Рисунок 6. Хемотаксиса нейтрофилов здоровых детей (n=41) к живым суточным культурам бактерий и к супернатантам нейтрофилов доноров, полученных после инкубации с различными видами живых суточных культур бактерий.

После часовой инкубации нейтрофилов с живыми бактериями они утрачивали двигательную активность к бактериям того вида, которые они фагоцитировали, но при этом сохраняли способность целенаправленного движения в сторону других микроорганизмов (рис.7). Напротив, САН, полученные при активации бактериями, вызывали выраженный положительный хемотаксис интактных нейтрофилов.

Примечание * - достоверность различий с контролем при р0,01.

Рисунок 7. Индекс хемотаксиса нейтрофилов периферической крови здоровых детей (n=41), инкубированных с различными видами бактерий, к живым суточным культурам бактерий.

Наблюдаемые нами эффекты действия секреторных продуктов нейтрофилов на хемотаксическую реакцию донорских клеток, свидетельствуют с одной стороны, о том, что "запредельная бактериальная инвитровая нагрузка" приводит к блокаде рецепторов и развитию двигательного "паралича" именно к конкретному возбудителю - бактерии, а с другой - к секреции продуктов с кинетикотропной активностью именно к тому "микробу-контактеру".

В процессе фагоцитоза бактерий происходит изменение хемотаксической активности нейтрофилов не только здоровых детей, но и пациентов с травматической болезнью, в том числе при развитии гнойно-воспалительных осложнений. При этом характер хемотаксической реакции клеток и к живым бактериям, и к САН, полученным при стимуляции бактериями, является однотипным.

САН с кинетикотропным действием являются элементом саногенеза в патогенезе травматической болезни. Они, усиливая избирательно локомоторную функцию фагоцитов в отношении этиологического фактора, вызвавшего гнойно-воспалительный процесс, эффективно противостоят антифагоцитарному эффекту бактерий. Именно поэтому, течение травматической болезни, как правило, благоприятное (по нашим данным в 88,08% случаев). Тем не менее, у части пациентов (12% случаев) гнойно-воспалительные осложнения все же развиваются. Одной из вероятных причин, по нашим данным, является подавление способности фагоцитов к продукции как неспецифических (цитокины), так и специфических (секреторные продукты нейтрофилов) регуляторов воспаления под действием дополнительных индукторов (бактерий и их дериватов). Неспособность фагоцитов отвечать на дополнительную стимуляцию, в особенности, бактериальную, связана с тем, что гиперпродукция цитокинов, гормонов и других индукторов воспаления, уже в раннем посттравматическом периоде приводит к острейшему энергетическому и пластическому дефициту. При этом многократно угнетается способность клеток секретировать необходимые в данных условиях и в данной ситуации факторы, эффективно регулирующие функциональную активность участников воспалительной реакции, потенцируя дефекты цитокиновой сети, которые сказываются на эффективности противомикробной защиты организма.

Коррекция таких дефектов, очевидно, может способствовать повышению эффективности профилактических и лечебных мер.

Традиционно в лечении хирургических инфекций основную ставку, помимо вскрытия и дренирования гнойного очага, делают на антимикробную терапию, в частности на антибиотики. Антибактериальные препараты (АБП), при явном приоритете этиотропной направленности своего действия, согласно полученных нами данных также влияют на продукцию цитокинов.

Исследуя влияние амоксиклава, гентамицина, линкомицина и цефотаксима в соответствующих концентрациях (0,15 мг/мл, 0,05 мг/мл, 0,1 мг/мл и 0,5 мг/мл) на продукцию цитокинов клетками периферической крови у детей в острый период травматической болезни, нами установлено их неоднозначные эффекты.

На фоне гиперпродукции ИЛ-1 амоксиклав, гентамицин и линкомицин индуцировали дальнейший рост спонтанной выработки ИЛ-1 (рис.8). Наиболее выраженную стимуляцию продукции данного цитокина вызывал гентамицин. Аналогичные результаты были получены при оценке влияния анти биотиков и на ЛПС-стимулированную продукцию ИЛ-1. Добавление амоксиклава, гентамицина и линкомицина к культуре клеток достоверно увеличивало ЛПС-секрецию ИЛ-1. Исключение составил цефотаксим, под действием которого снижалась как спонтанная, так и ЛПС-стимулированная продукция ИЛ-1.

Примечание: # - достоверные различия с нормой при уровне значимости р<0,001, * - достоверные различия с продукцией без АБП при уровне значимости р<0,01.

Рисунок 8. Показатели спонтанной и ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-1 клетками периферической крови здоровых (n=15) и травмированных детей (n=15) под действием антибактериальных препаратов.

Примечание: # - достоверные различия с нормой при уровне значимости р<0,01, * - достоверные различия с продукцией без АБП при уровне значимости р<0,05.

Рисунок 9. Показатели спонтанной и ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-10 клетками периферической крови здоровых (n=15) и травмированных детей (n=15) под действием антибактериальных препаратов.

Все антибиотики на фоне гиперпродукции ИЛ-10 в большей или меньшей степени стимулировали его спонтанную секрецию (рис.9). Максимум стимуляции инициировал цефотаксим. ЛПС-стимулированная секреция ИЛ-10 под действием всех АБП также достоверно увеличивалась.

Уровень спонтанной и ЛПС-продукции ИЛ-8 под влиянием практически всех изучаемых антибиотиков не изменялся (рис.10). Исключение составили гентамицин и линкомицин. Первый, из них, достоверно стимулировал спонтанный синтез цитокина, а второй - угнетал его ЛПС-продукцию. Подобная толерантность клеток к действию антибиотиков в отношении секреции ИЛ-8, на наш взгляд, обусловлена достаточно высоким уровнем его базальной и ЛПС-стимулированной продукции, уже в раннем посттравматическом периоде, что свидетельствует о "хемокиновой" гиперактивации in vivo.

Примечание: # - достоверные различия с нормой при уровне значимости р<0,001, * - достоверные различия с продукцией без АБП при уровне значимости р<0,05.

Рисунок 10. Показатели спонтанной и ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-8 клетками периферической крови здоровых (n=15) и травмированных детей (n=15) под действием антибактериальных препаратов.

Примечание: # - достоверные различия с нормой при уровне значимости р<0,02, * - достоверные различия с продукцией без АБП при уровне значимости р<0,05.

Рисунок 11. Показатели спонтанной и ЛПС-стимулированной продукции ИЛ-4 клетками периферической крови здоровых (n=15) и травмированных детей (n=15) под действием антибактериальных препаратов.

Несколько иное влияние АБП оказывали на продукцию ИЛ-4 (рис.11). Амоксиклав, гентамицин, линкомицин и цефотаксим угнетали его спонтанную и ЛПС-стимулированную продукцию. Исключение составил лишь линкомицин, который инициировал увеличение ЛПС-секреции ИЛ-4, восстанавливая ее до нормального уровня.

Продукция ИНФ-б под действием антибактериальных препаратов практически не менялась.

Таким образом, изучаемые антибиотики являются модуляторами цитокин-продуктивной активности клеток, в первую очередь, фагоцитов, участвующих в формировании посттравматической воспалительной реакции. Амплитуда и направленность этой модуляции, безусловно, детерминирует и состояние эффекторного звена иммунитета, т.е. тех факторов, которые определяют устойчивость организма и непосредственно участвуют в элиминации патогена. В этой связи важно было определить возможность оценки функционального состояния фагоцитарного звена, в целом, и хемотаксиса в частности, в качестве интегрального критерия оценки эффективности этиотропной терапии. Для этой цели мы изучили влияние АБП на хемотаксис нейтрофилов периферической крови детей с травматической болезнью к живым суточным бактериальным культурам и изучаемым АПБ.

Установлено, что АБП инициируют положительную хемотаксическую реакцию нейтрофилов периферической крови здоровых детей и пациентов с неосложненной механической травмой, которая совпадает с таковой к живым суточным культурам бактерий, наиболее часто вызывающих хирургическую инфекции. Феноменологическое сходство целенаправленной двигательной активности нейтрофилов к бактериям и антибактериальным препаратам, на наш взгляд, обусловлено происхождением антибиотиков.

Интересные данные были получены при изучении влияния антибактериальных препаратов на двигательную активность нейтрофилов в условиях непосредственного контакта (табл.3). Все исследуемые АБП достоверно угнетали целенаправленную двигательную активность нейтрофилов здоровых детей к ИЛ-1, ИЛ-8 и лейкинферону. Максимальный эффект оказывал амоксиклав.

Хемотаксис нейтрофилов к С5а-компоненту комплемента также угнетался под действием амоксиклава и линкомицина, только с меньшей амплитудой. Гентамицин и линкомицин не вызывали достоверных изменений хемотаксической реакции нейтрофилов к С5а.

Таблица 3. Индекс хемотаксиса нейтрофилов периферической крови здоровых детей (n=41) к бактериям и небактериальным хемоаттрактантам под действием антибактериальных препаратов

Примечание: * - достоверные различия с контролем при уровне значимости р0,05.

Хемотаксический ответ нейтрофилов периферической крови здоровых детей на бактерии под влиянием антибиотиков отличался разнонаправленностью. Антибактериальные препараты в той и или иной степени вызывали угнетение хемотаксиса Нф к взвеси суточных культур стафилококка, протея и синегнойной палочки, при этом линкомицин максимально тормозил хемотаксис к стафилококку и синегнойной палочке, а цефотаксим - к протею. Противоположный эффект антибиотики оказывали на хемотаксический ответ Нф к взвеси суточной культуры E. coli. В отличие от грамположительных и других грамотрицательных бактерий, целенаправленная двигательная активность к ней нейтрофилов под действием всех исследуемых антибиотиков увеличивалась. Достоверно более высокий уровень хемотаксической реакции к E. coli инициировал цефотаксим.

Итак, антибиотики инициируют положительную хемотаксическую реакцию нейтрофилов периферической крови здоровых детей, которая совпадает с таковой к живым суточным культурам бактерий, являющихся, как правило, возбудителями хирургической инфекции. При непосредственном контакте с нейтрофилами периферической крови здоровых детей антибактериальные препараты оказывают блокирующее действие на целенаправленную двигательную активность данных клеток. Данный феномен, по нашему мнению, связан с тем, что, антибиотики конкурируют с бактериями и другими хемоаттрактантами за общие рецепторы нейтрофилов, количество которых на покоящихся клетках невелико, вызывая тем самым рецепторную блокаду и ослабление хемотаксической реакции нейтрофилов.

Локомоторная активность нейтрофилов периферической крови пациентов изменялась и после применения антибиотиков по поводу гнойно-воспалительных осложнений травматической болезни. Антибактериальные препаратов усугубляли развивающиеся после механического повреждения нарушения локомоторной функции нейтрофилов (табл.4). Нами зарегистри ровано достоверное снижение хемотаксической реакции к С5а, ИЛ-1, ИЛ-8 и лейкинферону, а также к живым суточным культурам стафилококка, протея и синегнойной палочки. Динамика уровня хемотаксиса нейтрофилов к кишечной палочке характеризовалась лишь тенденцией к повышению.

Таблица 4. Хемотаксис нейтрофилов периферической крови здоровых детей и пациентов с осложненным течением травматической болезни, получавших антибактериальные препараты

Примечание: * - достоверные различия с нормой при уровне значимости р<0,001, # - достоверные различия с контролем при уровне значимости р<0,001.

Таким образом, фагоциты, являющиеся универсальным эффектор гомеостаза, в условиях инфекционного воспаления при травме становятся еще и мишенью для негативного воздействия антибактериальных препаратов, что еще раз подтверждает необходимость коррекции функции этих клеток, в том числе и их двигательных нарушений при травматической болезни.

Эти обстоятельства и определили следующую задачу нашего исследования - определить возможность индивидуального подбора ряда иммунотерапевтических препаратов для коррекции нарушений миграционной способности фагоцитов у детей с травмой на основе результатов влияния их различных доз на хемотаксис клеток in vitro.

Исследования проведены у 30 здоровых детей и 91 ребенка с ТБ, которые были разделены на 4 группы: I группа - 30 детей - контрольная (с традиционным лечением), II группа - 30 пациентов получали на фоне традиционного лечения метилурацил (М), III группа - 15 детей, получавших нуклеинат натрия (НН) и IV группа - 25 детей, получавших АТФ.

Подбор больных в группы осуществлялся методом сплошной выборки. Группы сравнения были идентичны по возрасту, полу, характеру и течению травмы, по виду хирургического лечения (ч²>3,841). Выбор препаратов для иммунокорригирующей терапии был обусловлен их доступностью и низкой стоимостью препаратов, широким применением в клинической практике и отсутствием побочных эффектов.

Для оценки кинетикотропного эффекта препаратов in vitro использовали следующие концентрации: метилурацила - 2,0, 1,5, 1,0, 0,5 мг/мл; нуклеината натрия - 0,3, 0,23, 0,15, 0,03 мг/мл, АТФ - 1,0, 0,75, 0,5, 0,1 мг/мл среды 199. После 3-х (18-ти) часовой инкубации нейтрофилов и моноцитов с препаратом определялась его иммунотропная эффективность по отношению уровня показателя хемотаксиса до и после инкубации клеток с препаратом.

Прежде чем приступить к изучению влияния М, НН и АТФ на кинетическую функцию нейтрофилов и моноцитов периферической крови травмированных пациентов, мы исследовали действие препаратов in vitro на фагоциты здоровых детей.

Почти все исследуемые препараты у здоровых детей вызывали in vitro достоверное угнетение целенаправленной двигательной активности нейтрофилов.

Далее мы сопоставили степень нарушения кинетической функции нейтрофилов и моноцитов во всех исследуемых группах (показатель больного/показатель нормы - 1) 100%) с тяжестью посттравматического эндотоксикоза, оцениваемой по уровню лейкоцитарного индекса интоксикации, являющегося интегральным показателем, отражающим состояние иммунной системы в целом (табл.5). Степень нарушения локомоторной функции нейтрофилов и моноцитов превышала 40%, что соответствовало второму уровню изменения данного параметра и позволяло отнести пациентов всех исследуемых групп к иммунологически компроментированным и нуждающимся в назначении иммунокорректоров. Все наблюдаемые нами пациенты имели тяжелую степень эндотоксикоза (ЛИИ превышал 3,0 усл. ед.). При оценке корреляционных взаимоотношений выявлена прямая связь (r= + 0,86, р<0,01) между хемотаксической функцией нейтрофилов и интоксикацией и обратная связь между интоксикацией и хемотаксисом моноцитов (r= - 0,95, р<0,01). Высокий уровень ЛИИ является дополнительным маркером посттравматической иммунодепрессии и подтверждает необходимость назначения корректоров с детоксицирующими свойствами.

Таблица 5. Степень нарушения локомоторной функции фагоцитов и степень тяжести эндотоксикоза в исследуемых группах пациентов

Примечание: * - достоверные различия с контролем при р<0,01.

Изучение влияния различных концентраций метилурацила, нуклеината натрия и АТФ на кинетическую функцию нейтрофилов и моноцитов периферической крови проводили у детей в острый период травматической болезни.

У всех 30 детей с травматической болезнью, у которых в последующем был применен метилурацил (табл.6), в острый период обнаружено достоверное (р<0,001) снижение исходного уровня хемотаксиса нейтрофилов к стандартному хемоаттрактанту (С5а-компоненту комплемента) в 1,67 раза (степень изменения показателя - 42,9%), а моноцитов - в 1,86 раза (степень изменения показателя - 45,5%) в сравнении со здоровыми детьми. Лейкоцитарный индекс интоксикации - 3,15 усл. ед.

Таблица 6. Индекс стимуляции хемотаксической функции фагоцитов различными концентрациями метилурацила in vitro (n=30)

Примечание: * - достоверные различия минимальной концентрации препарата с более высокими, при уровне значимости р<0,01.

Максимальным стимулирующим эффектом на сниженную локомоторную функцию, как нейтрофилов, так и моноцитов, обладала минимальная концентрация метилурацила - 0,5 мг/мл, которая эффективно стимулировала угнетенный хемотаксис в 21 наблюдений на модели нейтрофилов и у 19 пациентов - на модели моноцитов. Из них у 9 пациентов кинетическая активность ПМЯЛ и у 5 - моноцитов усиливалась и под влиянием более высоких концентраций метилурацила. Однако, ее уровень не достигал величины показателей хемотаксиса, индуцированного минимальной дозой препарата.

У всех 15 пациентов, которые впоследствии получали НН (табл.7), в остром периоде после травмы мы также регистрировали достоверное (р<0,001) снижение исходного уровня хемотаксиса нейтрофилов к стандартному хемоаттрактанту в 1,75 раза (степень изменения показателя - 42,9%), а моноцитов - в 2,02 раза (степень изменения показателя - 47%) в сравнении со здоровыми детьми и высокий ЛИИ - 3,01 усл. ед.

Таблица 7. Индекс стимуляции хемотаксической функции фагоцитов различными концентрациями нуклеината натрия in vitro

Примечание: * - достоверные различия минимальной концентрации препарата с более высокими, при уровне значимости р<0,01.

Максимальный стимулирующий эффект на угнетенную двигательную функцию нейтрофилов и моноцитов НН оказывал в минимальной концентрации - 0,03 мг/мл. У 6 пострадавших кинетическую функцию усиливали и более высокие концентрации препарата. Однако, ее уровень не достигал показателей целенаправленной миграции, индуцированной минимальной дозой препарата.

У пациентов IV наблюдаемой группы с механической травмой (табл.8), получавших АТФ, в остром периоде выявлено достоверное (р<0,001) снижение направленной миграции нейтрофилов в 1,58 раза (степень нарушения хемотаксиса - 42,2%), а моноцитов - в 2,32 раза (степень нарушения функции - 54,5%) и высокий лейкоцитарный индекс интоксикации - 4,32 усл. ед.

Таблица 8. Индекс стимуляции хемотаксической функции фагоцитов различными концентрациями АТФ in vitro

Примечание: * - достоверные различия минимальной концентрации препарата с более высокими, при уровне значимости р<0,01.

Максимальную стимуляцию угнетенной кинетической функции нейтрофилов в 22 наблюдениях и моноцитов - в 21 случаях вызывала минимальная концентрация АТФ - 0,1 мг/мл.

Восстановление хемотаксиса фагоцитов периферической крови под действием той или иной концентрации метилурацила, нуклеината натрия и АТФ in vitro мы расценивали как критерий, отражающий положительное действие этого препарата в указанной дозе. Поэтому в выборе дозы для лечения пациентов мы ориентировались на максимальный уровень инвитровой стимуляции хемотаксической функции нейтрофилов. Как правило, это были низкие концентрации препарата (метилурацил - в 93% случаев, нуклеинат натрия - в 95% наблюдений, АТФ - в 96% случаев).

Для расчета лечебной дозы использовалась концентрация препарата, которая in vitro вызывала максимальную инициацию двигательной активности, как нейтрофилов, так и моноцитов. Расчет индивидуальной дозы препарата осуществляли по формуле¹ (Чукичев А.В., 1984):

0,075Н (М) ЧСЧmЧV

D= - --------------------------, где

10⁸

D - доза препарата (мг); 75 - объем крови на 1 кг массы тела в (мл/кг); m - масса тела (кг); С - концентрация исследуемого препарата в качестве хемокина (мг/мл); Н (М) - количество клеток в 1 мл крови (клеток/мл); 10⁸ - количество клеток в лунке; V - объем лунки (0,02 мл).

Индивидуальные подобранные дозы метилурацила и нуклеината натрия назначали per os трехкратно в течение 10 дней, АТФ - в/мышечно, однократно в течение 10 дней.

Максимально высокий процент совпадений действия индивидуально подобранных доз in vitro и in vivo отмечен у метилурацила и АТФ на модели "препарат + нейтрофилы" (табл.9).

Оценку собственно эффекта иммунокорректоров по абсолютным значениям показателей локомоторной функции фагоцитов и ЛИИ проводили по формуле - [ (Р_ис - Р_m) Р_ис] - [ (Р_ис - Р_м) Р_ис] 100%, (Земсков А. М., 2006), где

Р ис - значение параметра в абсолютных величинах до начала лечения, Р т - то же после традиционной терапии, Р м - то же, после проведения традиционного лечения с модулятором.

Таблица 9. Результаты применения индивидуально подобранных доз препаратов и собственного эффекта иммунокорректора

Наибольший вклад в восстановление хемотаксиса данных клеток и нормализацию лейкоцитарного индекса интоксикации отмечен у АТФ, при этом более активно на коррекцию реагировало нейтрофильное звено, что опосредованно приводило к нормализации ЛИИ. Эффект метилурацила и нуклеината натрия был аналогичен АТФ по направленности, но отличался меньшей амплитудой.

Для сравнительной оценки эффективности традиционного лечения и предлагаемой технологии с использованием способа подбора индивидуальных доз иммунотропных препаратов мы изучали: лабораторные критерии - показатели кинетической функции фагоцитов, лейкоцитарный индекс интоксикации; эффективность профилактического действия препаратов, с вычислением показателя защищенности = (1 - Р₁/Р₂) 100%, где Р₁ - количество пациентов с осложнениями (в %) в опытной группе, Р₂ - количество пациентов с осложнениями (в %) в контрольной группе (Семененко Т.Н., 1987); безопасность применения препаратов, о которой судили по отсутствию побочных реакций (аллергические проявления, зуд, жжение, недомогание, головная боль, отрицательная динамика гематологических параметров).

Таблица 10. Показатели кинетической функции фагоцитов и ЛИИ у пациентов с травматической болезнью, получавших различные кинетикотропные препараты

Примечание: * - достоверные различия с контролем при р<0,05, # - достоверные различия средних исследуемых величин с аналогичными показателями до коррекции при р<0,05.

Исследования показали (табл.10), что при традиционном способе лечения (без корректоров) происходило достоверное усиление хемотаксиса, как нейтрофилов, так и моноцитов, однако показатели локомоторной реакции данных клеток не восстанавливались до уровня здоровых детей. При этом уровень эндотоксикоза оставался значительным.

Применение в схеме традиционной терапии травматической болезни индивидуально подобранных доз иммунокорректоров способствовало не только восстановлению, но и стимуляции хемотаксической функции фагоцитов и нормализации показателя эндотоксикоза. Максимальный эффект стимуляции хемотаксиса фагоцитов и нормализации ЛИИ отмечен под влиянием АТФ. При этом индекс стимуляции хемотаксиса фагоцитов in vivo (индивидуальная доза) почти во всех наблюдениях превосходил аналогичный in vitro. Более высокий показатель защищенности демонстрировали метилурацил и нуклеинат натрия.

Ни в одном случае применения метилурацила, нуклеината натрия и АТФ в индивидуально подобранных дозах не было отмечено ни местных, ни общих побочных реакций, не зарегистрировано также отрицательной динамики гематологических параметров. После 10-дневного курса корригирующей терапии пациенты находились под наблюдением в течение месяца.

Выводы

1. В процессе развития травматической болезни у детей формируется иммунодефицитное состояние, характеризующееся изменением клеточного и гуморального звеньев иммунной системы, наиболее выраженном в остром периоде болезни и при развитии гнойно-воспалительных осложнений.

2. Клетки периферической крови здоровых детей обладают цитокин-продуцирующей активностью. Стандартные митогены стимулируют продукцию цитокинов, амплитуда и направленность которой имеют феноменологическое сходство у оппозитных пулов цитокинов, что свидетельствует о состоятельности регуляторных и эффекторных функций цитокиновой системы в норме. Механическое повреждение костной ткани индуцирует гиперпродукцию провоспалительных цитокинов и развитие дисбаланса в цитокиновой регуляторной сети, преимущественно в системе хемокиновых интерлейкинов.

3. Нейтрофилы и моноциты периферической крови здоровых детей проявляют выраженную хемотаксическую активность к таким регуляторам иммунного воспаления как ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-8, ГМ-КСФ, смесь ИНФб2 (c) б2 (d), лейкинферон, А5-фракция пептидосодержащих секреторных продуктов нейтрофилов, активированных латексом, к живым суточным культурам бактерий, наиболее часто вызывающих хирургическую инфекцию, к антибактериальным препаратам - амоксиклаву, гентамицину, линкомицину, цефотаксиму. Непосредственный контакт биорегуляторов, микроорганизмов и антибактериальных препаратов вызывает двигательную деактивацию данных клеток.

4. Механическая деструкция костной ткани приводит к угнетению хемотаксиса и хемокинеза нейтрофилов и моноцитов как к стандартному хемоаттрактанту, так и к изучаемым провоспалительным цитокинам, наиболее выраженному в остром периоде травматической болезни и при развитии гнойно-воспалительных осложнений. Развивающаяся системная мобилизационная блокада фагоцитов детерминирована гиперпродукцией провоспалительных цитокинов, в частности, хемокинов.

5. Увеличение концентрации кальцитонина и С-телопептидов коллагена I типа и снижение уровня остеокальцина в сыворотке крови детей с травматической болезнью свидетельствуют об усилении процессов костной резорбции и угнетении способности к остеобразованию с максимальной выраженностью в катаболическую фазу посттравматического периода.

6. Локомоторные дисфункции фагоцитов, развивающиеся в посттравматическом периоде у детей, обусловливают интенсивность резорбтивных процессов, которая коррелирует с уровнем продукции провоспалительных цитокинов.

7. В условиях контакта с микроорганизмами, вызывающими двигательный "паралич" нейтрофилов, данные клетки секретируют продукты, избирательно усиливающие их локомоторную функцию в отношении этиологического фактора, вызвавшего гнойно-воспалительный процесс в поврежденной ткани.

8. Антибактериальные препараты, применяемые в качестве средств этиотропной терапии при лечении гнойно-воспалительных осложнений травматической болезни у детей, приводят к цитокин-продуктивной активности фагоцитов, что усугубляет двигательные дисфункции данных клеток.

9. Препараты с иммунотропной активностью (метилурацил, нуклеинат натрия и АТФ) вызывают снижение целенаправленной двигательной активности нейтрофилов и моноцитов in vitro у здоровых детей и обладают выраженным кинетикостимулирующим действием на фагоциты детей с травматической болезнью.

10. Максимальная эффективность кинетикостимулирующего действия метилурацила, нуклеината натрия и АТФ достигается подбором индивидуальной дозы, основанном на оценке хемотаксиса фагоцитов к стандартному хемоаттрактанту под действием его различных концентраций in vitro, что позволяет оптимизировать процесс лечения больных с повреждением опорно-двигательного аппарата.

Практические рекомендации

1. Для комплексной оценки иммунных дисфункций при травматической болезни у детей мы рекомендуем исследование цитокинового профиля, который обязательно должен включать хемокиновые интерлейкины (ИЛ-8, ИЛ-4 и др.).

2. Для оценки репаративных процессов и выраженности остеогенной резорбции при механической травме необходимо исследование маркеров костного ремоделирования и резорбции в динамике болезни.

3. С целью своевременной диагностики дефектов целенаправленной миграции фагоцитов при травме и проведении патогенетически обоснованного лечения рекомендуется проводить исследование хемотаксической активности (спонтанной миграции, хемокинеза и хемотаксиса) нейтрофилов и моноцитов в острый период болезни

4. При обнаружении в раннем посттравматическом периоде нарушений хемотаксической активности фагоцитов необходимо назначение препаратов с кинетикотропной свойствами. При выборе таких препаратов целесообразно ориентироваться на действие их различных концентраций на хемотаксическую активность фагоцитов in vitro. При клиническом применении препарата целесообразно использовать концентрацию препарата, оказывающую максимальный кинетикотропный эффект. Лечебная доза определяется с обязательным учетом этой концентрации, абсолютного количества нейтрофилов (моноцитов) крови, ОЦК и массы тела по предлагаемой формуле:

 0,075Н (М) СmV

D = - --------------------------------, где

10⁸

D - доза препарата (мг), 0,075 - объем крови на 1 кг массы тела в л/кг; m - масса тела (кг); С - концентрация исследуемого препарата (мг/мл); Н (М) - количество клеток в 1 мл крови (клеток/мл); 10⁸ - количество клеток в лунке; V - объем лунки (0,02 мл).

5. При развитии гнойно-воспалительных осложнений травматической болезни и назначении антибактериальных препаратов необходимо в схему традиционной терапии включать препараты с кинетикотропной активностью.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Злакоманова, О.Н. Влияние травмы на спонтанную миграцию фагоцитов / О.Н. Злакоманова // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях: тез. докл. XIV Рос. науч. конф. - Челябинск, 2000. - 40 с.

2. Студеникина, Ю.Н. Локомоторные реакции нейтрофилов в ответ на бактериальные хемоаттрактанты / Ю.Н. Студеникина, О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка, А.Н. Котляров // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях: тез. докл. XIV Рос. науч. конф. - Челябинск, 2000. - 113 с.

3. Студеникина, Ю.Н. Исследование специфического реагирования нейтрофилов в ответ на бактериальные хемоаттрактанты как метод идентификации возбудителя хирургической инфекции / Ю.Н. Студеникина, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка, О.Н. Злакоманова // Актуальные проблемы медицинской науки и профессионального образования: тр. науч. сессии ЧелГМА. - Челябинск, 2000. - С. 20-22.

4. Чукичев, А.В. Прогнозирование эффективности нуклеината натрия у детей с травматической болезнью / А.В. Чукичев, О.Н. Злакоманова // Современные технологии в биологии и медицине: материалы конф., посвящ. 20-летию ЦНИЛ ЧелГМА / под ред.В. В. Турыгина, А.В. Зурочки, А.В. Чукичева. - Челябинск, 2000. - С.93-95.

5. Злакоманова, О.Н. Стимуляция хемотаксической активности фагоцитов у детей с переломами трубчатых костей препаратом АТФ / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Новые технологии и фундаментальные исследования в медицине: материалы III Рос. межрегион. конф., посвященной 60-летнему юбилею ЧелГМА - Челябинск, 2002. - С.87-88.

6. Злакоманова, О.Н. Хемокинетикотропные свойства АТФ / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А, В. Зурочка // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тез. докл. III Общерос. конф. с междунар. участием. - Сочи, 2002. - 42 с.

7. Злакоманова, О.Н. Подбор индивидуальной дозы препаратов для коррекции дефектов хемотаксиса у детей с травматической болезнью / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии в педиатрии. Материалы Российской научно-практической конференции. - Оренбург, 2003. - С.73-74.

8. Зурочка, А.В. Цитокиновая регуляция миграционной активности фагоцитов при травматической болезни у детей / А.В. Зурочка, А.В. Чукичев, О.Н. Злакоманова // Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии в педиатрии: Материалы Рос. науч. - практ. конф. - Оренбург, 2003. - С.95-97.

9. Злакоманова, О.Н. Подбор индивидуальной дозы иммунопрепаратов для коррекции дефектов хемотаксиса у детей с травматической болезнью / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Биохимия: от исследования молекулярных механизмов - до внедрения в клиническую практику и производство: материалы межрегион. конф. биохимиков Урала, Западной Сибири и Поволжья / под ред.В.П. Твердохлиба. Оренбург, Юж. Урал, 2003. - С.489-491.

10. Злакоманова, О.Н. Посттравматические дефекты кинетических функций фагоцитов / О.Н. Злакоманова // Мед. иммунология. - 2003. - Т.5, № 3-4. - 398.

11. Злакоманова, О.Н. Коррекция нарушений миграционной функции фагоцитов у детей с травматической болезнью препаратом АТФ / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Мед. иммунология. - 2003. - Т.5, № 3-4. - 399 с.

12. Злакоманова, О.Н. Двигательные нарушения фагоцитов у детей с травмой / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Проблемы популяционного здоровья: материалы 1-й междунар. конф. - Челябинск; Монреаль, 2003. - С.110-112.

13. Чукичев, А.В. Исследование локомоторной функции фагоцитов - перспективный путь оптимизации диагностики и лечения заболеваний / А.В. Чукичев, О.Н. Злакоманова, А.В. Зурочка // Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения: тр. науч. - практ. конф. - . Трехгорный, 2003. - С.53-55.

14. Злакоманова, О.Н. Двигательные дисфункции фагоцитов у детей с травматической болезнью и их коррекция метилурацилом и АТФ / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Материалы III конференции иммунологов Урала. - Челябинск, 2003. - № 1 (3). - 89 с.

15. Злакоманова, О.Н. Использование хемотаксического метода исследования для подбора дозы и оценки эффективности иммунотропных препаратов у детей с травматической болезнью / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Вестн. Акад. Рос. энциклопедий. - 2003. - № 4 (10). - С.57-59.

16. Злакоманова, О.Н. Влияние цитокинов на хемотаксис фагоцитов при травме / О.Н. Злакоманова // Объединенный Иммунологический Форум: тез. докл. - Екатеринбург, 2004. - С.58.

17. Злакоманова, О.Н. Обоснование применения АТФ в лечении детей с травматической болезнью / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Современные проблемы диагностики и лечения дисбактериозов: материалы конф., посвящ.10-летию НПЦ диагностики, лечения и профилактики дисбактериозов НИИ иммунологии ЧелГМА и 60-летию ГОУ ВПО “Челябинская государственная медицинская академия МЗ РФ”. - Челябинск, 2004. - С.71-73.

18. Злакоманова, О.Н. Влияние антибиотиков на хемотаксическую функцию нейтрофилов / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка, Е.А. Елизарьева // Мед. иммунология. - 2004. - Т.6, № 3-5. - С.230-231.

19. Злакоманова, О.Н. Хемокинетикотропные эффекты антибиотиков / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка, Е.А. Елизарьева // Актуальные проблемы медицинской науки и практического здравоохранения: тр. науч. сессии, посвящ.60-летию ЧелГМА. - Челябинск, 2004. - С.141-144.

20. Злакоманова, О.Н. Хемотаксический ответ нейтрофилов, инкубированных с антибиотиками / О.Н. Злакоманова, А.В. Зурочка, А.В. Чукичев, Т.В. Журавлева, П.П. Городечный // Материалы IV конференции иммунологов Урала. - Уфа, 2005. - № 1 (4). - С.130-131.

21. Злакоманова, О.Н. Регуляторные эффекты цитокинов при исследовании двигательных функций фагоцитов у детей с травматической болезнью / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка // Цитокины и воспаление. - 2006. - Т.5, № 2. - С.30-36.

22. Долгушин, И.И. Хемотаксис фагоцитов: клиническое значение / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, А.В. Чукичев, О.Н. Злакоманова. - Челябинск: Изд-во ЧелГМА, 2006. - 183 с.

23. Злакоманова, О.Н. Хемотаксис фагоцитов: значение в подборе индивидуальной дозы лекарственного препарата для коррекции локомоторных дисфункций фагоцитов у детей с травмой / О.Н. Злакоманова, А.В. Зурочка, А.В. Чукичев // Мед. иммунология. - 2007. - Т.9, № 4-5. - С.479-493.

24. Злакоманова, О.Н. Подбор индивидуальной дозы и оценка эффективности иммунотропных препаратов у детей с травматической болезнью с использованием хемотаксического метода исследования / О.Н. Злакоманова // Дет. хирургия. - 2007. - № 6. - С.6-9.

25. Чукичев, А.В. Дисбаланс цитокинов и состояние маркеров костного метаболизма в посттравматическом периоде у детей / А.В. Чукичев, И.И. Долгушин, О.Н. Злакоманова, Ю.И. Чепуров // Дет. хирургия. - 2007. - № 6. - С.9-13.

26. Злакоманова, О.Н. Оценка хемокинетикотропной активности антибиотиков в норме и при гнойно-воспалительных осложнениях травматической болезни у детей / О.Н. Злакоманова // Вестн. новых мед. технологий. - 2008. - № 1-3. - С.112-116.

27. Злакоманова, О.Н. Исследование цитокинового профиля у детей с травматической болезнью под действием антибактериальных препаратов / О.Н. Злакоманова // Вестн. новых мед. технологий. - 2008. - № 4-6. - С.108-110.

28. Злакоманова, О.Н. Состояние системы цитокинов у детей с травматической болезнью / О.Н. Злакоманова // Травматология и ортопедия России. - 2008. - № 4-6. - С.65-71.

Размещено на Allbest.ru