Провоспалительные цитокины в регуляции процессов воспаления и репарации

Было выполнено исследование влияния мазевой формы IL-1в на экспрессию белков плотных контактов (клаудина-1, окклюдина и ZO-1) в эпидермисе при заживлении ран у мышей. Изучение выполнено в тех же группах мышей, что и электронно-микроскопическое исследование. Было показано, что введение ГК приводит к снижению экспрессии белков плотных контактов в эпидермисе при заживлении раны на 8-е сутки. Местные аппликации мазевой формы IL-1 способствовали поддержанию экспрессии клаудина-1, окклюдина и ZO-1 на 8-е сутки. На 14-е сутки наблюдали полную эпителизацию ран при нормальном заживлении, а также в группе мышей, которых лечили IL-1. На этом сроке в группе мышей, у которых применяли IL-1, клаудин-1 и окклюдин обнаруживались только в поверхностных слоях новообразованного эпидермиса. Напротив, в группе мышей, у которых использовали плацебо, в гиперпролиферативной зоне все еще отмечалась интенсивная экспрессия клаудина-1 и окклюдина.

Исследование веса и параметров иммунитета мышей проведено в процессе лечения мазевой формой IL-1. Изменения веса мышей, веса селезенок, количества спленоцитов, количества лейкоцитов, лимфоцитов и нейтрофилов крови были практически одинаковыми в группах мышей, которых лечили IL-1 или плацебо (рис. 9). Таким образом, применение мазевой формы IL-1 приводило к позитивным изменениям в заживлении ран, не оказывая выраженного системного действия.

В данном исследовании IL-1 был использован в виде мазевой формы с концентрацией цитокина 50 нг/мл. Основное преимущество мазевой формы состоит в постепенном высвобождении IL-1 в раневом очаге. Результаты нескольких исследований подтверждают, что IL-1 регулирует функции клеток соединительной ткани и кератиноцитов in vitro в диапазоне доз, включающем использованную нами концентрацию (Thornton S.C.,et al., 1990; Maas-Szabowski N., et al., 2000; Steude J., et al., 2002). В литературе находятся лишь единичные сообщения, касающиеся локального применения IL-1 при лечении ран кожи в экспериментах (Sauder D.N., et al., 1990; Vegesna V., et al., 1995). Эти результаты, указывающие на то, что IL-1 может стимулировать репаративные процессы в ранах, согласуются с полученными в данной работе доказательствами ранозаживляющей активности IL-1.

Использование мазевой формы рекомбинантного IL-1в человека у пациентов с длительно незаживающими ранами и трофическими язвами нижних конечностей

Изучение ранозаживляющего действия мазевой формы рекомбинантного IL-1 человека проведено у пациентов с длительно незаживающими ранами и трофическими язвами нижних конечностей на фоне хронической венозной недостаточности, варикозного расширения вен или сахарного диабета I и II типов. В контрольной группе применяли обычное лечение (мази «Солкосерил» и «Вульнузан» на гидрофобной основе). Цитологический анализ мазков-отпечатков был выполнен у 51 человека, функциональная активность нейтрофилов изучена у 39 человек. Исследования выполнялись до лечения, на 3-и, 7-е и 14-е сутки в динамике терапии.

Цитологическое исследование мазков-отпечатков является показательным методом при изучении процессов заживления ран. До начала применения мазевой формы IL-1 отмечали признаки вялотекущего воспалительного процесса, что проявлялось небольшим количеством клеток и преобладанием в ране нейтрофилов в разной степени деструкции. Количество макрофагов и лимфоцитов было снижено, а фибробласты и эпителиальные клетки отсутствовали. Отмечено значительное количество микроорганизмов в ране, которые располагались внеклеточно. Данная цитологическая картина является типичной для длительно незаживающих ран (Сергель О.С., Гончарова З.Н., 1990; Костюченок Б.М., Карлов В.А., 1990). При применении мазевой формы IL-1 динамика цитологических показателей отражала положительные изменения в процессе заживления раны (табл. 4). Происходило увеличение количества клеток на раневой поверхности, постепенно снижалась доля нейтрофилов, возрастала доля макрофагов и клеток соединительной ткани в мазках-отпечатках из ран.

Таблица 4

Цитологическое исследование мазков-отпечатков из длительно незаживающих ран у пациентов на фоне лечения мазевой формой, содержащей 50 нг/мл рекомбинантного IL-1 человека

Примечание: * - различия с контрольной группой достоверны, p< 0,05; ** - то же, p < 0,01, Т-тест Стьюдента. ^# - различия с данными «до начала лечения» достоверны, p< 0,05; ^## - то же, p < 0,01, парный Т-тест Стьюдента. Количество пациентов в группах: лечение мазевой формой с IL-1 (50 нг/мл) n = 36, контроль n= 15.

Рисунок 10 Влияние применения мазевой формы IL-1 (50 нг/мл) на фагоцитоз нейтрофилов в раневом очаге, приведено фагоцитарное число. Примечание: * p< 0,05 - различия с контрольной группой достоверны, ** p < 0,01, Т-тест Стьюдента. ^# p< 0,05 ^## p < 0,01 - различия с данными «до начала лечения» достоверны, парный Т-тест Стьюдента. Количество пациентов в группах: мазевая форма IL-1 - n = 22, контроль - n = 17

На 3-и сутки применения мазевой формы IL-1 происходило увеличение показателей спонтанной продукции супероксидных радикалов по сравнению с исходными значениями и контрольной группой (p<0,05). Особенно выраженным являлось усиление фагоцитарной функции нейтрофилов, которое наблюдалось на 3-и и 7-е сутки лечения (рис. 10). Усиление процессов фагоцитоза после применения IL-1 обеспечивало очищение раны от некротических тканей и микроорганизмов, что в дальнейшем, предохраняло рану от развития вторичной инфекции. Известно, что IL-1 обладает способностью опосредованно стимулировать функции нейтрофилов. Показано, что преинкубация нейтрофилов человека с IL-1 усиливает способность лейкоцитов отвечать на другие стимулы, повышая продукцию супероксидных радикалов и вызывая усиление фагоцитоза (Ogle J.D., et al., 1990; Yagisawa M., 1995).

Клиническое изучение действия мазевой формы IL-1 во 2 и 3 фазах раневого процесса было проведено у 70 пациентов. Мазевая форма, содержащая 50 нг/мл IL-1 (применение изучено у 43 пациентов) была признана оптимальной для клинического применения, так как в ранах синхронно протекали процессы образования грануляционной ткани и эпителизации. При использовании данной концентрации цитокина, в среднем в 1,4 раза увеличивалась скорость заживления ран, эпителизация ран начиналась раньше на сутки по сравнению с контролем. Уменьшение размеров раны в 2 раза отмечено у 12 пациентов (27,9%) в течение от 7 до 14 суток. Полное заживление ран в течение 2 - 4 недель наблюдали у 6 пациентов (14%). В контрольной группе (21 пациент) полной эпителизации ран в течение 14 суток не наблюдали, а уменьшение размеров раны в 2 раза было только у 2 пациентов (9,5%).

Как следует из полученных данных, при применении мазевой формы IL-1 усиливались как репаративные процессы в ранах, так и происходило повышение функций фагоцитов, что способствовало успешному заживлению ран. Поэтому, использование мазевой формы IL-1, цитокина с широким спектром биологического действия, с нашей точки зрения, является перспективным направлением для лечения хронических ран у человека.

Изучение механизмов лечебного действия рекомбинантного ИЛ-1 человека при местном применении у пациентов с гнойно-воспалительными заболеваниями

IL-1 был успешно применен для локальной терапии пациентов с бактериальными гнойными абсцессами легких, ХГРС, а также с флегмонами ЧЛЛ, у которых проведенная стандартная терапия была неэффективной.

Рекомбинантный IL-1 человека в концентрациях 10-20 нг/мл вводили в верхнечелюстные пазухи носа 93 пациентам с ХГРС. Группу сравнения составили 30 пациентов с ХГРС, получавших обычное лечение с применением антибиотиков (контрольная группа). Иммунологические исследования проводили до начала лечения (на 1 сутки), на 2 сутки проведения терапии и после курса лечения (на 7 сутки) у 57 случайным образом отобранных пациентов.

Исследование цитологического состава и функций нейтрофилов в содержимом верхнечелюстных пазух носа проведено при терапии IL-1в (41 человек) и у 16 человек, которым проводили стандартную терапию, на 1, 2 и 7 сутки лечения. После окончания курса IL-1в на 7 сутки происходило увеличение доли эпителиальных клеток по сравнению с группой пациентов, получавших стандартную терапию (28,54 ± 5,63% и 13,73 ± 4,55%, соответственно, p<0,05), что свидетельствует о стихании воспалительного процесса в пазухах носа. После первого введения IL-1 (2 сутки) и после курса (на 7 сутки) увеличивался фагоцитарный индекс по сравнению с данными до начала лечения (рис. 11). После окончания курса применения IL-1в (на 7 сутки) показатели фагоцитарного числа были значительно выше, чем после курса стандартной терапии.

Проводили измерение уровней провоспалительных цитокинов IL-1, IL-1, IL-6 и IL-8 в содержимом пазух носа до и после лечения. Исследование проведено в группе пациентов, которым вводили 10 нг/мл IL-1 (n=17). Контрольная группа состояла из 19 человек, получавших обычное лечение. IL-1 не был выявлен ни в одном случае. Концентрации эндогенного IL-1 снижались практически у всех пациентов с ХГРС на 7 сутки после проведенного лечения. После одного введения IL-1 (на 2 сутки)

Рисунок 11 Влияние IL-1 на фагоцитоз нейтрофилов в содержимом `верхне-челюстных пазух у пациентов с ХГРС, фагоцитарное число. ** - p<0,01, различия достоверны по сравнению с контролем. IL-1в n=41, контроль (обычное лечение), n=16

Рисунок 12 Уровни IL-6 в содержимом верхнечелюстных пазух у пациентов с ХГРС в ходе терапии IL-1 (10 нг/мл). Примечание: * - различия достоверны по сравнению с данными до лечения 1 сутки, p<0,05, парный Т-тест Стьюдента. Контроль - обычное лечение

Таблица 5

Функции нейтрофилов периферической крови пациентов ХГРС до и после курса местной терапии IL-1в

Таблица 6

Продукция цитокинов клетками периферической крови пациентов ХГРС до и после терапии IL-1в

происходило повышение уровней IL-6 в содержимом пазух по сравнению с данными до лечения (рис. 12). В контрольной группе пациентов такого повышения не наблюдалось. Уровни IL-8 также повышались на 2 сутки терапии IL-1 в среднем в 2,3 раза по сравнению с группой контроля. Однако эти различия не были статистически значимыми из-за больших индивидуальных колебаний уровней IL-8 у разных пациентов. Источником провоспалительных цитокинов в респираторном тракте могут являться клетки эпителия, продуцирующие цитокины в ответ на инфекцию (Bedard M., et al., 1993 ; Inoue H., 1994 ; Khair O.A., et al., 1996).

У пациентов с ХГРС было выполнено сравнительное исследование функциональной активности нейтрофилов (табл. 5) и продукции цитокинов (табл. 6) в периферической крови до и после местной терапии IL-1, а также в контроле. Не было выявлено значительных различий между группами по данным показателям. Таким образом, действие IL-1 ограничивалось воспалительным очагом и не проявлялось в периферической крови. Положительная динамика иммунологических показателей проявлялась в клинических улучшениях показателей у пациентов с ХГРС. После применения IL-1 количество гноя в верхнечелюстных пазухах быстро снижалось, а клинические симптомы заболевания исчезали на более ранних сроках.

Изучение местного действия L-1 было проведено при еще одной локализации бактериального гнойно-воспалительного процесса в респираторном тракте - при абсцессах легкого. Для того чтобы оценить влияние терапии IL-1в, на цитологическую картину в полости абсцесса было проведено исследование мазков содержимого полостей до и после проведенного лечения (табл. 10). До начала применения IL-1в нейтрофилы составляли около 90% всех клеток в полости абсцесса, макрофаги - около 6-7 %, количество лимфоцитов было незначительным. Результаты подтверждаются тем, что, как показано ранее, нейтрофилы представляют собой основной тип клеток в смывах из носовой полости, а также БАЛ у пациентов с острыми и хроническими заболеваниями различных отделов респираторного тракта (Ермаков Е.В. и др., 1990; Castella X., Artigos A., 1990; Munc G. et al., 1995). После курса лечения IL-1в происходило значительное увеличение количества макрофагов в очаге деструкции, что является признаком разрешения воспалительного процесса. В то же время, после обычного лечения доля макрофагальных клеток, наоборот, была даже ниже по отношению к исходным данным, что свидетельствует о продолжающемся гнойном воспалении.

Сравнительный анализ функциональной активности нейтрофилов, полученных из периферической крови и полости деструкции у пациентов с абсцессами легких, включал оценку показателей на всех этапах фагоцитарной реакции (табл. 7). Исследованные функциональные показатели нейтрофилов, полученных из полости абсцесса, были значительно ниже, чем соответствующие показатели нейтрофилов крови. Эти результаты свидетельствуют о том, что нарушения функций нейтрофилов происходят, главным образом, локально в гнойно-деструктивном очаге. Эти результаты согласуются с ранее полученными результатами о том, что гнойно-деструктивные заболевания легких, такие как абсцессы легких, сопровождаются значительными нарушениями функций нейтрофилов БАЛ (Абишева А.Б. и др., 1991; Абишева А.Б., Козаченко Н.В., 1991; Шойхет Я.Н. и др., 1991).

Таблица 7

Сравнительная оценка функций нейтрофилов, полученных из полости деструкции и периферической крови у пациентов с абсцессами легких

Примечание: различия между данными в строках «полость абсцесса» и «кровь» достоверны, * - р < 0,05, ** p < 0,01 (n=22).

Изучение влияния терапии IL-1в на функциональную активность нейтрофилов в очаге воспаления показало, что IL-1в оказывает наиболее выраженное действие на направленную миграцию и фагоцитоз. В течение курса применения IL-1в усиливалась направленная миграция к ФМЛП или к IL-8 нейтрофилов очага воспаления (табл. 8). Появление направленной миграции нейтрофилов к ИЛ-8 может быть связано с увеличением количества активных рецепторов к ИЛ-8 на поверхности нейтрофилов после начала применения ИЛ-1. В литературе имеются сообщения о том, что воспалительные медиаторы могут стимулировать экспрессию рецепторов к ИЛ-8 на поверхности нейтрофилов (Manna Sunil K. et al., 1995). После курса лечения IL-1в показатели миграции к ФМЛП превышали соответствующие показатели после обычного лечения. Как следует из данных, приведенных в таблице 9, локальное применение IL-1в оказывало значительное стимулирующее действие на фагоцитарную функцию нейтрофилов, полученных из очага деструкции. После проведенного курса терапии IL-1в значительно возрастали фагоцитарные индексы, и повышались значения фагоцитарного числа нейтрофилов.

Таблица 8

Влияние применения IL-1в на показатели направленной миграции нейтрофилов у пациентов с абсцессами легких

Примечание: * - различия с группой «обычное лечение» достоверны, р< 0,05. + - -различия с показателями до лечения достоверны, р< 0,05. Количество пациентов в группах: IL-1в n=22, обычное лечение n=11.

Таблица 9

Влияние применения IL-1в на показатели фагоцитарной функции нейтрофилов у пациентов с абсцессами легких

Примечание: различия с группой «обычное лечение» достоверны * - р< 0,05, ** - p < 0,01. -различия с показателями до лечения достоверны, + - р< 0,05, ++ - p < 0,01. Количество пациентов в группах: IL-1в n=22, обычное лечение n=11.

Известно, что IL-1в не оказывает прямого активирующего действия на функции нейтрофилов в системе in vitro. Действие IL-1в может быть опосредованным за счет индукции других провоспалительных цитокинов, таких как, IL-8 и TNF-б. В связи с этим, было проведено исследование синтеза цитокинов лейкоцитами, полученными из полости абсцесса, у 12 случайным образом отобранных пациентов в динамике проводимой терапии IL-1в. Исследовали мазки, приготовленные из содержимого полостей абсцессов. Результаты приведены в таблице 11. IL-1в обнаруживался в цитоплазме

Таблица 10

Динамика показателей цитологического состава в полости абсцесса до и после местной терапии рекомбинантным IL-1в человека

Примечание: * - различия с контролем достоверны, p < 0,05. Количество пациентов в исследуемых группах: IL-1в n = 22, обычное лечение n = 11.

Таблица 11

Иммуноцитохимическое исследование продукции цитокинов клетками, полученными из полости абсцесса, в динамике терапии IL-1в

макрофагальных клеток, количество клеток, продуцирующих IL-1в, не изменялось на всех сроках наблюдения. Местное применение IL-1в приводило к увеличению количества клеток (макрофагов и/или нейтрофилов), содержащих внутриклеточные цитокины, IL-1, IL-8 и TNF-б, в полости деструкции пациентов с абсцессами легких. Показано, что альвеолярные макрофаги являются основным источником провоспалительных цитокинов при патологии в легких (Sisson J. et al., 1987). Нейтрофилы, стимулированные IL-1в, или другими воспалительными медиаторами, могут продуцировать цитокины (Cassatella M.A., 1992; Marucha P.T., et al., 1991; Strieter R.M. et al., 1992).

IL-1в применяли для терапии пациентов с абсцессами легких, у которых проведенное обычное лечение было неэффективным. Клиническое исследование показало, что ежедневные введения IL-1 в концентрации 10 нг/мл в течение 7-10 дней приводили к быстрому клиническому улучшению, которое сопровождалось снижением воспалительного процесса в полости абсцесса и уменьшением перифокальной инфильтрации, а также уменьшением размеров полости абсцесса через месяц после терапии с последующим образованием рубца через 1-2 месяца.

Исследование местного применения IL-1в было проведено при флегмонах ЧЛЛ. После хирургической очищения очага гнойного воспаления у пациентов с флегмонами ЧЛЛ применяли местно препарат рекомбинантного IL-1в человека в концентрации 100 нг в 1,0 мл в первой фазе раневого процесса. У пациентов контрольной группы проводили обычное лечение.

Таблица 12

Изменения показателей функциональной активности нейтрофилов раневого отделяемого при применении IL-1 у пациентов с флегмонами ЧЛЛ

Примечание: * - различия достоверны с контрольной группой, p<0,05, + - различия достоверны с данными до лечения, p<0,05.

А

Б

Рисунок 13 Изменения содержания цитокинов в раневой жидкости при применении IL-1 у пациентов с флегмонами ЧЛЛ. А) IL-1. Б) IL-8. Примечание: * - различия достоверны с группой, получавшей обычное лечение, p<0,05. Количество пациентов: IL-1 - n=11, обычное лечение - n=10

У 34 пациентов с флегмонами ЧЛЛ в динамике терапии было выполнено исследование бактерицидной и фагоцитарной функции нейтрофилов, полученных из раневого очага. Применение IL-1 приводило к увеличению показателей индуцированной ФМА продукции супероксидных радикалов и фагоцитарного индекса на 7 сутки. Результаты представлены в таблице 12.

Оценка содержания провоспалительных цитокинов в раневом отделяемом выполнена в динамике лечения IL-1 и при проведении стандартной терапии (рис. 13). До начала лечения уровни IL-1в и IL-8 в раневом отделяемом в обеих группах были сходными. После начала применения IL-1в на 4-е сутки концентрации IL-8 превышали его уровни в группе пациентов, получавших обычное лечение. На седьмые сутки терапии уровни эндогенного IL-1в снижались в группе пациентов, которым применяли IL-1в, в то время как в группе пациентов, получавших обычное лечение, концентрации эндогенного IL-1в оставались на прежнем уровне.

Изучение клинической эффективности применения IL-1 у пациентов с флегмонами ЧЛЛ показало, что происходит ускорение сроков очищения раны, переход раневого процесса во вторую фазу и наблюдается быстрое активное гранулирование раны, а также сокращаются сроки лечения.

ВЫВОДЫ

1. При гнойно-воспалительных заболеваниях у человека наблюдается значительное снижение функциональной активности нейтрофилов в очаге воспаления, цитологическая картина характеризуется преобладанием нейтрофилов и уменьшением доли макрофагов и лимфоцитов. Происходит локальное повышение продукции провоспалительных цитокинов IL-1б, IL-1, IL-6, IL-8 и TNF- при увеличении активности, тяжести воспалительного процесса, а также при наличии бактериальной инфекции.

2. Усиление продукции IL-1в и IL-8 в слизистой оболочке желудка является маркером инфицирования Н.pylory у детей с хроническими гастродуоденальными заболеваниями.

3. При применении мазевой формы рекомбинантного IL-1в человека в экспериментах у мышей происходит уменьшение размеров ран кожи, повышение количества клеток в грануляционной ткани и усиление эпителизации. Аппликации мазевой формы IL-1в в экспериментальных исследованиях не оказывают влияния на вес тела, вес селезенки, количество спленоцитов и лейкоцитарный состав периферической крови у мышей.

4. Использование мазевой формы рекомбинантного IL-1в человека у пациентов с длительно незаживающими ранами и трофическими язвами нижних конечностей стимулирует фагоцитарную и бактерицидную функции нейтрофильных гранулоцитов, а также вызывает увеличение количества макрофагов и клеток соединительной ткани в раневом очаге.

5. Местное применение рекомбинантного IL-1в человека при гнойно-воспалительных процессах стимулирует функциональную активность нейтрофилов (хемотаксис, фагоцитоз, бактерицидную функцию), вызывает повышение уровней IL-8, IL-6, а также увеличение синтеза IL-1, IL-8 и TNF-б лейкоцитами в очаге воспаления. При местном применении IL-1в при гнойно-воспалительных заболеваниях у человека не наблюдается влияния на функции нейтрофилов и продукцию цитокинов в периферической крови.

6. Механизмы иммуностимулирующего действия IL-1в при местном применении связаны со стимуляцией синтеза провоспалительных цитокинов и активацией функций нейтрофилов в очаге воспаления у человека.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Определение продукции цитокинов в очаге воспаления может служить маркером особенностей протекания воспалительного процесса. Метод иммуногистохимии является информативным для изучения местной продукции цитокинов при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, а также воспалительных процессов в верхних и нижних отделах респираторного тракта. Результаты исследования продукции цитокинов могут служить основанием для индивидуального подбора терапии.

Рекомбинантный IL-1 человека может быть использован в качестве лечебного препарата в виде раствора для терапии хронических гнойных воспалительных процессов. Применение мазевой формы, содержащей IL-1, является перспективным направлением для лечения длительно незаживающих ран и трофических язв различной этиологии у человека.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Simbirtsev AS, Prokopieva ED, Ivanova EA, Konusova VG, Ketlinsky SA, Perumov ND. Interleukin-1 and tumor necrosis factor production by human monocytoid cells: study on a single cell level // European Cytokine Network. 1992.V. 3. P. 421-428.

2. Симбирцев А.С., Конусова В.Г., Варюшина Е.А., Кетлинский С.А. Взаимосвязанные этапы транскрипции гена, трансляции МРНК и секреции биологически активного интерлейкина-1 моноцитами периферической крови человека // Иммунология. 1995. № 3. С. 48-51.

3. Варюшина Е.А., Котов А.Ю., Симбирцев А.С., Кетлинский С.А., Саламатов А.В., Золотарев Д.В., Бисенков Л.Н. Изучение механизмов местного иммуностимулирующего действия интерлейкина-1. Повышение продукции провоспалительных цитокинов в очаге воспаления под влиянием интерлейкина-1 // Иммунология. 2000. № 4. С. 45-48.

4. Варюшина Е.А., Конусова В.Г., Симбирцев А.С., Кетлинский С.А., Саламатов А.В., Золотарев Д.В., Бисенков Л.Н. Изучение механизмов местного иммуностимулирующего действия интерлейкина-1. Усиление функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов человека в очаге воспаления под влиянием интерлейкина-1 // Иммунология. 2000. № 3. С. 18-21.

5. Бисенков Л.Н., Симбирцев А.С., Золотарев Д.В., Cаламатов А.В., Варюшина Е.А. Местное применение рекомбинантного интерлейкина-1 в комплексном лечении больных с острыми абсцессами легких // Вестник хирургии. 2001. Т. 160. №3. С. 20-24.

6. Variouchina E.A., Antsiferova M.A., Aleksandrov G.V. Konusova V.G., Pigareva N.V., Petrov A.V., Simbirtsev A.S. Topical application of interleukine-1 accelerates wound healing in hydrocortisone-treated mice // Russian Journal of Immunology- 2003. V. 8. № 2-3. P. 155-164.

7. Варюшина Е.А., Анциферова М.А., Александров Г.В., Минаева Е.Н., Пигарева Н.В., Петров А.В., Конусова В.Г., Исаева Е.Н., Бокованов В.Е., Котов А.Ю., Казаков А.А., Демьянов А.В., Симбирцев А.С. Модель осложненного течения раневого процесса у мышей на фоне иммуносупрессии, вызванной введением гидрокортизона // Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3. №. 4. С. 14-20.

8. Бисенков Л.Н., Симбирцев А.С., Золотарев Д.В., Саламатов А.В., Варюшина Е.А. Местная иммунозаместительная терапия Беталейкином в комплексном лечении острых абсцессов легких с затяжным течением // Грудная и сердечно-сосудистая хирургия. 2005. №2. С. 28-32.

9. Власова Г.В., Егоров Л.В., Котов А.Ю., Варюшина Е.А., Симбирцев А.С. Особенности общей и местной иммунологической реактивности у детей с хроническими средними отитами // Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4. № 4. С. 39-44.

10. Варюшина Е.А., Симбирцев А.С.. Регуляторная роль интерлейкина-1 при заживлении ран кожи. Обзор // Russian Journal of Immunology. 2006. V.9. S.3., P. 48-52.

11. Саламатов А.В., Баринов О.В., Синенченко А.Г., Варюшина Е.А., Конусова В.Г., Симбирцев А.С. Эффективность рекомбинантного ИЛ-1 в лечении гнойно-деструктивных заболеваний легких и плевры // Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5. № 4. С. 39-45.

12. Варюшина Е.А., Москаленко В.В., Симбирцев А.С., Лебедева Т.П., Бубнов А.Н.. Ранозаживляющее и местное иммуностимулирующее действие рекомбинантного ИЛ-1 человека при применении у больных с длительно незаживающими ранами и трофическими язвами. // Цитокины и воспаление. 2007. T. 6. № 2. С. 54-62.

13. Е.А.Варюшина, В.В.Москаленко, Т.П.Лебедева, А.Н.Бубнов, А.С.Симбирцев. Использование интерлейкина-1 для местного лечения гнойно-некротических поражений нижних конечностей // Медицинская иммунология. 2008. Т. 10. № 4-5. С. 439-448.

14. Гуломов З.С., Симбирцев А.С., Янов Ю.К., Варюшина Е.А., Тырнова Е.В. Роль цитокинов при лечении острых и хронических заболеваний верхних дыхательных путей // Российская оториноларингология. 2008 - №6(37) -С.200-205.

15. Варюшина Е.А., Козлова И.П., Котов А.Ю., Симбирцев А.С. Продукция провоспалительных цитокинов в слизистой оболочке желудка у детей с хроническими гастродуоденальными заболеваниями при инфекции Helicobacter pylori // Российский иммунологический журнал. 2009. Т. 3 (12). № 1. С. 72-83.

16. Розломий В.Л., Варюшина Е.А., Рыбальченко О.В.. Динамика заживления экспериментальной раны у мышей под влиянием препарата интерлейкин-1 // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2009. № 5. С. 79 - 82.

17. Дроздова М.В., Симбирцев А.С., Варюшина Е.А., Тырнова Е.В.. Продукция провоспалительных цитокинов в ткани глоточной миндалины при хроническом лимфопролиферативном синдроме у детей // Российская оторинолярингология. 2009. №5 (42). С. 35-45.

18. Варюшина Е.А., Симбирцев А.С.. Инфекция Helicobacter pylori: регуляторная роль цитокинов при воспалении и аллергии. // Российский иммунологический журнал. 2010. №2. С. 13 - 22.

19. Варюшина Е.А., Розломий В.Л., Александров Г.В., Рыбальченко О.В., Потокин И.Л., Исаева Е.Н., Симбирцев А.С. Влияние местного применения интерлейкина-1 на цитологические параметры заживления кожной раны // Цитокины и воспаление. 2010. Т. 9. №2. С. 7 -12.

20. Марков А.Г., Розломий В.Л., Варюшина Е.А., Александров Г.В., Симбирцев А.С.. Влияние ИЛ-1в на экспрессию белков плотных контактов при регенерации кожной раны на фоне иммуносупрессии. Российский иммунологический журнал. 2010. Т. 4 (13). № 1. С. 54 - 59.

21. Варюшина Е.А., Александров Г.В., Сазонова Т.А., Симбирцев А.С. Изучение влияния местного применения рекомбинантного человеческого интерлейкина-1 на репарацию язвенных повреждений слизистой оболочки желудка // Цитокины и воспаление. 2012. Т. 11. №1, с. 64 - 69.

22. Пат. 2355415, Российская Федерация, МПК7 А61Р1/04, А61К 38/20. Способ лечения повреждений слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта / Симбирцев А.С., Ищенко А. М., Варюшина Е. А., Александров Г. В.; ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, ООО «Цитокин». №2007125264/14; заявл. 04.07.2007; опубл. 10.01.2009.

23. Пат. 2361606, Российская Федерация, МПК7 A61K 38/20, 61K33/10, A61K9/08, A61P1/04. Композиция для лечения повреждений слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта / Симбирцев А.С., Ищенко А. М., Варюшина Е. А., Александров Г. В.; ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, ООО «Цитокин». № 2007125265/15; заявл. 04.07.2007; опубл. 10.01.2009.

24. Пат. 2432170, Российская Федерация, МПК А61К 38/20, А61Р 37/02. Интерлейкинсодержащая композиция (варианты) / Симбирцев А.С., Ищенко А. М., Пигарева Н.В., Петров А.В., Митрофанов Е.В., Котов А.Ю., Минаева Е.Н., Исаева Е.Н., Варюшина Е.А.; ООО «Цитокин». № 2009110858/15; заявл. 26.03.2009, опубл. 10.10.2010.

25. Симбирцев А.С., Петропавловская О.Ю., Котов А.Ю., Варюшина Е.А. Местное применение препаратов рекомбинантного интерлейкина-1 бета человека при лечении гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой локализации // Ученые записки СПГМГУ им. Акад. И.П.Павлова. 2000. Т. 7. № 2. С. 113-118.

26. Simbirtsev A., Variouchina E., Konusova V., Kotov A., Ketlinsky S., Salamatov A. and Bisenkov L. Local administration of interleukin-1beta for the treatment of lung abscesses induces neutrophil activation and changes in proinflammatory cytokine production // Eur.Cytokine Netw. 2001.V. 12. P. 420-429.

27. Бисенков Л.Н., Симбирцев А.С., Золотарев Д.В., Леонович А.П., Варюшина Е.А., Саламатов А.В. Местное применение аутологичного лейкоцитоконцентрата и рекомбинантного интерлейкина-1 в комплексном лечении больных острых абсцессов легких // Aqua Vitae. Российский медицинский журнал. 2001. № 4. С. 23-26.

28. Александрова В.А., Козлова И.П., Симбирцев А.С., Варюшина Е.А.. Клинико-иммунологические особенности детей с Helicobacter pylori-ассоциированной гастродуоденальной патологией // Российский семейный врач.2002. № 1. С. 30-33.

29. Соловьев М.М., Симбирцев А.С., Петропавловская О.Ю., Варюшина Е.А., Котов А.Ю. Препарат «Беталейкин» в лечении гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области // Terra Medica. 2003. № 2. С. 14-16.

30. Варюшина Е.А., Москаленко В.В., Симбирцев А.С., Лебедева Т.П., Бубнов А.Н. Использование мази, содержащей интерлейкин-1, усиливает функции раневых нейтрофилов и повышает репаративные процессы при хронических ранах у человека // Вестник уральской медицинской академической науки. 2006. № 3-1 (14). С. 29 - 32.

31. Варюшина Е.А., Конусова В.Г., Симбирцев А.С., Лишенко В.В., Саламатов А.В., Чуприна А.П. Изучение функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов у пациентов с легочными заболеваниями // Труды 3-й международной конференции «СПИД, рак и ретровирусы человека», г. Санкт-Петербург, Россия, 1995 г.

32. Бубнов А.Н., Симбирцев А.С., Лебедева Т.П., Москаленко В.В., Варюшина Е.А. Первый опыт применения интерлейкиновой мази // Хирургическая анатомия, техника и патофизиология. Сборник трудов МАПО, г. Санкт-Петербург, 1995, С. 109 - 111.

33. Varioushina E. Study of mechanism of local action on IL-1в during treatment of patients with chronic wounds // Papers of 4^th International Conference “AIDS, Cancer and related problems”, St.Petersburg, Russia, 1996, P. 91.

34. Simbirtsev A., Pigareva N., Kalinina N., Kotov A., Konusova V., Variuochina E., Popovich A. Immunotherapeutic application of recombinant human interleukin-1 beta // Eur. Cytokine Netw. 1996. V. 7. № 3. P. 651.

35. Бисенков Л.Н., Симбирцев А.С., Конусова В.Г., Варюшина Е.А., Попов В.И., Лишенко В.В., Саламатов А.В., Чуприна А.П. Применение препарата рекомбинантного интерлейкина-1в для лечения гнойно-деструктивных заболеваний легких // 6 Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Новосибирск, 1-4 июля 1996 г. Сборник трудов (приложение к журналу Пульмонология). С. 871.

36. Саламатов А.В., Лишенко В.В., Симбирцев А.С., Конусова В.Г., Варюшина Е.А., Суборова В.Г., Пасхина М.Н., Попов В.И., Лукин В.В., Чуприна А.П. Диагноcтичеcкие и лечебные возможноcти длительной тpанcназальной катетеpизации полоcти пpи инфекционныx деcтpукцияx легкиx // 6 Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Новосибирск, 1-4 июля 1996 г. Сборник трудов (приложение к журналу Пульмонология). С. 885.

37. Бисенков Л.Н., Симбирцев А.С., Конусова В.Г., Варюшина Е.А., Попов В.И.,, Саламотов А.В., Адмакин А.Л., Лишенко В.В., Чуприна А.П., Золотарев Д.В. Применение интерлейкина-1в в торакальной хирургии // Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. 1997. Т. 1. № 1. С. 142.

38. Бисенков Л.Н., Саламатов А.В., Попов В.И., Симбирцев А.С., Конусова В.Г., Варюшина Е.А., Чуприна А.П., Золотарев Д.В. Применение рекомбинантного интерлейкина-1 человека для лечения больных с абсцессами легких// Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике: Сб. изобретений и рационализаторских предложений ВмедА. СПб.: ВмедА, 1997. Вып. 28. С. 12.

39. Бисенков Л.Н., Симбирцев А.С., Попов В.И., Лишенко В.В., Саламатов А.В., Конусова В.Г., Варюшина Е.А., Чуприна А.П., Ермаков Н.А., Адмакин А.В. Цитокины в торакальной хирургии // Труды докладов научной конференции, посвященной 150-летию клинического отдела Военно-Медицинской Академии им. С. М. Кирова. СПб., 1997. С. 357-358.

40. Варюшина Е.А., Котов А.Ю., Конусова В.Г., Симбирцев А.С., Саламатов А.В., Золотарев Д.В. Изучение продукции провоспалительных цитокинов и функций нейтрофилов в очаге воспаления // Русский журнал ВИЧ/СПИД и родственные проблемы. 1998. Т. 2. № 2. С. 45.

41. Simbirtsev A., Grebenuk A., Sokolova N., Popovich A., Pigareva N., Kotov A., Konusova V., Variouchina E., Babkina I. Changes in the innume system after ...