Лабораторная диагностика. Лечебно-профилактические препараты при инфекционных болезнях рыб

Размещено на http://www.allbest.ru/

Министерство сельского хозяйства РФ

Департамент научно-технологической политики и образования

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования

"Костромская ГСХА"

Факультет ветеринарной медицины и зоотехнии

Кафедра "Эпизоотологии, паразитологии и микробиологии"

Предмет: Эпизоотология и инфекционные болезни

Реферат на тему:

"Лабораторная диагностика. Лечебно-профилактические препараты при инфекционных болезнях рыб"

Выполнила: студентка 552 группы

Батаева Екатерина Рихардовна

Проверил: заслуженный работник высшей школы РФ,

доктор ветеринарных наук, профессор

Бурдейный Василий Владимирович

Караваево

2017

Содержание

1. Лабораторная диагностика весенней виремии карпов (ВВК)

2. Лабораторная диагностика аэромоноза карповых рыб

3. Лабораторная диагностика бранхиомикоза

4. Лечебно-профилактические препараты при весенней виремии карпов (ВВК)

5. Лечебно-профилактические препараты при аэромонозе карповых рыб

6. Лечебно-профилактические препараты при бранхиомикозе (жаберная гниль)

Список источников литературы

1. Лабораторная диагностика весенней виремии карпов (ВВК)

Весенняя виремия карпов -- вирусная болезнь некоторых видов прудовых рыб, характеризующаяся острым течением с проявлением отеков тела, ерошением чешуи, одно- или двусторонним пучеглазием, наличием точечных или очаговых кровоизлияний у основания грудных и брюшных плавников.

Предварительный диагноз на ВВК ставят на основании анализа эпизоотологических данных, обнаруженных клинических признаков и патологоанатомических изменений. Окончательный диагноз базируется на результатах вирусологических исследовании по выделению и серологической идентификации вируса. ВВК дифференцируют от псевдомоноза и аэромоноза, руководствуясь положениями соответствующих инструкций.

Вирусологическую работу - отбор и обработка проб, выделение и идентификация вируса, биопроба и серологические исследования - проводят в соответствии с "Инструкцией по применению традиционных методов диагностики вирусных инфекций рыб".

После доставки отобранного материала в лабораторию сразу приступают к его обработке.

На вирусологические исследования материал отбирают от клинически больной рыбы в период эпизоотии при температуре воды 11-17°С. В эти же сроки проводят отбор материала при отсутствии заболевания в хозяйстве в случае исследования выращиваемой в нем рыбы на вирусоносительство. Для выделения вируса собранными материалами инокулируют культуру клеток ЕРС. Инокулированную культуру инкубируют при 21-22°С.

Идентификацию выделенного вируса осуществляют в реакции нейтрализации с использованием гипериммунной сыворотки. При работе с эпизоотическим материалом постановку реакции совмещают с выделением вируса. В реакции используют клеточную линию ЕРС.

Для диагностики ВВК необходимо не только изолировать и идентифицировать вирус в период эпизоотии, но и показать, что содержание его в тканях рыб находилось на эпизоотически значимом уровне (не ниже 105 ТЦД50/г) и, что более важно, доказать его этиологическую роль, воспроизведя заболевание и гибель рыб в биопробе. Последнее условие имеет особое значение в контексте значительного колебания вирулентности у полевых изолятов вируса и существования других болезней с подобными клиническими проявлениями.

Биологическую пробу с выделенным вирусом ставят на годовиках или сеголетках карпа массой соответственно 20-40 и 5-10 г. После заражения температуру воды в течение суток поднимают до 13-15°С. При экспериментальном заражении методом ванн или внутрибрюшинного введения вируссодержащего материала инкубационный период составляет 4-10 дней.

В летнее время при необходимости проводят предварительную оценку эпизоотической ситуации в хозяйствах по ВВК путем серологического обследования выращиваемых рыб.

Сыворотки крови отбирают от двухлетков или трехлетков карпа через 1,5-2 месяца после эпизоотии или периода благоприятных для развития инфекции температур воды (при отсутствии заболевания). Обычно это делают в середине или конце июня.

Постановку реакции ведут с использованием комплемента рыб, что повышает чувствительность метода выявления антител к вирусу ВВК в среднем в 10 раз. Источником комплемента служит свежая нормальная сыворотка крови карпа, которую вводят в состав рабочего разведения вируса в количестве 20%. В реакции используют культуру клеток FHM, как высокочувствительную в отношении детектирования рыбьих антител к вирусу. Инокулированную культуру инкубируют - при 21-22°С.

Обнаружение вируснейтрализующих антител в сыворотках рыб служит основанием для предварительного заключения о неблагополучии хозяйства (водоема) и проведения в нем прямых вирусологических исследований весной следующего года.

2. Лабораторная диагностика аэромоноза карповых рыб

Аэромоноз карпов (краснуха карпов, геморрагическая септицемия, инфекционная брюшная водянка, люблинская болезнь) -- инфекционная болезнь карповых рыб, характеризующаяся воспалением кожного покрова, очагами кровоизлияний, водянкой, ерошением чешуи, пучеглазием, гидратацией мышечной ткани и всех внутренних органов. Регистрируют во всех странах Западной и Восточной Европы, Южной Америки и Индии.

Для бактериологического исследования берут только живую больную рыбу. В каждом случае исследуют не менее 5 экземпляров рыб с признаками болезни.

Бактериологическое исследование

2.1. Высевы производят из асцитной жидкости, печени, почек, селезенки, из крови (отдельно из каждой пробы) на чашки с МПА (рН 7,2-7,4).

Заболевание характеризуется септическим течением, поэтому в посевах из крови и паренхиматозных органов, как правило, обильный рост культуры возбудителя.

Посев можно производить инокуляционной петлей, погружая её в обследуемый орган и поворачивая несколько раз, или пинцетом с изогнутыми браншами.

Посевы инкубируют при 25-26°С в течение 48-72 часов. На МПА бактерии рода Psudomonas образуют бесцветные или серовато-белые полупрозрачные, круглые выпуклые колонии с ровными краями. На 3-4-е сутки отмечают образование желто-зеленого или оранжево-желтого флюоресцирующего пигмента. Ps. cyprinisepticum и некоторые штаммы Ps. fluorescens могут образовывать слизистые колонии.

При обнаружении на агаре характерного роста подозрительные колонии пересевают на среду Клиглера и через 18 часов культуры, давшие на этой среде щелочную реакцию (столбик и скошенная поверхность окрашивается в малиновый цвет), подвергают дальнейшему изучению. Для дифференциации возбудителей рода Pseudomonas от бактерий сходных с ними родов (табл. 1) определяют оксидазную активность, способность расщеплять глюкозу в среде Хью-Лейфсона (тест окисления-ферментации).

Для определения оксидазной активности на небольшой участок скошенной поверхности с культурой наносят каплю смеси реактивов 1%-ного водного раствора диметилпарафенилендиамина (гидрохлорида или оксалата) и 1%-ного раствора (а-нафтола и 60° спирте-ректификате. Оксидазоположительные колонии окрашиваются в синий цвет через 30-60 секунд. Оксидазоотрицательные культуры дальше не исследуются.

При проведении теста окисления-ферментации (О/Ф) исследуемую культуру засевают уколом до дна в пробирку с 6 мл среды Хью-Лейфсона. Посевы инкубируют 96 часов при 25-26°С. Возбудители псевдомоноза окисляют глюкозу в аэробных условиях, поэтому среда в верхних слоях становится соломенно-желтой, нижний слой остается без изменения ферментация не происходит.

В случае сомнительного результата теста окисления-ферментации проводят дополнительные исследования декарбоксилазной активности выделенных культур. Исследуемую культуру высевают в четыре пробирки со средой Меллера или Биргер-Крушинской, в три из которых добавлено по одной из аминокислот (аргинин, лизин, орнитин), четвертая - контрольная. Затем на поверхность среды наслаивается стерильное вазелиновое масло (примерно I мл). Посевы инкубируют 4 суток при 25-26°С. Возбудители псевдомоноза обладают аргинин-дегидролазой, но не декарбоксилируют лизин и орнитин, в результате чего цвет среды Биргер-Крушинской в пробирке с аргинином становится синим. Цвет среды Меллера изменяется до фиолетового, при слабой реакции становится голубовато-серым.

Для определения видовой принадлежности культур проводят высевы на среды Гисса с маннитом, сахарозой, мальтозой, лактозой.

Подвижность культуры определяют при посеве на среду Хью-Лейфсона. Подвижные культуры растут диффузно, вызывая помутнение всей среды, неподвижные - строго по уколу (Ps. fluorescenc f. capsulata).

Биологическое исследование

3.1. Биологическую пробу ставят на 6-10 клинически здоровых рыбах того же вида и возраста, от которых выделена культура возбудителя, завезенных из хозяйства, благополучного по данному заболеванию.

Двухсуточную бульонную культуру вводят 4-6 рыбам внутримышечно и 4-6 рыбам внутрибрюшинно в дозе 0,3 мл. Рыбам массой более 150 г вводят по 0,5 мл культуры. Температура воды в аквариуме, где содержится зараженная рыба, должна быть в пределах 15-25° С.

Одновременно ставят контроль на 6-10 рыбах, которым вводят стерильный МПБ в тех же дозах. Срок наблюдения 16 суток.

В случае проявления заболевания или гибели рыб проводят бактериологическое исследование.

Биологическую пробу считают положительной, если все зараженные рыбы заболевают и не менее 50% из них погибает с признаками псевдомоноза, а из крови и внутренних органов изолируют исходную культуру.

Лабораторный диагноз на псевдомоноз считают установленным при выделении культуры со свойствами, характерными для возбудителей болезни, и патогенной для подопытных рыб.

3. Лабораторная диагностика бранхиомикоза

Бранхиомикоз -- острое инфекционное заболевание карпа, сазана, карася, линя и других рыб, возбудителем которого является грибок, паразитирующий в кровеносных сосудах жаберного аппарата. В результате закупорки грибком кровеносных сосудов происходит некротический распад жабр, вызывающий массовую гибель рыб, что и является самым характерным признаком болезни. Встречается в рыбо-хозяйственных водоемах стран Западной Европы. Бранхиомикоз регистрируют в ряде областей России.

Branchiomyces sanguinis -- паразит крови. Под микроскопом изучены некротизированные, подвергшиеся гнилостному распаду участки жабр

больных рыб. Лепестки жабр помещают на предметное стекло в каплю воды, разрывают препаровальной иглой и просматривают при малом увеличении микроскопа. В патологическом материале обнаруживают гифы гриба и споры.

При гистологическом исследовании жабр на срезах в капиллярах и респираторных складках видны гифы гриба и споры, которые окрашиваются гематоксилином в темно-лиловый цвет, а эозином -- в красный.

Для получения культуры патологический материал берут только от трупов, жабры которых подверглись разложению. Из свежей неразложившейся жаберной ткани живых рыб выделить гриб довольно трудно. Кусочек некротизированной жаберной ткани тщательно растирают в ступке с водой, чтобы освободить гифы гриба. Растертую массу обрабатывают в центрифуге с дистиллированной водой. Надосадочную жидкость сливают, вновь добавляют дистиллированную воду и помещают в центрифугу 3--4 раза до получения прозрачной жидкости. Осадок просматривают под микроскопом и отделяют свободно плавающие гифы

гриба. Промытые гифы помещают в 2%-ный раствор формалина на 2 мин., а затем вновь промывают стерильной водой и высевают на агар Сабуро, полужидкий агар, 3%-ный глюкозный агар, мясопептонный бульон, кровяной бульон. Культивируют при температуре 20--22°С. Возбудитель хорошо растет на МПБ. Мицелий гриба состоит из сильно разветвленных гиф (шириной 8--30 мкм), лишенных перегородок. Внутри гиф образуются споры диаметром 5--9 мкм. Чистая культура гриба в кровяном бульоне растет так же хорошо, как и в живой жаберной ткани рыб. Цикл развития гриба окончательно не изучен.

4. Лечебно-профилактические препараты при весенней виремии карпов (ВВК)

В недавнее время предложена методика иммунотерапии. Лечение производится интерлейкином-2, торговое название Ронколейкин. ИЛ-2влияет на рост, дифференцировку и активацию агранулярных лейкоцитов. Принцип лечения в том, чтобы активизировать собственный иммунитет рыбы, заставить организм самостоятельно справиться с болезнью.

Лекарство следует вносить либо в карантинный отсадник, либо в корм, если нет возможности высадить рыбу на карантин, например, прудовому карпу или в целях профилактики давать такой корм рыбам в общем аквариуме. В условиях аквариума разработчики препарата рекомендуют добавлять Ронколейкин в дозе 0,05 - 0,1 мг на 10 литров воды. Обратите внимание, что препарат имеет различные виды фасовки. Флаконы по 10 мл, содержащие 2 мг, 5 мг или 10 мг ИЛ-2, и в ампулы по 0,05 мг, 0,1 мг, 0,25 мг и 0,5 мг интерлейкина-2. Лечебные ванны с препаратом должны длиться 30-60 минут. Для карпов в пруду рекомендуют вводить препарат перорально с кормом. Корм опрыскивают раствором с расчетом 0,0025 г/кг массы рыбы. Кормят три раза с интервалом 48 часов. Препарат не подавляет биофильтрацию.

В качестве профилактики ВВК рекомендуют однократное кормление лечебным кормом, приготовленным по вышеизложенному способу.

5. Лечебно-профилактические препараты при аэромонозе карповых рыб

Применяют ванны с левомицетином (300 мг/л при экспозиции 12 час. и более), синтомицином (600--1000 мг/л при той же экспозиции) и метиленовой синью (50, 75,100,200 мг/л при экспозиции соответственно 12--16, 7--10, 4--6 и 2--4 час.). В выростных прудах сеголеткам карпа дают метиленовой сини по 1--2 мг каждой рыбе в сутки вместе с кормом в течение 8--10 сут. или синтомицин в дозе 1--2 мг. Двухлеткам в нагульных прудах скармливают те же препараты в дозе: метиленового синего 3--5 мг, синтомицина 2--3 мг каждой рыбе в сутки. Производителей и рыб группы ремонта обрабатывают индивидуально, левомицетин вводят внутрибрюшинно по 20--30 мг/кг двукратно, биомицин дают карпам через рот по 50 мг/кг в течение 2--4 сут. Между интервалами в корм добавляют метиленовый синий по 3000 мг на 1 кг корма или синтомицин из расчета 50 мг на 1 кг массы рыбы. Всем возрастным группам карпа в корм подмешивают фуразолидон из расчета 6 г на 10 кг корма в течение 10 сут. с двухдневным перерывом между пятидневками. С профилактической целью фуразолидон применяют также десятидневными курсами с двухдневным перерывом из расчета на 10 кг корма: производителям и карпам из группы ремонта -- по 0,4 г; двухлеткам -- по 0,3 г; годовикам массой до 50 г -- по 0,4 г; сеголеткам -- по 0,3 г. Профилактическое кормление в нагульных и летних маточных прудах начинают весной при повышении температуры воды до 14°С. Повторное кормление назначают летом -- в период возможной вспышки болезни. Сеголеткам карпа в выростных прудах профилактическое кормление назначают при первом же кормлении комбикормами. Со второй половины июля и до октября кормление лечебными препаратами повторяют через каждые 2--3 недели. Своевременно выполняют также ветеринарно-санитарные и рыбоводно-мелиоративные мероприятия. Особое внимание уделяют профилактической дезинфекции и дезинвазии водоемов, врачебному контролю за выращиваемой рыбой и карантину поступающих в хозяйство производителей и ремонтных рыб, в некоторых хозяйствах для профилактики аэромоноза применяют периодическое летование прудов, где выращивалась зараженная рыба. эпизоотологический виремия аэромоноз бранхиомикоз

Для повышения неспецифической резистентности по воде вносят препарат "ДОН" или проводят курс кормления рыбы с субалином (производство "Днепрофарм", Украина), или с кротонолактоном. Весной при бонитировке ремонтных особей и производителей инъецируют внутрибрюшинно дибиомицином (с экмолином или вазелиновым маслом). Хорошие результаты получены в России при производственном испытании

биохимической вакцины ВЮС-2.

6. Лечебно-профилактические препараты при бранхиомикозе (жаберная гниль)

Лечение не разработано.

При возникновении бранхиомикоза проводят весь комплекс противоэпизоотических мероприятий. Прежде всего улучшают зоогигиенические условия содержания рыб: усиливают проточность воды в прудах, обогащают ее кислородом водопитающих каналах и в прудах аэраторов, организуют систематический вылов больной рыбы и особенно трупов рыб, погибших от бранхиомикоза.

Больную рыбу, не утратившую товарного вида, реализуют в пищу людям, а сильно истощенную и свежие трупы используют после термической обработки в корм скоту и птице.

Чтобы не распространять болезнь на другие рыбоводные хозяйства и другие пруды, в одном и том же рыбхозе не проводят никаких перемещений рыб из пруда в пруд или другие водоемы. Весь рыбоводный инвентарь и орудия лова, бывшие в употреблении при работе с больной рыбой, перед использованием на других прудах и водоемах дезинфицируют: обрабатывают 2%-ным раствором формалина в течение 1 час. или кипятят в баках 30 мин.

Деревянные и металлические инструменты обжигают на пламени. В период вспышки бранхиомикоза временно прекращают все интенсификационные

мероприятия, при которых есть опасения увеличить окисляемость воды и ухудшить ее гидрохимический состав: прекращают кормление рыб, внесение органических удобрений. В это время проводят мероприятия, направленные на стабилизацию среды и угнетение развития возбудителя в ней. Для этого в пруды вносят известь в виде известкового молока, добиваясь при этом повышения щелочности (рН должен быть не менее 8--8,5), которая губительно действует на возбудителя, находящегося во внешней среде. Сроки внесения извести и ее количество определяют в зависимости от величины рН в воде неблагополучного пруда.

Список источников литературы

1. Головина Н. А., Стрелков Ю. А., Воронин В. Н., Головин П. П., Евдокимова Е. Б., Юхименко Л. Н. Ихтиопатология. 2003

2. 2. ИНСТРУКЦИЯ о мероприятиях по профилактике и борьбе с весенней виремией карпа (ВВК).

3. Коротова Д.М. Болезни рыб: краткий курс лекций для студентов IV курса направления подготовки 35.03.08 Водные биоресурсы и аквакультура // ФГБОУ ВО "Саратовский ГАУ". - Саратов, 2015. - 46 с.

4. http://aquatrium.ru/index.php/blog/item/26-весенняя-виремия-карпов-ввк

Размещено на Allbest.ru