Фармакогностическое исследование рода Equisetum L. флоры Сибири как источника лекарственных средств

Руководствуясь вышеизложенным, а также требованиями ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения», нами на основании исследования анатомо-морфологических признаков и химического состава хвоща полевого и близких к нему видов разработана фармакопейная статья «Хвоща полевого трава». Как видно из таблицы 6, в новый проект ФС внесены существенные изменения и дополнения в разделы «Внешние признаки», «Микроскопия» и «Числовые показатели»; внесены изменения в методику определения подлинности сырья методом ТСХ; введен новый раздел «Количественное определение», в котором описана методики определения содержания флавоноидов спектрофотометрическим методом в расчете на кверцетин, а также экстрактивных веществ. Данный показатель введен в связи с тем, что данное сырье предназначено для приготовления водных и водно-спиртовых извлечений. Кроме того, по новым требованиям в ФС включен раздел «Микробиологическая чистота».

По результатам нашего исследования интерес для углубленного исследования и внедрения в медицинскую практику представляет не только хвощ полевой, но и хвощ лесной, х.луговой, х.речной, х.прибрежный, х.болотный и х.зимующий.

В связи с этим нами на данном этапе разработаны показатели определения подлинности и качества сырья хвоща зимующий данного вида, включенные в проект Фармакопейной статьи «Хвоща зимующего трава».

Учитывая высокое содержание соединений кремния в надземной части хвоща зимующего и их значимость в проявлении фармакологической активности, стандартизацию сырья данного вида хвоща нами предложено проводить по содержанию кремния спектрофотометрическим методом. При этом использовали способность кремниевой кислоты давать с ионами молибдена в кислой среде (рН=1,5-1,7) растворимую кремнемолибденовую кислоту, окрашенную в желтый цвет. Кроме того, введен показатель «содержание экстрактивных веществ», так как указанное сырье рекомендуется использовать для получения водного настоя и экстракта на 40% этаноле.

Таблица 6. Разделы и показатели качества травы хвоща полевого, включенные в проект новой ФС42-0209-07

Для других, исследованных нами видов хвоща, в данном разделе обсуждены перспективные направления их дальнейшего исследования и использования в медицине.

Заключение

На основании комплексного изучения нами разработано научно-методическое обоснование использования перспективных видов хвоща флоры Сибири, как источников новых лекарственных средств различного спектра действия. Предложенный научно-методический подход можно использовать для поиска, изучения и обоснования перспективности в медицине филогенетически близких видов других родов (рис. 11,12).

Проведенные нами на первом этапе теоретические исследования по систематическому положению, распространенности, оценке ресурсного потенциала, позволили сузить круг поиска и выделить для дальнейшего исследования наиболее перспективные виды хвоща.

Ареал хвощей на территории России достаточно велик. При этом наиболее изучена ресурсная база официнального вида - хвоща полевого, промышленную заготовку которого осуществляют в основном в Европейской части России. Как отмечают ресурсоведы, несмотря на большой ареал, природные запасы хвоща полевого на территории России не равноценны. Занимая огромные по площади территории хвощ полевой в большинстве районов России встречается рассеянно или в виде небольших куртин, что не позволяет осуществлять заготовительные мероприятия в большом объеме. Известны и районы, где хвощ полевой относится к видам, требующим охраны. При этом по всему ареалу хвощ полевой сочетается с другими видами хвоща (х.луговой, х.приречный, х.лесной, х.болотный, х.зимующий), которые имеют еще более широкое распространение и образуют большие по размерам заросли. Отметим и другую проблему, возникающую при осуществлении заготовительных мероприятий. Как известно, хвощи отличаются крайним полиморфизмом, вследствие чего примесные виды, имеющие схожие с хвощом полевым морфологические признаки, ошибочно заготавливаются в качестве лекарственного растительного сырья (ЛРС). Подтверждением сказанному служат результаты нашего исследования по проблеме фальсификации и качества травы хвоща полевого, реализуемого на фармацевтическом рынке Томской области. Анализ образцов промышленных партий продукции более чем 20 российских производителей показал, что 70% образцов не соответствует требованиям ГФ XI по показателю «подлинность». При этом в 65% образцах вместо хвоща полевого обнаружен хвощ болотный, 5% образцов соответствовали хвощу лесному.

На основании вышесказанного один из следующих этапов комплексного изучения хвощей был посвящен исследованию их анатомо-морфологических признаков. Полученные данные могут быть использованы для решения теоретических вопросов систематики с целью объективной оценки различий между систематически близкими, но морфологически трудно различимыми видами хвощей. Кроме того, на основании сравнительного анатомо-морфологического исследования получена достоверная информация о диагностических признаках хвощей, которая включена нами в проекты ФС «Хвоща полевого трава», «Хвоща зимующего трава».

Рис. 11. Схема научно-методического подхода к исследованию видов рода Equisetum L

Для определения направления изучения фармакологической активности перспективных видов хвощей был проведен анализ сведений научной и традиционной медицины по использованию исследуемой группы растений. На основании полученных данных проведено экспериментальное исследование экстрактивных комплексов хвощей по выбранным тестам.

Согласно предложенной схемы научно-методического подхода к исследованию видов рода хвощ на следующем этапе проведено исследование химического состава перспективных видов. Определены основные группы БАВ (фенольные соединения, соединения кремния); детально исследован компонентный состав фенольных соединений с установлением структуры веществ.

В составе исследуемых видов хвоща идентифицировано более 30 компонентов фенольной природы. Индивидуальные отличия в комбинациях содержащихся компонентов указывают на видовую самостоятельность хвощей в рамках единого таксона и дают дополнительную возможность решить вопросы систематики рода Equisetum L. Достоверность различий подтверждена выделением и установлением структуры основных компонентов.

В рамках научно-методического подхода важным является вопрос об установлении возможной взаимосвязи между биологической активностью и компонентным составом различных видов хвоща, что позволяет предложить методологию дальнейшего исследования и практического использования перспективных видов (рис. 12).

Как показали результаты исследования химического состава, основными БАВ видов рода хвощ являются фенольные соединения и соединения кремния, на основании содержания которых хвощи разделены нами на две секции.

Значимость фенольных соединений и соединений кремния хвощей, подтверждена нами экспериментальным изучением антимикробной, противовоспалительной, диуретической, гепатопротекторной и антирадикальной активности 10 видов рода хвощ флоры Сибири.

Нами показано, что водные извлечения 4 видов подрода Hippohaete Milde, богатые кремнием, в перспективных концентрациях (7,8-31,2 мкг/мл) подавляют активность поверхностных дерматофитий на уровне препаратов сравнения нитрофунгина и сангвиритрина. Для 6 видов подрода Equisetum Sad., в которых преобладают флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты и полисахаридный комплекс, с точки зрения противогрибковой активности перспективны водно-спиртовые извлечения (7,8-62,5 мкг/мл). Таким образом, можно предположить, что противогрибковые свойства хвощей в равной степени могут быть обусловлены, как соединениями кремния, так и фенольными соединениями.

Рис. 12 Взаимосвязь химического состава видов рода хвощ с их фармакологическими свойствами

Кроме противогрибкового действия, представляет интерес способность экстракционных препаратов хвощей подавлять активность некоторых бактерий, вызывающих и отягощающих течение целого ряда заболеваний инфекционно-воспалительного характера.

Исследование диуретической активности 7 видов хвоща показало, что наиболее значительно увеличивают диурез хвощ болотный и хвощ зимующий.

Диуретический эффект хвоща зимующего можно связать с содержанием кремния, в то время, как препараты хвоща болотного, по-видимому, оказывают диуретическое действие за счет суммирования эффекта флавоноидных гликозидов, фенолкарбоновых кислот и соединений кремния.

Известно, что соединения кремния препятствуют образованию мочевых камней, за счет образования защитных коллоидов, препятствующих кристаллизации минеральных солей, и тем, самым, затрудняющих образование из них камней. Заметим, что соли кремниевой кислоты наряду с выведением из организма излишка воды, препятствуют адгезии микроорганизмов, решая проблему выведения токсических веществ эндогенного и экзогенного происхождения, связывая их в кишечнике.

Что касается роли фенольных соединений в диуретическом эффекте, то многочисленными исследованиями различных авторов установлено, что ряд флавоноидов и фенолкарбоновых кислот, выделенных из растений, обладают выраженной способностью увеличивать диурез и влиять на обмен электролитов в почках. Диуретический эффект выявлен у кверцетина, кемпферола, рутина, лютеолина, некоторых других флавоноидов, дубильных веществ и фенолкарбоновых кислот. Нами установлено, что хвощи содержат более 20 гликозидированных производных кемпферола, кверцетина, апигенина и лютеолина.

Поскольку хвощи рассматриваются в качестве потенциальных средств для лечения урологических заболеваний, неотъемлемой частью которого является воспаление, была проведена оценка противовоспалительного действия хвощей.

Нами установлено, что хвощ зимующий и х.полевой статистически достоверно снижают прирост массы отека у экспериментальны животных. Высокую антиэкссудативную активность проявили экстракты хвоща болотного, х.речного и х.берегового.

При этом противовоспалительное действие хвоща полевого, х.болотного, х.речного и х.берегового может быть обусловлено флавоноидами, фенолкарбоновыми кислотами и полисахаридами. Большинство перечисленных веществ, по данным литературы, способны ослаблять воспалительные и аллергические реакции, усиливать процессы регенерации.

Противовоспалительные свойства хвоща зимующего можно связывать с соединениями кремния. Защитная роль соединений кремния в купировании воспалительного процесса связана, прежде всего, с тем, что кремний, сосредоточенный в эластине и коллагене кровеносных сосудов, эпителиальных и соединительных тканях повышает их эластичность, упругость, снижает проницаемость стенок сосудов для «неблагоприятных» факторов. Как следствие, это улучшает местное кровоснабжение и способствует быстрому восстановлению поврежденных сосудов, тканей и органов.

При любом воспалительном процессе, в том числе и при патологии почек увеличивается токсическая нагрузка на печень, которая является основной мишенью для поражения различными ксенобиотиками, и, как правило, по свободнорадикальному механизму. В связи с этим важным элементом профилактических и терапевтических мероприятий является использование средств с антирадикальным действием. Данные литературы говорят о том, что антирадикальная активность растительных препаратов определяется, главным образом, фенольными соединениями (флавоноидами и фенолокислотами) и витаминами. Нами установлено, что антирадикальные свойства наиболее выражены у видов подрода Equisetum Sad. с преимущественным содержанием флавоноидов и фенолкарбоновых кислот. При этом наиболее выраженную способность подавлять активность свободных радикалов проявил хвощ лесной, который также оказался наиболее перспективным гепатопротектором и корректором мутагенеза.

Исследование антитоксической и экскреторной активности хвощей показывает целесообразность углубленного изучения в данном направлении видов подрода Equisetum Sad., которые отличаются значительно большим набором гликозидов кверцетина, лютеолина, апигенина и фенолкарбоновых кислот. Напротив, нами отмечено, что экстракт хвоща зимующего - представитель подрода Hippohaete Milde практически не изменял биохимических показателей сыворотки крови и индикаторных ферментов, не влияя, таким образом, на экскреторную и антитоксическую функцию печени. Это позволяет сделать заключение о нецелесообразности поиска гепатопротекторов среди видов хвоща подрода Hippohaete Milde.

Таким образом, проведенные исследования показывают перспективность дальнейшего углубленного фармакологического исследования хвоща полевого, х.лесного, х.лугового, х.болотного, х.речного, х.зимующего и х.прибрежного.

На проведенных исследований нами разработана нормативная документация на перспективные виды сырья «Хвоща зимующего трава» и «Хвоща полевого трава». Кроме того, разработаны многокомпонентные растительные фитосредства: «Урологический сбор» и «Климактерический сбор». Проведены фармакологические исследования, которые подтвердили их безопасность и специфическую фармакологическую активность; разработаны проекты нормативной документации.

Выводы

1. На основании данных литературы по систематическому положению, распространенности и сырьевым ресурсам видов рода Equisetum L. флоры Сибири установлено, что наиболее перспективными для химико-фармакологического изучения являются: хвощ полевой - Equisetum arvense L.; х.речной (приречный) - E.fluviatile L.; х.зимующий - E.hyemale L.; х.болотный - E.palustre L.; х.луговой - E.pratense Ehrh.; х.лесной - E.sylvaticum L.; х.береговой (прибрежный) - E. ^x litorale Kuhlew. ex Rupr.

2. Морфологические различия видов хвоща заключаются в характере обрыва стебля, ветвления, форме и длине влагалищ стебля; направлении и количества граней ветвей 1-го и 2-го порядка; структуре зубцов влагалищ стебля; наличии или отсутствии спороносных колосков; характере поперечных срезов стебля и ветвей (наличие, расположение и диаметр полостей), наличии и строению выростов на верхушках ребер (гребнях),

Наиболее важными анатомическими особенностями хвощей являются: для подрода Equisetum Sad. - наличие непогруженных устьиц, расположенных в бороздках узкими и широкими полосами без четко выраженных продольных рядов и многообразие выростов клеток эпидермиса; для подрода Hippochaete Milde - наличие погруженных устьиц, расположенных в бороздках узкой полосой в 1-3 четко выраженных продольных ряда.

3. Впервые проведено определение устьичного индекса для 10 видов рода хвощ флоры Сибири. Показано, что устьичный индекс, как стоматографический признак, с определенной степенью достоверности можно использовать только для идентификации видов подрода Hippochaete Milde.

4. Проведена оценка фармакологической активности хвощей флоры Сибири по различным тестам:

- из 7 видов хвоща только хвощ зимующий и х.болотный достоверно увеличивают объем суточного диуреза и экскреторную функцию почек у крыс;

- наиболее значительно снижают прирост массы отека у экспериментальных животных хвощ полевой и х. зимующий;

- наиболее выраженный антибактериальный эффект проявили виды хвоща подрода Equisetum в отношении штаммов Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Кlebsiella pneumoniae и Pseudomonas aeruginosa.

- к числу перспективных фунгистатиков относятся хвощ полевой и хвощ зимующий. Экстракты этих видов в перспективных концентрациях задерживают рост возбудителей поверхностных дерматофитий;

- наиболее выраженную гепатопротекторную активность, коррелирующую с антирадикальным действием проявили хвощ полевой и х.лесной. Антирадикальные свойства наиболее выражены у видов подрода Equisetum.

5. Из 10 видов хвоща выделены и идентифицированы 30 веществ фенольной природы, из них впервые кемпферол 3,7 - ди-О-б-L-рамнопиранозид. Методом ВЭЖХ-МС с максимально возможной достоверностью обнаружены гликозид госсипетина, эллаговая кислота, дихлорпроизводные фенольных соединений (дихлорапигенин, дихлоркемпферол).

В зависимости от состава флавоноидов виды рода хвощ разделены на три группы: виды, накапливающие только гликозиды кемпферола (E.palustre, E.hiemale, E.scirpoides, E.variegatum, E.ramossisimum); виды, накапливающие гликозиды кемпферола и кверцетина (E.pratense; E.sylvaticum); виды, накапливающие гликозиды кверцетина, кемпферола, апигенина, генкванина и лютеолина (E.fluviatile; E.arvense, E. ^x litorale). Данная классификация соотносится с концепцией классификации хвощей, основанной на морфологических и микроморфологических характеристиках.

В 10 видах хвоща флоры Сибири установлено наличие более 30 макро- и микроэлементов. Различия в компонентном составе незначительные и связаны с удельным содержанием элементов. В видах, систематически близких, отмечено сходное накопление элементного состава. Установлено, что виды подрода Hippochaete Milde превосходят виды подрода Equisetum Sad. по содержанию кремния в 2-3 раза.

6. Анализ возможной взаимосвязи химического состава видов рода хвощ с их фармакологическими свойствами показал, что оптимальное сочетание фенольных соединений, ПСК и соединений кремния в видах подрода Equisetum Sad. обеспечивает диуретическое, антимикробное, противовоспалительное и гепатопротекторное свойства; виды подрода Hippohaete Milde, содержащие преимущественно соединения кремния в сочетании с небольшими количествами фенольных соединений и ПСК перспективны только в качестве источников диуретических и антигрибковых средств.

7. На основании проведенных исследований разработаны и утверждены новые Фармакопейная статья «Хвоща полевого трава» и «Инструкция по сбору и сушке травы хвоща полевого»; разработаны проекты ФС «Хвоща зимующего трава», ФСП «Урологический сбор» и ФСП «Климактерический сбор».

По теме диссертации опубликованы следующие работы

1. Антигрибковые свойства растений рода Equisetum / Н.Э. Коломиец, О.А. Мальцева, С.Е. Дмитрук // Тез.докл. научно-практической конференции, посвященной 80-летию фармацевтической службы Самарской области, Самарского государственного медицинского университета и Самарского аптечного склада, 1999.-Самара, 1999.-С. 99-100.

2. Поиск новых источников антигрибковых препаратов / Н.Э. Коломиец, О.А. Мальцева, С.Е. Дмитрук, С.Н. Ефимов // Тез.докл. международной научной конференции, 27-29 июня 2000 г.-Томск, 2000 г. - С. 34-35.

3. Изучение элементного состава растений рода Equisetum и Lemna / Н.Э. Коломиец, О.А. Мальцева, С.Е. Дмитрук // Тез.докл. Международной конференции молодых ученых, 26-29 июня 2001 г.-Москва, 2001. - т. 2.-С. 66-67.

4. Грибковые поражения кожи и перспективы поиска антигрибковых средств на основе суммарных комплексов травы хвоща / Н.Э. Коломиец, С.Е. Дмитрук // Тез.докл. первой Международной юбилейной конференции, посвященной 110-летию со дня открытия проф. К.Н. Виноградовым сибирской двуустки у человека, 2-6 апреля 2001 г.-Томск, 2001. - С. 95.

5. Дмитрук С.Е. Грибковые заболевания и альтернативные возможности фитотерапии // С.Е. Дмитрук, Н.Э. Коломиец, В.С. Дмитрук, О.А. Мальцева // Бюллетень СО РАМН. - Новосибирск, 2001. - №3.-С. 9-14.

6. Исследование микроэлементов, тяжелых металлов в сырье растений рода хвощ - перспективном источнике новых фитопрепаратов и биологически активных добавок / Н.Э. Коломиец, Л.Д. Агеева, С.Е. Дмитрук // Тез.докл. Всероссийской научно-технической конференции, 13-14 сентября 2001 г.-Бийск, 2001. - С. 22-26.

7. Possibilities of phytotherapy in treatment of fungal diseases / Kolomiets N, Maltseva O, Dmitruk S.. // «Yong doctors on the third millennium»: Materials of International Yong Medic's Conference, 17-22 September 2001. - Yerevan, Armenia, 2001. - S. 78.

8. Коломиец Н.Э. Растения рода Equisetum:степень химической изученности, токсичность, применение в медицине // Коломиец Н.Э., Дмитрук С.Е. / Объединенный медицинский журнал. - 2002. - №1 (2). - С. 86-89.

9. Возможности использования лекарственных растений для профилактики и лечения дерматомикозов / Н.Э. Коломиец, О.А. Мальцева, С.Е. Дмитрук // Тез.докл. Первого съезда микологов Современная микология в России: Москва, 11-13 апреля 2002 г. С. 229-230.

10. Коломиец Н.Э. Исследование острой токсичности растений рода Equisetum // Н.Э. Коломиец, С.Е. Дмитрук // Объединенный научный журнал. - 2003. - №32 (90).-С. 78.

11. Разработка ФС «Хвоща полевого трава» / Н.Э. Коломиец, С.Е. Дмитрук, Г.И. Калинкина // Лекарственные растения в фармакологии и фармации: Тез.докл. научн. конф., посвященной 50-летию Алт. гос. мед. ун-та.-Барнаул: АГМУ, 2004.-с. 103-104.

12. Проблема рационального использования экологического чистого ЛРС / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина, И.А. Туева, А.С. Ангаскиева, Е.А. Лукша, А.А. Марьин, Л.П. Охрименко, Е.Н. Сальникова, И.М. Смолякова // Труды постоянно действующей научно-технической школы-семинара студентов, аспирантов и молодых ученых «Информационные системы мониторинга окружающей среды». - Выпуск 3.-Томск, 2004. - с. 51-53.

13. Оценка перспективности некоторых видов лекарственного растительного сырья с точки зрения их экологической чистоты / Н.Э. Коломиец, И.АТуева., О.А. Мальцева, С.Е. Дмитрук, Г.И. Калинкина // Химия растительного сырья. - 2004. - №4. - С. 25-28.

14. Коломиец Н.Э. Изучение гепатопротекторных свойств хвоща полевого / Н.Э. Коломиец, Л.К. Михалева, В.В. Шейкин // Фармация. - 2005. - №4. - С. 38-40.

15. Коломиец Н.Э. Антимутагенные свойства растений рода хвощ / Н.Э. Коломиец, С.Н. Ефимов // Фармация №5, 2005.-С. 31-32.

16. Решение проблемы сырьевой базы лекарственных растений за счет систематически близких видов / Н.Э. Коломиец, Л.П. Охрименко, Е.Н. Сальникова, В.Н. Тихонов // Проблемы изучения рационального покрова Сибири: Материалы III Международной научной конференции, посвященной 120-летию Гербария им. П.Н. Крылова Томского государственного университета (Томск, 16-18 ноября 2005 г.). - Томск: Изд-во Томского ун-та, 2005.-198 с.

17. Анатомическое строение растений рода хвощ / Н.Э. Коломиец, Н.Н. Сапронова Г.И. Калинкина, С.Е. Дмитрук // Фармация. - 2006. - №1.-С. 19-21.

18. Проблема фальсификации сырья хвоща полевого / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина, С.Е. Дмитрук, А.М. Зиновьева // Фармация. - 2006. - №2. - С. 37-42.

19. Коломиец Н.Э. Растения рода хвощ / Н.Э. Коломиец // Фармация. - 2006. - №3.-С. 46-48.

20. Антимикробные свойства компонентов противоклимактерического сбора / Н.Э. Коломиец, Т.В Полуэктова., Г.И. Калинкина, М.Т. Джумаева // Бюллетень Сибирской медицины. - Томск, 2006. - том 5. - приложение 2. - С. 122-124.

21. Фитотерапия климактерических расстройств / Т.В. Полуэктова, Н.Э. Коломиец, Г.И. Калиникина // Науки о человеке: материалы VII конгресса молодых ученых и специалистов.-Томск, 2006. - с. 136.

22. Коломиец Н.Э. Вопросы стандартизации травы хвоща полевого / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина // Фармация. - 2007. - №1.-С. 11-14.

23. Антигрибковые свойства хвощей флоры Сибири / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина, С.Е. Дмитрук // Фармация. - 2007. - №4.-С. 36-40.

24. Коломиец Н.Э. Антибактериальные свойства хвощей / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина // Фармация. - 2007. - №5.-С. 38-39.

25. Проблема урологических заболеваний и основные направления их решения с помощью фитотерапии / Е.А. Лукша, Н.Э. Коломиец, Т.В. Полуэктова // Аптечное дело. - 2007. - №1. - с. 36-47.

26. Фармакогностическая оценка биологически активных добавок, реализуемых на российском рынке / С.Е. Дмитрук, Г.И. Калинкина, Е.А. Лукша, Н.Э. Коломиец, Т.В. Полуэктова // VII Межрегиональная научно-практическая фармацевтическая конференция «Биологически активные соединения в профилактике заболеваний и укреплении здоровья нации», 23 мая 2007. - Новосибирск, 2007.-С. 11-13.

27. Разработка состава и изучение характеристик подлинности многокомпонентного урологического сбора / Е.А. Лукша, Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина // Международная научно-практическая конференция «Научные исследования и практическое применение. Современное состояние и пути развития 2007», 1-15 октября 2007. - Том 15. - Химия. Медицина ветеринария и фармацевтика. Биология, сельское хозяйство. - С. 34-43.

28. Количественное определение флавоноидов в многокомпонентных сборах / Т.В. Полуэктова, Е.А. Лукша, Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина, Л.А. Тихонова // Сборник научных трудов Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. - Пятигорск, 2008. - вып. 63.-С. 319.

29. Растения рода хвощ (Equisetum L.) - перспективные источники новых лекарственных препаратов / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина, Р.А. Данильчук // Сборник научных трудов IX международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» «Влияние космической погоды на биологические системы в свете учения А, Л. Чижевског».-Москва, 2008. - С. 260-261.

30. Проблема качества лекарственного растительного сырья, реализуемого на фармацевтическом рынке России / Н.Э. Коломиец, Е.А. Лукша, Г.И. Калинкина, В.В. Шейкин, В.Ю. Андреева, Т.В. Полуэктова // Фармация, 2008. - №8.-С. 33-38.

31. Коломиец Н.Э. Количественное определение кремния в хвощах / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина // Фармация. - 2009. - №3.-С. 13-15.

32. Патент на изобретение «Лекарственное средство, обладающее комплексным диуретическим, противомикробным и противовоспалительным действием» №2314116 от 10.01.2008 г.;

33. Патент на изобретение «Лекарственное средство для профилактики и лечения патологический проявлений климактерического синдрома» №2376026 от 20.12.2009 г.

34. Исследование химического состава нового урологического сбора / Е.А. Лукша, Г.И. Калинкина, Н.Э. Коломиец // Химия растительного сырья, 2009. - №4.-С. 139-142.

35. Исследование фенольных соединений урологического сбора методом ВЭЖХ-МС / Е.А. Лукша, Г.И. Калинкина, Н.Э. Коломиец // Химия растительного сырья, 2009. - №4.-С. 143-146.

36. Коломиец Н.Э. Растения рода Хвощ (EQUISETUM L.). Систематика, химический состав, перспективы использования в медицине / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина. - Томск: Печатная мануфактура, 2009. - 88 с.

37. Коломиец Н.Э. Сравнительное исследование химического состава видов рода хвощ флоры Сибири / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина // Химия растительного сырья. - 2010. - №1.-С. 149-154.

Размещено на Allbest.ru