Размещено на http://www.allbest.ru/

Размещено на http://www.allbest.ru/

Содержание

• Введение
• 1. Техника вскрытия лабораторных мышей и взятие крови из сердца
• 2. Методика нанесения мазка
• 3. Подсчёт лейкоцитарной формулы
• 4. Осмотическая резистентность эритроцитов
• 5. Выделение костного мозга
• 6. Определение активности АЛТ и АСТ
• Результаты и обсуждения
• Заключение
• Список литературы


Введение

Цель: Изучить влияние стресса на компоненты крови мышей.

На основе выше поставленной целы были определены следующие задачи:

1. Оценить средний рост и вес экспериментальных животных;

2. Изучить изменение параметров лейкоцитарной формулы;

3. Выделить клетки костного мозга из бедерной кости;

4. Изучить активность в плазме мышей группы контроля и группы мышей подверженных стрессу;

5. Изучить осмотическую резистентность у группы контроля и у мышей подверженных стрессу.

Объектом исследования явились 7 мышей женского пола. Материалом послужила кровь взятая из сердца в шприцы с добавлением гепарина натрия.

1. Техника вскрытия лабораторных мышей и взятие крови из сердца

Для того чтобы произвести взятие крови из сердца мышки надо на носик мышки поместить небольшую ёмкость с тампоном смоченным эфиром, чтобы она могла дышать открываем ей рот. Важно, чтобы мышка оставалась жива во время взятия крови!!! Для удобства вскрытия труп животного фиксируют. Для фиксации используют инъекционные иглы или одностержневые булавки (портновские). Вскрытие выполняют стерильными инструментами. Брюшную и грудную полости вскрывают при фиксации животного в спинном положении с направленными в стороны и укрепленными передними и задними конечностями (рис. 1).

Рисунок 1. Порядок вскрытия грудной и брюшной полостей (по Вагнеру)

Шерсть животного по линии разреза обрабатывают дезинфицирующим раствором. Разрез кожи делают по белой линии от лонной кости (симфиза) до шеи. Чтобы при этом не прорезать брюшную стенку, пинцетом, находящимся в левой руке, приподнимают кожу и делают сначала поперечный надрез складки кожи, удерживаемой пинцетом у симфиза, а затем, вставив одну браншу ножниц в образовавшееся отверстие, разрезают кожу до шеи животного, после чего кожу разрезают по направлению к каждой из четырех конечностей. Лоскуты кожи фиксируют булавками за верхние и нижние углы. Заменив инструменты, вскрывают брюшную полость. Для этого разрез брюшной стенки делают под линией диафрагмы и по белой линии до лонной кости. Треугольники брюшной стенки отводят в стороны и фиксируют. В качестве вируссодержащего материала из брюшной полости берут кусочки (или целый орган у мелких животных) печени, селезенки, почки, брыжеечные лимфатические узлы, участок кишечника при наличии патологоанатомических изменений или симптомов болезни, наблюдавшихся перед смертью.

Грудную полость вскрывают с учетом того, что она имеет твердые стенки. Для получения доступа к находящимся в ней органам с нее надо как бы снять «крышку». Для этого разрезают ребра поперек сзади вперед, удаляя их вместе с грудной костью.

Пункция сердца. После выстригания шерсти и дезинфекции места укола животное наркотизируют и фиксируют животом кверху Пальпаторно определяют место наилучшего ощущения сердечного толчка и на 4--5 мм краниальнее от этого пункта у левого края грудины делают прокол Пункцией сердца удается получить до 0,5 мл крови. Путем декапитации у мыши получают примерно 0,5--0,6 мл крови.

2. Методика нанесения мазка

Мазки крови делают на предметных стеклах с помощью более узкого шлифованного предметного стекла.

Подготовка стекол:

1. С предметных стекол, бывших в употреблении и соприкасавшихся с иммерсионным маслом, последнее удаляют сухой тряпкой или бензином. Затем стекла кипятят без мыла и соды в течение 15--20 мин, промывают чистой водой и погружают на 1 ч в насыщенный раствор двухромовокислого калия в серной кислоте. Обработанные таким образом стекла промывают в течение не менее 1 ч под струей водопроводной воды и насухо вытирают чистым поло­тенцем.

2. При отсутствии двухромовокислого калия и серной кислоты стекла, бывшие в употреблении, кладут в мыльный раствор и выдерживают в нем 8--10 ч, а затем в том же растворе кипятят их 5--10 мин.

После кипячения стекла вынимают и тщательно промывают под струей водопроводной воды, а затем насухо вытирают.

3. Стекла, не бывшие в употреблении, промывают в горячей воде и насухо вытирают. Хранят стекла в стеклянной широкогорлой банке с крышкой.

Приготовление мазков. Взяв предметное стекло за длинные края, прикасаются его поверхностью (отступя 0,5--1 см от узкого края) к капле крови (но не к коже). Предметное стекло держат на столе или в левой руке за узкие края. Правой рукой приставляют шлифованное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45° и продвигают его вправо до соприкосновения с кровью.

Выжидают, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением ведут его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерена так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1--1,5 см до его края. Нельзя прекращать размазывание и отнимать стекло раньше, чем капля будет исчерпана. Нельзя также сильно нажимать на стекло, так как многие клетки могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой».

Густо-розовые и красноватые мазки непригодны для счета, так как они слишком толсты и клеточные элементы при этом дифференцировать невозможно. После приготовления мазки быстро сушат на воздухе до исчезновения влажного блеска. При медленном высыхании может изменяться морфология клеток.

На высушенном мазке уголком предметного стекла или карандашом (только не химическим) пишут фамилию, инициалы больного, дату.

Краску следует готовить на воде нейтральной реакции.

Окраска мазков. Все предложенные методы окраски мазков основаны главным образом на химическом сродстве основных частей клеток к определенным анилиновым краскам и в меньшей степени на их физических свойствах. Цитоплазма одних клеток, будучи щелочной, имеет сродство к кислым краскам, выявляя оксифильные элементы крови. Цитоплазма других клеток, содержащих базофильные и нейтрофильные субстанции, поглощает и кислые, и основные краски. Ядра, содержащие в значительном количестве нуклеиновую кислоту, связывают главным образом основные краски.

К основным гематологическим краскам относятся метиленовый синий и его производные-- азур I (метиленазур) и азур II (смесь равных частей азура I и метиленового синего), к кислым -- водорастворимый желтый эозин.

Азур-эозиновые смеси красок обладают высокой чувствительностью к реакции воды и поэтому применяемая для приготовления красителей и для смывания их дистиллированная вода должна иметь нейтральную реакцию, т. е. рН 7,0. При кислей реакции воды клетки долго не прокрашиваются и имеют красный оттенок. При щелочной реакции эритроциты окрашиваются в серовато-синий цвет, а ядра и цитоплазма клеток -- в очень темные цвета.

3. Подсчёт лейкоцитарной формулы

Подсчет лейкоцитарной формулы проводят с помощью иммерсионной системы микроскопа. В связи с тем что в мазке различные виды лейкоцитов располагаются неравномерно (моноциты и нейтрофилы -- преимущественно вдоль верхнего и нижнего продольного края препарата, а лимфоциты -- ближе к его центру), подсчет лейкоцитарной формулы осуществляют, пользуясь следующими методическими указаниями. Под малым увеличением микроскопа находят край мазка крови вблизи образовавшейся щеточки. У продольного края мазка наносят каплю иммерсионного масла, после чего фокусируют плоскость препарата Наблюдая в окуляр, отступают на 2--З поля зрения по направлению к середине мазка. Затем продолжают продвижение препарата в том же направлении еще на 3--5 полей зрения, в каждом из них подсчитывая имеющиеся лейкоциты. Вслед за этим продвигают мазок на З--5 полей зрения вдоль продольного края, меняя направление продвижения мазка под прямым углом, возвращаются к краю мазка, продвигая при этом мазок еще на 3--5 полей зрения и так далее. Зигзагообразную линию, по которой продвигают мазок крови, называют линией Меандра.

Подсчет продолжают до тех пор, пока не будет сосчитано 50 % клеток. Затем подсчет продолжают на противоположной стороне мазка. Так же, как описано выше, при продвижении мазка подсчитываюТ все лейкоциты, обнаруживаемые в поле зрения. Подсчет заканчивают, когда сумма ейкоцитов будет равна 100. В другом препарате обследуемого подсчитывают еще 100 лейкоцитов. регистрацию ейкоцитов при подсчеТе производят с помощью счетчика 11клавишного СЛ-1, при этом получают общую сумму и количество Каждого вида лейкоцитов в процентах. При отсутствии счетчика регистрацию производят с помощью записи на листе бумаги. По вертикали записывают начальные буквы названий лейкоцитов метамиелоциты (мтмц.), палочкоядерные (п.), сегментоядерные (с), эозинофильные (э.), базофильные гранулоциты (б.), лимфоциты (лимф.), моноциты (мсп.), плазматические клетки (пл.).

Процентное содержание различных видов лейкоцитов не отражает истинного количества их в 1 л крови, поэтому вычисляют абсолютное содержание лейкоцитов в 1 л крови. для этого необходимо знать количество лейкоцитон в 1 л крови, процентное содержание отдельных их видов, подсчитанных в окрашенном препарате.

мазок лейкоцитарный резистентность эритроцит

Таблица 1. Лейкоцитарная формула