличие спор сульфит редуцирующих клостридий.

При проведении контроля режимов суховоздушной стерилизации в полном объеме (биологический, термический, химический) с рекомендуемой периодичностью, контроль обсемененности стеклянных флаконов для отбора проб в зависимости от объема стерилизуемых партий проводят не реже 1 раз в квартал.

Для каждого вида анализа отбирают флаконы в количестве 1 % , но не менее 3 от общего количества партии стерилизованной посуды. Партией флаконов считают все флаконы, прошедшие стерилизацию за один цикл работы одного стерилизатора.

В случае получения результата, свидетельствующего о нестерильности хотя бы одного флакона, все партии флаконов, прошедшие обработку в данном стерилизаторе , бракуют. Забракованные партии флаконов подлежат повторной стерилизации. Выясняют возможные причины нарушения стерильности. Проводят комплексную проверку стерилизатора с одновременным использованием химического, термического (в 5 точках) и биологического контроля согласно п. 6.1.

Для контроля используют:

· жидкую полноценную неселективную среду (питательный бульон, ГРМ-бульон и др.), проверенной ранее серии (раз д ел 11);

· плотную полноценную неселективную среду (питательный агар, ГРМ-агар и др.), проверенной ранее серии (раздел 11);

· железосульфитный агар, приготовленный согласно МУК 4.2.1018-01, либо зарубежные аналоги, предназначенные для определения сульфитредуцирующих клостридий в воде;

· стерильные мембранные фильтры (нитрат- или ацетат-целлюлозные) для микробиологических целей с диаметром пор 0 ,45 мкм, проверенной ранее партии (раздел 12);

· стерильные чашки Петри диаметром 90 мм;

· стерильную водопроводную воду;

· спирт ректификат 96 °-ны й для фламбирования;

· спирт ректификат 70 %-ны й для дезинфекции.

Питательный бульон предварительно проверяют на стерильность. Для этого 2 пробирки от приготовленной партии среды инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 часов - учитывают наличие (отсутствие) пророста среды. При наличии пророста партию бульона выбраковывают. Контроль стерильности питательного агара и же лезосульфитного агара проводят в процессе исследования путем постановки отрицательного контроля.

Контроль на общую обсемененность. В исследуемые флаконы вносят питательный бульон в количестве 20 % от объема флакона (например, во флакон 500 мл вносят 100 мл питательного бульона). Флаконы закрывают стерильными резиновыми (силиконовыми) пробками.

Переворачиванием или встряхиванием флаконов трехкратно обмывают всю внутреннюю поверхность флакона, включая пробку. Инкубацию посевов проводят в этих же флаконах при ( 37 ± 1 ) °С в течение (48 ± 2 ) часа. При видимом росте (помутнение бульона) в каком-либо флаконе результат учитывают как «не стерильно». При сохранении прозрачности питательного бульона проводят контроль пророста бульона: из каждого флакона отбирают по 1 мл содержимого, вносят в 2 стерильные чашки Петри и заливают питательным агаром. Параллельно для контроля стерильности используемого питательного агара стерильную чашку Петри заливают тем же питательным агаром (отрицательный контроль). Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 часов.

Наличие бактериального роста при условии отсутствия роста микроорганизмов в отрицательном контроле свидетельствует о нестерильности флакона. Результаты заносятся в протокол исследования.

Контроль на наличие спор сульфитредуцирующих клостридий

В исследуемые флаконы вносят стерильную водопроводную воду в количестве 20 % от объема флакона (например, во флакон 500 мл вносят 100 мл воды). Флаконы закрывают стерильными резиновыми пробками.

Переворачиванием или встряхиванием флаконов трехкратно обмывают (смачивают) всю внутреннюю поверхность флакона, включая пробку. Фильтровальную установку фламбируют, после чего производят фильтрацию 100 мл стерильной водопроводной воды (отрицательный контроль), затем через другой мембранный фильтр без дополнительного обжига установки фильтруют весь объем смыва с флакона.

Дальнейшие исследования обоих фильтров («смыва» и «контроля») выполняют аналогично по схеме анализа на выявление спор сульфитредуцирующих клостридий по МУК 4.2.1018-01.

Наличие роста колоний сульфитредуцирующих клостридий при отсутствии роста в отрицательном контроле свидетельствует о нестерильности флакона. Результаты заносятся в протокол исследования.

Раздел составлен на основе:

МУ 24-92 Министерства медицинской промышленности «Контроль стерильности материалов первичной упаковки».

10. Контроль качества дистиллированной воды

В микробиологических исследованиях воды дистиллированная вода используется для приготовления питательных сред, различных растворов, мытья лабораторной посуды, заправки паровых стерилизаторов.

Дистиллированная вода, применяемая в микробиологических лабораториях, должна соответствовать требованиям ГОСТ 6709-72 и проходить контроль не реже 1 раза в месяц.

Хранить дистиллированную воду следует в стеклянных или пластиковых бутылях, желательно с нижним сливом, закрытых крышками или пробками.

Документы Международного комитета по стандартизации предъявляют более жесткие требования к воде, предназначенной для приготовления питательных сред. Разный состав воды может обусловливать отличия по качеству питательных сред, приготовленных в разных лабораториях или даже в одной и той же лаборатории из обезвоженной среды одной серии одного производителя, и, как следствие, существенные различия в результатах анализа.

В качестве оптимального варианта для приготовления питательных сред, а также реактивов, используемых непосредственно в анализе, предлагается применение бидистиллированной или деминерализованной воды.

Стандарт ISO 7218 :1996 , а также ГОСТ Р 51446-99 качество воды, предназначенной для приготовления питательных сред, оценивают по удельному сопротивлению, которое должно быть не менее 300000 Ом/см (либо по электропроводности - не более 3 МкС/см).

Об этом необходимо помнить при использовании для приготовления питательных сред дистиллированной воды, полученной с помощью дистилляторов и контролируемой по ГОСТ 6709-72.

При использовании деминерализованной воды необходимо обращать внимание на содержание микроорганизмов, которые могут размножаться на фильтрах, и при прохождении через ионообменник попадать в воду. При высокой контаминации воды микроорганизмами продукты их жизнедеятельности могут оказывать ингибирующее действие на рост исследуемых микроорганизмов. Наиболее адекватным методом контроля в этих случаях является определение общего числа микроорганизмов, выросших на питательном агаре при температуре 22 °С в течение 72 часов.

При приобретении установок деионизированной воды для микробиологических анализов, необходима консультация с производителями в целях выбора способов обработки, предотвращающих вторичное микробное загрязнение воды.

Размещено на Allbest.ru

...