Роль гуморальных и клеточных факторов иммунной системы в контроле развития плаценты в норме и при гестозе
Сравнительная оценка популяционного состава лимфоцитов периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и при гестозе. Интенсивность поглощения липидов сыворотки крови моноцитами периферической крови и эндотелиальными клетками.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 25.12.2017 |
| Размер файла | 496,7 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
Роль гуморальных и клеточных факторов иммунной системы в контроле развития плаценты в норме и при гестозе
14.00.36 - аллергология и иммунология
доктора биологических наук
Соколов Дмитрий Игоревич
Санкт-Петербург, 2009
Работа выполнена в Учреждении РАМН Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта Северо-Западного отделения РАМН
Научные консультанты:
доктор медицинских наук, профессор Сельков Сергей Алексеевич
доктор медицинских наук, профессор,
академик РАМН Айламазян Эдуард Карпович
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук, профессор Сесь Татьяна Павловна
доктор биологических наук Самойлович Марина Платоновна
доктор медицинских наук, профессор Малинин Владимир Викторович
Ведущая организация: Государственный Научный Центр «Институт иммунологии Федерального медико-биологического агентства России»
Защита состоится « » _____________ 2009 г. в ___ часов на заседании диссертационного совета ДМ 001.022.01 при Учреждении РАМН Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН, 197376, Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, 12.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ ЭМ СЗО РАМН
Автореферат разослан « » _____________ 2009 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук Бурова Л.А.
лимфоцит кровь беременность гестоз
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы. Успешное развитие беременности зависит от иммунологического контроля взаимоотношений матери и плода. Одной из наиболее тяжелых форм патологии беременности, связанной с нарушением регуляторных механизмов, является гестоз, проявляющийся полиорганной функциональной недостаточностью, развитием гипертензии, отеков и протеинурии после 20 недели беременности. Частота гестоза в различных странах колеблется от 2 до 14% к числу всех беременностей [Douglas K.A., 1994; Cавельева Г. М., 2000]. Гестоз остается одной из ведущих причин материнской смертности и составляет в ее структуре 25%. Наиболее часто гестоз развивается у женщин, страдающих соматическими заболеваниями, а также у первородящих и у беременных старше 30 лет. Преждевременные роды при гестозе наблюдаются в 25-41%, частота оперативного родоразрешения составляет 40% [Савельева Г.М., 1996; Серов В.Н., 1997]. Несмотря на многочисленные исследования последних десятилетий, до сих пор не существует единых четких представлений об этиологии и патогенезе данного заболевания. К настоящему времени изучены механизмы иммунологического контроля инвазии трофобласта в стенку матки, механизмы создания иммунологической толерантности в системе мать - плод, факторы, действие которых может приводить к патологическому течению беременности. Вместе с тем, до сих пор не проанализированы иммунологические механизмы, связывающие особенности функционирования клеток иммунной системы, эндотелиальных клеток сосудистого русла беременной женщины, эндотелиальных и других клеток плаценты при ее физиологическом развитии и при патологическом течении беременности. Недостаточно изучен до сих пор характер изменений цитокиновой сети плаценты при ее физиологическом развитии и при гестозе. В литературе представлены разрозненные сведения о локализации ростовых факторов в плаценте на ранних и поздних этапах физиологически протекающей беременности. Изучение секреции тканью плаценты цитокинов и других факторов проводилось, как правило, без иммуногистохимического подтверждения наличия или отсутствия исследуемых факторов в плаценте. Комплексное сравнительное изучение иммунологических механизмов регуляции, роли гуморальных и клеточных факторов в контроле развития плаценты в норме и при патологии позволит конкретизировать отдельные звенья иммунопатогенеза гестоза.
Цель работы. Оценить роль иммунологических механизмов в регуляции формирования плаценты при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
Задачи исследования.
1. Провести сравнительную оценку популяционного состава лимфоцитов периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и при гестозе.
2. Сравнить функцию адгезии мононуклеаров периферической крови беременных женщин к эндотелиальным клеткам при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
3. Изучить интенсивность поглощения липидов сыворотки крови моноцитами периферической крови и эндотелиальными клетками при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
4. Сопоставить особенности продукции иммунологически значимых секреторных вариантов поверхностных молекул, ростовых факторов, хемокинов, цитокинов тканью плаценты на ранних и поздних этапах ее развития при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
5. Охарактеризовать экспрессию и локализацию ангиогенных и антиангиогенных факторов в плаценте на различных этапах ее развития при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
6. Оценить характер экспрессии и локализации апоптогенных и антиапоптогенных факторов, а также определить степень выраженности апоптоза в плаценте на ранних и поздних этапах ее развития при физиологически протекающей беременности и при гестозе.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Беременность, осложненная гестозом, характеризуется нарушением иммунологической регуляции развития плаценты, проявляющимся выраженными изменениями морфологии ткани плаценты и секреции биологически активных молекул клетками плаценты.
2. Сбалансированная продукция ангиогенных и антиангиогенных, антиапоптогенных и проапоптогенных факторов, а также цитокинов клетками плаценты определяет ее нормальное развитие и препятствует проявлению цитотоксических эффектов лимфоцитов матери. При этом антиангиогенные и проапоптогенные факторы на ранних этапах физиологически протекающей беременности ограничивают избыточную пролиферацию клеток плаценты, а в третьем триместре способствуют формированию структуры плаценты. Напротив, при гестозе в третьем триместре беременности происходит повышение продукции IL-6, IL-8, антиангиогенных и проапоптогенных факторов, сопровождающееся повышенной гибелью клеток трофобласта.
3. Физиологическое развитие плаценты сопровождается изменением локализации процессов апоптоза при сохранении их интенсивности, что позволяет плаценте выполнять свои функции и обеспечивать растущие потребности плода вплоть до родоразрешения.
4. В плаценте при гестозе запускаются компенсаторные механизмы защиты против избыточных антиангиогенных, апоптогенных стимулов и цитотоксических эффектов лимфоцитов матери, к которым относится повышение секреции ангиогенина, PDGF, TGFв и растворимых форм поверхностных рецепторов sFas, sFasL при одновременном снижении экспрессии Fas, FasL и повышенной экспрессии TRAIL.
5. Некоторые из обнаруженных нами изменений, в частности, увеличение продукции тканью плаценты при гестозе секреторных вариантов поверхностных молекул sVEGF-R1 и sVE-cadherin, являются отражением нарушения функций клеток плаценты. Повышение концентрации sICAM-1 в сыворотке периферической крови беременных с гестозом свидетельствует об активации лейкоцитов периферической крови и нарушении функций эндотелиальных клеток кровеносного русла.
Научная новизна. Впервые проведено комплексное сопоставление иммунологических механизмов, контролирующих физиологическое развитие плаценты и особенностей иммунологической регуляции и иммунопатологических механизмов при гестозе.
Впервые выявлено усиление функции адгезии к эндотелиальным клеткам линии EA.Hy926 у мононуклеаров периферической крови беременных с гестозом по сравнению со здоровыми беременными.
Впервые показана более выраженная способность эндотелиальных клеток линии EA.Hy926 поглощать липиды из сывороток беременных с гестозом по сравнению с сыворотками здоровых беременных. Также впервые выявлена повышенная способность моноцитов периферической крови беременных с гестозом в сравнении с моноцитами периферической крови здоровых беременных поглощать липиды из аутологичной сыворотки крови.
Установлено, что продукция тканью плаценты секреторных вариантов поверхностных молекул sVEGF-R1, sVE-cadherin, sICAM-1, sFas, sFasL не вносит существенного вклада в их накопление в периферической крови. В то же время, повышение в сыворотке крови беременных женщин уровня sICAM-1 можно расценивать как отражение системной эндотелиальной дисфункции и активации лейкоцитов при гестозе.
Впервые продемонстрировано, что снижение экспрессии проангиогенных и антиангиогенных факторов, секреции IL-6, IL-8, а также увеличение секреции IFNг, IL-4, IL-10 в плаценте в динамике от первого к третьему триместру физиологически протекающей беременности не сопровождается изменением интенсивности апоптоза. В отличие от этого при гестозе снижение экспрессии ангиогенных факторов, увеличение секреции IL-6, IL-8 и экспрессии антиангиогенных и проапоптогенных факторов в плаценте сопровождается апоптотической гибелью преимущественно клеток трофобласта и эндотелиальных клеток плодовых сосудов.
Впервые обнаружено, что повышение секреции ангиогенина, PDGF, TGFв и растворимых форм поверхностных рецепторов sFas, sFasL, а также снижение экспрессии мембранных рецепторов Fas, FasL и повышение экспрессии рецептора TRAIL отражают реализацию компенсаторных механизмов защиты клеток плаценты при гестозе.
Практическая значимость. Среди общепринятых иммунологических тестов отобраны наиболее информативные, позволяющие уточнить раннюю диагностику гестоза, начиная с первого триместра беременности: определение уровня содержания молекул sICAM-1 в сыворотке крови, оценка функции адгезии мононуклеаров периферической крови к эндотелиальным клеткам, оценка поглощения липидов эндотелиальными клетками и моноцитами.
Разработана модификация метода для оценки интенсивности поглощения липидов эндотелиальными клетками линии EA.Hy926 из сыворотки крови. Метод позволяет изучать механизмы, лежащие в основе нарушений липидного обмена, в том числе при гестозе, оценивать риск развития эндотелиальной дисфункции и тяжесть гестоза. Метод также может быть использован для мониторинга проводимой терапии.
Модифицированный метод оценки интенсивности поглощения липидов моноцитами периферической крови беременных из аутологичной сыворотки крови позволяет оценить функциональную активность моноцитов и их потенциальную способность образовывать пенистые клетки при гестозе. Метод может быть использован для мониторинга проводимой терапии.
Определение уровня содержания молекул sICAM-1 в сыворотке крови может использоваться в качестве прогностического критерия развития гестоза, а также для оценки выраженности эндотелиальной дисфункции при различных заболеваниях.
Личное участие автора заключалось в проведении всех лабораторных исследований, обобщении и анализе полученных результатов, написании статей. Проведение морфологического и иммуногистохимического анализа осуществлялось при консультативной помощи сотрудников лаборатории патоморфологии НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН, анализ содержания липидов в сыворотке крови осуществлялся при консультативной помощи сотрудников лаборатории биохимии НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на VII, VIII, IX, X конференциях «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2004, 2005, 2006, 2007 гг.), конференции «Объединенный иммунологический форум - 2008» (Санкт-Петербург, 2008), 2-м региональном научном форуме «Мать и дитя» (Сочи, 2008г.), конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2007г.), первом региональном научном форуме «Мать и дитя» (Казань, 2007г), конференции II-го междисциплинарного конгресса «Ребенок, врач, лекарство», (Санкт-Петербург, 2007г.), I съезде патологоанатомов Республики Беларусь (Беларусь, г. Минск, 2006г), конференции «Биология клетки в культуре» (Санкт-Петербург, 2006 г.), девятой всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей (Санкт-Петербург, 2007 г.), первом международном конгрессе по репродуктивной медицины (Москва, 2006 г.).
По теме диссертации опубликовано 29 работ, в том числе глава в учебнике для ВУЗ`ов; журнальных статей 14, из них 12 статей в рекомендованных ВАК РФ журналах; 14 тезисов докладов.
Реализация работы. Диссертация выполнена на базе НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН. Результаты исследований внедрены в практическую и научную деятельность лаборатории иммунологии НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН, научную деятельность отдела иммунологии НИИ экспериментальной медицины СЗО РАМН. Материалы диссертации использованы в учебнике для ВУЗ`ов «Руководство по нейроиммуноэндокринологии». Основные положения, материалы и выводы диссертации используются в учебном процессе на кафедре патологии медицинского факультета Государственного образовательного учреждения Высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский Государственный Университет».
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 344 страницах и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, выводы, практические рекомендации, список литературы. Текст диссертации иллюстрирован 88 рисунками и 21 таблицей. Список литературы включает 671 источник, из них 75 отечественных и 596 зарубежных.
Материалы и методы
В ходе работы обследовано 450 женщин во время и вне беременности. В первую группу вошли беременные с гестозом первой и второй степени тяжести без признаков угрожающего прерывания беременности на момент исследования в III триместре беременности. Вторую группу составили беременные на сроке 32-39 недель с физиологическим течением беременности. В третью группу включены здоровые небеременные женщины без признаков воспалительных изменений и гиперлипидемии. Диагноз гестоза у женщин первой группы установлен в Отделении физиологии и патологии беременности НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта СЗО РАМН на основании ведущих клинических симптомов различной степени выраженности - наличия протеинурии, отеков, гипертензии (повышение систолического давления от 135 мм. рт. ст. и выше, диастолического давления от 85 мм. рт. ст. и выше). При оценке тяжести гестоза использовали классификацию акад. РАМН Г.М. Савельевой, принятую на форуме «Мать и Дитя» в 2005 году. Степень тяжести гестоза оценивали по бальной системе: до 7 баллов - легкая степень тяжести; 8-11 баллов - средняя; 12 и более - тяжелая. Отечественная классификация адекватно сочетается с Международной классификацией болезней Х пересмотра. Группы беременных были сопоставимы по возрасту, паритету родов и акушерскому анамнезу. Периферическую кровь здоровых небеременных женщин получали в отделении переливания крови НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта СЗО РАМН. Объектом исследования также явились 80 плацент, полученных на разных сроках беременности. Обследованы плаценты, полученные при искусственном аборте у женщин с физиологическим течением беременности (9-11 недель); плаценты женщин, у которых беременность протекала без осложнений (38-39 недель); плаценты женщин с течением беременности, осложненным гестозом (38-39 недель). Все плаценты на сроке 38-39 недель получены при родоразрешении путем кесарева сечения. У обследованных женщин оценивали содержание и свойства мононуклеаров периферической крови и содержание иммунологически значимых молекул в сыворотке крови.
Оценка популяционного состава лимфоцитов. Использовали стандартный набор для определения популяций лимфоцитов периферической крови IMKPlus (BD, США), позволяющий определять количество: CD3+ лимфоцитов, CD19+ (B-лимфоцитов), CD3+\CD4+ лимфоцитов, CD3+CD8+ лимфоцитов, CD3+\CD4+\CD8+ лимфоцитов, CD3+\HLA-DR лимфоцитов, CD3-\CD16+\CD56+ натуральных киллеров, CD3+\CD16+\CD56+ NKT лимфоцитов. Гепаринизированную периферическую кровь обрабатывали антителами в соответствии с рекомендациями производителя (BD, США). Учет проводили на проточном цитофлуориметре FACSCanto II (BD, США).
Оценка функции адгезии мононуклеаров периферической крови к эндотелию. В работе использовали эндотелиальные клетки линии EA.hy926, воспроизводящие характеристики эндотелия крупных сосудов [Edgell C.J., 1983]. Клетки линии EA.hy926 культивировали 24 часа (5% СО2, 37°С) в плоскодонном 24-луночном планшете. Затем в часть лунок вносили 100 ЕД/мл рекомбинантного TNFб («Рефнолин», Латвия) и инкубировали 22 часа. Затем отмывали теплым раствором Хенкса. Мононуклеары выделяли из периферической крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл\верографин. В лунки c монослоем интактных или активированных TNFб клеток линии EA.Hy926 вносили 1Ч106 мононуклеаров и культивировали 30 минут. Затем отмывали теплым раствором Хенкса от неадгезированных клеток. Адгезированные клетки вместе с монослоем эндотелиальных клеток переводили в суспензию раствором версена. Суспензию клеток обрабатывали моноклональными антителами в комбинациях: анти-VEGF-R1+анти-CD45; анти-CD3(FITC)+анти-CD16+56(PE); анти-CD3(PerCP)+анти-CD4(FITC)+анти-CD8(PE), анти-CD14(FITC) +анти-CD16(PE); контрольными изотип-антителами (BD, США). Анализировали на проточном цитофлуориметре FACSCanto II (BD, США). При анализе в координатах прямого и бокового светорассеяния контролировали наличие эндотелиальных клеток, моноцитов и лимфоцитов в суспензии, полученной после их совместного культивирования. Лимфоциты и моноциты экспрессировали CD45, но обладали низкой экспрессией VEGF-R1. Эндотелиальные клетки экспрессировали VEGF-R1, но не экспрессировали CD45. Затем настройку проточного цитофлюориметра проводили так, чтобы выделить области, занимаемые лимфоцитами и мононуклеарными фагоцитами. Обладающие большими размерами эндотелиальные клетки находились вне пределов выделенных областей. Проводили гейтирование исследуемых клеток в координатах FSC и SSC, анализировали на наличие флюоресценции лимфоциты и моноциты. При анализе данных дополнительно определяли соотношения популяций мононуклеаров периферической крови среди мононуклеаров, адгезировавших к эндотелию. После отсечения зоны дебриса число клеток в популяциях мононуклеаров периферической крови пересчитывали на 100 эндотелиальных клеток.
Определение липидов в сыворотке крови проводили в соответствии с протоколом производителя стандартного набора фирмы Dia Sys (Германия) на автоматическом биохимическом анализаторе Alcyon 300 (Abbot , США). Определение концентрации триглицеридов, липопротеинов высокой плотности, ЛПНП, ЛПОНП, холестерина и оценку индекса атерогенности проводили при консультативной помощи сотрудников лаборатории биохимии НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН.
Оценка интенсивности поглощения липидов моноцитами периферической крови или эндотелиальными клетками линии EA.Hy926. Метод окраски липидов красителем OIL RED O [Luna, L.G., 1968] модифицировали для оценки интенсивности поглощения липидов моноцитами периферической крови в культуре. Мононуклеары выделяли из периферической крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл\верографин и культивировали 3 часа (5% СО2, 37єС) в среде RPMI1640, 10% ЭТС («ICN», США) в лунках стерильного предметного стекла с 4-луночной камерой (3Ч106 клеток на лунку в 1000 мкл среды). Затем отмывали от неприлипших лимфоцитов теплым раствором Хенкса, и культивировали в 1000 мкл среды 24 часа. Затем из лунок отбирали по 500 мкл среды и добавляли в первую лунку 500 мкл ЭТС (контроль), во вторую лунку с клетками того же пациента 500 мкл аутологичной сыворотки крови (опыт), инкубировали 24 часа.
Для оценки интенсивности поглощения липидов эндотелиальные клетки линии EA.Hy926 помещали в концентрации 8Ч105 клеток на лунку в 500 мкл культуральной среды на стерильное предметное стекло, снабженное 4-луночной камерой, культивировали 24 часа (5% СО2, 37єС). Затем в лунки вносили 500 мкл сыворотки здоровых небеременных, здоровых беременных или беременных женщин с гестозом. В контрольные лунки вносили 500 мкл ЭТС, инкубировали 24 часа.
После инкубации моноциты или клетки линии EA.Hy926 отмывали теплым раствором Хенкса, фиксировали 10% формалином 10 минут, отмывали дистилированой водой 15 минут. Подготовленные таким образом препараты моноцитов или эндотелиальных клеток промывали 70% изопропанолом 10 минут и окрашивали 0,25% раствором OIL RED O («ICN», США) в 70% изопропаноле 10 минут; промывали дистилированой водой 10 минут; окрашивали гематоксилином 5 минут и промывали дистилированой водой. Препараты фиксировали в глицерин-желатине. Анализировали площадь липидных включений при помощи микроскопа Nikon Eclipse 400 и программы Морфология 4.0 (Видеотест, Россия). Площадь липидов в каждом поле зрения делили на количество ядер и умножали на 100. Из полученных значений площади липидов в клетках, проинкубированных в присутствии сывороток крови, вычитали значение площади экспрессии липидов, полученное для тех же клеток, но проинкубированных в обычной среде с добавлением 500 мкл ЭТС.
Оценку концентрации растворимых форм мембранных рецепторов в сыворотке крови проводили при помощи стандартных наборов для иммуноферментного анализа: sICAM-1 (BD, США), sFas, sFasL, sVEGF-R1, sVE-cadherin (Bender MedSystems, Австрия). Учет результатов проводили на планшетном ридере (Labsystems, Финляндия).
Оценка продукции цитокинов и растворимых форм мембранных рецепторов тканью плаценты. Для иммуногистохимического анализа экспрессии различных факторов экспланты из центральной части плацент фиксировали в 10% формалине. Экспланты из центральной части тех же плацент культивировали в среде DMEM\F12, 10% ЭТС (Sigma, США) 24 часа. Кондиционированные среды собирали и замораживали. Экспланты плацент взвешивали для пересчета концентрации факторов на 1мг ткани. В полученных кондиционированных средах определяли содержание ангиогенина, VEGF, bFGF, IL-8, IP-10, MCP-1, MIG, RANTES, TNFб, IFNг, IL-12p70, IL-1в, IL-2, IL-4, IL-6, IL-5, IL-10 с использованием тест-систем BD Cytometric Bead Array (BD, США) и цитофлюориметра FACSCanto II (BD, США) в соответствии с указаниями производителя. При помощи стандартных наборов для иммуноферментного анализа определяли содержание sICAM-1 (BD, США), sFas, sFasL, sVEGF-R1 и sVE-cadherin (Bender MedSystems, Австрия). Учет результатов проводили на планшетном ридере (Labsystems, Финляндия). Концентрация указанных факторов в среде DMEM\F12, 10% ЭТС не превышала 2 пг/мл.
Иммуногистохимический анализ экспрессии факторов клетками плаценты. Зафиксированные в 10% формалине экспланты из центральной части плацент использовали для иммуногистохимического анализа на серийных срезах экспрессии VEGF, VEGF-R3, bFGF, PDGF, MMP-2, TGFв, TGFв-R, CD105, TSP-1, Fas (CD95), FasL (CD95L), TRAIL, каспазы-2, каспазы-3, каспазы-8, каспазы-9 и Mcl-1. Визуализацию проводили с применением универсального набора иммуноглобулинов (Novocastra, UK) и стандартного проявляющего набора (ABC-kit, Novocastra, UK). Для контроля использовали антитела против гемоцианина. Анализ площади экспрессии VEGF, VEGF-R3, bFGF, PDGF, MMP-2, TGFв, TGFв-R, CD105, TSP-1 в ткани плаценты, выраженную в процентах от площади поля зрения, проводили при помощи микроскопа Nikon Eclipse 400 и программы Морфология 5.0. Локализацию апоптоза в ткани плаценты оценивали TUNEL-методом при помощи стандартного набора (Chemicon, США). Анализ площади экспрессии Fas (CD95), FasL (CD95L), TRAIL, каспазы-2, каспазы-3, каспазы-8, каспазы-9 и Mcl-1 в ткани плаценты, проводили при помощи микроскопа Leica DMR и программы Leica QWin. Иммуногистохимический анализ проводился при консультативной помощи сотрудников лаборатории патоморфологии НИИ акушерства и гинекологии им.Д.О.Отта СЗО РАМН, за что автор выражает благодарность д.м.н., профессору Кветному И.М., к.м.н. Колобову А.В. и Соповой Е.С.
Статистический анализ проводили при помощи критерия Манна-Уитни, медианного теста, используемого для определения тенденции изменения признака [Makhseed M., 2001], и корреляционного анализа Спирмена в программе STATISTICA 6.0.
Результаты исследования и их обсуждение
Секреция и экспрессия тканью плаценты на разных сроках беременности факторов, контролирующих ее развитие. При морфологическом исследовании плацент на сроках 9-11 недель и 38-39 недель при физиологически протекающей беременности отмечали нормальное строение ткани. При гестозе на сроке 38-39 недель в плацентах отмечали нарушение формирования и ветвления ворсин, инволютивно-дистрофические изменения, мононуклеарные инфильтраты с преобладанием лимфоцитов. Для оценки влияния различных факторов на формирование ткани плаценты в норме и при гестозе оценивали их секрецию и экспрессию клетками плаценты.
Таблица 1. Секреция тканью плаценты bFGF.
|
Цитокины |
Группы |
Концентрация в пикограммах в 1мл кондиционированной среды |
Концентрация в пикограммах в пересчете на 1мг ткани |
|
|
bFGF |
9-11 недель (n=15) |
1309,3±239,1* |
12,7±1,7** |
|
|
38-39 недель (n=30) |
655,3±76,5 |
5,9±0,5 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
545,4±22,4__ |
5,6±0,3___ |
Достоверность различий между группами: группа «9-11 недель» отличается от группы «38-39 недель» * - р<0,05; ** - р<0,01; группа «гестоз, 38-39 недель» отличается от группы «9-11 недель» __ - р<0,01; ___ - p<0,001.
Секреция bFGF тканью плаценты на сроке 9-11 недель была в два раза выше, чем на сроке 38-39 недель (Таблица 1). Экспрессия bFGF в ткани плаценты на ранних и поздних сроках беременности не различалась (Таблица 2). Статистически значимых различий между уровнями секреции bFGF на сроке 38-39 недель и при гестозе не обнаружено. При гестозе выявлена статистически недостоверная тенденция к снижению секреции bFGF тканью плаценты. В тоже время, экспрессия bFGF клетками плацент беременных с гестозом была достоверно ниже (Таблица 2), чем клетками плацент здоровых беременных на сроке 38-39 недель, что подтверждает данные, полученные нами при анализе секреции bFGF тканью плацент и отражает нарушение процессов ангиогенеза.
Ангиогенин обнаружен в высоких концентрациях как при физиологической беременности, так и при гестозе. Статистически значимых различий в секреции ангиогенина между группами не выявлено, однако медианный тест показал тенденцию к повышению секреции ангиогенина клетками плаценты к третьему триместру физиологически протекающей беременности и в большей степени при гестозе (Рисунок 1).
VEGF принимает активное участие в контроле всех этапов формирования сосудистого русла плаценты [Clark D.E., 1998]. Однако VEGF не был обнаружен нами в надосадочных жидкостях, полученных после культивирования эксплантов плацент. В то же время, при помощи метода иммуногистохимического анализа нами обнаружена экспрессия VEGF в ткани плаценты (Таблица 2). Полученные данные можно объяснить способностью VEGF связываться с экстрацеллюлярным матриксом [Brewster L.P., 2008].
Рисунок 1. Концентрация ангиогенина в кондиционированных средах, полученных после культивирования эксплантов плацент, медианный тест.
Экспрессия VEGF-R3, PDGF, MMP-2, TSP-1, TGFв, TGFв-R1, CD105 плацент беременных на сроке 38-39 недель была ниже (Таблица 2), чем экспрессия этих факторов клетками плацент на сроке 9-11 недель. На ранних этапах развития локализация указанных факторов в ткани плаценты и проангиогенный цитокиновый профиль отражают активацию процессов ангиогенеза и формирование сосудистой сети. Снижение секреции проангиогенных и антиангиогенных факторов тканью плаценты в третьем триместре свидетельствует о завершении формирования ткани плаценты. Экспрессия VEGF-R3, bFGF, MMP-2, TGFв-R1, CD105 клетками плацент беременных с гестозом была ниже, а экспрессия PDGF, TSP-1, TGFв была выше (Таблица 2), чем экспрессия этих факторов клетками плацент здоровых беременных на сроке 38-39 недель. Сниженная экспрессия проангиогенных факторов при гестозе может являться причиной нарушения процессов ангиогенеза в плаценте, и отражает нарушение функций клеток плаценты. Увеличенная экспрессия антиангиогенных факторов TSP-1 и TGFв и их локализация при гестозе отражают нарушение регуляции формирования ткани плаценты.
Приведенные результаты показывают, что для ранних и поздних этапов развития плаценты характерен определенный баланс между проангиогенными и антиангиогенными цитокинами. Нарушение такого равновесия у беременных с гестозом может приводить к снижению жизнеспособности клеток плаценты. В то же время, снижение экспрессии TGFв-R1 и CD105 клетками плаценты при гестозе по сравнению с физиологически протекающей беременностью свидетельствует о компенсаторной реакции в ответ на действие антиангиогенных факторов. Дополнительно при гестозе повышенная продукция PDGF и ангиогенина в плаценте обеспечивает поддержание жизнеспособности клеток.
Таблица 2. Экспрессия факторов и рецепторов, контролирующих ангиогенез в ткани плаценты на разных этапах ее развития в норме и при гестозе.
|
Маркеры |
Площадь экспрессии маркера в ткани плаценты (%) |
|||
|
в 9-11 недель (n=15) |
в 38-39 недель, физиологически протекающая беременность (n=10) |
в 38-39 недель, гестоз (n=10) |
||
|
VEGF |
21,33±2,7 |
3,11±0,49*** |
0,58±0,13__ |
|
|
VEGF-R3 |
14,43±1,9 |
4,88±1,1** |
2,31±0,47__ |
|
|
bFGF |
5,39±0,59 |
5,2±0,52 |
2,0±1,01_ |
|
|
PDGF |
15,33±2,11 |
2,67±0,3*** |
6,2±0,32__ |
|
|
MMP-2 |
27,02±6,7 |
11,60±0,19* |
6,91±0,74___ |
|
|
TSP-1 |
1,76±0,24 |
0,08±0,01*** |
0,61±0,05_ |
|
|
TGFв |
25,52±5,2 |
0,69±0,33*** |
4,55±0,65_ |
|
|
TGFв-R1 |
7,42±2,95 |
0,96±0,25** |
0,21±0,02_ |
|
|
CD105 |
21,87±4,65 |
9,35±0,76* |
3,1±0,63_ |
Достоверность различий между группами: группа «38-39 недель, физиологически протекающая беременность» отличается от группы «9-11 недель» ** - р<0,01; *** - p<0,001; группа «гестоз, 38-39 недель» отличается от группы «38-39 недель, физиологически протекающая беременность» __ - р<0,01.
Продукция тканью плаценты sVE-cadherin на сроке 9-11 недель не обнаружена. При гестозе повышалась продукция sVE-cadherin тканью плаценты в сравнении с физиологически протекающей беременностью (Таблица 3). В сыворотке sVE-cadherin не обнаружен ни в одной из групп. Продукция тканью плаценты sVE-cadherin при гестозе указывает на нарушение функций эндотелиальных клеток плаценты и на гибель клеток трофобласта.
Продукция тканью плаценты sVEGF-R1 была ниже на сроке 38-39 недель, чем на сроке 9-11 недель, что может быть связано с активным контролем ангиогенеза клетками трофобласта на ранних этапах развития плаценты. При гестозе повышалась секреция sVEGF-R1 тканью плаценты в сравнении с физиологически протекающей беременностью (Таблица 3), что может свидетельствовать об активной секреции sVEGF-R1 клетками плаценты, повышенной активности протеолитических ферментов и усиленной гибели клеток, экспрессирующих этот рецептор. Концентрация sVEGF-R1 в сыворотке женщин с физиологически протекающей беременностью и при гестозе была одинаковой, то есть повышенная секреция sVEGF-R1 тканью плаценты при гестозе не оказывала существенного влияния на концентрацию этих молекул в сыворотке крови беременных с гестозом.
Таблица 3. Продукция секреторных вариантов поверхностных рецепторов тканью плаценты.
|
Секреторные молекулы |
Группы |
Концентрация в 1мл кондиционированной среды, пг\мл |
Концентрация в пересчете на 1мг ткани, пг\мл |
|
|
sVE-cadherin (sCD144) |
9-11 недель (n=15) |
0,1±0,1 |
0,001±0,001 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
307,4±117,5** |
2,75±1,0* |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
665,2±155,2___ ‡ |
6,98±1,63___ ‡ |
||
|
sVEGF-R1 |
9-11 недель (n=15) |
77000,0±527,68 |
996,6±68,9 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
28513,6±305,9*** |
313,7±25,7*** |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
40779,3±400,6 ___ ‡ |
490,9±54,2 ___ ‡ |
Достоверность различий между группами: группа «9-11 недель» отличается от группы «38-39 недель» * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001; группа «38-39 недель» отличается от группы «гестоз, 38-39 недель» ‡ - р<0,05; группа «гестоз, 38-39 недель» отличается от группы «9-11 недель» ___ - p<0,001.
Продукция тканью плаценты sICAM-1 на сроке 38-39 недель при гестозе (3351,4±613,3 пг\мл) и при физиологически протекающей беременности была одинаковой (3362,7±546,1 пг\мл). Концентрация sICAM-1 в сыворотках здоровых беременных (22800±450 пг\мл) не отличалась от таковой в сыворотках здоровых небеременных женщин (21500±350 пг\мл). Концентрация sICAM-1 в сыворотках беременных с гестозом (40370±420 пг\мл) была достоверно выше, чем в сыворотках здоровых беременных (p <0,05). Обнаруженное нами при гестозе увеличение концентрации в сыворотке крови sICAM-1 подтверждается данными литературы [Kim S., 2004] и может быть следствием системной дисфункции эндотелиальных клеток или активации лейкоцитов.
Обнаружено достоверное снижение секреции IL-8 клетками плаценты к третьему триместру физиологически протекающей беременности (Таблица 4). При отсутствии статистически значимых различий секреции IL-8 клетками плацент женщин с физиологическим течением беременности на 38-39 неделе и с гестозом, медианный тест показал тенденцию к повышению секреции IL-8 клетками плаценты в последнем случае. Очевидно, при физиологическом течении беременности на ранних этапах IL-8 участвует в контроле процессов ангиогенеза, а повышение его продукции при гестозе свидетельствует об его участии в реализации воспалительной реакции.
При отсутствии статистически значимых различий в уровнях секреции хемокинов IP-10, MCP-1, RANTES тканью плаценты выявлена тенденция к повышению их секреции клетками плаценты к третьему триместру и снижению при гестозе. Продукция MIG снижалась к третьему триместру при физиологически протекающей беременности и при гестозе. Отмечена положительная корреляционная зависимость между IP-10 и MCP-1, IP-10 и MIG, а также ангиогенином и RANTES (p<0,01) при гестозе. Изменение секреции тканью плаценты хемокинов отражает различную степень активности плацентарных и децидуальных макрофагов, эндотелиальных клеток плаценты в динамике физиологического течения беременности и при гестозе.
Таблица 4. Секреция тканью плаценты цитокинов.
|
Цитокины |
Группы |
Концентрация в пикограммах в 1мл кондиционированной среды |
Концентрация в пикограммах в пересчете на 1мг ткани |
|
|
IL-8 |
9-11 недель (n=15) |
17837,9±5345,5* |
294,3±109,7* |
|
|
38-39 недель (n=30) |
6445±833 |
61,1±7,8 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
7437±1482_ |
66,8±13,4_ |
||
|
IFNг |
9-11 недель (n=15) |
113,3±6,6* |
2,0±0,4 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
151,5±13,6 |
1,8±0,2 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
164,0±14,7_ |
1,7±0,2 |
||
|
IL-2 |
9-11 недель (n=15) |
32,6±1,7* |
0,6±0,08 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
45,8±4,2 |
0,5±0,07 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
48,8±5,0_ |
0,5±0,07 |
||
|
IL-4 |
9-11 недель (n=15) |
25,1±1,2* |
0,4±0,07 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
36,2±3,4 |
0,4±0,06 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
37,5±3,0_ |
0,39±0,04 |
||
|
IL-5 |
9-11 недель (n=15) |
12,1±0,5** |
0,2±0,03 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
16,6±1,2 |
0,19±0,03 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
16,9±1,1__ |
0,18±0,02 |
||
|
IL-6 |
9-11 недель (n=15) |
3496,5±767,3** |
51,5±11,4** |
|
|
38-39 недель (n=30) |
1013,9±144,1 |
17,9±6,4 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
2479,0±592,1 |
44,2±7,6_ |
||
|
IL-10 |
9-11 недель (n=15) |
26,8±1,4* |
0,5±0,1 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
33,8±2,4 |
0,39±0,06 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
34,0±2,2_ |
0,35±0,04 |
Достоверность различий между группами: группа «9-11 недель» отличается от группы «38-39 недель» * - р<0,05; ** - р<0,01; группа «38-39 недель» отличается от группы «гестоз, 38-39 недель» ‡ - р<0,05; группа «гестоз, 38-39 недель» отличается от группы «9-11 недель» _ - р<0,05; __ - р<0,01; ___ - p<0,001.
В полученных после культивирования эксплантов плацент надосадочных жидкостях IL-12p70 не был выявлен ни в одной из групп. Достоверных различий концентраций IL-1в не было обнаружено. При отсутствии статистически значимых различий секреции TNFб при физиологически протекающей беременности на 9-11 неделе и на 38-39 неделе, медианный тест показал тенденцию к повышению его секреции клетками плаценты в последнем случае. Секреция IFNг, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10 тканью плаценты при физиологически протекающей беременности на сроке 38-39 недель была достоверно выше, чем секреция указанных цитокинов на сроке 9-11 недель (Таблица 4). Секреция IL-6 тканью плаценты при физиологически протекающей беременности на сроке 38-39 недель была достоверно ниже, чем его секреция на сроке 9-11 недель (Таблица 4). С отмеченным повышением секреции цитокинов IL-10 и IL-4 к третьему триместру при физиологически протекающей беременности можно связать компенсаторное усиление их антиапоптотической роли в отношении клеток плаценты и участие в ингибиции активности цитотоксических лимфоцитов.
Достоверных различий между уровнями секреции IL-1в, TNFб IFNг, IL-2, IL-4, IL-6, IL-5 и IL-10 при физиологически протекающей беременности на сроке 38-39 недель и при гестозе на сроке 38-39 недель не обнаружено. Таким образом, от первого к третьему триместру физиологически протекающей беременности наблюдалось увеличение секреции тканью плаценты IFNг, IL-4 и IL-10, а также IL-2, IL-5 и TNFб. При гестозе в третьем триместре по сравнению с физиологически протекающей беременностью уровень их секреции не изменялся. Эта закономерность подтверждается положительными коэффициентами корреляции между концентрациями указанных цитокинов (p<0,01). Увеличение секреции тканью плаценты указанных цитокинов от первого к третьему триместру физиологически протекающей беременности сопровождалось снижением экспрессии ангиогенных и антиангиогенных факторов, что указывает на роль этих цитокинов в формировании плаценты. Наблюдаемое по результатам медианного теста увеличение секреции тканью плаценты IL-6 при гестозе на сроке 38-39 недель по сравнению с физиологически протекающей беременностью на сроке 38-39 недель, может отражать описанную ранее активацию плацентарных макрофагов, а также участие IL-6 в воспалительных реакциях в ткани плаценты. Увеличение при гестозе секреции тканью плаценты IL-6 и IL-8 и сохранение уровня секреции IFNг, IL-10 может отражать нарушение формирования к третьему триместру сбалансированной цитокиновой сети.
Секреция и экспрессия апоптогенных и антиапоптогенных факторов тканью плаценты на разных сроках ее развития при физиологически протекающей беременности и при гестозе. Исследование срезов ткани плаценты при помощи TUNEL-метода показало одинаковую интенсивность процессов апоптоза в первом триместре (3,31%±1,68% (n=15)), в третьем триместре (5,29%±2,43% (n=10)) физиологически протекающей беременности, при беременности с гестозом (4,22%±1,86% (n=10)). Локализация апоптоза на ранних сроках выражена в трофобласте, а при доношенной беременности - в синцитиотробласте ворсин, что соответствует стратегии развития плаценты. При гестозе преимущественная локализация апоптоза в синцитиотрофобласте ворсин, а также повышенная экспрессия апоптогенного фактора TSP-1 в синцитиотрофобласте ворсин, строме ворсин и вокруг эндотелиальных клеток плодовых сосудов сопровождалась нарушением строения ткани плаценты и уменьшением количества плодовых сосудов.
Экспрессия FasL (CD95L), TRAIL, каспазы-2, каспазы-9, Mcl-1 клетками плацент беременных на сроке 38-39 недель была ниже, а экспрессия каспазы-3 была выше (Таблица 5), чем экспрессия этих факторов клетками плацент на сроке 9-11 недель. Экспрессия Fas (CD95), каспазы-8 в ткани плаценты на ранних и поздних сроках беременности не различались (Таблица 5).
Таблица 5. Экспрессия факторов и рецепторов, контролирующих апоптоз в ткани плаценты на разных этапах ее развития.
|
Молекулы |
Площадь экспрессии молекулы в ткани плаценты (%) |
|||
|
в 9-11 недель (n=15) |
в 38-39 недель, физиологически протекающая беременность (n=10) |
в 38-39 недель, гестоз (n=10) |
||
|
Fas (CD95) |
13,85±4,07 |
13,79±1,33 |
5,41±0,47__ |
|
|
FasL (CD95L) |
12,75±3,81 |
3,82±1,46*** |
3,96±0,31 |
|
|
TRAIL |
20,39±3,46 |
3,14±1,11*** |
16,32±1,32__ |
|
|
Каспаза-2 |
12,75±3,81 |
3,82±1,46*** |
1,58±0,36 |
|
|
Каспаза-3 |
5,78±0,57 |
8,29±1,31* |
2,23±0,2__ |
|
|
Каспаза-8 |
7,47±0,99 |
6,75±1,71 |
2,36±0,16__ |
|
|
Каспаза-9 |
17,15±3,26 |
6,37±2,01** |
3,97±1,09 |
|
|
Mcl-1 |
16,12±3,75 |
2,72±0,27*** |
1,45±0,65 |
Достоверность различий между группами: группа «38-39 недель, физиологически протекающая беременность» отличается от группы «9-11 недель» * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - p<0,001; группа «гестоз, 38-39 недель» отличается от группы «38-39 недель, физиологически протекающая беременность» __ - р<0,01.
Отсутствие различий экспрессии Fas (CD95) клетками плаценты на ранних и поздних сроках физиологически протекающей беременности свидетельствует о сбалансированном механизме контроля апоптоза. Снижение экспрессии FasL (CD95L) к третьему триместру физиологически протекающей беременности и его экспрессия в синцитиотрофобласте и фибробластах стромы ворсин указывает на снижение роли Fas-FasL взаимодействий в индукции апоптоза, с чем связано поддержание жизнеспособности клеток плаценты. Экспрессия TRAIL клетками плаценты очевидно способствует их защите от цитотоксических эффектов лимфоцитов на ранних сроках физиологически протекающей беременности. Экспрессия каспазы-2, каспазы-3, каспазы-8 и каспазы-9 в развивающейся и зрелой плацентах соответствовала локализации апоптоза в ткани плаценты. Полученные результаты могут свидетельствовать о регулируемом блокировании апоптотического сигнала от каспазы-2 и каспазы-9 к эффекторным каспазам за счет экспрессии Mcl-1. Незначительное увеличение экспрессии каспазы-3 и снижение экспрессии каспазы-2, каспазы-9 и Mcl-1 к концу беременности свидетельствует о снижении роли блокирующих антиапоптотических стимулов при передаче сигнала от каспазы-2 и каспазы-9 к эффекторным каспазам в условиях завершения формирования ткани плаценты.
Таблица 6. Продукция секреторных вариантов поверхностных молекул тканью плаценты.
|
Секреторные молекулы |
Группы |
Концентрация в 1мл кондиционированной среды, пг\мл |
Концентрация в пересчете на 1мг ткани, пг\мл |
|
|
sFas (sCD95) |
9-11 недель (n=15) |
298,8±40,1 |
3,98±0,68 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
277,8±15,6 |
3,0±0,19 |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
331,3±19,4 ‡ |
3,4±0,18 |
||
|
sFasL (sCD95L) |
9-11 недель (n=15) |
50,9±9,3 |
0,61±0,1 |
|
|
38-39 недель (n=30) |
16,78±3,5*** |
0,18±0,03*** |
||
|
гестоз, 38-39 недель (n=35) |
26,0±4,68_ |
0,27±0,05__ |
Достоверность различий между группами: группа «9-11 недель» отличается от группы «38-39 недель» *** - р<0,001; группа «38-39 недель» отличается от группы «гестоз, 38-39 недель» ‡ - р<0,05; группа «гестоз, 38-39 недель» отличается от группы «9-11 недель» _ - р<0,05; __ - р<0,01.
Экспрессия Fas (CD95), каспазы-3, каспазы-8, клетками плацент беременных с гестозом была ниже, а экспрессия TRAIL была выше (Таблица 5), чем экспрессия этих факторов клетками плацент здоровых беременных на сроке 38-39 недель. Экспрессия FasL (CD95L), каспазы-2, каспазы-9, Mcl-1 в ткани плаценты при физиологически протекающей беременности и при гестозе не отличались (Таблица 5). Таким образом, в плаценте при гестозе апоптоз активно управляется при помощи TRAIL при одновременном снижении роли Fas-FasL взаимодействий. Обнаруженное нами при гестозе снижение экспрессии каспазы-3 и каспазы-8, при неизменном уровне интенсивности апоптоза, экспрессии каспазы-2, каспазы-9 и Mcl-1 в сравнении с физиологически протекающей беременностью свидетельствует в пользу компенсаторного защитного действия ангиогенина и PDGF, продукция которых тканью плаценты увеличивалась при гестозе.
Концентрация sFas (sCD95) в надосадочных жидкостях, полученных после культивирования плацент здоровых беременных, была одинаковой как на сроке 38-39 недель, так и на сроке 9-11 недель (Таблица 6). Концентрация sFas (sCD95) в надосадочных жидкостях при гестозе была выше, чем при физиологически протекающей беременности. Молекула sFas не обнаружена в сыворотках крови, что свидетельствует о роли этой молекулы в местной регуляции процессов апоптоза.
Продукция тканью плаценты sFasL при физиологически протекающей беременности была ниже на сроке 38-39 недель, чем на сроке 9-11 недель (Таблица 6). При отсутствии статистически значимых различий медианный тест показал, что при гестозе происходило незначительное повышение секреции sFasL тканью плаценты в сравнении с физиологически протекающей беременностью. Повышенная секреция клетками плаценты sFasL при гестозе по сравнению с физиологически протекающей беременностью свидетельствует об активированном состоянии клеток плаценты и компенсаторном механизме, позволяющем клеткам плаценты избегать апоптотических сигналов за счет индукции апоптоза цитотоксических лимфоцитов. В сыворотке крови sFasL не обнаружен ни в одной из групп. Сохранение способности sFasL связываться с лигандами на поверхности клеток, в том числе лимфоцитов матери, снижает вероятность появления sFasL в кровотоке. Таким образом, продукция sFas и sFasL тканью плаценты является местным механизмом защиты против цитотоксического действия лимфоцитов матери.
Популяционный состав лимфоцитов периферической крови и функция адгезии мононуклеаров периферической крови беременных женщин. Относительное содержание популяций лимфоцитов периферической крови у здоровых небеременных, здоровых беременных и у женщин с гестозом находилось в пределах физиологической нормы (Таблица 7). У здоровых беременных содержание CD3+\CD4+ T-лимфоцитов хелперов (50,4%±2,2%) было выше содержания CD3+\CD8+ цитотоксических лимфоцитов (35,5%±1,6%, p<0,001) (Таблица 7). Относительное содержание CD3+\CD4+ лимфоцитов (42,7%±2,7%) и CD3+\CD8+ лимфоцитов (42,1%±2,4%) у беременных женщин с гестозом находилось на одинаковом уровне. Отмечено снижение соотношения CD3+\CD4+ лимфоцитов к CD3+\CD8+ лимфоцитам у беременных с гестозом по сравнению со здоровыми беременными (Таблица 7). У беременных с гестозом количество CD3+\CD4+ лимфоцитов было ниже, а количество CD3+\CD8+ лимфоцитов выше, чем у здоровых беременных. Также отмечено, что у беременных с гестозом количество активированных T-лимфоцитов CD3+\HLA-DR+, натуральных киллеров CD3-\CD16+\CD56+ и NKT-лимфоцитов CD3+\CD16+\CD56+ было выше (Таблица 7) по сравнению со здоровыми беременными. Общее количество CD3+ лимфоцитов, CD19+ B-лимфоцитов и CD3+\CD4+\CD8+ T-лимфоцитов у беременных с гестозом не отличалось от такового у здоровых беременных женщин.
Таблица 7. Соотношение популяций лимфоцитов периферической крови у небеременных, здоровых беременных женщин и у беременных женщин с гестозом.
|
Популяции |
Содержание лимфоидных клеток с различным фенотипом |
||||
|
здоровые небеременные женщины, % |
здоровые беременные женщины, % |
беременные женщин с гестозом, % (M±m, n=30) |
|||
|
по данным производителя; указано минимальное и максимальное значение |
по собственным данным |
||||
|
CD3+ |
62,8-85,0 |
75,2±0,6 |
81,1±1,8 |
77,1±2,8 |
|
|
CD19+ |
7,1-23,3 |
10,1±0,4 |
8,6±0,7 |
7,2±0,8 |
|
|
CD3+\CD4+ |
31,4-56,7 |
46,3±0,9 |
50,4±2,2 |
42,7±2,7* |
|
|
CD3+\CD8+ |
18,9-47,9 |
38,4±0,8 |
35,5±1,7 |
42,06±2,4* |
|
|
CD3+\CD4+\CD8+ |
0-3,2 |
2,8±0,4 |
1,8±0,6 |
2,5±0,9 |
|
|
CD3+\HLA-DR+ |
3,6-25,9 |
6,9±0,6 |
3,93±0,6 |
8,00±1,7* |
|
|
CD3-\CD16+\CD56+ |
6,7-33,5 |
14,4±0,6 |
10,47±1,0 |
17,6±2,9* |
|
|
CD3+\ CD16+CD56+ |
3,1-8,1 |
6,6±0,4 |
1,11±0,1 |
6,29±0,9*** |
|
|
Отношение CD3+\CD4+ к CD3+\CD8+ |
0,6-3,0 |
1,3±0,04 |
1,49±0,1 |
1,11±0,1* |
* - достоверность отличия группы беременных женщин с гестозом от группы здоровых беременных женщин p<0,05; *** - достоверность отличия группы беременных женщин с гестозом от группы здоровых беременных женщин p<0,001.
Таким образом, обнаруженное нами увеличение содержания цитотоксических лимфоцитов в периферической крови и очаги мононуклеарных инфильтратов с преобладанием лимфоцитов в ткани плаценты подтверждают данные литературы о развитии цитотоксического иммунного ответа у беременных с гестозом.
Гестоз сопровождается активацией эндотелиальных клеток сосудистого русла матери. Мы предположили, что снижение количества CD4+\CD8+ Т-лимфоцитов хелперов в периферической крови у беременных с гестозом по сравнению со здоровыми беременными может быть связано с повышением их способности к адгезии. Для проверки этой гипотезы мы оценивали функцию адгезии различных популяций мононуклеаров периферической крови небеременных и беременных женщин.
Рисунок 2. Количество лимфоцитов периферической крови женщин адгезировавших к эндотелиальным клеткам линии EA.Hy926. ** - p<0,01 (достоверность различий между показателем адгезии к интактному эндотелию и показателем адгезии к активированному TNFб эндотелию); †† - p<0,01 (достоверность различий между группой здоровых небеременных и здоровых беременных женщин); ?? - p<0,01 (достоверность различий между группой здоровых небеременных и беременных женщин с гестозом); ¦ - p<0,05 (достоверность различий между группой здоровых беременных и беременных женщин с гестозом).
Адгезия лимфоцитов (Рисунок 2) здоровых небеременных женщин к интактному и активированному TNFб эндотелию была одинаковой. Адгезия лимфоцитов здоровых беременных к активированному TNFб эндотелию превышала адгезию к интактному эндотелию в два раза, а у беременных с гестозом - в четыре раза. Количество адгезировавших лимфоцитов к интактному эндотелию у здоровых беременных и у беременных с гестозом была в 1,5 раза меньше, чем у здоровых небеременных женщин. Количество адгезировавших лимфоцитов к активированному TNFб эндотелию у беременных с гестозом была в 2 раза больше, чем у здоровых небеременных и у здоровых беременных женщин. Оценка популяционного состава лимфоцитов (CD3+\CD4+, CD3+\CD8+, CD16+/CD56+), адгезировавших к интактному и активированному TNFб эндотелию, у небеременных и беременных женщин показала незначительные различия в их составе.
Адгезия моноцитов (Рисунок 3) здоровых небеременных женщин к интактному и активированному TNFб эндотелию также была одинаковой. Адгезия моноцитов здоровых беременных и беременных с гестозом к активированному TNFб эндотелию превышала в два раза адгезию к интактному эндотелию. Количество адгезировавших моноцитов к интактному эндотелию у здоровых беременных была в 1,3 раза больше, а у беременных с гестозом была в 2 раза больше, чем у здоровых небеременных женщин. Количество адгезировавших моноцитов к активированному TNFб эндотелию у здоровых беременных было в 2 раза больше, чем у здоровых небеременных женщин. Оценка популяционного состава моноцитов (CD14+\CD16-, CD14+\CD16+), адгезировавших к интактному и активированному TNFб эндотелию, у небеременных и беременных женщин показала незначительные различия в их составе. При этом количество адгезировавших моноцитов к активированному TNFб эндотелию у беременных женщин с гестозом была в 2 раза больше, чем у здоровых небеременных и в 1,3 раза больше, чем у здоровых беременных женщин.
Рисунок 3. Количество моноцитов периферической крови женщин адгезировавших к эндотелиальным клеткам линии EA.Hy926. * - p<0,05 (достоверность различий между показателем адгезии к интактному эндотелию и показателем адгезии к активированному TNFб эндотелию); † - p<0,05 (достоверность различий между группой здоровых небеременных и здоровых беременных женщин); ? - p<0,05; ?? - p<0,01 (достоверность различий между группой здоровых небеременных и беременных женщин с гестозом); ® - p<0,05 (достоверность различий между группой здоровых беременных и беременных женщин с гестозом).
Подобные документы
Изучение различий в составе периферической крови до и после физических нагрузок. Оценка влияния интенсивности нагрузки и стажа тренировок на показатели периферической крови и адаптивные резервы организма человека. Техника проведения общего анализа крови.
курсовая работа [1,3 M], добавлен 23.09.2016Лабораторное исследование периферической крови у детей. Функции эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Качественные изменения нейтрофилов. Скорость оседания эритроцитов. Белковый состав плазмы крови. Нормальные показатели у детей различного возраста.
презентация [3,2 M], добавлен 22.09.2016Периферическая кровь и ее элементы. Средняя продолжительность жизни тромбоцита в крови. Моноциты и макрофаги. Ключевая роль Т-лимфоцитов в клеточном иммунитете. Механизм поддержания постоянства состава крови. Органы кроветворения и кроверазрушения.
курсовая работа [305,9 K], добавлен 16.06.2012Особенности состава и свойств крови у детей. Состав периферической крови в первые дни после рождения. Симптомы малокровия и его профилактика. Роль воспитателя. Анатомические особенности органов кровообращения. Работа сердца. Тренировка детского сердца.
контрольная работа [17,4 K], добавлен 19.03.2014Описания особенностей железодефицитной анемии, которая развивается после кровопотери. Острая и хроническая постгеморрагические анемии. Картина периферической крови. Симптомы анемии. Изучение компенсаторно-приспособительных механизмов организма человека.
презентация [147,0 K], добавлен 26.11.2014Общие функции крови: транспортная, гомеостатическая и регуляторная. Общее количество крови по отношению к массе тела у новорожденных и взрослых людей. Понятие гематокрита; физико-химические свойства крови. Белковые фракции плазмы крови и их значение.
презентация [3,6 M], добавлен 08.01.2014История зарождения и развития науки о переливании крови, первые опыты и оценка полученных результатов. Открытие четырех групп крови и необходимость их совместимости у донора и реципиента. Антигены и антитела системы АВ0. Наследование групп крови.
презентация [976,0 K], добавлен 26.01.2014Использование крови с лечебными целями. Первое переливание крови от человека человеку. Показания к переливанию крови, ее компонентов. Типология групп крови. Диагностика ВИЧ-инфекции. Сравнение количества переливаний крови в г. Находка и других городах.
курсовая работа [3,4 M], добавлен 26.10.2015Определение глюкозы в крови на анализаторе глюкозы ECO TWENTY. Определение креатинина, мочевины, билирубина в крови на биохимическом анализаторе ROKI. Исследование изменения биохимических показателей крови при беременности. Оценка полученных данных.
отчет по практике [67,4 K], добавлен 10.02.2011Гетерогенное опухолевое заболевание системы крови, характеризующееся клональной экспансией миелобластов в костном мозге, периферической крови и других тканях и органах. Показания для плановой и экстренной госпитализации. Критерии постановки диагноза.
презентация [225,1 K], добавлен 03.10.2016Изучение клеточного состава крови: эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Строение, физико-химические свойства, функции крови. Физиологически активные вещества, принимающие участие в свертывании крови и находящиеся в плазме. Скорость оседания эритроцитов.
курсовая работа [146,8 K], добавлен 26.12.2013История развития донорства крови в России. Роль донорства крови в современном обществе. Спасение жизни и восстановление здоровья людей как основные цели донорства. Переливание крови и ее компонентов. Повышение популярности сдачи крови среди молодежи.
курсовая работа [451,9 K], добавлен 18.06.2019Функции крови - жидкой ткани сердечно-сосудистой системы позвоночных. Ее состав и форменные элементы. Формирование эритроцитов, типы патологий. Главная сфера действия лейкоцитов. Лимфоциты - основные клетки иммунной системы. Возрастные изменения крови.
презентация [2,3 M], добавлен 14.10.2015Кровь. Функции крови. Компоненты крови. Свертывание крови. Группы крови. Переливание крови. Болезни крови. Анемии. Полицитемия. Аномалии тромбоцитов. Лейкопения. Лейкоз. Аномалии плазмы.
реферат [469,2 K], добавлен 20.04.2006Проблема переливания крови от человека к человеку, агглютинация и свертываемость крови как препятствие к его применению. Серологический состав основных групп крови, особенности их совместимости. Понятие универсальных доноров и реципиентов, системы резус.
реферат [45,2 K], добавлен 24.06.2011Системы групп крови - иммуногенетические признаки крови людей, определенные сочетания групповых изоантигенов в эритроцитах. Методики определения групп крови системы АВ0. Резус-конфликт, коагуляционный гемостаз, свертывание крови, регуляция фибринолиза.
реферат [1,6 M], добавлен 06.04.2011Место крови в системе внутренней среды организма. Количество и функции крови. Гемокоагуляция: определение, факторы свёртывания, стадии. Группы крови и резус–фактор. Форменные элементы крови: эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, их количество в норме.
презентация [1,9 M], добавлен 13.09.2015Система регуляции агрегатного состояния крови. Свертывающая и противосвертывающая системы крови. Реакция стенки сосудов в ответ на их повреждение. Плазменные факторы свертывания крови. Роль сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Пути расщепления тромба.
презентация [43,4 K], добавлен 15.02.2014Роль активных форм кислорода и инициируемых ими свободнорадикальных процессов при различных патологических процессах, а так же при беременности. Содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида в плазме крови у женщин в разные периоды беременности.
дипломная работа [1,7 M], добавлен 15.01.2009Ретикулоциты - характеристика, метод определения, особенности окраски крови, методы подсчета. Лейкемоидные реакции – характеристика, причины, механизмы развития, проявление в костном мозге и периферической крови, отличие от лейкозов и классификация.
разработка урока [5,6 M], добавлен 23.12.2012
