Технология получения лекарственных средств на основе синюхи голубой и валерианы лекарственной

Размещено на http://www.allbest.ru/

Технология получения лекарственных средств на основе синюхи голубой и валерианы лекарственной

1.Общая характеристика работы

В настоящее время актуальным является создание лекарственных средств (ЛС) на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС).

Технологии получения экстракционных ЛС являются достаточно известными. Но когда речь идет об использовании новых видов ЛРС, эти технологии требуют индивидуальных подходов и разработок с точки зрения закономерностей экстрагирования ЛРС и содержания определенной группы биологически активных веществ (БАВ).

Наиболее рациональным типом экстрактов следует считать сухие экстракты. Они удобны в применении, имеют минимально возможную массу. К недостаткам сухих экстрактов относится их высокая гигроскопичность, вследствие чего они превращаются в комкообразные массы, утрачивающие сыпучесть. Поэтому перспективным является производство на их основе твердых ЛС - таблеток и капсул.

Еще одной формой переработки растительного сырья являются ЛС, в состав которых ЛРС входит в виде тонко измельченного порошка. Создание таких ЛС является одним из перспективных направлений развития фармацевтического производства, так как позволяет максимально использовать весь комплекс БАВ растений, рационально и комплексно применять растительные ресурсы. Актуальным является создание мягких желатиновых капсул (МЖК), содержимое которых представляет собой масляную суспензию на основе тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной. Применение этих лекарственных растений в виде МЖК позволяет решить ряд задач: максимально повысить биологическую доступность ЛС путем сохранения комплекса БАВ, повысить стабильность ЛС, корригировать неприятный вкус и запах входящих в состав компонентов, рационально использовать растительные ресурсы.

Вышеизложенное дает основания полагать, что разработка и совершенствование технологий получения готовых лекарственных форм на основе тонко измельченных растительных субстанций, расширение арсенала ЛС этой номенклатуры, оптимизация методов оценки их качества и стандартизации - актуальная проблема фармацевтической науки и практики.

Цель и задачи исследования

Целью диссертационного исследования является научное обоснование, разработка составов и технологии экстракционных ЛС на основе корневищ с корнями синюхи голубой - жидкого и сухого экстракта, твердых желатиновых капсул (ТЖК) на основе сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой, МЖК на основе тонко измельченного порошка корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной.

Для достижения поставленной цели в рамках диссертационной работы необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить влияние размера частиц, природы экстрагента и технологии производства жидкого экстракта на извлечение БАВ из корневищ с корнями синюхи голубой;

2. Разработать состав и технологию получения жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой;

3. Получить сухой экстракт корневищ с корнями синюхи голубой;

4. Определить физико-химические и технологические свойства сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой;

5. Подобрать оптимальную композицию вспомогательных веществ для получения ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой;

6. Разработать оптимальный состав для получения МЖК тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной.

7. Установить сроки годности предложенных ЛС, провести стандартизацию предложенных ЛС и разработать нормативную документацию на их производство.

8. Изучить специфическую фармакологическую активность, доказать безопасность и эффективность разработанных ЛС.

2.Научная новизна

Впервые изучены закономерности экстрагирования корневищ с корнями синюхи голубой, определены коэффициенты полной и внутренней поглощаемости, набухания, рассчитаны потери на диффузию при получении жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой.

Впервые разработаны оптимальный состав и рациональная технология получения жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой, получен сухой экстракт данного растения, разработан состав ТЖК на основе сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой и МЖК на основе тонко измельченных корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной.

Научная новизна исследований подтверждена тремя патентами на изобретение: патент № 11668 Способ получения жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи, патент № 11554 Экстракт корневищ с корнями синюхи, патент № 13435 Лекарственное средство на основе валерианы.

3.Практическая значимость

Разработаны новые высокоэффективные ЛС на основе ЛРС, которые характеризуются высокой фармакологической активностью, стабильностью, удобством применения, использованием ресурсосберегающих технологий.

В ходе выполнения диссертационного исследования разработаны следующие нормативные документы: ФС «Корневища с корнями синюхи голубой», ФСП «Жидкий экстракт корневищ с корнями синюхи голубой» (проект), ФСП «ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой» (проект), Спецификация на субстанцию «Корневищ с корнями синюхи голубой сухой экстракт» (проект), ТУ РБ 100348119.035-2007 «Валериана плюс». Зарегистрированы и успешно внедрены в промышленное производство на УП «Минскинтеркапс» МЖК на основе корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной в виде БАД «Валериана плюс». БАД зарегистрирована в Республике Латвия, регистрационное удостоверение № 34/08-UB.

Разработанные экстракционные ЛС на основе корневищ с корнями синюхи голубой предложены для внедрения на фармацевтических предприятиях РБ.

Для корневищ с корнями синюхи голубой и ЛС на ее основе предложен способ стандартизации по содержанию БАВ - тритерпеновые сапонины (ТС). Разработанные методики качественного и количественного определения ТС включены в Государственную фармакопею Республики Беларусь (ГФ РБ).

Проведено изучение безопасности и эффективности ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой, что может быть использовано при регистрации ЛС.

4.Апробация результатов диссертации

Основные результаты исследований, выполненных в рамках диссертационной работы, были представлены на итоговых научно-практических конференциях студентов и молодых ученых УО «ВГМУ» (2006, 2007), научных сессиях УО «ВГМУ» (2007, 2008, 2009, 2010, 2011), VII международной научно-практической конференции «Студенческая медицина XXI века (Витебск, 2007), международной научной конференции «Экспериментальная и клиническая фармакология» (Минск, 2007, 2009), международном симпозиуме молодых ученых «Экологическая медицина и фармакология» (Минск, 2007), Всеукраинском конгрессе «Настоящее и будущее фармации» (Харьков, 2008), юбилейной международной научно-практической конференции «Фармакогнозия XXI века» (Харьков, 2009),VIII съезде фармацевтических работников Республики Беларусь (Витебск, 2010).

5.Опубликованность результатов диссертации

Основные результаты работы опубликованы в 10 статьях в рецензируемых научных журналах общим объемом 4 авторских листа (из них 1 статья соответствует требованиям ВАК РФ и 9 статей соответствуют требованиям ВАК РБ), 13 статьях в сборниках статей и 2 тезисах научных конференций, 3 патентах.

6.Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, перечня условных обозначений, общей характеристики работы, обзора литературы, семи глав собственных исследований, заключения, библиографического списка, включающего 184 использованных источников, 28 публикаций соискателя и 9 приложений.

Диссертация изложена на 275 страницах машинописного текста, включая 73 таблицы на 56 страницах, 13 рисунков на 7 страницах, 9 приложений на 55 страницах.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Тема диссертации соответствует приоритетным направлениям научно-технической деятельности Республики Беларусь на 2006 - 2010 г.г. по разделу «Медицина и фармация».

Тема диссертации включена в утвержденный план научно-исследовательской работы УО «ВГМУ» на 2004 - 2010 г.г.

7.Основные положения, выносимые на защиту

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование составов и способов производства экстракционных ЛС на основе корневищ с корнями синюхи голубой;

2. Теоретическое и экспериментальное обоснование состава и технологии производства ТЖК на основе сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой и МЖК тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной;

3. Показатели стандартизации разработанных экстракционных ЛС - жидкого и сухого экстрактов корневищ с корнями синюхи голубой: идентификация и количественное определение действующих веществ, сухой остаток, относительная плотность (жидкий экстракт), содержание этанола (жидкий экстракт), тяжелые металлы, микробиологическая чистота, потеря в массе при высушивании (сухой экстракт).

4. Показатели стандартизации ТЖК на основе сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой и МЖК тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной: идентификация и количественное определение действующих веществ, средняя масса, средняя масса содержимого капсул, однородность дозирования, микробиологическая чистота.

5. Результаты изучения безопасности (острой и хронической токсичности) и эффективности разработанных ЛС на животных.

8.Основное содержание работы

Во введении и первой главе проанализированы и обобщены известные данные, обосновывающие актуальность, целесообразность и медицинскую значимость разработки экстракционных ЛС на основе ЛРС. Отмечается, что в настоящее время фармацевтическими организациями производятся экстракционные ЛС, к которым относятся настойки, экстракты, а в аптечной практике на основе ЛРС изготавливаются настои и отвары.

Кроме того, большой интерес представляет использование растений в виде порошков и получение на их основе твердых лекарственных форм - таблеток и капсул. Представлена характеристика процесса экстрагирования как массообменного процесса, а также - разносторонняя биологическая, химическая и фармакологическая характеристика синюхи голубой и валерианы лекарственной, которые являются исходными фармацевтическими субстанциями для производства ЛС, разработанных в рамках данной диссертации. Дана характеристика способов экстрагирования ЛРС.

Во второй главе «Объекты и методы исследования» описаны объекты исследования и изложены основные методики, использованные или разработанные при выполнении диссертационных исследований. Методики химико-фармацевтического анализа ЛРС синюхи голубой и валерианы лекарственной и готовых ЛС, разработанных на их основе, базируются на определении основных групп БАВ - тритерпеновых сапонинов синюхи голубой, валепотриатов и сесквитерпеновых кислот валерианы лекарственной.

Для идентификации подлежащих анализу соединений использованы характерные качественные реакции и ТСХ. Валепотриаты идентифицировали с помощью цветной качественной реакции со смесью концентрированных хлористоводородной и ледяной уксусной кислот, в результате которой образуются пирилиевые соли, обладающие интенсивной синей окраской. Для подтверждения наличия кислоты валереновой и тритерпеновых сапонинов использовали метод ТСХ.

С целью количественного определения тритерпеновых сапонинов в ЛРС синюхи голубой и готовых ЛС на его основе разработана спектрофотометрическая методика, основанная на определении продуктов реакции ТС с кислотой серной концентрированной, обладающих максимумом поглощения при 310±2 нм. Предложенная методика характеризуется небольшой затратой реактивов и сорбента, не требует применения дорогих стандартных образцов и обладает хорошей воспроизводимостью.

Для стандартизации ЛРС и готовых ЛС валерианы лекарственной по количественному содержанию БАВ использована спектрофотометрическая методика определения валепотриатов, основанная на их специфической особенности взаимодействовать со смесью концентрированных хлористоводородной и ледяной уксусной кислот с образованием пирилиевых солей интенсивного синего цвета с максимумом поглощения при 595±2 нм, и ВЭЖХ для определения сесквитерпеновых кислот.

Определение технологических характеристик фармацевтических субстанций, физические и физико-химические показатели, анализ ЛРС и ЛС на его основе, фармацевтико-технологические испытания осуществляли стандартными методами, используемыми при изучении данных свойств. Экспериментальные данные обрабатывали методами статистического анализа с использованием критериев Стьюдента, Фишера, Кокрена и многофакторного дисперсионного анализа для оценки достоверности полученных результатов при р = 0,05, использовали методы математического планирования эксперимента латинский квадрат, физическое моделирование. Статистическая обработка данных осуществлялась с применением программы «Exсel».

В третьей главе «Изучение закономерностей экстрагирования корневищ с корнями синюхи голубой» изложены результаты определения важнейших параметров, оказывающих влияние на качество получаемого экстракционного ЛС. Важной характеристикой, влияющей на содержание БАВ в готовом экстракционном ЛС, является коэффициент потерь на диффузию. Для определения потерь на диффузию необходимо, прежде всего, оценить влияние объема экстрагента на коэффициент потерь на диффузию при получении жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой. Результаты исследования представлены в таблицах 1, 2, 3.

Таблица 1. Потери на диффузию в зависимости от концентрации спирта этилового и размера частиц сырья (жидкий экстракт синюхи голубой 1:1)

Концентрация спирта этилового, %	Размер частиц сырья в мм
	0,5	1	3	5
20	0,001136	0,001148	0,001193	0,001211
40	0,001136	0,001136	0,001193	0,001229
70	0,001148	0,001148	0,001211	0,001244

Таблица 2. Потери на диффузию в зависимости от концентрации спирта этилового и размера частиц сырья (жидкий экстракт синюхи голубой 1:2)

Концентрация спирта этилового, %	Размер частиц сырья в мм
	0,5	1	3	5
20	0,000883	0,000899	0,000954	0,000978
40	0,000883	0,000883	0,000954	0,001001
70	0,000899	0,000899	0,000978	0,001022

Таблица 3. Потери на диффузию в зависимости от соотношения сырье : экстрагент

Параметры экстрагирования	Соотношение сырье : экстрагент
Конц. спирта этилового, %	Размер частиц ЛРС, мм	1:1	1:2
1	2	3	4
20	0,5	0,001136	0,000883
20	1	0,001148	0,000899
20	3	0,001193	0,000954
20	5	0,001211	0,000978
40	0,5	0,001136	0,000883
40	1	0,001136	0,000883
1	2	3	4
40	3	0,001139	0,000954
40	5	0,001229	0,001001
70	0,5	0,001148	0,000899
70	1	0,001148	0,000899
70	3	0,001211	0,000978
70	5	0,001244	0,001022

Потери на диффузию увеличиваются с возрастанием концентрации спирта этилового и увеличением размера частиц ЛРС и уменьшаются при увеличении соотношения экстрагент : сырье (таблицы 1, 2, 3).

Для изучения процесса экстрагирования использовали физическое моделирование, то есть заменяли изучение процесса экстрагирования корневищ с корнями синюхи голубой исследованием его модели с той же физической природой. В качестве параметра оптимизации (у) выбрали величину потерь на диффузию.

В качестве факторов, определяющих процесс, использовали:

х₀ - фиктивная переменная;

х₁ - соотношение сырье : экстрагент;

х₂ - размер частиц ЛРС, мм;

х₃ - концентрация спирта этилового, %.

Матрица планирования полного факторного эксперимента представлена в таблице 4.

лекарственный валериана экстракт

Таблица 4. Матрица планирования полного факторного эксперимента

№ опыта	Количество факторов	Параметр оптимизации (потери на диффузию), у
	х0	х1	х2	х3	у1	у2	у3	у ср.
1	+	+	+	+	0,001021	0,001010	0,001021	0,001018
2	+	+	+	-	0,000978	0,000978	0,000989	0,000982
3	+	+	-	+	0,000898	0,008985	0,000882	0,000893
4	+	+	-	-	0,000866	0,000882	0,000898	0,000883
5	+	-	+	+	0,001243	0,001235	0,001243	0,001240
6	+	-	+	-	0,001211	0,001211	0,001220	0,001214
7	+	-	-	+	0,001148	0,001148	0,001135	0,001144
8	+	-	-	-	0,001121	0,001135	0,001148	0,001135

Функция у представлена в виде линейного уравнения:

у = 106,4·10^-5 - 11,96·10^-5х₁ + 4,99·10^-5х₂ +1,01·10^-5х₃

Как видно из уравнения регрессии, величина потерь на диффузию увеличивается с возрастанием концентрации спирта этилового и увеличением размера частиц ЛРС и уменьшается при увеличении соотношения сырье : экстрагент. Наиболее значимыми факторами, оказывающими влияние на величину потерь на диффузию, являются соотношение сырье : экстрагент и размер частиц ЛРС.

При разработке технологии жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой различного размера частиц в качестве экстрагента нами использовались водно-спиртовые растворы, поэтому целесообразно сравнить коэффициент набухания (КН) для корневищ с корнями синюхи голубой различного размера частиц для водного раствора и спирта этилового различной концентрации. Результаты определения КН корневищ с корнями синюхи голубой представлены в таблице 5.

Таблица 5. Зависимость коэффициента набухания корневищ с корнями синюхи голубой от размера частиц ЛРС и природы экстрагента (n = 5, Р = 0,95)

Экстрагент	Размер частиц ЛРС, мм
	0,5	1	3	5
1	2	3	4	5
Вода очищенная	3,17±0,12	4,17±0,15	8,17±0,13	10,50±0,11
Спирт этиловый 20%	3,17±0,15	4,17±0,18	8,17±0,12	10,67±0,11
Спирт этиловый 40%	3,17±0,19	4,17±0,14	8,33±0,13	10,83±0,16
Спирт этиловый 70%	3,17±0,19	4,17±0,12	8,33±0,11	10,50±0,15

КН корневищ с корнями синюхи голубой зависит от размера частиц ЛРС - чем больше размер частиц, тем КН выше - и не зависит от природы использованных в эксперименте экстрагентов (таблица 5).

При набухании ЛРС можно выделить две стадии - продвижение экстрагента внутрь кусочков ЛРС и увеличение объема кусочков ЛРС вследствие явления набухания. Для процесса экстрагирования определенное значение имеют количество экстрагента, поглощенного ЛРС, и динамика поглощения экстрагента, которая связана с процессом набухания ЛРС. Поглощенный ЛРС экстрагент образует внутренний сок, количество которого является важной константой для ЛРС различного размера частиц. Нами определены коэффициент внутренней поглощаемости (КВП) и коэффициент полной поглощаемости (КПП) корневищ с корнями синюхи голубой.

Величина КПП корневищ с корнями синюхи голубой в незначительной степени зависит от размера частиц ЛРС и концентрации спирта. С увеличением концентрации спирта происходит уменьшение КПП корневищ с корнями синюхи голубой (таблица 6).

Таблица 6. Зависимость коэффициента полной поглощаемости корневищ с корнями синюхи голубой от концентрации спирта этилового и размера частиц ЛРС (n = 5, Р = 0,95)

Размер частиц ЛРС, мм	Концентрация спирта этилового, %
	20	40	70
0,5	1,53±0,16	1,45±0,11	1,18±0,19
1	1,68±0,19	1,54±0,11	1,29±0,11
3	1,78±0,19	1,67±0,18	1,44±0,15
5	1,89±0,13	1,77±0,11	1,65±0,19

КВП уменьшается с увеличением концентрации спирта этилового. В то же время в этих пределах размера частиц ЛРС КВП меняется незначительно. Происходит некоторое увеличение КВП с уменьшением размера частиц (таблица 7).

лекарственный валериана экстракт

Таблица 7. Зависимость коэффициента внутренней поглощаемости корневищ с корнями синюхи голубой от концентрации спирта этилового и размера частиц ЛРС (n = 5, Р = 0,95)

Размер частиц ЛРС, мм	Концентрация спирта этилового, %
	20	40	70
0,5	1,36±0,19	1,17±0,12	1,05±0,11
1	1,45±0,18	1,31±0,19	1,19±0,13
3	1,47±0,17	1,35±0,14	1,21±0,16
5	1,50±0,16	1,39±0,11	1,27±0,11

Установлено, что с увеличением размера частиц корневищ с корнями синюхи голубой КПП возрастает более заметно, чем КВП. Для проверки равенства дисперсий полученных значений КПП и КВП использовали критерий Кокрена (G). Поскольку расчетные значения G больше G_табл., следовательно, полученные значения КПП и КВП корневищ с корнями синюхи голубой различного размера частиц с использованием спирта этилового различных концентраций достоверно различаются.

Экспериментально определены КН, КПП и КВП корневищ с корнями синюхи голубой. Показано, что с увеличением размера частиц корневищ с корнями синюхи голубой КН уменьшается. КПП и КВП увеличиваются с ростом степени измельчения, причем КПП возрастает более заметно.

Определен коэффициент вымывания корневищ с корнями синюхи голубой разного размера частиц с использованием спирта этилового различных концентраций (рисунок 1).



Рисунок 1. Зависимость коэффициента вымывания корневищ с корнями синюхи голубой от размера частиц ЛРС

Таким образом, изучены закономерности экстрагирования корневищ с корнями синюхи голубой. Определены потери на диффузию, коэффициент набухания, коэффициент полной поглощаемости и коэффициент внутренней поглощаемости, коэффициент вымывания.

В четвертой главе «Разработка технологии получения экстракционных лекарственных средств корневищ с корнями синюхи голубой» приведены исследования, проведенные для выбора рациональной технологии получения жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой. Для разработки оптимальной комбинации размера частиц ЛРС, концентрации экстрагента и способа получения жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой использовали метод математического планирования эксперимента латинский квадрат 3Ч3.

Было изучено влияние следующих факторов на содержание ТС в жидком экстракте корневищ с корнями синюхи голубой:

А - концентрация этанола

а₁ - 20%

а₂ - 40%

а₃ - 70%

В - способ получения жидкого экстракта

b₁ - способ с делением сырья на равные части

b₂ - способ с делением сырья на равные части и делением экстрагента

b₃ - способ с делением сырья на неравные части

C - размер частиц ЛРС

с₁ - 0,5 мм

с₂ - 1 мм

с₃ - 3 мм.

Наиболее значимым фактором, оказывающим влияние на выход ТС при получении жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой, является способ получения жидкого экстракта.

Предложен состав жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой:

Корневищ с корнями синюхи голубой

с размером частиц 0,5 мм 1 ч

Спирта этилового 40% 2 ч

Данный состав запатентован (патент № 11554 «Экстракт корневищ с корнями синюхи»). Получен патент на способ получения жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой, который заключается в экстрагировании корневищ с корнями синюхи голубой с размером частиц 0,5 мм спиртом этиловым 40% методом реперколяции с делением сырья на неравные части (патент № 11668 Способ получения жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи).

Технология получения жидкого экстракта. День 1: сырье с размером частиц 0,5 мм делили на три части в соотношении 5:3:2 и засыпали в три перколятора, заливали в перколятор №1 спирт этиловый 40%, объем которого рассчитан с использованием коэффициента спиртопоглощения; настаивали 24 часа. День 2: отжимали сырье и полученный объем извлечения переносили в перколятор №2, настаивали 24 часа. День 3: отжимали сырье и полученный объем извлечения переносили в перколятор №3, настаивали 24 часа. Сливали готовый продукт из перколятора №3 .Полученный экстракт отстаивали 3 суток в холодильнике при температуре 8 - 10 ⁰С, фильтровали и стандартизировали.

Использование ЛРС с размером частиц 0,5 мм и спирта этилового 40% в качестве экстрагента позволяет максимально извлечь ТС, обеспечивает максимальный коэффициент вымывания, уменьшает полную и внутреннюю поглощаемость, а соотношение сырье : экстрагент 1:2 уменьшает потери на диффузию.

В пятой главе «Разработка состава и технологии твердых желатиновых капсул сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой» представлены исследования, направленные на разработку оптимального состава и рациональной технологии производства ТЖК на основе сухого экстракта синюхи голубой. Основной технологической характеристикой капсулируемых материалов является сыпучесть.

Результаты исследования технологических характеристик сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой представлены в таблице 8.

Таблица 8. Технологические свойства сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой (n = 5, Р = 0,95)

Исследуемая характеристика	Значение исследуемой характеристики
Сыпучесть, г/с	0,68±0,02
Влажность, %	3,46
Насыпная масса, кг/м3	625,5±1,4
Насыпная масса при уплотнении, кг/м3	714,8±1,5
Угол естественного откоса, 0	51,4±0,1
Угол падения, 0	15,8±0,1
Угол разности, 0	35,6±0,1
Коэффициент вибрационного уплотнения	0,143

На основании полученных результатов можно сделать вывод, что сыпучесть сухого экстракта относится к классу «очень плохой», что предполагает использование при капсулировании дополнительных мероприятий по ее улучшению, например, использование вспомогательных веществ, улучшающих технологические свойства капсулируемой массы (таблица 8).

Для разработки оптимального состава капсульной смеси было изучено влияние концентрации вспомогательных веществ на технологические свойства смеси сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой и лактозы. В качестве вспомогательного вещества использовали лактозу, которая обладает необходимыми технологическими свойствами и широко применяется в технологии производства капсул.

Готовили модельные смеси сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой и лактозы (таблица 9).

Оценивали сыпучесть полученных смесей, а также такие характеристики как насыпная масса и насыпная масса при уплотнении, угол естественного откоса, угол падения, угол разности. Результаты исследования представлены в таблице 9.

Таблица 9. Зависимость технологических свойств смеси сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой и лактозы от концентрации лактозы (n = 5, Р = 0,95)

Состав Характеристика	Сухой экстракт + 10% лактозы	Сухой экстракт + 20% лактозы	Сухой экстракт + 30% лактозы	Сухой экстракт + 50% лактозы
1	2	3	4	5
1	2	3	4	5
Насыпная масса, кг/м3	619,33±0,16	607,09±0,17	601,28±0,17	595,92±0,12
Насыпная масса при уплотнении, кг/м3	806,77±0,30	809,71±0,15	833,76±0,40	899,74±0,22
Угол естес. откоса, 0	43,45±0,01	36,42±0,02	35,45±0,01	30,05±0,02
Угол падения, 0	16,44±0,02	16,04±0,01	15,84±0,03	12,83±0,02
Угол разности, 0	27,45±0,01	20,07±0,02	19,68±0,01	17,23±0,02
Сыпучесть, г/с	3,65±0,10	5,63±0,12	7,41±0,14	13,16±0,15

С увеличением концентрации лактозы сыпучесть возрастает. Так, сыпучесть смеси с добавлением 10% и 20% лактозы можно считать удовлетворительной, с добавлением 30% лактозы - хорошей, с добавлением 50% лактозы - отличной (таблица 9).

По результатам изучения фармакологической активности (глава 8) и с позиций технологии был выбран следующий вариант состава ЛС на одну капсулу, в мг:

Сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой 200 (в пересчете на ТС) 16,45 - 28,75

Лактозы достаточное количество для получения капсульного содержимого массой 300 мг

Технология получения ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой: для получения капсульной массы предварительно измельченный до размера частиц 0,1 мм и просеянный сухой экстракт корневищ с корнями синюхи голубой, а также измельченную и просеянную лактозу (0,1 мм) последовательно загружали в барабанный смеситель и перемешивали в течение 15 мин. Полученная готовая капсульная масса имела следующие технологические характеристики: сыпучесть - 13,25±0,15 г/с; насыпная масса - 595,12±0,15 кг/м³; насыпная масса при уплотнении - 899,65±0,13 кг/м³. Инкапсуляция осуществлялась вручную, используя капсулы бесцветные № 1. Полученные капсулы стандартизировали и упаковывали.

В шестой главе «Разработка состава и технологии мягких желатиновых капсул тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной» представлены исследования, направленные на разработку оптимального состава и рациональной технологии производства МЖК из тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной.

9.Фармакологическое обоснование дозы действующих веществ

Рациональность создания комбинации субстанций корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной обусловлена тем, что оба растения содержат различные по химической природе нейроактивные действующие начала, обладающие психодепримирующим эффектом (анксиолитическим, седативным и гипногенным). Поскольку точками приложения действия этих начал являются различные молекулярные мишени (в силу разнообразия химической природы агентов), комбинация синюхи голубой и валерианы лекарственной обеспечивает эффекты потенцирования и синергизма по психоактивной компоненте без суммации системной токсичности. Наиболее ценным в такой комбинации является отсутствие реальной опасности последействия, толерантности и передозировки, которые как для валерианы лекарственной, так и синюхи голубой практически не выявлены.

Наиболее выраженной фармакологической активностью обладает масляный экстракт валерианы. С целью повышения биологической доступности предлагается использовать в качестве вспомогательных веществ масло подсолнечное, воск пчелиный и лецитин. Использование воска и лецитина обеспечивает необходимые физико-химические свойства масляной суспензии порошка корневищ с корнями валерианы лекарственной и синюхи голубой при получении МЖК. При этом воск содержит сложные эфиры, свободные жирные кислоты, углеводороды, ароматические и минеральные вещества, витамин А. Лецитин содержит в своем составе эссенциальные фосфолипиды, являющиеся основными составными компонентами клеточных мембран. Кроме того, лецитин повышает смачиваемость частиц измельченных порошков растительного сырья в растительном масле, а присутствие в пчелином воске свободных спиртов обусловливает его некоторую эмульгирующую способность.

Для выбора оптимального соотношения тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной изучали седативный эффект модельных смесей с помощью методики оценки гипнотического эффекта по пролонгированию снотворного действия барбитуратов.

Для исследования дозовой зависимости влияния валерианы лекарственной и синюхи голубой на пролонгирование снотворного действия этаминала натрия, проведены эксперименты с введением валерианы лекарственной и синюхи голубой в дозах 30; 60; 120 мг/кг.

Доза этаминала натрия, вызывающая боковое положение у 5 % животных (ЭД₅), составила 7,5 мг/кг.

Учитывая, что валериана лекарственная и синюха голубая обладают пределом седативной активности в области доз среднего уровня, представляло интерес исследовать эффективность их комбинации в дозах среднего и высокого уровней. Предполагалось, что в таких комбинациях может наблюдаться два контрастных результата: нивелирование эффекта, если седативное действие препаратов имеет одинаковую природу (по аналогии с эффектом увеличения дозы от «средней» к «высокой»), либо потенцирование эффекта, если их действие реализуется через независимые механизмы. Для проверки этой гипотезы проведена серия экспериментов на крысах линии Wistar, которым вводилась комбинация валерианы лекарственной и синюхи голубой в средней и высокой дозе. Как видно из таблицы 10, в данном независимом эксперименте подтвердились результаты, свидетельствующие о пролонгировании снотворного действия этаминала натрия данной комбинацией. Вместе с тем, полученные данные показывают, что фитопрепараты, примененные в комбинации, не нивелируют эффектов друг друга, а, напротив, обеспечивают приращение эффекта по пролонгированию снотворного действия этаминала натрия или приводят к очевидной тенденции сдвига в этом направлении. Вероятно, что при увеличении объема выборок эта тенденция может достигнуть уровня статистической значимости.

Таблица 10. Влияние внутрижелудочного введения валерианы лекарственной, синюхи голубой и их комбинации на пролонгирование снотворного действия этаминала натрия

Препарат	Доза, мг/кг	Продолжительность бокового положения, мин	Удлинение снотворного действия этаминала натрия, мин
Эксперимент 1
Контроль		22,6±3,4
Валериана	30	35,2±3,0	12,6
Синюха	30	40,2±3,6	17,6
Валериана + Синюха	30+30	51,2±4,9	28,6
Эксперимент 2
Контроль		25,4±3,4
Валериана	60	46,2±5,3	20,8
Синюха	60	53,6±8,8	28,2
Валериана + Синюха	60+60	66,8±7,2	40,6
Валериана + Синюха	60+30	54,4±3,6	29,0
Валериана + Синюха	30+60	58,2±4,8	32,8
Эксперимент 3
Контроль		23,6±4,4
Валериана	120	50,4±5,2	26,8
Синюха	120	57,5±6,8	33,2
Валериана + Синюха	120+12	68,5±5,3	44,9
Валериана + Синюха	120+60	56,4±5,2	32,8
Валериана + Синюха	60+120	61,2±7,4	37,6

Таким образом, проведенные исследования показывают, что лекарственные средства на основе валерианы лекарственной и синюхи голубой обладают выраженными седативными свойствами по тесту пролонгирования снотворного действия этаминала натрия.

При комбинированном применении седативный эффект данных препаратов возрастает, превышая максимальный эффект, который недостижим при их изолированном введении.

Оптимальная доза для крыс, при которой отмечается выраженный седативный эффект составляет - 60 мг/кг, а оптимальное соотношение валерианы лекарственной и синюхи голубой - 1:1.

На основе проведенных исследований предложен состав МЖК тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной на одну капсулу в мг:

Порошок корневищ с корнями валерианы 100

(в пересчете на пирилиевую соль валтрата) 0,70 - 1,04

Порошок корневищ с корнями синюхи 100

(в пересчете на тритерпеновые сапонины) 8,48 - 12,72

Воск пчелиный 20,0

Лецитин очищенный 5,0

Масло подсолнечное достаточное количество для получения капсульного содержимого массой 500 мг

10.Технология получения МЖК тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной

Корневища с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной измельчали с помощью ножевой мельницы до размера частиц 0,5 мм. Далее сырье доизмельчали с помощью лабораторного измельчителя и просеивали через сито с диаметром отверстий 0,1 мм. Расплавляли воск пчелиный с частью масла подсолнечного в посуде из нержавеющей стали, отдельно смешивали оставшуюся часть масла подсолнечного с лецитином, добавляли к расплаву и тщательно перемешивали. В смесителе тщательно смешивали корневища с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной с измельченностью 0,1 мм. По частям добавляли к данной смеси полученный расплав при непрерывном перемешивании до однородной массы. МЖК получали ротационно-матричным методом из желатиновой ленты на машине с вращающимися барабанами с ячейками. Полученные МЖК подвергали сушке. Готовый продукт стандартизировали и упаковывали в блистеры по 10 капсул, а затем в картонную пачку.

В седьмой главе «Стандартизация лекарственных средств на основе синюхи голубой и валерианы лекарственной» представлены результаты разработки методик стандартизации ЛС по основным показателям качества твердых лекарственных форм - капсул, жидких и сухих экстрактов, предусмотренных ГФ РБ. Исследования проведены в соответствии с ТКП 123-2008 (02040) «Фармакопейные статьи. Порядок разработки и утверждения», а также рекомендациями комитета экспертов ВОЗ по спецификации для фармацевтических препаратов. Результаты представлены в разработанных спецификациях, фармакопейных статьях производителя и ТУ (таблицы 11 - 14).

Таблица 11. Результаты оценки качества жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой

Наименование показателя	Требование по нормативной документации	Результаты испыт.
1	2	3
Описание	Прозрачное, водно-спиртовое извлечение темно-желтого цвета, со специфическим запахом	Соответствует
Подлинность	Идентификация ТС методом ТСХ	Соответствует
Количественное определение	Сумма ТС. Содержание суммы ТС в пересчете на в-эсцин должно быть не менее 3%	3,70%
Сухой остаток	Не более 18% (ГФ РБ 2.8.16)	10,5%
Относительная плотность	От 0,9482 до 0,9480 (ГФ РБ 2.2.5)	0,9481
Содержание этанола	40% (ГФ РБ 2.9.10)	40%
Тяжелые металлы	Не более 0,01% в преп. (ГФ РБ 2.4.8, метод А).	0,007%
1	2	3
Микробиологическая чистота	Соответствует требованиям ГФ РБ 2.6.12, 2.6.13, 5.1.4, категория 3Б.	Соответствует
Условия хранения	В воздухонепроницаемом контейнере, в защищенном от света месте.
Срок годности	2 года

Таблица 12. Результаты оценки качества сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой

Наименование показателя	Требование по нормативной документации	Результаты испытаний
Описание	Мел. темно-желтого цвета порошок. Запах слабый, спец.. Вкус горький. Растворим в воде и спирте	Соответствует
Размер частиц	Не менее 90% порошка должно пройти через сито с размером отверстий 500 мкм	Соответствует
Подлинность	Идентификация ТС методом ТСХ	Соответствует
Количественное определение	Сумма ТС. Содержание суммы ТС в пересчете на в-эсцин должно быть не менее 9%	12,29%
УФ- спектр	Наличие максимума поглощения при длине волны 321±2 нм (ТС)	Соответствует
Потеря в массе при высушивании	Не более 5% (ГФ РБ 2.2.32)	3,8%
Общая зола	Не более 3 % (ГФ РБ 2.4.16)	2,5%
Тяжелые металлы	Не более 0,01% в препарате (ГФ РБ 2.4.8, метод А).	0,008%
Микробиологическая чистота	Соответствует требованиям ГФ РБ 2.6.12, 2.6.13, 5.1.4, категория 3.2.	Соответствует
Маркировка	Страна изготовления, изготовитель и его товарный знак, название, количество в упаковке (масса нетто и брутто), условия хранения, номер серии, срок годности, дата изготовления, штрих-код
Хранение	В защищ. от влаги и света месте в герметичных контейнерах при температуре от 15°С до 25°С.
Срок годности	2 года
Вид упаковки	Первичная упаковка: полиэтиленовые пакеты; Вторичная упаковка: алюминиевые пакеты

Таблица 13. Результаты оценки качества ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой

Наименование показателя	Требование по нормативной документации	Результаты испытаний
1	2	3
1	2	3
Описание	Капсулы твердые желатиновые прозрачные, бесцветные. Содержимое капсул - порошок коричневого цвета	Соответствует
Подлинность	Идентификация ТС методом ТСХ	Соответствует
Средняя масса капсул	От 370 до 430 мг (ГФ РБ 2.9.5)	400 мг
Средняя масса содержимого капсул	От 277,5 до 322,5 (ГФ РБ 2.9.5)	300 мг
Распадаемость	В течение не более 20 мин с использованием пластмассовых дисков (ГФ РБ 2.9.1)	5 мин
Однородность дозирования	Содержание ТС в одной капсуле должно быть от 85% до 115% от количества, указанного в разделе «Состав на одну капсулу», (ГФ РБ 2.2.25)	Соответствует
Количественное определение	Содержание ТС в пересчете на Я-эсцин в одной капсуле должно быть от 16,45 мг до 28,75 мг, считая на среднюю массу содержимого капсул (ГФ РБ 2.2.25).	Соответствует
Микробиологическая чистота	Соответствует требованиям ГФ РБ 2.6.12, 2.6.13, 5.1.4, категория 3Б	Соответствует
Упаковка	В соответствие с разделом «Упаковка» настоящей ФСП
Маркировка	В соответствие с разделом «Маркировка» настоящей ФСП
Условия хранения	В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15єС до 25єС
Срок годности	2 года

Таблица 14. Результаты оценки качества МЖК корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной

Наименование показателя	Требование по нормативной документации	Результаты испытаний
1	2	3
Описание	Капсулы мягкие желатиновые овальной формы со швом, упругие, непрозрачные, коричневого цвета. Содержимое капсул - масляная суспензия коричневого цвета. При хранении возможно расслаивание смеси	Соответствует
Подлинность	Идентификация ТС методом ТСХ Идентификация кислоты валереновой методом ТСХ Идентификация валепотриатов цветной реакцией с раствором кислоты хлористоводородной Р и кислоты уксусной ледяной Р (36:25)	Соответствует
1	2	3
Средняя масса капсул	От 622 до 722 мг (ГФ РБ 2.9.5)	700 мг
Средняя масса содержимого капсул	От 462 до 537 (ГФ РБ 2.9.5)	500 мг
Распадаемость	В течение не более 20 мин с использованием пластмассовых дисков (ГФ РБ 2.9.1)	5 мин
Однородность дозирования	Содержание ВП в одной капсуле должно быть от 85% до 115% от количества, указанного в разделе «Состав на одну капсулу». Содержание ТС в одной капсуле должно быть от 85% до 115% от количества, указанного в разделе «Состав на одну капсулу», (ГФ РБ 2.2.25)	Соответствует
Количественное определение	Содержание ВП в пересчете на пирилиевую соль вальтрата в одной капсуле должно быть от 0,70 мг до 1,04 мг, считая на среднюю массу содержимого капсул. Содержание ТС в пересчете на Я-эсцин в одной капсуле должно быть от 8,48 мг до 12,72 мг, считая на среднюю массу содержимого капсул.	Соответствует
Микробиологическая чистота	Соответствует требованиям ГФ РБ 2.6.12, 2.6.13, 5.1.4, категория 3Б.	Соответствует
Упаковка	В соответствие с разделом «Упаковка» настоящих ТУ
Маркировка	В соответствие с разделом «Маркировка» настоящих ТУ
Условия хранения	В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15єС до 25єС
Срок годности	2 года

Определены сроки годности жидкого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой - 2 года и ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой - 2 года, МЖК тонко измельченных порошков корневищ с корнями синюхи голубой и валерианы лекарственной - 2 года.

В восьмой главе «Изучение специфической фармакологической активности твердых желатиновых капсул сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой» представлены результаты изучения острой токсичности и переносимости, хронической токсичности ТЖК на основе сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой, общего действия капсул на основе сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой при интрагастральном введении.

Влияние ТЖК сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой на седативную активность оценивали по пролонгированию снотворного действия барбитуратов (этаминал натрия), по методике депривации парадоксальной фазы сна у крыс, по методу Жуве (модель нарушений сна при невротических расстройствах) и в тесте «открытое поле».

Для исследования дозовой зависимости влияния сухого экстракта корневищ с корнями синюхи голубой на пролонгирование снотворного действия этаминала натрия проведены эксперименты с вве...