Сиалидазная активность и морфологические изменения опухолевых клеток нейрального и мышечного происхождения

Сравнительная характеристика активности лизосомальной сиалидазы в контрастных по метастатическому потенциалу клонах. Изучение структуры ядер в клетках потомства с высоким и низким метастатическим потенциалом при воздействии химиотерапевтических агентов.

Рубрика Медицина
Вид автореферат
Язык русский
Дата добавления 13.01.2018
Размер файла 695,3 K

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Рис. 15. Нейральная клеточная линия NB-1: I - контроль без обработки дб-цАМФ; II - контроль c обработкой дб-цАМФ; III - трансфекция вектором, не содержащем ген САПМ; без обработки дб-цАМФ; IV - трансфекция вектором, не содержащем ген САПМ; обработка дб-цАМФ; V - трансфекция вектором, содержащем ген САПМ; без обработки дб-цАМФ; VI - трансфекция вектором, содержащем ген САПМ; обработка дб-цАМФ. Активность ацетилхолинэстеразы выражена в процентах от контроля. По оси ординат - %. *p<0.001, **p<0.05 (см. пояснение в тексте).

дб-цАМФ также регистрировалась высокая активность АЭ достоверно отличавшаяся от активности АЭ как в клетках, подвергнутых только трансфекции вектором с САПМ (V), так и в клетках и подвергнутых трансфекции вектором с САМП, и обработанных дб-цАМФ (VI).

Результаты проведённого исследования указывают, что высокая активность САПМ приводит к выраженной активности такого функционального маркера дифференцировки нейральных клеток как ацетилхолинэстераза. Более значимое повышение в активности АЭ в клетках без повышенной экспрессии САПМ, но обработанных дб-цАМФ, можно объяснить активацией нескольких цАМФ-сопряжённых молекулярных факторов, которые усиливают действие друг друга.

Активность лизосомальной сиалидазы в клеточной линии NB-1 нейробластомы человека.

В связи с полученными результатами при исследовании активности сиалидазы, ассоциированной с плазматической мембраной,

Таблица 6 Активность лизосомальной сиалидазы в клеточной линии NB-1 нейробластомы человека

Клетки при различных экспериментальных условиях*.

Активность фермента в ед./мг белка.

Контрольная клеточная культура

0.884±0.139

Контрольная клеточная культура, с последующей обработкой д-цАМФ

1.114±0.215

Клетки, подвергнутые трансфекции “пустым вектором”

1.451±0.370

Клетки, подвергнутые трансфекции “пустым” вектором, с последующей обработкой дб-цАМФ

0.935±0.421

Клетки, подвергнутые трансфекции вектором, содержащим ген САПМ

1.510±0.353

Клетки, подвергнутые трансфекции вектором, содержащим ген САПМ, с последующей обработкой дб-цАМФ

1.640±0.491

*См. материалы и методы. Средние представлены результатом трёх экспериментов.

представляло несомненный интерес изучить активность лизосомальной сиалидазы (ЛС) в клеточной линии NB-1 нейробластомы человека при различных экспериментальных условиях, включая обработку клеток синтетическим аналогом циклического аденозинмонофосфата. Результаты, представленные в табл. 6, показывают, что в нейрональных клетках NB-1 выявляется спонтанная активность лизосомальной сиалидазы, которая в контрольной клеточной культуре составляет 0.884±0.139 ед./мг белка. В клетках, подвергшихся трансфекции, активность ЛС варьировала и была зарегистрирована на уровне 0.935±0.421 ед./мг белка для клеток после трансфекции “пустым” вектором с последующей обработкой д-цАМФ и максимальной для клеток, модифицированных вектором с САПМ и обработанных дб-цАМФ, в которых ЛС активность составила 1.640±0.491 ед./мг белка. Вместе с тем следует отметить, что при анализе средних показателей активности ЛС в исследованных клеточных культурах достоверных различий не было зарегистрировано.

Анализ молекулярно-генетических маркеров экспрессии сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной в клеточной линии NB-1 нейробластомы человека.

Верификация продукта транскрипции гена сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной в клетках NB-1 нейробластомы человека.

Исследование количества матричной РНК, экспрессируемого геном САПК, было проведено в клеточных культурах при условиях согласно стандартному протоколу (см. материалы и методы). При этом исследование количества матричной РНК в культурах, подвергшихся трансфекции вектором, содержащим ген САПМ, не проводилось. Количество мРНК (рис. 16), измеренное в контрольной клеточной культуре, подвергшейся обработке дб-цАМФ, превысило контрольное значение (клетки, не подвергавшиеся трансфекции и обработке дб-цАМФ) более чем в 4 раза (p<0.001). Измерение количества мРНК в клеточной культуре, подвергшейся трансфекции “пустым” вектором, выявило тенденцию в повышении уровня мРНК гена САПМ, однако, различия по сравнению с контролем оказались недостоверны, что позволяет говорить об отсутствии неспецифической индукции “пустым” вектором в повышении транскрипционной активности гена, кодирующего мРНК для САПМ.

Иммуноцитохимическая верификация клеток NB-1, положительных по экспрессии сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной.

Рис. 16. Количество матричной РНК (% от контроля), выявленной в нейральных клетках NB-1 нейробластомы человека, культивировавшихся при разных экспериментальных условиях (среда без ЭТС): I - контроль; II - контрольные клетки, обработанные дб-цАМФ; III - клетки, подвергшиеся трансфекции вектором, не содержащим ген САПМ; IV - клетки, подвергшиеся трансфекции, вектором, не содержащим ген САПМ. Обработаны дб-цАМФ. По оси ординат - %. *p<0.001 (см. пояснение в тексте).

Исследование методом иммуноцитохимического анализа показало, что в клеточных линиях NB-1 нейробластомы человека, не модифицированных трансфекцией для получения клеток с повышенной экспрессии гена САПМ, представляется затруднительным локализовать антиген, даже при использовании усиления сигнала с помощью иммуноцитохимических систем визуализации. По-видимому, это связано с тем, что САПМ - это фермент, который в количественном отношении незначительно представлен в клетке и не образует скоплений в клеточной мембране. В связи с этим представляет несомненный интерес возможность локализовать САПМ: находится ли фермент предпочтительно в теле нейральной клетки или её отростках. Результаты иммуноцитохимического анализа показали, что клетки NB-1 нейробластомы человека после трансфекции вектором, содержащим ген САПМ, значимо экспрессируют фермент, который выявляется с помощью моноклональных антител. При этом флюоресцентный сигнал выявляется не только в теле нейральной клетки, но и её отростке. По-видимому, синтезируясь и созревая в аппарате Гольджи и эндоплазматическом ретикулуме фермент, в дальнейшем, поступает из тела нейральной клетки в её отросток.

ВЫВОДЫ

1. Клоны клеток перевиваемой рабдомиосаркомы РА-23 крыс с высоким метастатическим потенциалом характеризуются низкой активностью лизосомальной сиалидазы, тогда как клоны клеток с низким метастатическим потенциалом характеризуются высокой активностью лизосомальной сиалидазы, что свидетельствует о важности этого фермента для метастазирования опухолевых клеток мышечного происхождения.

2. Клоны клеток перевиваемой рабдомиосаркомы РА-23 крыс с высоким и низким метастатическим потенциалом характеризуются, соответственно, более выраженными и менее выраженными изменениями структуры ядер в форме интерфазных мостов.

3. Морфологическая дифференцировка нейральной клеточной линии NB-1 нейробластомы человека сопровождается высокой активностью сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной, что свидетельствует о супрессивном значении этого фермента для опухолей нейрального происхождения.

4. Циклический аденозинмонофосфат повышает количество матричной РНК гена сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной и её активность в нейральной клеточной линии NB-1 нейробластомы человека, что свидетельствует о зависимости этих изменений от цАМФ-сопряжённой сигнальной системы.

5. Циклический аденозинмонофосфат не вызывает повышения количества матричной РНК гена лизосомальной сиалидазы и её активности в клетках NB-1 нейробластомы человека, что указывает на отличные от цАМФ-сопряжённой сигнальной системы механизмы геномной и протеомной регуляции этого фермента в нейральных клетках.

6. В нейральных клетках NB-1 нейробластомы человека с высокой активностью сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной регистрируется достоверное повышение активности ацетилхолинэстеразы, что доказывает возможность использования сиалидазы, ассоциированной с плазматической мембраной, как функционального маркера дифференцировки опухолевых клеток нейрального происхождения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Рекомендуется использование перевиваемой рабдомиосаркомы РА-23 крыс в качестве экспериментальной модели для тестирования противоопухолевых препаратов. При этом предлагается измерять активность лизосомальной сиалидазы, как маркера снижения метастатического потенциала опухолевых клеток.

2. Предлагается регистрировать активность сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной при тестировании антибластомных средств, разрабатываемых для супрессии опухолей нейрального происхождения.

3. В экспериментах по регенерации аксонов необходимо учитывать значения активности сиалидазы ассоциированной с плазматической мембраной как прогностического маркера.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кравцов В.Ю., Прошин С.Н., Федорцева Р.Ф., Треус В.В., Никифоров А.М., Яковлев А.Ф., Каминская Е.В., Вахтин Ю.Б. Частота клеток с полумостами в клеточных популяциях in vivo // Доклады Академии Наук. - 1996. - Т.350. - N.6. - С.831-833.

2. Vakhtin Yu.B., Kaminskaya E.V., Kravtsov V.Yu., Proshin S.N., Fedorova E.V., Yakovlev A.F. Genomic stability of tumour cells of rat rhabdomyosarcoma with different levels of tumorogenicity. In: 'Molecular determinants of cancer metastasis' // 50th Annual Symposium on Fundamental Cancer Research / Houston, Texas, USA. - 1997. - P.122.

3. Кравцов В.Ю., Прошин С.Н., Яковлев А.Ф., Каминская Е.В., Вахтин Ю.Б. Мосты и многополюсные митозы в популяциях клеток рабдомиосаркомы РА-23 крыс // Бюл. Эксп. Биол. Мед. - 1997. - Т.123. - N.5. - С.569-572.

4. Proshin S, Kaminskaya E, Vakhtin Yu, Kravtsov V, Yakovlev A. Cells with "trailed nuclei" as markers of the breakages of the chromosome bridges // XVIII International Congress of Genetics / Beijing, China. - 1998. - P.32.

5. Kaminskaya E.V., Vakhtin Yu.B., Fedorova E.V., Kravtsov V.Yu., Proshin S.N., Yakovlev A.F. Mutagenecity and tumorigenecity in cells of lung metastases of rat rhabdomyosarcomas // 17th International Cancer Congress / Rio de Janeiro - Brazil. - 1998. - P.216.

6. Прошин С.Н., Кравцов В.Ю., Ольнев М.Г., Яковлев А.Ф., Вахтин Ю.Б. Хромосомные мосты и "хвостатые" ядра в популяциях злокачественных клеток // Генетика. - 1998. - Т.34. - №.1. - С.61-64.

7. Патент на изобретение N 2111249 от 20 мая 1998 года. Способ селекции популяций клеток in vivo. Прошин С.Н., Кравцов В.Ю., Яковлев А.Ф., Федорцева Р.Ф., Бычкова Н.В., Вахтин Ю.Б., Никифоров А.М.

8.Забежинский М.А., Коваленко А.Л., Кветной И.М., Южаков В.В., Попучиев В.В., Вахтин Ю.Б., Каминская Е.В., Прошин С.Н., Попович И.Г., Зарипова Е.А., Анисимов В.Н. Влияние циклоферона на метастазирование карциномы лёгких Льюис у мышей и рабдомиосаркомы РА-23 у крыс // Вопросы онкологии. - 1999. - Т.45. - N.6. - С.650-654.

9. Proshin S., Yamaguchi K., Wada T., Miyagi T. Modulation of neuritogenesis by ganglioside-specific sialidase in human neuroblastoma NB-1 cells // The 23rd Japanese Carbohydrate Research Meeting / Yokohama, Japan. 2002. - P.237.

10.Proshin S., Yamaguchi K., Wada T., Miyagi T. Modulation of neuritogenesis by ganglioside-specific sialidase (Neu 3) in human neuroblastoma NB-1 cells // Neurochemical Research. - 2002. - Vol.27. - N7/8. - P.841-846.

11.Прошин С.Н. Физиологические эффекты сиалидаз в формировании пластичности нервной ткани // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - Том.7. - N.1. - С.1414-1418.

12.Прошин С.Н. Физиологическая роль ганглиозидов и сиалидаз при воздействии факторов ионизирующей радиации // Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. - 2007. - N. 2. - С.28-32.

13.Proshin S.N. Sialidase activity and metastatic characteristics of tumor cell clones in vivo of rat rhabdomyosarcoma RA-23 // J. Glycobiology. - 2007. - Vol.17. - N.11. - P.1228.

14.Прошин С.Н., Каминская Е.В., Лебедев А.А., Кравцов В.Ю., Шабанов П.Д. Активность лизосомальной сиалидазы в опухолевых клетках клонов рабдомиосаркомы РА-23 / III Съезд Фармакологов России: спец. вып. (сентябрь). С.1909 // Психофармакология и биологическая наркология. - 2007. - Т.7. - Ч.2. - 2084 с.

15.Прошин С.Н., Каминская Е.В., Лебедев А.А., Шабанов П.Д. Опухолевые клетки клонов рабдомиосаркомы РА-23 с высоким и низким метастатическим потенциалом отличаются по активности лизосомальной сиалидазы // Бюл. Эксп. Биол. Мед. - 2008. - Том.145. - N.3. - С.330-333.

16.Прошин С.Н., Каминская Е.В., Лебедев А.А., Байрамов А.А., Яковлев А.Ф., Шабанов П.Д. Метастатический потенциал и сиалидазная активность клеток опухолевых клонов рабдомиосаркомы РА - 23 крыс // Мед. Акад. Жур. - 2008. - Том.2. - С.26-29.

Размещено на Allbest.ru

...

Подобные документы

  • Содержание ДНК в ядрах опухолевых клеток и изменение числа хромосом. Атипизм обмена нуклеиновых кислот и углеводов. Изменение изоферментного спектра. Накопление в крови эмбриональных белков и ферментов. Изменение функционирования регуляторных систем.

    презентация [1,1 M], добавлен 15.09.2015

  • Отделы желудка. Состав желудочного сока. Клетки желез и их секреты. Механизм образования соляной кислоты в обкладочных клетках. Регуляция париетальных клеток. Функции гастрина. Виды пепсинов. Электрическая активность гладкомышечных клеток разных отделов.

    презентация [3,2 M], добавлен 13.12.2013

  • Главная задача и основы курса патологической физиологии. Морфологические типы лизосом и их наследственная патология. Характеристика липопигментов и синдром Чедиака-Хигаси. Причины и механизмы повреждения клеток, патология и изменения структуры ядра.

    реферат [24,0 K], добавлен 11.05.2009

  • Виды злокачественных и доброкачественных опухолей, их биологические особенности, атипизм размножения. Частота выявления болезни. Причины ее возникновения. Цитологическая и гистологическая дифференцировка опухолевых клеток. Их взаимодействие с организмом.

    презентация [25,4 K], добавлен 12.04.2014

  • Канцерогенез: определение и основные стадии опухолевой трансформации клеток, классификация и характеристика провоцирующих факторов. Вирусный онкогенез, клинические признаки. Биологические особенности и свойства злокачественных опухолевых клеток.

    презентация [1,0 M], добавлен 24.10.2013

  • Опухоли – группа генных болезней с неконтролируемой пролиферацией клеток, их классификация. Механизм действия радиационного канцерогенеза. Действие радиации на ДНК. Основные химические канцерогены. Защитные механизмы опухолевых клеток, их метаболизм.

    презентация [1,9 M], добавлен 17.06.2014

  • Сущностные характеристики нейрональной активности и исследование активности нейронов головного мозга. Анализ электроэнцефалографии, которая занимается оценкой биопотенциалов, возникающих при возбуждении мозговых клеток. Процесс магнитоэнцефалографии.

    контрольная работа [296,9 K], добавлен 25.09.2011

  • Роль физической активности в жизни человека. Физическая активность и контроль массы тела. Понятие умеренной или выраженной физической активности. Рак и сердечно-сосудистые заболевания: факторы риска их развития при понижении физической активности.

    реферат [30,5 K], добавлен 20.10.2009

  • Дифференциация стволовых клеток. Использование стволовых клеток в медицине: проблемы и перспективы. Пуповинная кровь как источник стволовых клеток. Лекарства будут испытывать на стволовых клетках. Эмбриональные и соматические стволовые клетки.

    реферат [851,0 K], добавлен 24.07.2010

  • Спектр активности антимикробных средств. Принцип действия антибактериальных, противогрибковых и антипротозойных препаратов. Способы получения антибиотиков. Структуры клетки, служащие мишенями для антибактериальных химиотерапевтических препаратов.

    презентация [1,1 M], добавлен 27.09.2014

  • Патологические процессы, влияющие на регуляцию деления клеток живого организма. Исследование происхождения опухолей головного мозга. Отличия опухолевых процессов головного мозга, их происхождение. Механизмы воздействия опухоли на головной мозг, ее виды.

    презентация [3,9 M], добавлен 19.06.2014

  • Понятие о стволовых клетках, сохранение их потенциала к развитию, анализ культур и способы получения. Использование стволовых клеток для лечения заболеваний. Стволовые клетки и проблемы генной и клеточной терапии. Потребности медицины в стволовых клетках.

    презентация [2,5 M], добавлен 31.03.2013

  • Врожденный сифилис - патологии, возникающие у ребенка внутриутробно до рождения при воздействии бледной трепонемы на ткани плода. Классификация, признаки раннего и позднего врожденного сифилиса; течение заболевания, симптомы, морфологические изменения.

    презентация [2,5 M], добавлен 05.06.2013

  • Внезапное увеличение смертности под действием излучения. Гипотезы происхождения излучения и его идентификации. Источники биологически активных излучений земного происхождения, химические объекты и их влияние на видоизменение клеток живых организмов.

    доклад [15,8 K], добавлен 16.12.2009

  • Проявления сахарного диабета, включающие различные морфологические изменения в органах и тканях. Микроангиопатия в микрососудистом русле. Экссудативное проявление сахарного диабета, выражающееся в образовании фибриновых шапочек на капиллярных петлях.

    презентация [1,3 M], добавлен 07.05.2014

  • Анатомо-физиологические особенности строения мышечного волокна. Электрические явления в мышце при сокращении. Параметры электромиограммы и их связь с функциональным состоянием мышцы (сила мышечного напряжения, степень утомляемости). Формы сокращения мыщц.

    реферат [32,5 K], добавлен 25.03.2009

  • Биоэлектрические явления в нервных клетках. Характеристика рецепторов, их виды и специфичность, понятия "нейромедиатор", "мессенджер", структура и механизм их действия. Влияние фармакологических агентов при лечении заболеваний центральной нервной системы.

    реферат [2,0 M], добавлен 27.08.2009

  • Влияние однократного воздействия атропина на активность карбоксипептидазы Н и фенилметилсульфонилфторид-ингибируемой карбоксипептидазы. Изучение активности КПН и ФМСФ-КП при однократном введении атропина в отделах головного мозга и надпочечниках крыс.

    статья [14,5 K], добавлен 19.07.2009

  • Морфологические проявления развития воспалительной реакции организма на туберкулезную инфекцию. Исследование ферментативных реакций, от активности которых зависит функциональное состояние всех органов и организма в целом. Роль клеток соединительной ткани.

    реферат [459,2 K], добавлен 15.09.2010

  • Электрография и ее задачи. Оценка функционального состояния органа по его электрической активности. Примеры использования метода эквивалентного генератора. Метод регистрации биологической активности головного мозга посредством записи биопотенциалов.

    презентация [1,6 M], добавлен 30.09.2014

Работы в архивах красиво оформлены согласно требованиям ВУЗов и содержат рисунки, диаграммы, формулы и т.д.
PPT, PPTX и PDF-файлы представлены только в архивах.
Рекомендуем скачать работу.