Исследуемое соединение	Результаты исследований при рН среды = 10,5.
Резорцин.	Буровато-желтое окрашивание, переходящее в коричневое. Чувствительность реакции - 1,0.10-4 г/мл. Время реакции - 3 - 5 минут.
Соли адреналина.	Розовое окрашивание с выделением пузырьков газа. Чувствительность реакции - 8,5.10-3 г/мл. Время реакции - 3 - 5 минут.
Гидрохинон.	Желтовато-розовое окрашивание, переходящее в коричневое с выделением паров коричневого цвета. Чувствительность реакции - 1,5.10-5 г/мл. Время реакции - 3-5 минут.
Арбутин.	Постепенное появление зеленого окрашивания, с выделением пузырьков газа, после нагревания на кипящей водяной бане. Чувствительность реакции - 2,5.10-3 г/мл. Время реакции - 10 - 15 минут.
Пирогаллол.	Желто-зеленое окрашивание, переходящее в оранжевое с выделением пузырьков газа. Чувствительность реакции - 7,5.10-5 г/мл. Время реакции - 3 - 5 минут.
Танин.	Красно-коричневое окрашивание, с выделением пузырьков газа и паров коричневого цвета. Чувствительность реакции - 7,5.10-5 г/мл. Время реакции - 3 - 5 минут.
Флороглюцин.	Малиновое окрашивание, с выделением пузырьков газа и паров розового цвета. Чувствительность реакции - 5,0.10-6 г/мл. Время реакции - 3 - 5 минут.

2 вариант.

Вариант получения индофенолов, основанный на взаимодействии со щелочным раствором гидроксиламина, в присутствии кислоты серной концентрированной или разбавленной. Суть реакции идентификации состоит в том, что выделившаяся в реакционной смеси кислота азотистая дает в дальнейшем с любым соединением, из производных многоатомных фенолов, пара - нитрозосоединение в виде важнейшего промежуточного продукта реакции, которое в дальнейшем изомеризуется в монооксим производного пара - бензохинона, переходящего при последующем взаимодействии с первоначальным соединением, в индофенол.

Аналогом предложенной нами новой цветной реакции является нитрозореакция Либермана. Недостатками аналога являются низкая чувствительность и специфичность обнаружения производных исследуемых фенолов. Индофенолы, полученные с реагентом гидроксиламином при нитрозировании, также дают стабильное окрашивание, что пригодно для количественного фотометрического определения исследуемых нами соединений.

Пример: 0,01 г исследуемого лекарственного вещества растворяют в 2,0 мл воды очищенной, добавляют 2,0 мл свежеприготовленного 10 % щелочного раствора гидроксиламина, фиксировали первоначальное появление окраски, далее к реакционной смеси прибавляли 0,5 мл кислоты серной концентрированной (рН = 1,5). Результаты исследований представлены в таблице 18.

Таблица 18.

Сравнительная характеристика идентификации многоатомных фенолов.

Исследуемое соединение.	Результаты цветной реакции.	Время идентификации.	Открываемый минимум, в г/мл.
Соли адреналина или норадреналина.	Переход от розового цвета к желтому.	3 - 5 минут	4,0.10-4
Резорцин.	Переход от желтого цвета к вишневому.	3 - 5 минут.	0,3.10-4
Гидрохинон.	Переход от оранжевого цвета к коричневому.	3 - 5 минут.	0,5.10-5
Арбутин.	Переход при нагревании от зеленого цвета к оранжевому.	10 - 15 минут	3,5.10-3
Пирогаллол.	Переход от оранжевого к желтому цвету.	3 - 5 минут.	2,0.10-5
Танин.	Переход от красно-коричневому цвету. оранжевого к	3 - 5 минут.	3,5.10-5
Флороглюцин.	Переход от малинового к коричневому цвету.	3 - 5 минут.	2,5.10-6

Известны другие способы идентификации фенолов, например, взаимодействие с солями трехвалентного железа; с бромной водой и т.д. Недостатками способов являются относительно низкая чувствительность определения и невозможность отличить одноатомные фенолы от многоатомных. Прототипом нами выбран способ определения производных фенолов путем обработки аммиаком, с последующим добавлением хлорамина "Б" и нагреванием на кипящей водяной бане. К недостаткам прототипа относятся:

1) невозможность отличия одноатомных фенолов от многоатомных;

2) низкая чувствительность определения;

3) большая продолжительность исследования. По предлагаемым нами первому или второму вариантам взаимодействия исследуемых производных фенолов с гидроксиламином, в определенных условиях, удалось повысить чувствительность и упростить определение, также - отличить многоатомные фенолы от одноатомных. В таблице 19 представлена сравнительная характеристика экспериментальных исследований по первому варианту взаимодействия многоатомных фенолов с гидроксиламином в щелочной среде и по предлагаемому прототипу.

Таблица 19.

Сравнительная характеристика дифференциации многоатомных фенолов.

Соединение	2 % раствор исследуемого препарата По первому варианту По прототипу
Резорцин.	Буровато-желтое окрашивание, переходящее в коричневое, с выделением пузырьков газа и паров коричневого цвета. Чувствительность реакции - 1,0.10-4 г/мл. Время обнаружения - 3 - 5 минут.	Буровато-желтое окрашивание после нагревания на кипящей водяной бане. Чувствительность реакции - 4,0.10-3 г/мл. Время обнаружения - 10-15 минут
Адреналина гидрохлорид.	Розовое окрашивание с выделением пузырьков газа. Чувствительность реакции - 8,5.10-4 г/мл. Время обнаружения - 3 - 5 минут.	Розовое окрашивание. Чувствительность реакции - 2,5.10-3 г/мл. Время обнаружения - 10-15 минут
Гидрохинон.	Желто-розовое окрашивание, переходящее в коричневое с выделением пузырьков газа и паров коричневого цвета. Чувствительность реакции - 1,65.10-5 г/мл. Время обнаружения - 3 - 5минут.	Желто-розовое окрашивание после нагревания на кипящей водяной бане. Чувствительность реакции - 2,5.10-4 г/мл. Время 10 - 15 минут.
Флороглюцин.	Малиновое окрашивание с выделением пузырьков газа и паров розового цвета. Чувствительность реакции - 5,0.10-5 г/мл. Время обнаружения - 3 - 5минут.	Малиновое окрашивание после нагревания на водяной бане. Чувствительность реакции - 8,0.10-4 г/мл. Время обнаружения - 10 - 15 минут

Разработанные методики идентификации для многоатомных фенолов по первому и второму вариантам также могут быть применены в тонкослойной хроматографии лекарственных средств. Помимо предлагаемых альтернативных методик идентификации, как уже было отмечено ранее, по второму варианту показана возможность количественного фотометрического определения для лекарственных форм резорцина, танина, пирогаллола, гидрохинона. Например, разработаны методики количественного определения для 2 % - 5 % растворов резорцина, и также - для резорцина в многокомпонентных лекарственных смесях, например, в различных прописях глазных капель с резорцином:

1) Резорцина 0,5

новокаина 0,5

воды очищенной до 100,0 мл

2) Новокаина 0,5

цинка сульфата 0,2

резорцина 1,0

кислоты борной 1,0

воды очищенной до 100,0 мл

3) Раствора цинка сульфата 0,25 % - 10,0

новокаина 0,05

резорцина 0,1

кислоты борной 0,2

Для количественного определения резорцина к исследуемым лекарственным формам добавляют свежеприготовленный 10 % щелочной раствор гидроксиламина, затем - 30 % раствор кислоты уксусной до появления зеленого окрашивания. Установлено, что в этих условиях закон Бера соблюдается в пределах концентраций резорцина 40,0 - 800,0 мкг/мл. Такие методики нашли применение в количественном определении ряда других производных многоатомных фенолов, где рН реакционной смеси составляет 2,5. Результаты исследований, также с учетом параметров валидации, представлены в таблице 20.

Таблица 20.

Результаты исследования многоатомных фенолов с 10 % щелочным раствором гидроксиламина, после подкисления.

Соединение	Цвет продуктов реакции.	Пределы количественного определения (соблюдение закона Бера, в мг/мл).
Резорцин.	Зеленый.	0,04 - 0,85
Флороглюцин.	Розовый.	0,03 - 0,9
Пирогаллол.	Желтый.	0,02 - 0,8
Танин.	Красно-коричневый.	0,035 - 0,85
Адреналина гидрохлорид.	Желтый.	0,38 - 1,45
Гидрохинон.	Коричневый.	0,05 - 1,15
Арбутин.	Оранжевый.	0,25 - 1,55

Также изучались некоторые хроматографические и оптические характеристики полученных продуктов взаимодействия с гидроксиламином, в таких условиях. Очевидно, могут представлять интерес унифицированные методики установления подлинности соединений, производных многоатомных фенолов методом ТСХ, где в качестве детергента применен 10 % щелочной раствор гидроксиламина. Было исследовано влияние подвижных фаз (ПФ) различного состава на подвижность исследуемых соединений. Для целей разделения и идентификации препаратов рекомендованы ПФ кислого характера, а именно - н-бутанол - кислота уксусная - вода (10: 1: 9); н-бутанол - кислота уксусная - вода (12: 3: 5); н-пропанол - кислота уксусная - вода (10: 1: 9). Предложена альтернативная методика ТСХ-обнаружения изучаемых соединений, которая значительно превышает существующие прототипы, по своей чувствительности определения.

II) Лекарственные средства, производные конденсированных одноатомных фенолов.

Разработаны методики идентификации для конденсированных одноатомных фенолов: для хинозола и витамина "Е" или токоферола ацетата. Лекарственные вещества, очевидно, дают полиметиновый краситель при взаимодействии с 10 % щелочным раствором гидроксиламина, в сочетании с дальнейшим подкислением 16 % раствором кислоты азотной. Например, в случае хинозола, по соседству с гетероатомом азота, может происходить раскрытие шестичленного цикла, с образованием альдегидной группировки. Затем идет реакция конденсации полученного производного альдегида с производным ароматического амина, с дальнейшим образованием полиметинового красителя, имеющего зеленое окрашивание (рН среды = 2,5).

Пример: 0,04 г лекарственного вещества растворяют в 10,0 мл воды очищенной, затем 3,0 мл этого раствора переносят в мерный цилиндр на 10,0 или 15,0 мл, добавляют 3,0 мл 10 % щелочного раствора гидроксиламина. Затем добавляют в реакционную смесь 3,0 мл 16 % раствора кислоты азотной и отмечают появление зеленого окрашивания.

Разработана методика количественного фотоэлектроколориметрического определения на примере 0,4 % раствора хинозола по реакции со свежеприготовленным 10 % щелочным раствором гидроксиламина, с последующим добавлением 16 % раствора кислоты азотной. Измерение оптической плотности исследуемых растворов хинозола проводили на приборе фотоэлектроколориметре КФК - 2, в кювете с толщиной слоя 10 мм (светофильтр № 2), используя в качестве раствора сравнения контрольный опыт.

Разработанная методика количественного определения также находит применение для анализа лекарственных форм и лекарственных смесей, содержащих хинозол в следующих прописях:

1) раствор хинозола (1: 3000) - 100,0 мл;

2) раствор хинозола (1: 2000) - 100,0 мл;

3) раствор хинозола (1: 1000) - 1000,0мл;

4) хинозола 0,2

талька 5,0

крахмала 5,0

5) хинозола 0,5

вазелина 10,0

Реагент гидроксиламин, в определенных условиях, также пригоден в качестве детергента для опрыскивания хроматографических пластинок при исследовании конденсированных одноатомных фенолов с применением метода ТСХ. Например, разработаны унифицированные и высокочувствительные методики установления подлинности для исследуемых лекарственных средств ТСХ-методом. Также было исследовано влияние подвижных фаз различного состава на подвижность исследуемых соединений и селективность хроматографической системы. Нами предложено применение ПФ для конденсированных одноатомных фенолов наряду с многоатомными фенолами - кислого характера, с целью разделения и обнаружения исследуемых соединений, а именно - н-бутанол - кислота уксусная - вода (10: 1: 9). Результаты исследований представлены в таблице 21.

Таблица 21.

Результаты определения некоторых производных фенолов ТСХ - методом.

Исследуемое соединение.	Зоны
	Окраска.	Величина Rf	Открываемый минимум (г/мл).
Хинозол.	Зеленовато-черноватый.	~ 0,67	1,2.10-4
Токоферола ацетат.	Светло-зеленый.	~ 0,43	1,8.10-4
Резорцин.	Коричневый.	~ 0,87	1,0.10-4
Танин.	Буровато-красноватый.	~ 0,79	1,3.10-5
Гидрохинон.	Желтый.	~ 0,38	1,5.10-5
Арбутин.	Оранжевый.	~ 0,22	2,6.10-3

ГЛАВА 4. ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫЕ РЕАКЦИИ ГИДРОКСИЛАМИНА С ПРОИЗВОДНЫМИ ПИРИДИН - 4 - КАРБОНОВОЙ КИСЛОТЫ

Нами найдено, что изониазид, салюзид, фтивазид, метазид вступают в реакцию со щелочным раствором гидроксиламина (без последующего подкисления). Затем вероятно дальнейшее превращение исследуемых соединений в нитрозопроизводные и в азиды, при этом наблюдается характерное окрашивание. Возможные химические превращения представлены на схеме реакций, на примере изониазида.

Пример: 0,01 г исследуемого лекарственного вещества растворяют в 2,5 мл воды очищенной, затем добавляют 2,0 мл свежеприготовленного 10 % щелочного раствора гидроксиламина, появляется желтое окрашивание, устойчивое в течение двух часов (рН среды = 10,5). Чувствительность реакции или предел обнаружения - 1,0.10^-4 г/мл. И также после дальнейшего добавления к полученной реакционной смеси 1,0 мл 3 % раствора железа (III) хлорида наблюдается переход первоначального окрашивания в красно-коричневое. Такой способ идентификации обеспечивает повышение чувствительности, специфичности и создает минимальную длительность определения.

Предлагаемая новая химическая реакция, на примере способа идентификации изониазида, может быть использована для контроля качества продукции, выпускаемой фармацевтическими производствами и аптеками. В качестве РСО взят изониазид (ФС 42 - 2081 - 96). Ранее были известны способы идентификации изониазида с применением других реагентов: 2, 4 - динитрохлорбензола, аммиачного раствора серебра нитрата, солей меди (II), раствора иода и т.д.

В качестве прототипа, для сравнения, нами выбран способ обработки изониазида аммиачным раствором серебра нитрата. Недостатками прототипа являются: низкая чувствительность, недостаточная специфичность определения, применение дорогостоящего и малодоступного реагента - серебра нитрата, необходимость длительного нагревания реакционной смеси на кипящей водяной бане и наблюдения фиксирования первоначальной неустойчивой желтой окраски, переходящей в серую, а затем - в выделение металлического серебряного зеркала. В таблице 22 представлены результаты экспериментальных исследований.

Таблица 22.

Сравнительная характеристика способов идентификации изониазида.

Соединение	Определение, предел обнаружения, время исследования
Изониазид (1 % водный раствор).	По предлагаемому способу. Желтое окрашивание. Предел обнаружения - 1,0.10-4 г/мл. Время исследования - 3 - 5 минут.	По прототипу. Первоначально образуется желтоватый осадок, при нагревании на водяной бане темнеет и в пробирке образуется серебряное зеркало. Предел обнаружения - 5,0.10-3 г/мл. Время исследования - 25 минут.

Предлагаемый способ изобретения, по сравнению с прототипом, позволяет увеличить чувствительность определения в 50 раз и сократить время исследования в 5 раз. Нами также показана возможность количественного фотоэлектроколориметрического определения изониазида в лекарственных формах, включая инъекционный раствор изониазида 10 % и таблетки изониазида по 0,01 г. Измерение оптической плотности полученных окрашенных продуктов реакции проводят на приборе КФК - 2, светофильтр № 3, в стеклянной кювете, толщиной слоя 10 мм, в сравнении с контрольным раствором (без лекарственного вещества). Найдено, что закон Бера соблюдается в пределах 0,05 г/мл - 0,4 г/мл.

Предлагаемые методики количественного определения хорошо воспроизводимы, доступны, сокращают время анализа, по сравнению с методиками, приведенными в нормативной документации - иодометрическим или броматометрическим определением.

Разработанная нами новая цветная реакция на производные пиридин - 4 - карбоновой кислоты была использована при исследованиях ТСХ - методом, в определенных условиях. Подобран состав ПФ, а именно: н - бутанол - 10 % раствор аммиака (19:

1). В таблице 23 представлены результаты исследования.

Таблица 23.

Результаты определения некоторых производных пиридин-4-карбоновой кислоты ТСХ-методом.

Исследуемое соединение.	Зоны
	Окраска.	Величина Rf	Открываемый минимум (г/мл).
Изониазид.	Желто-зеленый.	~ 0,68	0,05.10-4
Салюзид.	Желтый.	~ 0,15	0,03.10-3
Фтивазид.	Оранжевый.	~ 0,43	0,05.10-3
Метазид	Коричневый.	~ 0,28	0,05.10-3

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ РЕАКЦИЙ ГИДРОКСИЛАМИНА С ПРОИЗВОДНЫМИ АМИДА ХЛОРБЕНЗОЛСУЛЬФОНОВОЙ КИСЛОТЫ.

Объекты исследования - хлорамин "Б" и пантоцид, применяемые как антисептические лекарственные средства.

Исследуемые лекарственные вещества, являясь окислителями, активно реагируют со щелочным раствором гидроксиламина. При дальнейшем подкислении реакционной смеси происходит распад реагента до аммиака и оксидов азота, а исследуемых соединений - до кислоты хлорноватистой и соответствующих амидов органических кислот, (рН среды = 3,0):

5 NH₂OH = 3NH₃ + 2NO + 3H₂O

Пример: К 2,5 мл 1 % раствора хлорамина "Б" или пантоцида добавляют 1,5 мл свежеприготовленного 10 % щелочного раствора гидроксиламина, затем - 1,5 мл 16 % раствора кислоты серной. Появляется зеленое окрашивание. Чувствительность реакции - 3,0.10^-3 г/мл.

Реагент - гидроксиламин в таких условиях проявляет себя как сильный восстановитель, отражая химические процессы, очевидно, связанные с диспропорционированием в присутствии хлорамина "Б":

Cl₂ + 2OH ^- = Cl ^- + ClO ^- + H₂О

2NH₂OH + HClO = N₂ + HCl + 3H₂O

Разработана методика количественного фотоэлектроколориметрического определения для 5 % раствора хлорамина "Б". Оптическую плотность полученных окрашенных растворов измеряют на фотоэлектроколориметре КФК - 2, светофильтр № 2, в кювете толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения контрольный опыт (без лекарственного вещества). Подчинение закону Бера наблюдается в пределах 3,7.10^-3 г/мл до 8,5.10^-3 г/мл.

ГЛАВА 6. ПРИМЕНЕНИЕ ГИДРОКСИЛАМИНА В ОКИСЛИТЕЛЬНО-ВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ РЕАКЦИЯХ С ЛЕКАРСТВЕННЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ НЕОРГАНИЧЕСКОЙ ПРИРОДЫ

Нами изучена реакционная способность гидроксиламина в отношении ряда лекарственных веществ неорганической природы: иода, натрия и калия иодидов, раствора Люголя, кальция гипохлорита, калия перманганата, висмута нитрата основного, серебра нитрата, протаргола, колларгола, железа (II) сульфата и натрия нитропруссида. Найдено, что в определенных условиях гидроксиламин может реагировать как окислитель, а именно - с иодид - ионами и соединениями железа (II). Также реагент может быть восстановителем при взаимодействии в определенных условиях с иодом, гипохлоритами, перманганатом, с соединениями висмута и серебра.

Реакции неорганических лекарственных веществ с гидроксиламином как окислителем

Взаимодействие натрия и калия иодидов с гидроксиламином.

Изучено взаимодействие 10 % щелочного раствора гидроксиламина с натрия и калия иодидами, с последующим добавлением раствора кислоты уксусной или растворов минеральных кислот. Известно, что в щелочной среде возможен распад гидроксиламина до натрия нитрита, который в дальнейшем способен окислять иодид-анион до свободного иода, как в среде органических, так и минеральных кислот (рН среды = 4,0). Схема реакций:

NH₂OH + 4OH ^- 4е ^- = HNO₂ + 3H₂О

HNO₂ + NaOH = NaNO₂ + H₂O;

2NaNO₂ + 2KI + 4CH₃COOH =

=2NO + 2CH₃COONa + I₂ + 2H₂O + 2CH₃COOK;

2KI + H₂SO₄ = K₂SO₄ + 2HI

2NaNO₂ + H₂SO₄ = 2HNO₂ + Na₂SO₄

2HNO₂ + 2HI = I ₂ + 2NO + 2H₂O

Взаимодействие соединений железа с гидроксиламином. Изучено взаимодействие реагента с железа (II) сульфатом и натрия нитропруссидом. Показано, что соединения железа (II) активны со щелочным или аммиачным раствором гидроксиламина в сочетании с разными реагентами, где основной реагент ведет себя как окислитель, согласно схеме реакций:

Fe²⁺ + 5NH₂OH = Fe³⁺ + 3NH₃ + 2NO + 3H₂O (рН среды = 3,5),

Также с выделившимся газообразным NO гидроксиламин реагирует по уравнению:

2NH₂OH + 2NO = N₂O + N₂ + 3H₂O

Примеры

Методика 1. К 2,0 мл 1,5 % раствора железа (II) сульфата добавляют 2,0 мл 10 % щелочного раствора гидроксиламина, появляется желто-зеленое окрашивание. Чувствительность реакции - 3,0.10^-4 г/мл.

Методика 2. К 2,0 мл 1,5 % раствора железа (II) сульфата добавляют 4,0 мл 10 % аммиачного раствора гидроксиламина гидрохлорида. Через 3 - 5 минут наблюдается розовое окрашивание с выделением пузырьков газа. Чувствительность реакции - 2,5.10^-4 г/мл.

Методика 3. К 2,5 мл 2 % раствора железа (II) сульфата добавляют 3,0 мл 10 % щелочного раствора гидроксиламина, появляется темно-синее окрашивание, переходящее при добавлении 16 % раствора кислоты азотной в красно-коричневое, а затем - в желто-коричневое окрашивание. Чувствительность реакции - 1,5.10^-4 г/мл.

Разработана методика количественного фотометрического определения для железа (II) сульфата, применяемого для лечения гипохромных анемий, взятого в виде 4 % раствора. Оптическую плотность полученных растворов, определяли на КФК - 2, светофильтр № 3, относительно контрольных растворов, в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Найдено, что подчинение закону Бера соблюдается в пределах от 0,02 г/мл до 0,3 г/мл.

Реакции неорганических лекарственных веществ с гидроксиламином как восстановителем

При взаимодействии калия перманганата с гидроксиламином образуется первоначально нитрит-анион, который затем окисляется до нитрат-аниона (рН среды = 4,5):

5NaNO₂ + 2KMnO₄ + 3H₂SO₄ = 5NaNO₃ + 2MnSO₄ + K₂SO₄ + 3H₂O

При взаимодействии йода с гидроксиламином происходит реакция, в которой реагент участвует в реакции как восстановитель, согласно схеме реакций (рН среды = 2,5):

NH₂OH. HCl + 2I₂ + NaOH = HNO₂ + 4HI + NaCl

В уксуснокислом растворе гидроксиламин окисляется иодом активнее, чем в растворах минеральных кислот.

В медицине применяют серебра нитрат и коллоидные препараты серебра: протаргол и колларгол. Найдено, что при взаимодействии соединений серебра с аммиачным раствором гидроксиламина, в сочетании с предварительным подкислением, возможно восстановленние соединений серебра до металлического серебра, при этом происходит распад реагента до азота (рН среды = 4,5).

Схема реакций:

2AgNO₃ + 2NH₃. H₂O = 2AgOH + 2NH₄NO₃

2AgOH = Ag₂O + H₂O

Примеры.

Методика 1. К 2,0 мл 2 % раствора серебра нитрата добавляют 1,0 мл 16 % раствора кислоты серной и 2,0 мл 10 % аммиачного раствора гидроксиламина. Через 3 - 5 минут наблюдается выделение осадка сиреневого цвета, постепенно приобретающего сероватый оттенок. Чувствительность реакции - 7,5.10^-4 г/мл.

Методика 2. К 2,0 мл 1 % раствора протаргола или колларгола добавляют по 1,0 мл 16 % раствора кислоты серной и по 1,5 мл 10 % аммиачного или щелочного раствора гидроксиламина. Появляется коричневое окрашивание, переходящее в желтое. Чувствительность реакции для протаргола - 9,0.10^-4 г/мл, а для колларгола - 3,5.10^-4 г/мл.

В таких условиях, наряду с распадом гидроксиламина, лекарственные вещества также ведут себя либо - как окислители, либо - как восстановители, также как и применяемый основной реагент.

ГЛАВА 7. ЭКСПРЕСС - АНАЛИЗ С ЦЕЛЬЮ ВЫЯВЛЕНИЯ ФАЛЬСИФИЦИРОВАННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ. (ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА, ПРОИЗВОДНЫЕ ФЕНОТИАЗИНА).

Оборудование и условия испытаний.

Для исследуемых лекарственных средств, производных фенотиазина, с целью выявления фальсифицированных лекарственных средств, предложено применение разработанных нами качественных химических цветных реакций, в том числе - с применением ТСХ-методов. Также использованы физико-химические методы анализа, включая ИК-спектроскопию и УФ-спектрофотометрию.

В работе использовали однолучевой интерференционный ИК-спектрофотометр Инфрафлюм ФТ-02 (НПФ "ЛЮМЕКС", Россия). Параметры записи спектров: диапазон 4000 - 400 см-¹, разрешение 1 см - ¹, циклическая запись с количеством сканов 20, аподизация стандартная. Управление прибором и обработку спектров осуществляли с использованием программы "Спектралюм" (НПФ "ЛЮМЕКС", Россия). В работе использовали также однолучевой спектрофотометр СФ - 103 (Аквилон, Россия). Управление прибором осуществляли с использованием программы "Спектр" (Аквилон, Россия). Спектры получали в интервале длин волн от 200 до 760 нм. В качестве раствора сравнения использовали соответствующий растворитель.

Хроматографирование проводили на пластинках "Сорбфил" размером 10х10 см (ТУ 26-11-17-89, ЗАО "Собполимер", г. Краснодар). На линию старта пластин с помощью микрошприца наносили 5 мкл спиртового раствора (5 мкг действующего вещества), при нанесении проб расстояние между пятнами - 2 см, на каждую пластину наносили до 4 растворов. Сушку проб осуществляли с помощью устройства для сушки пластин УСП-1 (ЗАО "Собполимер", г. Краснодар) при температуре около 70^о С. Использовали стеклянную хроматографическую камеру размером 150х120х80 мм. Насыщение камеры парами ПФ проводили в течение 20 минут. Пробег фронта растворителя составлял 8,5 см. Проявление пятен производных фенотиазина проводилось либо в свете УФ-лампы (при 254 и 365 нм) облучателя хроматографического УФС 254/365 (ЗАО "Собполимер", г. Краснодар), либо - опрыскиванием 10 % щелочным раствором гидроксиламина с последующим опрыскиванием 16 % раствором кислоты азотной, и после высушивали хроматографическую пластину в течение 5 - 10 минут на воздухе.

Результаты исследования.

Цель работы - разработка методик анализа среди производных фенотиазина, позволяющих выявить фальсифицированные лекарственные препараты. Рекомендуемые методики положены в основу предлагаемых способов обнаружения исследуемых лекарственных веществ. Такое сочетание позволяет с достаточной степенью достоверности подтвердить наличие или доказать отсутствие в лекарственном средстве действующего вещества, указанного на упаковке.

Для проведения экспресс-анализа совместно применяются качественные химические реакции и метод ТСХ (результаты исследований см. на 10-15 страницах, и - на 24-25 страницах). Одновременное применение этих аналитических подходов позволяет с большой вероятностью определить факт подделки.

В настоящей работе также использованы ИК-спектры и УФ - спектры производных фенотиазина. Методы ИК - и УФ-спектроскопии позволяют практически однозначно установить подлинность лекарственного средства. При несовпадении ИК - спектра или УФ-спектра испытуемого препарата со стандартным спектром можно предположить о том, что исследуемый образец не содержит указанное на упаковке действующее вещество.

ИК - спектроскопия.

Пробоподготовку осуществляли путем диспергирования испытуемых лекарственных средств в вазелиновом масле.

Интерпретация ИК-спектров.

Найдены общие характеристические полосы поглощения производных фенотиазина в областях 3375 - 3620 см^-1; 2910 - 2940 см - ¹; 1600 - 2420 см^-1; 145 - 1470 см^-1 и 740 - 780 см^-1, обусловленных ароматической структурой препаратов. Основное отличие 10-ацилпроизводных фенотиазина (фторацизин, этмозин, этацизин) от 10-алкилпроизводных заключается в наличии характеристических полос поглощения с максимумами поглощения при 1680 см^-1, 1675 см^-1, 1665 см^-1 и 1660 см^-1, обусловленных амидным карбонилом в 10 положении. ИК-спектры препаратов, содержащие во 2 положении трифторметильную группу (фторацизин, трифтазин, фторфеназин) характеризуются высокоинтенсивными колебаниями в областях 1160 и 1260 см^-1, 1000 и 1245 см^-1, 1170 и 1245 см - ¹. Органически связанный атом хлора в аминазине, нонахлазине, этаперазине обуславливает наличие максимумов поглощения в областях 750 и 770 см^-1. ИК-спектры субстанций и препаратов совпадали.

УФ - спектрофотометрия

УФ-спектры 10-алкилпроизводных сущетвенно отличаются от

УФ-спектров 10-ацилпроизводных фенотиазина. УФ-спектры исследуемых соединений (концентрации 5 мкг/мл) измеряли в воде очищенной, в УФ-спектроскопии, как и в ИК-спектроскопии проводили сравнение исследуемых образцов со спектрами РСО.

УФ-спектры 10-алкилпроизводных фенотиазина имеют по две характерных полосы поглощения (при 242 - 261 нм и при 279 - 315 нм), в то время как для 10 - ацилпроизводных характерна лишь одна полоса поглощения (при 258 - 269 нм). Имеют место батохромные сдвиги максимумов поглощения 10-ацилпроизводных фенотиазина, по сравнению с 10 - алкилпроизводными. Результаты исследований представлены в таблице 24.

Таблица 24.

Основные спектральные характеристики электронных полос поглощения УФ-спектров производных фенотиазина в воде очищенной.

Лекарственное вещество	Главный максимум поглощения	Оптическая плотность	Удельный показатель экстинкции	Молярный показатель экстинкции
10-алкилпроизводные фенотиазина
Аминазин	255 305	0,814 0,112	815 113	28900 4010
Дипразин	250 300	0,870 0,104	875 104	27920 3337
Пропазин	250 300	0,935 0,122	937 122	29990 3910
Динезин	250 300	0,845 0,105	841 105	28350 3520
Этаперазин	255 306	0,583 0,084	585 86	25710 3700
Фторфеназин	257 307	0,700 0,076	607 76	28808 3607
Трифтазин	256 305	0,878 0,070	571 75	27100 3300
Тиоридазин	261 315	0,878 0,135	881 133	35691 5487
10 - ацилпроизводные фенотиазина
Фторацизин	260	0,329	318	14168
Нонахлазин	262	0,290	290	14456
Этмозин	269	0,365	365	17649
Этацизин	260	0,243	243	9681

Для обнаружения фальсифицированных лекарственных средств, не содержащих на упаковке действующего вещества, указанного на этикетке, и содержащих действующие вещества, указанные на этикетке, следует использовать следующие методы установления подлинности: простые качественные реакции, ТСХ, ИК - и УФ - спектроскопию.

На основании рекомендаций ВОЗ и наших собственных исследований нами предлагается комплексный подход к обнаружению фальсифицированных лекарственных средств среди производных фенотиазина с использованием современных аналитических методов.

Выводы

1. Проведены детальные экспериментальные и теоретические исследования реакций окислительно - восстановительного характера на разнообразные группы лекарственных веществ с реагентом - гидроксиламином, учитывая его разнообразный окислительно - восстановительный потенциал. Показано и подтверждено, что гидроксиламин в определенных условиях является донором оксидов азота.

2. Впервые изучены, разработаны и предложены новые цветные реакции для идентификации и показана возможность количественного определения в лекарственных формах среди соединений органической и смешанной природы, с применением щелочного раствора гидроксиламина, а именно: для производных фенотиазина; для многоатомных и некоторых одноатомных фенолов; для производных пиридин-4-карбоновой кислоты; для производных амида хлорбензолсульфоновой кислоты и т.д.

3. На основании предложенной цветной реакции на 10-алкилпроизводные и 10-ацилпроизводные фенотиазина для 12 лекарственных средств разработан новый способ качественного определения. Показано, что процесс окисления проходит в 2 стадии. Применен метод латинских квадратов как метод математического планирования эксперимента при выборе оптимальных условий определения. Для аминазина, дипразина, пропазина, этаперазина, динезина, фторацизина, нонахлазина, этмозина показана возможность количественного фотометрического определения в лекарственных формах. Разработанные методики определения просты, доступны, отличаются быстротой, высокой чувствительностью и групповой специфичностью определения, также могут быть использованы в тонкослойной хроматографии и количественном определении.

4. Впервые доказана возможность получения индофеноловых красителей для 10 лекарственных средств, производных многоатомных фенолов, с применением в качестве реагента щелочного раствора гидроксиламина. Разработаны методики идентификации с применением тонкослойной хроматографии для лекарственных средств, производных многоатомных фенолов также в лекарственном арбутин - и рутин-содержащем растительном сырье. Показана возможность количественного фотометрического определения в лекарственных формах для резорцина, гидрохинона, танина.

5. Изучены условия образования продуктов нитрозирования и нитрования для многоатомных фенолов. Показано, что течение реакций зависит от условий предварительного распада гидроксиламина, ряда физико-химических факторов: рН реакционной смеси, химического строения исследуемых соединений.

6. Разработаны методики идентификации и показана возможность количественного фотометрического определения для лекарственных форм хинозола. В основе химических процессов предложено образование полиметинового красителя, связанного с частичным распадом и окислением препарата, применяемого реагента и последующей конденсацией до получения окрашенного соединения.

7. На основании впервые разработанной цветной реакции на изониазид и другие производные пиридин-4-карбоновой кислоты предложены доступные и высокочувствительные методики идентификации с применением щелочного раствора гидроксиламина (без последующего подкисления). Для изониазида показана возможность количественного фотометрического определения в лекарственных формах.

8. Разработаны и изучены методики идентификации и количественного определения производных бензолсульфохлорамида, а именно - хлорамина "Б" и пантоцида. Предложенные методики анализа отличаются экономичностью, простотой и быстротой выполнения.

9. Разработаны методики идентификации и количественного определения для лекарственного средства - железа (II) лактата. Методики определения отличаются доступностью и экономичностью.

10. Изучены условия взаимодействия гидроксиламина с лекарственными средствами неорганической природы. Предложены оптимальные условия определения иода, натрия и калия иодидов, кальция гипохлорита, калия перманганата, висмута нитрата основного, железа (II) сульфата. Показано, что определяющим фактором в подобных окислительно-восстановительных реакциях является последовательность добавления применяемых реагентов. Для железа (II) сульфата показана возможность для количественного фотометрического определения в лекарственных формах.

11. Разработаны унифицированные методики идентификации лекарственных средств неорганической природы, имеющих комплексное строение, с применением в качестве реагента гидроксиламина, а именно - для растворов Люголя, Несслера, протаргола, колларгола, натрия нитропруссида, где, вероятно, имеют место твердофазные явления осаждения, наряду с окислительно - восстановительными процессами.

12. Предложен комплекс химических реакций и физико-химических характеристик производных фенотиазина для выявления возможных фальсифицированных лекарственных средств, соединений данной группы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. А. С.1789846 СССР, МКИ³ G 01 № 21/ 78. Способ идентификации двух - и трех-атомных фенолов. / Кувырченкова И. С., Печенников В.М., Митрягина С.Ф., Садчикова Н.П. (СССР) - 2с.: ил.

2. А. С.1286970 СССР, МКИ³ G 01 № 21/ 78. Способ идентификации производных фенотиазина. / Прокофьева В.И., Митрягина С.Ф., Егоренкова Г.И., Садчикова Н.П., Кирпичева Э.И., Глушакова В.П., Фалина Р.И., Кувырченкова И.С. (СССР) - 2с.: ил.

3. Патент RU № 2249200. Способ идентификации изониазида. / Кувырченкова И.С., Арзамасцев А.П., Митрягина С.Ф. Опубл.27.03.2005г. Бюлл. № 9.

4. Кувырченкова И.С., Прокофьева В.И., Чернова С.В. и др. Использование хроматографических и экстракционно-фотометрических методов определения некоторых производных фенотиазина в биофармацевтических исследованиях. // Сборник "Актуальные проблемы фармации". - М., 1981. - С.70-72.

5. Аксенова Э.Н., Арзамасцев А.П., Брутко Л.И., Кувырченкова И.С. и др. Исследования в области анализа производных фенотиазина (фотометрия в видимой области спектра). // Сборник ВНИИМИ "Современные физико-химические методы анализа лекарственных препаратов." - М., 1981. - Выпуск 1. - С.12-15.

6. Прокофьева В.И., Кувырченкова И.С., Сенов П.Л. Применение цветной реакции для качественного определения производных фенотиазина и фотометрического определения этмозина. // Научные труды НИИФ "Физико-химические методы анализа лекарств". - М., 1984. - Т. XII. - С.146-152.

7. Арзамасцев А.П., Прокофьева В.И., Чернова С.В., Кувырченкова И.С. Унифицированная методика для дифференциации восьми лекарственных средств алкильных производных фенотиазина методом тонкослойной хроматографии. // Тез. докл. II съезда фармацевтов Молдавии. - Кишинев, 1985. - С.86-88.

8. Дмитриев С.В., Кувырченкова И.С., Фетисов А.И. Применение физико-химических методов анализа при исследовании арбутина. // Рукопись депонирована в ВИНИТИ от 4.02.1988г. - № 939 - В 88. - М., 1988. - 8С.

9. Кувырченкова И.С., Дмитриев С.В. Применение цветных реакций для качественного и количественного определения арбутина в листьях брусники. // Рукопись депонирована в ВИНИТИ от 13.10.1989г. - № 7379 - В 89. - М., 1989. - 8С.

10. Кувырченкова И.С., Прокофьева В.И., Трофимов А.Р., Родионова Г.М. Применение метода латинских квадратов в определении этмозина с использованием новой цветной реакции. // Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики: Тез. докл. научно-практ. конф., посвящ.25 - летию фарм. фак. Курского мед. института. - Курск, 1991. - Ч.2. - С.67-68.

11. Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П. Применение химических и физико - химических методов анализа при исследовании лекарственных средств, производных фенолов. // Рукопись депонирована в ВИНИТИ РАН от 19.02.1993г. - № 416 - В 93. - М., 1993. - 13С.

12. Кувырченкова И.С., Калмыкова Т.П., Игнатьева Н.С. Фотометрическое определение многоатомных фенолов, приготовленных из травы зверобоя, листьев шалфея, цветков календулы. // Рукопись депонирована в НПО "Союзмединформ" в ГЦНМБ от 14.04.1994г. - № Д - 24025. - М., 1994. - 10С.

13. Арзамасцев А.П., Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П., Митрягина С.Ф. Новый способ идентификации многоатомных фенолов. // Фармация. - 1994. - № 2. - С.47 - 50.

14. Кувырченкова И.С. Применение гидроксиламина гидрохлорида в окислительно-восстановительных реакциях для определения лекарственных веществ резорцина и хлорамина "Б". // Сборник " Актуальные проблемы фармации", посвященный 30-летию фарм. фак. Тюменского мед. института. - Тюмень, 1994. - С.64 - 66.

15. Кувырченкова И.С. Применение гидроксиламина как окислителя для качественного и количественного определения аминазина. // Казанский медицинский журнал. - Казань, 1995. - № 3. - С.261 - 263.

16. Кувырченкова И.С. Количественный анализ хинозола при взаимодействии со щелочным раствором гидроксиламина гидрохлорида. // Формирование приоритетов лекарственной политики: Матер. докл.28-29 июня 1995г. - М., 1995. - С.125-126.

17. Кувырченкова И.С. Гидроксиламин как общий реагент в окислительно-восстановительных реакциях при исследовании различных групп лекарственных средств органической природы. // Формирование приоритетов лекарственной политики: Матер. докл.28-29 июня 1995г. - М., 1995. - С.126-127.

18. Кувырченкова И.С. Фотометрическое определение пропазина с использованием щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида. // Сборник "Актуальные проблемы фармации." - Барнаул, 1995. - С.81-85.

19. Арзамасцев А.П., Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П. и др. Применение новой цветной реакции для качественного и количественного определения дипразина. // Фармация. - 1996. - № 1. - С.12-15.

20. Кувырченкова И.С. Применение щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида для качественного и количественного фотометрического определения этаперазина. // Научные труды НИИФ "Актуальные проблемы фармацевтической химии". - М., 1996. - Т. XXXV. - С.42-47.

21. Арзамасцев А.П., Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П., Митрягина С.Ф. Применение гидроксиламина гидрохлорида в окислительно-восстановительных реакциях с лекарственными веществами неорганической природы. // Фармация. - 1996. - № 3. - С.31-34.

22. Арзамасцев А.П., Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П., Митрягина С.Ф. Применение нитрогидроксиламината натрия для определения лекарственных веществ различных химических групп. - // Сборник трудов "Современное состояние и перспективы научных исследований в области фармации". - Самара, 1996. - С.77-78.

23. Кувырченкова И.С. Новые окислительно-восстановительные реакции в фармацевтическом анализе с применением гидроксиламина гидрохлорида. // Человек и лекарство: Тез. докл. IV Росс. нац. конгр. - М., 1997. - С.68.

24. Кувырченкова И.С. Применение щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида как окислителя для фотометрического определения фторацизина. // Научные труды НИИФ "Фармацевтическая наука и практика в новых - социально-экономических условиях". - М., 1997. - Т. XXXVI. - Ч. II. - С.48-53.

25. Арзамасцев А.П., Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П. и др. Использование гидроксиламина гидрохлорида в окислительно-восстановительных реакциях с лекарственными веществами органической природы. // Фармация. - 1997. - № 4. - С.21-23.

26. Кувырченкова И.С. Разнообразные варианты применения щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида - реагента окислительно-восстановительного и кислотно-основного характера в фармацевтическом анализе. // Фармацевтическая биоэтика: Матер. междунар. конф., посвящ.850-летию г. Москвы. - М., 1997. - С.40-41.

27. Кувырченкова И.С. Новые способы нитрозирования и нитрования лекарственных средств, производных фенолов. // Человек и лекарство: Тез. докл. V Росс. нац. конгр. - М., 1998. - С.655.

28. Кувырченкова И.С. Количественное фотометрическое определение изониазида с применением щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида. // Человек и лекарство: Тез. докл. V Росс. нац. конгр. - М., 1998. - С.655.

29. Кувырченкова И.С. Фотометрическое определение нонахлазина с применением щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида как окислителя. // Научные труды НИИФ "Фармацевтическая наука в решении вопросов лекарственного обеспечения". - М., 1998. - Т. XXXVII. - Ч. II. - С.56-61.

30. Арзамасцев А.П., Кувырченкова И.С., Садчикова Н.П., Митрягина С.Ф. Применение гидроксиламина гидрохлорида в реакции нитрозирования лекарственных веществ, производных многоатомных фенолов. // Фармация. - 1998. - № 3. - С.35-36.

31. Кувырченкова И.С. Способы превращения реагента гидроксиламина гидрохлорида с дальнейшим применением в фармацевтическом анализе. // Человек и лекарство: Тез. докл. VI Росс. нац. конгр. - М., 1999. - С.427.

32. Кувырченкова И.С. Количественное фотометрическое определение тиоридазина с применением щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида как окислителя. // Научные труды НИИФ "Современные проблемы фармацевтической науки и практики". - М., 1999. - Т. XXXVIII. - Ч. II. - С.61-64.

33. Кувырченкова И.С. Количественное фотометрическое определение железа закисного сульфата. // Человек и лекарство: Тез. докл. VII Росс. нац. конгр. - М., 2000. - С.612.

34. Кувырченкова И.С. Применение щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида по типу химических реакций в фармацевтическом анализе. // Человек и лекарство: Тез. докл. VII Росс. нац. конгр. - М., 2000. - С.612-613.

35. Кувырченкова И.С. Гидроксиламина гидрохлорид как универсальный реагент в фармацевтическом анализе. // Фармация. - 2001. - № 2. - С.39-41.

36. Кувырченкова И.С. Количественное фотометрическое определение гидрохинона. // Человек и лекарство: Тез. докл. VIII Росс. нац. конгр. - М., 2001. - С.695.

37. Кувырченкова И.С., Митрягина С.Ф. Применение некоторых модифицированных типов химических реакций в анализе лекарственных веществ с использованием щелочного раствора гидроксиламина гидрохлорида как реагента окислительно-восстановительного характера. // Человек и лекарство: Тез. докл. IX Росс. нац. конгр. - М., 2002. - С.640-641.

38. Кувырченкова И.С., Митрягина С.Ф. Применение гидроксиламина гидрохлорида в анализе лекарственных средств. Книга под редакцией академика РАМН, профессора А.П. Арзамасцева. - М.: Издательство ПБОЮЛ Чернюгов Л.И. (Художественно-полиграфический салон "Leon-XXI"), 2002. - 101с.

39. Кувырченкова И.С. Применение гидроксиламина гидрохлорида как окислителя в тонкослойной хроматографии лекарственных средств. // Человек и лекарство: Тез. докл. X Росс. нац. конгр. - М., 2003. - С.725.

40. Кувырченкова И.С., Митрягина С.Ф. Окислительно-восстановительное преимущество гидроксиламина гидрохлорида как реагента перед другими типами химических реакций в фармацевтическом анализе. // Человек и лекарство: Тез. докл. X Росс. нац. конгр. - М., 2003. - С.725-726.

41. Кувырченкова И.С. Применение гидроксиламина гидрохлорида для качественного и количественного фотометрического определения динезина в фармацевтическом анализе. // Человек и лекарство: Тез. докл. XI Росс. нац. конгр. - М., 2004. - С.29.

42. Кувырченкова И.С. Исследование спектральных характеристик при взаимодействии производных фенотиазина с окислителем гидроксиламина гидрохлоридом в фармацевтическом анализе. // Человек и лекарство: Тез. докл. XII Росс. нац. конгр. - М., 2005. - С.154-155.

43. Кувырченкова И.С. Тонкослойная хроматография с применением реагента окислителя гидроксиламина в анализе ряда лекарственных веществ, производных фенолов. // Человек и лекарство: Тез. докл. XIII Росс. нац. конгр. - М., 2006. - С.709-710.

44. Кувырченкова И.С. Методики анализа производных фенотиазина. // Фармация. - 2006. - № 6. - С.18-21.

45. Кувырченкова И.С. Применение тонкослойной хроматографии в исследовании продуктов окисления некоторых производных фенотиазина. // Человек и лекарство: Тез. докл. XIV Росс. нац. конгр. - М., 2007. - С.296.

46. Кувырченкова И.С. Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в исследовании продуктов окисления производных фенотиазина при взаимодействии с гидроксиламином. // Человек и лекарство: Тез. докл. XIV Росс. нац. конгр. - М., 2007. - С.296-297.

Размещено на Allbest.ru

...