Специфическая профилактика и лечение ассоциативных инфекционных болезней нутрий

Размещено на http: //www. allbest. ru/

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Специфическая профилактика и лечение ассоциативных инфекционных болезней нутрий

Шевченко Людмила Васильевна

Краснодар 2008

Работа выполнена в Кубанском государственном аграрном

университете, на кафедрах микробиологии, эпизоотологии и вирусологии

факультета ветеринарной медицины

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, академик РАСХН, заслуженный деятель науки РФ Бакулов Игорь Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор, академик РАЕН Тимченко Людмила Дмитриевна

доктор ветеринарных наук, профессор Болоцкий Иван Александрович

доктор ветеринарных наук, профессор Малышева Людмила Александровна

Ведущая организация ? Ставропольский государственный аграрный университет, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12.

Защита диссертации состоится « » 2008 г. в часов на заседании Диссертационного совета Д 220.038.07 при Кубанском государственном аграрном университете по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина 13, ауд. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан « » 2008г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор Родин И.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Россия по производству пушнины традиционно является одним из мировых лидеров. Значительную часть дохода этой отрасли приносят нутрии.

Нутриеводство - перспективная отрасль пушного звероводства. От нутрий получают вкусное диетическое мясо, ценные шкурки различных расцветок (В.П. Рютова, 1991; В.Г. Кузнецов, 1993; В.Ф. Кладовщиков, В.Н. Александров, 2002; Н.А. Балакирев, 2006).

Разведением нутрий в России занимаются в различных климатических зонах государственные, фермерские хозяйства и нутриеводы-любители, но преимущественно в южных регионах: в Краснодарском и Ставропольском краях, Ростовской области (В.И. Вачугов, 1989; Н.А. Цепкова, В.А. Карпухин, 1991; Н.А. Балакирев, В.Ф. Кладовщиков, 2002; Г.А. Кузнецов, Е.Г. Сергеев, О.И. Федоров, 2003; И.А. Плотников, О.Ю Беспятых, 2003).

Стабильному развитию нутриеводства препятствуют инфекционные болезни: колибактериоз, сальмонеллез, стрептококкоз, наносящие значительный экономический ущерб отрасли (Р.А. Кадымов с соавт., 1992; В.А. Есепенок с соавт, 1997; А.Н. Панин с соавт, 1997; Л.П. Миронова с соавт., 2000; В.Ф. Коссе, 2001). Заболевания имеют широкое распространение. Они регистрируются во всех развитых странах мира (K. Nordstoga, 1972; B. Kohler [et al.], 1988), в том числе России (Е.А. Клепинина, 1987; А.А. Конопаткин, В.А. Есепенок, 1990; Л.П. Миронова, А.А. Миронова, 1998; П.А. Емельяненко, 2000; В.И. Терехов, Е.В. Малюхова, 2005).

Следует отметить также, что колибактериоз, сальмонеллез, стрептококкоз имеют эпидемиологическое значение. Роль эшерихий, сальмонелл, стрептококков в инфекционной патологии животных, человека ежегодно возрастает (Н.И. Брико, 2000; Л.А. Бурова, 2000; Е.С. Вылегжанина, А.Н. Панин, 2001; Н.М. Колычев, М.И. Петрова, Л.И. Лазарева, 2006).

Как показывает мировой опыт, во многих случаях одним из основных средств специфической профилактики инфекционных болезней животных является вакцинация.

Выпускаемые в России поливалентная вакцина против сальмонеллеза и колибактериоза пушных зверей (С.Я. Любашенко, 1963), против пастереллеза и стрептококкоза нутрий (А.Н. Панин с соавт, 1997) содержат в своем составе штаммы возбудителей без учета их территориальной антигенной изменчивости. Антигенный состав биопрепаратов был предложен в 60- 90 гг. XX столетия и до сих пор не пересматривался. Проводимый мониторинг не учитывает серотиповую циркуляцию штаммов возбудителей инфекционных болезней. В силу этого выпускаемые биофабриками вакцины «отстают» от сложившегося антигенного фона эшерихий, сальмонелл, стрептококков и не обеспечивают надежной защиты нутрий от данных инфекционных болезней.

В последние годы в нутриеводческих хозяйствах широкое распространение получило ассоциативное течение колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза, а также пастереллеза, стафилококкоза в различных сочетаниях (В.А. Есепенок, 1990; Р.А. Кадымов, Э.М. Агаева, Г.Э. Дунямалиев, 1998; В.И. Терехов, С.Н. Тельнов, 1999; Л.П. Миронова, В.Ф. Коссе, А.А. Миронова, 1999, 2000, 2001; Н.В. Броварец, 2003; С.Н. Треглазов, Л.А. Малышева, 2003). В связи с этим большое значение придается применению ассоциированных вакцин, преимущество которых заключается в создании иммунитета сразу к нескольким болезням одновременно при отсутствии у животных иммунодепрессивных процессов, повышении производительности труда, экономии времени и меньшей трудоемкости процесса вакцинации (В.А. Есепенок с соавт., 2005; 2006). Кроме того, уменьшается процент травмирования и осложнений при отлове и фиксации животных (Р.А. Кадымов с соавт., 1990; И.А. Домский, 2002).

Для защиты нутрий от ассоциативных инфекций, включающих патогены колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза, ассоциированные вакцины в России не разработаны. Изучение возможности их применения с целью иммунизации пушных зверей представляет большой научный и практический интерес. Проведение таких исследований могло бы решить проблему надежной профилактики этих болезней у восприимчивых растительноядных.

На основании вышеизложенного, учитывая сложную эпизоотическую обстановку, обусловленную действием различных возбудителей, разработка новых ассоциированных вакцинных препаратов является одним из важнейших современных направлений в области инфекционной патологии животных (В.П. Урбан, 1985).

Серогрупповой состав стрептококков, эшерихий, сальмонелл многочисленен, склонен к быстрой смене по набору и количеству. В таких ситуациях методы специфической профилактики должны основываться на применении ассоциированных вакцин, содержащих сероварианты возбудителей, которые выделяются от больных и павших животных в эпизоотическом очаге. Биопрепараты из местных штаммов возбудителей болезней обладают более высокими антигенными и иммуногенными свойствами и способствуют созданию иммунитета достаточной напряженности (А.М. Ахмедов, 1983; В.И. Вачугов, 1989; Р.А. Кадымов с соавт.,1990; Р.Т. Маннапова, 1998; Н.Н. Шульга, Н.В. Яковлева, 2006).

Исследований по включению в состав ассоциированных вакцин антигенов колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза согласно выделенному серотиповому составу не проводилось. Разработка таких вакцинных ассоциаций и новых методов профилактики данных болезней целесообразна в теоретическом и практическом отношениях. Проведение этих работ будет способствовать решению актуальной проблемы надежной и эффективной профилактики, позволяющей в кратчайшие сроки с минимальными затратами создать иммунное в отношении возбудителей данных болезней поголовье зверей.

Цель и задачи исследований. Целью работы являлось разработка комплекса мероприятий для специфической профилактики ассоциативных инфекционных болезней нутрий - колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и их лечения.

В связи с этим были поставлены задачи:

- изучение эпизоотологических особенностей инфекционных болезней нутрий, распространенных в Краснодарском крае;

- разработка технологии изготовления, нормативно-технической документации по изготовлению и контролю инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- изучение иммунобиологических свойств новых моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях;

- изучение иммунобиологической реактивности организма нутрий до и после прививки ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- изучение эффективности новых ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях;

- изучение лечебного действия антибактериальных препаратов при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий; вакцина сальмонеллез нутрия лечебный

- разработка системы профилактических и лечебных мероприятий по колибактериозу, сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий в Краснодарском крае.

Научная новизна работы. Впервые изучена эпизоотическая обстановка по инфекционным болезням нутрий в Краснодарском крае, определен серологический профиль возбудителей.

Впервые разработаны технологии изготовления новых инактивированных моновакцин против: колибактериоза; сальмонеллеза и ассоциированных вакцин против: сальмонеллеза и стрептококкоза; колибактериоза и стрептококкоза; сальмонеллеза и колибактериоза; колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Отработана кинетика инактивации эшерихий, сальмонелл, стрептококков на основе совместного действия инактивантов разной физико-химической природы, которые позволяют в несколько раз уменьшить количество формалина, вводимого в бактериальную культуру, и сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционными технологиями в 4 раза.

В ходе исследований определены оптимальные соотношения антигенов, адъюванта, входящих в состав новых инактивированных ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, дозы, схемы введения биопрепаратов. Доказана безвредность, слабая реактогенность и высокая иммуногенность новых инактивированных моно- и ассоциированных вакцин при их применении на нутриях.

Впервые изучена динамика морфобиохимического статуса и динамика формирования клеточного и гуморального звеньев иммунитета у нутрий до и после иммунизации ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза.

Установлено, что применение инактивированных ассоциированных вакцин позволяет обеспечить не менее 80%-ную защиту нутрий от колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза, сократить количество прививок в 2-3 раза, создать иммунное поголовье в короткие сроки, увеличить производительность труда зооветспециалистов и обслуживающего персонала, уменьшить в два-три раза затраты на проведение противоэпизоотических мероприятий против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза нутрий.

Разработали и внедрили в ветеринарную практику систему мероприятий по профилактике и ликвидации инфекционных заболеваний колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Установили высокое лечебное действие отечественного антибактери-ального препарата «Абактан» при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Научная новизна работы подтверждена и защищена 10 патентами РФ на изобретение.

Теоретическая и практическая значимость работы. Изучили эпизоотическую ситуацию по инфекционным болезням нутрий в Краснодарском крае. Теоретически обосновали и практически подтвердили необходимость защиты нутрий от инфекционных болезней моно- и ассоциированными вакцинами, изготовленными из местных штаммов возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Разработали и предложили для внедрения в производство новые инактивированные моновакцины против: колибактериоза; сальмонеллеза и ассоциированные вакцины против: сальмонеллеза и стрептококкоза; сальмонеллеза и колибактериоза; колибактериоза и стрептококкоза; колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

Выявили характер изменений неспецифического и специфического звеньев иммунитета у нутрий, проявляющийся после иммунизации ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза.

Установили, что в формировании специфической защиты организма зверей ведущая роль принадлежит В-лимфоцитам, г-глобулинам, Ig A, Ig M, Ig G и специфическим антителам.

Выявленные закономерности клеточной реакции фагоцитов полностью соответствуют активации уровня гуморального звена иммунитета у нутрий и существенно дополняют характеристику специфического иммунного ответа.

Разработали и утвердили в установленном порядке нормативно-технические документы (регламент по изготовлению и контролю, технические условия, временные наставления по применению моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий).

Производство разных вариантов новых инактивированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий освоено на ФГУ «Краснодарская биофабрика» и ФГУ «Армавирская биофабрика», изготовлено более 250 тысяч доз биопрепаратов, которые с положительными результатами были испытаны в производственных условиях.

На основании теоретических, экспериментальных и производственных исследований предложена система мероприятий по специфической профилактике инфекционных болезней нутрий, включающая изучение эпизоотической обстановки хозяйства, выделение возбудителей, конструирование инактивированных вакцин, их контроль и применение. Разработали и предложили схему лечения ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, а также мероприятия по ликвидации указанных заболеваний.

Материалы исследований включены в утвержденные рекомендации по профилактике и ликвидации колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в Краснодарском крае.

Основные материалы оформлены, утверждены и вошли в монографию «Нутрии», учебное пособие с грифом МСХ РФ «Биологические особенности и болезни нутрий», патенты и используются на кафедре микробиологии Кубанского государственного аграрного университета при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по дисциплинам: «Болезни пушных зверей», «Ветеринарная микробиология и иммунология», «Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных» на факультете ветеринарной медицины, дисциплине «Микробиология» на факультете перерабатывающих технологий, дисциплине «Микробиология и иммунология» на зооинженерном факультете, при лабораторной диагностике энтеробактерий в ГУ Краснодарского края «Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория», ФГУ «Краснодарская межобластная ветеринарная лаборатория», на кафедре микробиологии, вирусологии и патанатоми Донского государственного аграрного университета и Дагестанской государственной сельскохозяйственной академии, на кафедре эпизоотологии и микробиологии Ставропольского государственного аграрного университета, в Ставропольском НИИЖК РАСХН.

Практическое значение результатов работы и их внедрение подтверждено рядом актов.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнялась в соответствии с тематическим планом НИР Кубанского государственного аграрного университета, государственный регистрационный №01200113464 «Разработка и совершенствование специфической профилактики инфекционных болезней животных»; по проекту № 03-04-96554 гранта совместных конкурсов РФФИ и администрации Краснодарского края «Теоретическое и экспериментальное моделирование профилактики инфекционных болезней у нутрий в Краснодарском крае»; по проекту № 06-04-96772 гранта совместных конкурсов РФФИ и администрации Краснодарского края «ЮГ РОССИИ». «Теоретическое и экспериментальное моделирование эпизоотологической и экологической безопасности выращивания нутрий».

Апробация результатов исследований. Материалы исследований по диссертационной работе доложены и обсуждены на 4-ой региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», 28-29 ноября 2002г., г. Краснодар; Международной научно-практической конференции «Биолого-экологические проблемы заразных болезней диких животных и их роль в патологии с/х животных и людей», г. Покров, ВНИИВВиМ 16-18 апреля 2002г.; Международной научно-практической конференции, посвященной 45-летию ВНИИВВиМ «Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов» г. Покров, ВНИИВВиМ 24-26 сентября 2003г.; Региональных научно-практических конференциях Кубанского государственного аграрного университета, март 2004- 2008гг., г. Краснодар; научно-производственной конференции, посвященной 100-летию профессора Н.Г. Кондюрина «Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологии животных». Омский ГАУ, институт ветеринарной медицины, г. Омск, 2004г.; Второй Всероссийской дистанционной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, Донской ГАУ пос. Персиановский, 2004г.; Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию Уральской государственной академии ветеринарной медицины 19-20 мая 2005г., г. Троицк; Всероссийской конференции грантодержателей регионального конкурса РФФИ и администрации Краснодарского края «р2003юг», г. Краснодар, 2003, 2004гг; Заключительной конференции грантодержателей регионального конкурса РФФИ и администрации Краснодарского края «р2003юг», г. Краснодар, 2005г.; на конференции грантодержателей регионального конкурса Российского фонда фундаментальных исследований и администрации Краснодарского края «ЮГ РОССИИ», г. Краснодар, 2006, 2007гг.; на заседаниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета в 2001 - 2008 гг.

Публикация результатов исследований. Результаты исследований по теме диссертационной работы изложены в 61 научной работе, в том числе в монографии, учебном пособии с грифом МСХ РФ, пяти рекомендациях, 10 патентах, научных статьях и тезисах докладов центральных научных журналов и изданий, рекомендованных ВАК, в материалах международных и всероссийских научных конференций.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 305 листах машинописного текста и содержит разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы и предложения. Список литературы включает 485 источников, в том числе 107 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 46 таблицами и 35 рисунками. В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающих результаты отдельных этапов работы, их научную новизну и практическую значимость.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения эпизоотической обстановки по инфекционным болезням нутрий в Краснодарском крае и серологического профиля возбудителей;

- результаты разработки технологии изготовления и методов контроля инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- результаты изучения иммунобиологических свойств и эффективности новых инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях;

- результаты изучения иммунобиологической реактивности организма нутрий до и после прививки ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий;

- результаты изучения эффективности антибактериальных препаратов при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

- результаты разработки системы мероприятий по специфической профилактике и ликвидации инфекционных болезней нутрий.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Материалы

Работа выполнена на кафедрах микробиологии, эпизоотологии и вирусологии Федерального государственного образовательного учреждения (ФГУ) высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет», в государственном учреждении (ГУ) «Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория» Краснодарского края, в звероводческих хозяйствах Краснодарского края, в ФГУ «Краснодарская биофабрика», «Армавирская биофабрика» в период с 2000 по 2007 гг.

В работе использовали штаммы, выделенные от павших нутрий, возбудителей: стрептококкоза (Str. pneumoniae), сальмонеллеза (S. typhimurium), колибактериоза (Е. соli О1).

Животные. Опыты на лабораторных животных и нутриях проводили в виварии ГУ «Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория», на базе племзверосовхоза «Северинский», фермерских хозяйств п. Лорис, г. Усть-Лабинска, в ФГУ «Краснодарская биофабрика» и ФГУ «Армавирская биофабрика» Краснодарского края.

Для определения патогенности возбудителей, испытаний вакцин на безвредность, реактогенность, иммуногенность, пассажей и титрования возбудителей использовали белых беспородных мышей массой 16-18 г - 2500, нутрий (Miocastor coypus) различного возраста и окраса - 78500.

Зверей вакцинировали в возрасте от 40 до 60 дней, взрослых животных - за месяц до гона, беременных самок - во второй половине беременности.

Исследования проведены на клинически здоровых нутриях. Животные были подобраны по принципу параналогов (по породной принадлежности, возрасту, физиологическому состоянию, упитанности). Рационы животных соответствовали нормам, разработанным в НИИ пушного звероводства и кролиководства им. В. А. Афанасьева.

Производственные испытания вакцин проводили в племзверосовхозе «Северинский» Тбилисского района и фермерских хозяйствах Краснодарского края.

Биопрепараты. Для проведения научных исследований и производственных испытаний использовали опытные серии вакцин по разработанной нами технологии: вакцину против колибактериоза нутрий; вакцину против сальмонеллеза нутрий; вакцину против стрептококкоза нутрий; ассоциированную вакцину против сальмонеллеза и колибактериоза нутрий; ассоциированную вакцину против колибактериоза и стрептококкоза нутрий; ассоциированную вакцину против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий; ассоциированную вакцину против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий; коммерческую вакцину против пастереллеза и стрептококкоза нутрий, ФГУ «Ставропольская биофабрика».

Диагностикумы, наборы, тест-системы:

- сыворотки «О»-коли агглютинирующие, поливалентные и моновалентные, ФГУ «Армавирская биофабрика»;

- антиадгезивные коли-сыворотки, НПФ «ДИАВАК», п. Оболенск Московской области;

- сыворотки сальмонеллезные О-комплексные агглютинирующие, ФГУ «Кур ская биофабрика»;

- сыворотки сальмонеллезные монорецепторные О и Н-агглютинирующие, ФГУ «Курская биофабрика»;

- эритроцитарный диагностический эшерихиозный набор для выявления антител в РНГА, ООО «Агровет» г. Москва;

- эритроцитарный диагностический сальмонеллезный набор для выявления антител в РНГА, ООО «Агровет» г. Москва;

- набор антистрептококковых группоспецифических сывороток и стандартных групповых антигенов для реакции преципитации, НПО «АКВАПАСТ», г. Санкт-Петербург.

Методы исследований

Клинические методы исследований. С целью изучения влияния вакцинных, вирулентных штаммов и биопрепаратов на организм лабораторных животных и опытных зверей проводили визуальное наблюдение за их состоянием после введения антигенов и возбудителей болезней. В необходимых случаях регистрировали физиологические параметры организма нутрий: температуру тела, пульс, частоту дыхания (В.А. Берестов, 2002).

Гематологические методы. Кровь у нутрий брали перед кормлением из боковой вены хвоста до начала опытов и через 7, 14, 21, 28 дней после иммунизации. Оценку гематологических показателей (количество эритроцитов, уровень гемоглобина, количество лейкоцитов, лейкоцитарная формула) проводили по общепринятым методикам, описанным в соответствующих руководствах (В.А. Берестов, 1981).

Биохимические методы. Общий белок в сыворотке крови нутрий определяли рефрактометрически, содержание белковых фракций - нефелометрическим методом в соответствии с методическими указаниями по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях (М., 1981).

Бактериологические методы. Применялись общепринятые в микробиологии приемы работы (Б.И. Антонов, 1986), а именно: посевы культур микроорганизмов на питательные среды для их выращивания, определение чистоты роста, идентификация штаммов; посевы на специальные среды для изучения биохимических свойств микроорганизмов, определение устойчивости их к антибиотикам; определение концентрации микробных клеток, проведение биопробы на лабораторных животных и нутриях.

Определение чувствительности выделенных бактериальных культур E. coli О1, S. typhimurium, Str. pneumoniae к антибактериальным препаратам: гентамицин, фурадонин, левомицетин, биовит-80, энрофлон, «Абактан» проводили методом диффузии в агар с применением дисков и лунок, методом серийных разведений в бульоне или агаре согласно методических указаний по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных (М., 1972), рекомендаций по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (А.В. Скориков, 2005).

Серологические методы. Для установления серогрупповой принадлежности возбудителя стрептококкоза нутрий использовали стрептококковые групповые преципитирующие сыворотки в реакции преципитации (РП) в капиллярах по общепринятой методике (Д.И. Скородумов, 2005). Определение уровня антител в сыворотке крови нутрий проводили в РП согласно методических указаний по лабораторной диагностике стрептококкоза животных (М., 1990), утвержденных главным управлением ветеринарии (ГУВ).

Серологическую типизацию кишечной палочки и определение уровня антител в сыворотке крови нутрий проводили в реакции агглютинации (РА) согласно методических указаний по лабораторной диагностике колибактериоза животных, утвержденных Департаментом ветеринарии РФ (М., 2000).

Серологическую типизацию выделенной культуры Salmonella и определение уровня антител в сыворотке крови нутрий проводили в РА согласно методических указаний по лабораторной диагностике сальмонеллезов человека и животных (М., 1990).

Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных нутрий и защиту определяли через 7, 14, 21, 28 дней и выборочно у 5% животных через 60, 90, 180, 270 дней после прививки.

Иммунобиологические методы. Для определения факторов неспецифической резистентности использовали тест бактериального фагоцитоза нейтрофилов с учетом степени его завершенности по отношению к бактериям Staphylococcus aureus (№209 Р) по И.В. Нестеровой (1996).

Количество Т-, В-лимфоцитов, нулевых клеток крови нутрий определяли по методу Пирса (1962) в модификации Н.Н. Гугушвили (2000).

Содержание иммуноглобулинов основных классов (Ig А, Ig М, Ig G) в сыворотке крови нутрий определяли на биохимическом анализаторе HUMALYZER 2000.

Безвредность моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий оценивали на белых беспородных мышах массой 18-20 г , нутриях в возрасте 40-60 дней путем подкожного и внутримышечного соответственно введения им вакцины в 3-5-кратной иммунизирующей дозе. Вакцина считается безвредной, если она не вызывает нарушения физиологического состояния нутрий (повышение температуры тела, воспаление в месте введения препарата, хромота и др.) в течение 10 дней.

Иммуногенность вакцинных препаратов оценивали по проценту выживаемости (защиты) привитых нутрий (белых мышей) после заражения вирулентными возбудителями колибактериоза (E. сoli О1), сальмонеллёза (S. typhimurium) и стрептококкоза (Str. pneumoniae) в летальных дозах, определяемых предварительным титрованием на нутриях и белых мышах.

Статистические методы. Статистическая обработка массовых цифровых материалов проводилась на персональном компьютере IBM с использованием пакета статистических программ «Microsoft», «Microsoft Word» и «Microsoft Excel». Полученные результаты были подвергнуты биометрической обработке по И.А. Ойвину (1960), степень достоверности установлена по распределению Стьюдента.

Научные исследования по теме диссертации проводили по схеме (рисунок 1).



Рисунок 1 Схема проведения исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Эпизоотологические особенности распространения инфекционных болезней нутрий в Краснодарском крае

Нами был проведен ретроспективный анализ уровня заболеваемости нутрий инфекционными болезнями в Краснодарском крае в сравнительном аспекте и динамике. За основу были взяты ветеринарная отчетность по инфекционной патологии животных в Краснодарском крае за 1992-2006 гг. и результаты собственных исследований. Регистрировали также количество и видовой состав выделенных культур возбудителей.

Установлено, что в течение 11 лет (1996-2006гг.) в нозологическом профиле инфекционной патологии нутрий доминировали (рисунок 2) стрептококкоз (60%), колибактериоз (33%), сальмонеллез (4%), инфекционная энтеротоксемия, псевдомоноз, стафилококкоз (1%). Возбудители первых трех инфекций вызывали массовую заболеваемость и гибель животных.

Стрептококкоз - инфекционная болезнь всех возрастных групп многих видов сельскохозяйственных и лабораторных животных, пушных зверей и птиц. Характеризуется развитием гнойно-воспалительных процессов в разных органах и тканях. Широкому распространению его способствует постоянное обитание стрептококков в верхних дыхательных путях и кишечнике здоровых животных, выделение их бактерионосителями во внешнюю среду.

У нутрий болезнь регистрировали в течение всего года, заболеваемость составляла 30-60%, летальность-70-90%. До 80% самок абортировали во второй половине беременности.



Рисунок 2 Нозологический профиль инфекционной патологии нутрий в Краснодарском крае (1996-2006 гг.)

Выявили, что при естественном заражении к стрептококкозу восприимчивы все возрастные группы нутрий. Однако чаще всего поражались звери 2-3 месячного возраста. Болезнь регистрировали в периоды массового щенения (февраль-март), отсадки потомства от самок (май-июнь), а также при формировании групп зверей для косячной случки (сентябрь-ноябрь). После всех технологических перемещений отход нутрий начинался на 12-45 день.

При изучении территориальной распространенности стрептококкоза нутрий в Краснодарском крае установили, что чаще всего его регистрировали (рисунок 3) в Кавказском (29%), Динском (16%), Белоглинском (15%), Тбилисском (11%) районах и г. Краснодаре (9%).

От больных и павших нутрий при лабораторных исследованиях выделяли различные стрептококки: Str. рneumoniae (55,73%), Str. zooepidemicus (20,36%), относящиеся к группе С, а также Str. faecalis (23,91%) группы D.

Колибактериоз - широко распространенная, остро протекающая инфекционная болезнь молодняка всех видов животных, в том числе пушных зверей, проявляющаяся септицемией, токсинемией и энтеритами - летальность до 100%, а у взрослых самок - абортами или рождением мертвых щенков.

Колибактериоз нутрий чаще регистрировали (рисунок 4) в Кавказском (26%), Каневском (16%), Ленинградском и Динском (по 8%), Тбилисском (7%) районах и в г. Краснодаре (19%) При этом из патологического материала павших и заболевших животных выделяли сероварианты E. coli, доля которых составляла (%): О1 (20,77), О2 (5,93), О4 (4,15), О8 (6,53), О15 (11,28), О20 (8,61), О26 (2,67), О33 (2,97), О41 (3,56), О55 (8,31), О78 (2,97), О103 (4,75), О111 (2,97), О115 (3,26), О127 (0,30), О139 (2,37), О141 (1,78), 987Р (5,04) К88 (1,78). Доминирующим среди них был серотип E. coli О1 (20,77%).

Рисунок 3 Динамика регистрации стрептококкоза нутрий в Краснодарском крае (1996-2006 гг.)



Рисунок 4 Динамика регистрации колибактериоза нутрий в Краснодарском крае (1996-2006 гг.)

Сальмонеллез - инфекционная болезнь преимущественно молодняка сельскохозяйственных животных, диких и пушных зверей, характеризующаяся лихорадкой, септицемией, токсинемией и энтеритами. Нутрии чаще болеют сальмонеллезом в возрасте 1,5-5 мес и во время беременности. Болезнь носит сезонный характер (февраль, сентябрь-ноябрь). Заболеваемость и смертность зверей составляют 33-55 и 17-31% соответственно.

Сальмонеллез нутрий чаще всего регистрировали (рисунок 5) в Белоглинском (33%), Динском (19%), Каневском (16%), Выселковском и Крымском (по 7%), Северском (5%), Славянском и Кавказском районах (по 2%), а также в г. Краснодаре (9%).

При лабораторных исследованиях от больных и павших нутрий выделяли сероварианты, доля которых составляла (%): S. typhimurium (71,71), S. dublin (13,73), S. enteritidis (5,04), S. choleraesuis (3,92), S. gallinarum (1,68), S. раratyphi (3,92). Доминировал среди них серовариант S. typhimurium (71,71%).

Ассоциативное течение инфекционных болезней нутрий в Краснодарском крае установлено в 89,2% случаев, в том числе: стрептококкоза и колибактериоза; колибактериоза и сальмонеллеза; стрептококкоза и сальмонеллеза; колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза.

Рисунок 5 Динамика регистрации сальмонеллеза нутрий в районах Краснодарского края (1996-2006 гг.)

3.2 Разработка технологии изготовления инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

Изучили биологические свойства 185 различных бактериальных культур, наиболее часто выделяемых сероваров и на основании проведенных исследований по антигенности, иммуногенности, стабильности подобрали штаммы Е. coli О1, S. typhimurium, Str. рneumoniae для изготовления биопрепаратов. Накопление микробных клеток (м.к./см3) изучали на обогащенных питательных средах: селенитовая, желчный бульон, мясо-пептонный бульон, Эндо, Левина, глюкозо-сывороточный бульон. Оно составляло от 10 до 20 млрд м.к./см3. Для получения бактериального сырья для производства вакцин нами был взят мясо-пептонный бульон, обогащенный глюкозой, позволяющий получать необходимую концентрацию микробных клеток и как наиболее доступный и дешевый. На основе штаммов Е. coli О1, S. typhimurium, Str. рneumoniae нарабатывали бактериальное сырье для изготовления инактивированных моно- и ассоциированных вакцин согласно разработанной нами технологической схемы (рисунок 6).

Разработали эффективные режимы инактивации возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза нутрий на основе совместного действия формалина и температуры. Формалин в 0,4%-ной концентрации при температуре 37±2°С в течение 2-3 суток полностью подавлял инфекционную активность Е. coli О1, Str. рneumoniae нутрий, а в 0,5% концентрации при температуре 37±2°С в течение 3-4 суток - инфекционную активность S. typhimurium нутрий, сохраняя при этом иммуногенные свойства антигенов. Данные режимы позволили сократить время инактивации микроорганизмов по сравнению с традиционной технологией в 4 раза (рисунок 6).

Инактивированную бактериальную массу подвергали стандартизации путем разбавления ее физиологическим раствором до концентрации не менее 4 млрд. микробных клеток в 1 см3 по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича. Депонирование биомассы проводили путем внесения адъюванта - 3 - 6%-ного гидрата окиси алюминия до 20-30% к объему и выдерживания с ним в течение 12-24 ч при температуре 20-25°С (рисунок 6).

3.3 Изучение иммунобиологических свойств моно-и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях

3.3.1 Изучение иммунобиологических свойств моновакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

По разработанной нами технологии были изготовлены опытные образцы инактивированных моновакцин против: колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий на основе штаммов E. coli О1, S. typhimurium, Str. рneumoniae соответственно: формолвакцины, адсорбированные на гидрате окиси алюминия; формолвакцины с масляным адъювантом; формолвакцины без адъюванта. При изучении иммуногенности и безвредности серий вакцин на нутриях в возрасте 40-50 дней установили, что после однократной внутримышечной прививки зверей одной из гидроокисьалюминиевых формолвакцин в дозе 0,5 смі у животных через 14 суток формируется напряженный иммунитет против соответствующей инфекции, обеспечивающий 80% защиту нутрий. В дозах 0,1-0,4 смі данные биопрепараты создавали 50-60% защиту животных, что не отвечает предъявляемым требованиям к инактивированным вакцинам. У нутрий, иммунизированных формолвакцинами без адъюванта и формолвакцинами с масляным адъювантом, наблюдали хромоту в течение 2-3 дней, защита зверей составляла 60-80 %. При определении иммунобиологических свойств гидроокисьалюминиевых формолвакцин против: колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий после двукратной внутримышечной прививки (первая доза - 0,5 смі, вторая - 1,0 смі с интервалом 10 суток) у животных не наблюдали поствакцинальных осложнений, через 14 суток после ревакцинации у привитых зверей формировался напряжённый иммунитет против соответствующей инфекции, обеспечивая 100% защиту.



Рисунок 6 Принципиальная технологическая схема изготовления инактивированных моно- и ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий

Таким образом, нами были разработаны и испытаны в лабораторных условиях безвредные и высокоиммуногенные гидроокисьалюминиевые формолвакцины против колибактериоза, против сальмонеллеза и против стрептококкоза нутрий (далее вакцины против: колибактериоза, сальмонеллеза и стрептоккоза нутрий), обеспечивающие после одно- и двукратной иммунизации 80 и 100% соответственно защиту животных.

Учитывая ассоциативное течение инфекционных болезней нутрий в зверохозяйствах России, Краснодарского края, а также отсутствие эффективных ассоциированных вакцин против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, дальнейшие наши исследования были направлены на разработку технологии изготовления ассоциированных вакцин против данных инфекций нутрий в разных сочетаниях и изучение их основных свойств.

3.3.2 Изучение иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях

На основе эпизоотических штаммов S. typhimurium и St. рneumoniae нутрий нарабатывали бактериальное сырье и инактивировали его формалином и температурой раздельно согласно разработанной нами технологической схемы (рисунок 6). После проверки на полноту инактивации антигены смешивали в соотношении 1:1,1:2,1:3, добавляли 10-30% гидрата окиси алюминия, перемешивали, выдерживали в течение 12-24 ч при температуре 20-25єС, контролировали на бактериальную стерильность и фасовали во флаконы с последующей укупоркой. По разработанной нами технологии были изготовлены опытные серии ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий и изучены ее основные свойства.

Иммуногенность вакцины оценивали на белых мышах массой 18-20 г, предварительно определив для них иммунизирующую дозу антигенами сальмонеллеза и стрептококкоза, а также соответствующие дозы для заражения данными вирулентными возбудителями. Результаты исследований показали, что после однократной подкожной прививки белых мышей ассоциированной вакциной в дозе 2 млн./0,5 смі у них через 14 суток формируется напряжённый иммунитет, обеспечивающий защиту 80-90% привитых против стрептококкоза и сальмонеллеза соответственно, поствакцинальных осложнений не отмечали.

При изучении влияния соотношения антигенов и компонентов в ассоциированной вакцине на ее иммуногенную активность установили, что биопрепарат в соотношении антигенов сальмонеллеза и стрептококкоза 1:2 и 20 % гидрата окиси алюминия после двукратной иммунизации белых мышей подкожно с интервалом 10 суток в дозе по 0,5 смі не вызывает у животных поствакцинальных осложнений и через 14 суток после ревакцинации обеспечивает 80-100 %-ную защиту против стрептококкоза и сальмонеллеза соответственно.

При определении оптимальной иммунизирующей дозы ассоциированной вакцины против сальмонеллёза и стрептококкоза для нутрий в возрасте 40-50 дней (однократно внутримышечно в область бедра) установили, что 1,0 млрд. микробных клеток по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича позволяет защитить 100% вакцинированных нутрий от вирулентных возбудителей сальмонеллёза и стрептококкоза при 100% заболевании и 100% гибели невакцинированных животных (контроль).

С целью изучения безвредности и иммуногенности ассоциированной вакцины на каждую серию препарата брали по 5 нутрий в возрасте 40 - 50 дней, вакцинировали однократно в дозе 1,0 смі и двукратно (первая доза - 1,0 смі, вторая - 1,5 смі с интервалом 10 суток), внутримышечно с последующим заражением привитых и не привитых животных вирулентными возбудителями S. typhimurium (50 млрд м.к.) и St. рneumoniae ( 2 млрд м.к.).

Выявили, что у животных через 14 суток после вакцинации и ревакцинации формируется напряжённый иммунитет, обеспечивающий защиту 80 100% привитых против стрептококкоза и сальмонеллеза, поствакцинальных осложнений не отмечали.

Производственные испытания 2-х опытных серий вакцины проводили в племзверосовхозе «Северинский» Тбилисского района Краснодарского края. В хозяйстве иммунизировали 3000 нутрий 40-60 дневного возраста внутримышечно в область бедра двукратно: первая доза - 1,0 смі, вторая - 1,5 смі с интервалом 10 суток. За привитыми животными вели наблюдение в течение 9 месяцев. Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных нутрий определяли выборочно (у 5% животных) к S. typhimurium в РА и к Str. рneumoniae в РП по общепринятым методикам.

В результате исследований установлено, что у нутрий, привитых ассоциированной вакциной против сальмонеллёза и стрептококкоза двукратно, отклонений от физиологической нормы не было, через 14 суток после ревакцинции формировался напряжённый иммунитет, обеспечивая защиту всех привитых зверей против сальмонеллёза и стрептококкоза. Через 9 месяцев после повторной прививки уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных нутрий к S. typhimurium составил 1:80-1:320, а к Str. рneumoniae - 1:8-1:32.

3.3.3 Изучение иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и колибактериоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях

По разработанной нами технологии (рисунок 6) на основе выделенных штаммов S. typhimurium и Е. coli О1 были изготовлены 2 опытные серии ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и колибактериоза нутрий. Установили, что биопрепарат при соотношении антигенов сальмонеллеза и колибактериоза 1:1 и 10 и 20 % гидрата окиси алюминия после двукратной подкожной иммунизации белых мышей в дозе 0,5 смі с интервалом 10 суток не вызывает у животных поствакцинальных осложнений и через 14 суток после ревакцинации обеспечивает 100%-ную защиту против сальмонеллеза и колибактериоза.

При изучении безвредности и иммуногенной активности вакцины на нутриях в возрасте 40-50 дней выявили, что у животных через 14 суток после однократной внутримышечной прививки биопрепаратом в дозе 1,0 см3, а также двукратной: первая доза 1,0 см3, вторая - 1,5 см3 с интервалом 10 суток формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий 80% защиту после однократной иммунизации и 100% после двукратной прививки против сальмонеллеза и колибактериоза, поствакцинальных осложнений не отмечали.

В результате производственных испытаний вакцины (две серии) в племзверосовхозе «Северинский» на 2000 нутрий 40-60 дневного возраста установили, что у животных после двукратной внутримышечной прививки в область бедра (первая доза - 1,0 смі, через 10 дней вторая - 1,5 смі) через 14 дней после ревакцинации формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий защиту всех привитых зверей против сальмонеллеза и колибактериоза. Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных нутрий через 9 месяцев после вакцинации, выявляемых в РА к S. typhimurium и Е. coli О1, колебался от 1:80 до 1:320.

3.3.4 Изучение иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против колибактериоза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях

При изучении влияния соотношения компонентов в ассоциированной вакцине на иммуногенную активность установили, что биопрепарат в соотношении антигенов колибактериоза и стрептококкоза 1:2 и 20% гидрата окиси алюминия после двукратной иммунизации белых мышей подкожно с интервалом 10 суток в дозе 0,5 см3 не вызывает у животных поствакцинальных осложнений и через 14 суток после ревакцинации обеспечивает 80 и 100%-ную защиту против стрептококкоза и колибактериоза соответственно.

При изучении безвредности и иммуногенности биопрепарата выявили, что после однократной внутримышечной прививки нутрий ассоциированной вакциной против колибактериоза и стрептококкоза в дозе 1,0 смі, а также двукратной ( первая доза 1,0 смі, вторая - 1,5 смі с интервалом 10 суток после первой) у животных через 14 суток после вакцинации и ревакцинации формируется напряжённый иммунитет, обеспечивающий 80% защиту против колибактериоза и стрептококкоза после однократной иммунизации и 100% после двукратной прививки, поствакцинальные осложнения не отмечали.

В результате производственных испытаний вакцины в племзверосовхозе «Северинский» на 1000 нутрий 40-60 дневного возраста установили, что у животных после двукратной внутримышечной прививки в область бедра (первая доза - 1,0 смі, через 10 дней вторая - 1,5 смі) формируется напряженный иммунитет, обеспечивающий защиту всех привитых против колибактериоза и стрептококкоза через 14 дней после ревакцинации. Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных нутрий в РА против колибактериоза составил 1:80-1:160, в РП против стрептококкоза - 1:8- 1:16.

3.3.5 Изучение иммунобиологических свойств ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в экспериментальных и производственных условиях

По разработанной нами технологии на основе штаммов E. coli О1, S. typhimurium, St. рneumoniae изготовили три опытные серии ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

При изучении влияния соотношения компонентов в биопрепарате на иммуногенную активность выявили, что ассоциированная вакцина в соотношении антигенов колибактериоза, сальмонеллёза, стрептококкоза 1:1:2 и 20% гидрата окиси алюминия после однократной иммунизации белых мышей подкожно в дозе 0,5 смі не вызывает у них поствакцинальных осложнений и через 14 суток после вакцинации обеспечивает 80%-ную защиту против трех инфекций, что отвечает предъявляемым требованиям (таблица 1).

Таблица 1 Влияние соотношения компонентов в ассоциированной вакцине против колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза нутрий на ее иммуногенность

Вакцина	Соотношение антигенов колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза	Адъювант, %	Безвредность	Результаты заражения возбудителями сальмонеллёза, стрептококкоза и колибактериоза через 14 суток
				S. typhimurium	Str. pneumoniae	E. coli О1
				Кол-во жив-х	Пало жив-х	Выжило жив-х	Кол-во жив-х	Пало жив-х	Выжило жив-х	Кол-во жив-х	Пало жив-х	Выи ло жив-х
Ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза нутрий	1:1:1	10	-	10	2	8	10	4	6	10	0	10
	1:1:2	20	-	10	0	10	10	2	8	10	0	10
	1:1:3	30	-	10	3	7	10	1	9	10	3	7
Контроль, непривитые	-	-	-	3	3	0	3	3	0	3	3	0

Таблица 2 Определение иммунизирующей дозы ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза нутрий

Вакцина	Иммуниз. доза, 109 м.к.	Кол-во нутрий	Вирулентный возбудитель, доза, млрд. м.к./1 смі	Результаты заражения возбудителями сальмонеллёза, стрептококкоза и колибактериоза через 14 суток
				S. typhimurium	Str. pneumoniae	E. coli О1
				Заболело жив-х	Пало жив-х	Выжило жив-х	Заболело жив-х	Пало жив-х	Выжило жив-х	Заболело жив-х	Пало жив-х	Выжило жив-х
Ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза нутрий	2,0 1,5 1,0 0,5 0,25	4 4 4 4 4	S. typhimurium, 50 млрд. м.к. Str. pneumoniae, E.coli О1 - 2 млрд. м.к.	0 0 0 1 2	0 0 0 0 1	4 4 4 4 3	0 0 1 2 3	0 0 1 1 2	4 4 3 3 2	0 0 0 1 2	0 0 0 1 1	4 4 4 3 3
Контроль, непривитые	-	4	50 млрд. м.к.	4	4	0
Контроль, непривитые	-	4	2 млрд. м.к.				4	4	0	4	4	0

Определили, что иммунизирующей дозой для ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза нутрий является 1,5 млрд. микробных клеток по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича, которая обеспечивает 100% защиту привитых зверей от вирулентных возбудителей колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза при 100% заболевании и гибели невакцинированных животных (таблица 2).

При определении иммуногенности трехвалентной вакцины выявили, что после однократной внутримышечной прививки нутрий в возрасте 40-50-дней данным препаратом в дозе 1,0 смі у животных через 14 суток формируется напряжённый иммунитет против трёх инфекций, обеспечивая 80%-ную защиту против сальмонеллёза и колибактериоза, а 60%-ную против стрептококкоза.

Установили, что ассоциированная вакцина против колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза нутрий при оптимальном соотношении компонентов с адъювантом после двукратной иммунизации зверей (первая доза 1,0 смі, вторая - 1,5 смі через 10 суток после первой) формирует напряжённый иммунитет через 14 суток после ревакцинации, обеспечивая 100%-ную защиту против колибактериоза, сальмонеллёза и 80% защиту против стрептококкоза, поствакцинальных осложнений не отмечали.

Учитывая, что одним из основных показателей вакцин является их безвредность, произвели оценку биопрепарата по данному показателю на белых мышах и нутриях при внутримышечном и подкожном методах введения соответственно в дозах, превышающих иммунизирующие в 5-10 раз. Установили, что ассоциированная вакцина против колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза нутрий является безвредной как для взрослых белых мышей, так и для молодняка нутрий с 30-дневного возраста. Все испытанные дозы ассоциированной вакцины не вызывали у подопытных животных в месте введения биопрепарата поствакцинальных осложнений (воспаление, припухлости, абсцессы, хромота).

Таким образом, в экспериментальных условиях ассоциированная вакцина против колибактериоза, сальмонеллёза и стрептококкоза нутрий после одно- и двукратной прививки зверей не вызывает поствакцинальных осложнений, обеспечивает формирование напряженного иммунитета и защиту.

После получения положительных результатов по иммунизации белых мышей, нутрий в лабораторных условиях ассоциированной трехвалетной вакциной, были проведены опыты по сравнительной эффективности данного биопрепарата с коммерческой вакциной против пастереллеза и стрептококкоза нутрий Ставропольской биофабрики в эпизоотическом очаге при ассоциативной инфекции колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза нутрий в племзверосовхозе «Северинский» Тбилисского района Краснодарского края.

С этой целью молодняк нутрий в возрасте 40-60 дней иммунизировали ассоциированной вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий двукратно: первая доза - 1,0 смі, вторая - 1,5 смі с интервалом 10 суток. Коммерческим биопрепаратом животных прививали в соответствии с «Временным наставлением по применению вакцины против пастереллеза и стрептококкоза нутрий» (таблица 3).

Из данных таблицы 3 видно, что при иммунизации нутрят в неблагополучном по колибактериозу, сальмонеллезу, стрептококкозу нутрий хозяйстве высокий процент эффективности во всех трех опытах получен при применении ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Сохранность поголовья составляла 99,19 - 99,71%. В тех же условиях вакцина против пастереллеза и стрептококкоза нутрий обеспечивала сохранность нутрят в 19,52±2,95%, что достоверно ниже (Р>0,001) аналогичного показателя при использовании ассоциированной вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий в 5,0 раз.

...