Оценка влияния полиморфизма генов системы гемостаза и генов, отвечающих за формирование дисфункции эндотелия, в развитии гестационных осложнений

Размещено на http://www.allbest.ru/

Новосибирский государственный университет

Оценка влияния полиморфизма генов системы гемостаза и генов, отвечающих за формирование дисфункции эндотелия, в развитии гестационных осложнений

Чуманова Ольга Владимировна Студент

Проведено исследование для поиска генетических причин развития патологии беременности. Было установлено, что мутации генов системы гемостаза и генов дисфункции эндотелия приводят к развитию гестационных осложнений.

Ключевые слова: осложнения беременности; тромбофилия; эндотелиальная дисфункция; полиморфизм генов.

Актуальность Повышенное тромбообразование и нарушение тонуса маточно-плацентарных сосудов в акушерской практике является одной из значимых причин развития осложнений беременности. Различают наследственные и приобретенные факторы риска развития этих осложнений.

К первой группе относятся наследственные формы тромбофилии и генетически обусловленная дисфункция эндотелия, которые, согласно литературным данным, имеют место в патогенезе более 30% всех гестационных осложнений [1,2, с.6]. В эту группу попадают наиболее грозные, определяющие четверть в структуре материнской смертности в РФ: преэклампсия, эклампсия и отслойка плаценты [3, с.6].

Все исследуемые осложнения являются следствием снижения кровотока в маточно - плацентарных сосудах, приводя к нарушению имплантации, плацентации и дальнейшего развития плодного яйца.

Целью работы являлось определение роли следующих полиморфизмов в развитии осложненного течения беременности: G20210A FII, rs1799963; G1691A FV, rs6025; 5G/4G 675 PAI-1, rs1799768; C677T MTHFR, rs1801133; G634C VEGF, rs2010936; Glu298Asp еNOS, rs1799983.

Материалы и методы Для проведения исследования были выбраны следующие группы: основная группа (n=257) и контрольная (n=190). В первую группу включались женщины с патологией беременности (преэклампсия, преждевременная отслойка плаценты, декомпенсированная фетоплацентарная недостаточность, синдром потери плода). Для устранения других причин развития гестационных осложнений были установлены критерии исключения из экспериментальной группы: врожденные пороки развития репродуктивной системы, тяжелая урогенитальная инфекция, декомпенсация хронических экстрагенитальных заболеваний, эндометриоз, миома матки, аномалии хромосомного набора плода при проведении кариотипирования, антифосфолипидный синдром.

В группу контроля вошли здоровые женщины, родившие живого доношенного ребенка с оценкой по шкале Апгар 8-10 баллов и не имеющие акушерской патологии. Предпочтение отдавалось женщинам, имеющим двух и более детей. патология беременность полиморфизм осложнение

Все женщины, включенные в исследуемые группы были пациентками лечебно-диагностического центра - ООО «Клиника профессора Пасман» города Новосибирска. Генотипирование проводилось на базе Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН.

В обеих группах проводился забор венозной крови. ДНК выделяли методом фенол - хлороформной экстракции с последующим осаждением этанолом [4, с.6].

Типирование полиморфных локусов G20210A FII, G1691A FV, 5G/4G 675 PAI-1, C677T MTHFR, G634C VEGF, Glu298Asp еNOS проводили методом ПЦР в режиме реального времени с использованием технологии конкурирующих TaqMan-зондов. Общий объем реакционной смесисоставлял 25 мкл, содержащей 40-100 нгДНК, 300 нМ прямого и обратного праймера (представлены в табл.1); по 100 нМTaqMan-зондов, коньюгированных с FAM или HEX; 200 мкМdNTP, амплификационный буфер, термостабильную Taq-полимеразу - 1 ед. акт. /реакц. Амплификация проводилась с помощью амплификатора CFX-96 (Bio-Rad, США) в следующих условиях: начальная денатурация 3 мин при 96°С; затем 50 циклов, включающих денатурацию при 96°С - 8 сек, отжиг праймеров и последующую элонгацию при 60°С - 40 сек. [5,6, с.7]. Интерпретацию результатов проводили с помощью анализа графиков накопления флюоресценции по соотношению значений флюоресценции в диапазонах эмиссии красителей FAM и HEX.

Таблица 1

Структуры праймеров для проведения генотипирования

Соответствие частот генотипов равновесию Харди - Вайнберга проверяли с помощью критерия ч². Достоверность различий частот аллелей и генотипов в исследуемых группах оценивали с помощью критерия ч² с учетом поправки Йетса. Статистически значимыми считались различия при р<0,05. Для оценки величины относительного риска использовали отношение шансов (OR) с его доверительным интервалом (C.I.) при уровне доверия 95 %. Вычисления производили с помощью программы DeFinetti на сайте Института генетики человека (Мюнхен, Германия,).

Результаты и обсуждение Частоты встречаемости генотипов всех исследуемых полиморфизмов соответствуют закону Харди - Вайнберга и представлены в табл.2.

Таблица 2

Частоты аллелей и генотипов исследуемых полиморфизмов в экспериментальных и контрольных группах

Мутация гена протромбина G20210A

Для гена II фактора нами были обнаружены статистически значимые различия между контрольной и экспериментальной группой в частотах встречаемости аллелей (чІ=6,09; p=0,01357). Риск развития акушерской патологии при наличии аллеля А, приводящего к возрастанию концентрации протромбина в крови в несколько раз, увеличивается в 3,3 раза (OR=0,179; C.I.=0,056-0,569) [7, с.7]. Частоты встречаемости мутации протромбина в обеих группах выше среднепопуляционных. Это может быть обусловлено тем, что в популяционных исследованиях используется смешанная выборка из мужчин и женщин, и не проводится какой-либо отбор по наличию/отсутствию заболеваний.

Мутация Лейдена G1691А гена V фактора свертывания крови заключается в замене гуанина на аденин в позиции 1691. Она приводит к резистентности V фактора к расщепляющему действию протеина С, в результате чего уменьшается скорость инактивации протромбиназного комплекса и возрастает количество тромбина [8, с.7]. Ассоциаций между наличием этой мутации и развитием гестационных осложнений выявлено не было. В данной работе исследуемая группа состояла из женщин с различными нарушениями протекания беременности. При выделении подгруппы с преэклампсией, состоящей из 98 женщин, было показано, что при наличии мутации Лейдена риск развития преэклампсии возрастает в 3,4 раза (чІ=5,94; p=0,01478; O.R.=3,351; C.I.=1,200-9,362). Это подтверждает литературные данные: по данным метаанализа из 47 статей была установлена ассоциация лейденской мутации с развитием тяжелой и умерненной преэклампсии [9, с.7].

Полиморфный локус С677T гена MTHFR

MTHFR является ключевым ферментом фолатного цикла, приводя к образованию активной формы фолиевой кислоты. Аллель Т локуса С677T гена MTHFR, наличие которого приводит к снижению активности фермента метилентетрагидрофолатредуктазы, вызывает повышение уровня гомоцистеина в крови, что приводит к повреждению эндотелия и нарушению микроциркуляции [10,11, с.7]. Однако в нашем исследовании было показано, что полиморфный локус С677T гена MTHFR не приводит к развитию акушерской патологии.

Полиморфный локус 675 5G/4G гена PAI-1

Для гена PAI-1 статистически значимые различия между группами наблюдались в распределении как аллелей (чІ=11.68; p=0.00063), так и генотипов (чІ=8,34; p=0.00387). Для женщин, имеющих генотип 4G/4G, риск развития осложнений по сравнению с генотипом 5G/5G увеличивается в 2,6 раз (O.R.=2,586; C.I.=1,424-4,696), в то время как у гетерозигот - в 1,8 раз. Развитие осложнений связывают с тем, что присутствие аллели 4G сопровождается повышением экспрессии гена и увеличением концентрации PAI-1 в крови, что приводит к снижению активности системы фибринолиза и увеличению содержания фибрина в сосудистом русле, в том числе и в маточно - плацентарных сосудах [12, с.7].

Полиморфный локус G634C гена VEGF

Для гена сосудисто-эндотелиального фактора роста (VEGF) было показано наличие ассоциаций аллели С с развитием патологического течения беременности (чІ=4,49; p=0.03402). Это наблюдается за счет развития вазоконстрикции, повышения сосудистой проницаемости и нарушения процессов неоангиогенеза [13,14, с.7].

Полиморфный локус Glu298Asp гена eNOS

Полиморфизм гена эндотелиальной NO-синтазы приводит к уменьшению содержания оксида азота, являющегося основным вазодилататором, что сопровождается усилением вазоконстрикции. В литературе описаны ассоциации этого полиморфизма с развитием ишемической болезни сердца, гипертонической болезни [15,16, с.7]. Нами не было выявлено ассоциаций полиморфизма гена eNOS с развитием патологии беременности. По данным Беспаловой С.Н. и соавт., полиморфизм этого гена приводит к развитию преэклампсии, однако его связь с развитием прочих осложнений не установлена [9, с.7].

Выводы

В результате проведенной работы выявлены ассоциации аллелей 20210A гена протромбина, 634C гена VEGF, аллели 4G полиморфного локуса 5G/4G 675 гена PAI-1 с развитием осложнений беременности, обусловленных развитием тромбофилии и дисфункции эндотелия. Обнаружение генетических маркеров позволяет определить группу женщин с высокой вероятностью развития акушерской патологии и вовремя начать соответствующую терапию, включающую применение низкомолекулярных гепаринов, избегая патологического течения беременности [17, с.7].

Описанные выше полиморфизмы генов MTHFR, еNOS, FV не приводят к развитию гестационных осложнений.

Библиографический список

1. Simcox L.E., Ormesher L, Tower C, Greer I.A. Thrombophilia and Pregnancy Complications //Int J Mol Sci. 2015 Nov 30; 16 (12).

2. Близнецкая С.Л. Основные наследственные тромбофилии и их роль при привычном невынашивании беременности// Автореф. дисс.... канд. мед. наук, 2009. С. 4-5.

3. Агеева Л.И., Александрова Г.А., Зайченко Н.М. Здравоохранение в России. 2015 //Стат.сб./ Росстат. М., 2015. С. 26.

4. Бондарь И.А., Филипенко М.Л., Шабельникова О.Ю. Ассоциация полиморфных маркеров rs7903146 гена TCF7L2 и rs1801282 гена PPARG (Pro12Ala) с сахарным диабетом 2 типа в Новосибирской области // Научно-практический медицинский журнал «Сахарный диабет», 2013. С. 22-24.

5. Березина О.В., Вайнер А.С., Воронина Е.Н., Филипенко М.Л. Ассоциация полиморфных вариантов генов фолатного цикла с риском развития агрессивных и индолетных лимфом // Сибирский научный медицинский журнал, выпуск № 2, том 31. 2011. С. 38-41.

6. Воронина Е.Н., Пикалов И.В., Хрипко Ю.Н., Филипенко М.Л. Исследование мутаций гена фактора гемокоагуляции V и гена протромбина в популяции г. Новосибирска. // Консилиум №4, 2004. С. 39-41.

7. Poort S., Rosendaal F., Reitsma P. A coomon genetic variation in the 3'-untranslated region of the prothrombin gene is associated with elevated plasma prothrombin levels and an increase in venous thrombosis // Blood 1996: 88, 3698-3703.

8. AparicioС, Dahlbдck B. Molecular mechanisms of activated protein C resistance. Properties of factor V isolated from an individual with homozygosity for the Arg506 to Gln mutation in the factor V gene// Biochem J. 1996 Jan 15; 313: 467-472.

9. Баранов В.С. Генетический паспорт -- основа индивидуальной и предиктивной медицины // Под ред. В. С. Баранова. СПб.: Изд-во Н-Л, 2009. 528 с.

10. Трифонова Е.А., Габидулина Т.В., Агаркова Т.А. Гомоцистеин, полиморфизмы гена MTHFR и осложнения беременности, 2011, 13-16.

11. Бицадзе В. О., Макацария А. Д. Тромбофилические состояния в акушерской практике. М., 2001. С. 89-92.

12. Пизова Н.В. Тромбофилии: генетические полиморфизмы и сосудистые катастрофы, Москва, 2013; 88.

13. Arroyo J. A., Winn V. D. Vasculogenesis and angiogenesis in the IUGR placenta // Semin. Perinatol, 2008. V. 32.172. 177.

14. Makris A., Thornton C., Thompson J. et al. Uteroplacental ischemia results in proteinuric hypertension and elevated sFLT-1 // Kidney Int. 2007. P 977 - 984.

15. Кузнецова Т.Ю, Гаврилов Д.В., Самоходская Л. М. Влияние полиморфизма Glu298Asp гена эндотелиальной NO синтазы на развитие поражений органов - мишеней при установлении артериальной гипертензии в молодом возрасте//Сибирский медицинский журнал, 2010. С. 33-36.

16. Куба А.А., Никонова Ю.М., Феликсова О.М. Ассоциация генетического полиморфизма гена эндотелиальной синтазы оксида азота с сердечно - сосудистой патологией //Современные проблемы науки и образования, 2015. №3.

17. Бицадзе В. О., Макацария А. Д. Применение низкомолекулярных гепаринов в акушерской практике // Рус. мед. журн. 2000. Т. 8, № 18. С. 775-778.

Размещено на Allbest.ru