Модифицирующее влияние блокатора Н3/Н4-гистаминовых рецепторов имопроксифана на уровень интерлейкиновой продукции в смешанных лимфоцитарных культурах у больных Q-позитивным инфарктом миокарда

Размещено на http://www.allbest.ru/

Модифицирующее влияние блокатора Н3/Н4-гистаминовых рецепторов имопроксифана на уровень интерлейкиновой продукции в смешанных лимфоцитарных культурах у больных Q-позитивным инфарктом миокарда

Ханферян Роман Авакович, доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой Клинической иммунологии, аллергологии и лабораторной диагностики ФПК и ППС,

Оранский Павел Петрович, соискатель, врач-кардиолог Краевой клинической больницы № 1, г. Краснодар, ГОУ ВПО Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Кубанский Государственный Медицинский Университет.

Введение

В последнее время наблюдается повышенный интерес исследователей к роли иммунных факторов, и, в частности цитокинов, в развитии инфаркта миокарда (ИМ), являющегося одним из самых прогностически неблагоприятных проявлений ишемической болезни сердца (Balbay Y. et al., 2001; Al-Ahmad R.S., 2004). Цитокины являются регуляторными пептидами, влияющими на широкий спектр клеточных реакций, развивающихся при иммунном ответе, воспалении, гипоксии и других патологических процессах. В большинстве публикаций, посвященных активации системы цитокинов при ИБС, основное внимание уделяется изменению сывороточного уровня преимущественно провоспалительных интерлейкинов у больных с различными формами ишемической болезни сердца (ИБС) (Jaremo P. et al., 2000; Koukkunen H. et al., 2001; Закирова А.Н. и соавт., 2005). Показано, что некоторые цитокины способны влиять на различные показатели функционального статуса миокарда - гемодинамические, иммунные, метаболические и др., причем продемонстрированы как кардиодепрессивные, так и, напротив, кардиопротективные их эффекты (Мазуров В.В. и соавт., 1999; Smith D.A. et al., 2001).

Продукция же цитокинов в клеточных культурах при этой патологии исследована явно недостаточно, в то время как именно изучение уровня интерлейкинов в клеточных культурах и определение возможности его медикаментозной модификации могут способствовать разработке принципиально новых подходов к лечению такой распространенной и приводящей к неблагоприятным социальным последствиям патологии, какой является ИБС, и, в частности, инфаркт миокарда.

Гистаминовые Н3-рецепторы были открыты Schwartz et al. (Arrang J.M., 1983) при изучении метаболизма гистамина в центральной нервной системе. Н3 рецепторы преимущественно экспрессируются на гистаминергических нейронах центральной нервной системы, а также эозинофилах и дендритных клетках. Н4-рецепторы, которые по своей структуре более чем наполовину гомологичны Н3-рецепторам, представлены на различных клетках периферической крови - лейкоцитах, лимфоцитах, дендритных, тучных клетках (Akdis C.A. et al., 2003). Установлено, что экспериментальная активация Н3-рецепторов стенки артериальных сосудов на экспериментальных моделях сердечной недостаточности вызывает отрицательный ино- и хронотропный эффекты (Seyedi N. et al., 1996; Mazenot C. et al., 1999). Работ по изучению системы Н3/Н4 рецепторов у больных ИБС в доступной для нашего анализа мировой литературе практически не представлено.

Известны тесные взаимодействия между системами гистамина и различными цитокинами: так, например, Idzko M. et al. (2002) установлено, что гистамин способен стимулировать выработку ИЛ-10, тормозить выработку ИЛ-12 дендритными клетками, а также является индуктором выработки моноцитами ИЛ-18 и интерферона-гамма. В то же время, необходимо отметить, что литературе практически отсутствуют данные об уровне спонтанной и стимулированной цитокиновой продукции в лимфоцитарных культурах больных острым инфарктом миокарда на фоне экспериментального применения Н3/Н4-антагонистов.

Цель исследования

Изучение спонтанной и стимулированной продукции ИЛ-6 и ИЛ-10 в смешанных лимфоцитарных культурах в исходном состоянии и после добавления H3/H4-антагониста имопроксифана (И).

Материалы и методы

гистаминовый имопроксифан иммуномодулирующий

Исследование проведено у 14 пациентов с Q-позитивным инфарктом миокарда (9 мужчин, 5 женщин) в возрасте от 52 до 71 года (средний возраст 59,2±8,2 года). Контрольную группу составили 8 относительно здоровых лиц, рандомизированных по полу и возрасту с опытной группой.

Острый Q-позитивный ИМ устанавливался по общепринятым критериям (по клинической картине, ЭКГ, положительному тесту с тропонином I, наличию гиперферментемии).

Забор крови из кубитальной вены производили в первые сутки после развития ИМ (в остром периоде). Концентрация ИЛ-6 и ИЛ-10 в смешанных лимфоцитарных культурах определялась с помощью метода иммуноферментного анализа (иммуноферментный анализатор Anthos 2010) согласно прилагаемым протоколам к наборам реактивов.

Смешанные лимфоцитарные культуры выделялись после центрифугирования в градиенте раствора Ficoll-Hypaque. Затем выдерживался период инкубации в течение 48 часов. На следующем этапе исследования в смешанных культурах лимфоцитов методом иммуноферментного анализа изучалась спонтанная и стимулированная конканавалином А, трансформирующим фактором роста в1 продукция ИЛ-6 и ИЛ-10 без присутствия имопроксифана и при добавлении различных его концентраций.

Результаты обработаны с использованием пакета статистических программ Statistica 6.0. Данные представлены в виде медиана (25; 75 процентили). Различия между группами оценены с помощью критериев Манна-Уитни и Вилкоксона, значимыми различия считали при значении р<0,05.

Результаты

Согласно поставленной цели исследования, нами проведено изучение спонтанной и стимулированной конканавалином А, трансформирующим фактором роста в1 продукции ИЛ-6 и ИЛ-10 в смешанных лимфоцитарных культурах сыворотки больных в остром периоде ИМ. Данные по изучению продукции провоспалительного цитокина ИЛ-6 в лимфоцитарных культурах представлены в таблице 1.

Таблица 1. Продукция интерлейкина-6 в смешанных лимфоцитарных культурах больных с острым Q-позитивным инфарктом миокарда на фоне различных стимуляторов и при добавлении Н3/Н4 антагониста имопроксифана

Примечание:

Концентрация ИЛ-6 представлена в пг/мл; И - имопроксифан;

ТФРв1 - трансформирующий фактор роста в1;

Данные представлены в виде: медиана (25; 75 процентиль);

† - p<0,05 - сравнение c контрольной группой (критерий Манна-Уитни)

* - p<0,05 - сравнение с группой без И (критерий Вилкоксона)

Спонтанная продукция ИЛ-6 в исследуемой группе больных с ИМ была повышена более чем двухкратно (p=0,02). При использовании в качестве стимулятора секреции конканавалина А в этой группе отмечен повышенный на 61% уровень продукции ИЛ-6 (р=0,04). При добавлении в культуру имопроксифана в концентрации 10-5 г/мл отмечено значимое уменьшение концентрации ИЛ-6 на 60,2% (p=0,04) с приближением к показателю в контрольной группе, стимулированная конканавалином продукция ИЛ-6 также уменьшалась при использовании препарата в этой же концентрации. При добавлении более низких концентраций Н3/Н4 блокатора нами не зарегистрировано значимого влияния на уровень продукции ИЛ-6. ТФРв1 не оказывал значимого влияния на культуральнуюпродукцию этого провоспалительного цитокина.

Таким образом, нами установлены повышенные уровни спонтанной и стимулированной конканавалином А продукции ИЛ-6 в группе больных с Q-позитивным ИМ и уменьшение выработки ИЛ-6 в лимфоцитарных культурах на фоне добавления имопроксифанав концентрации 10-5 г/мл.

Во второй части нашего исследования проведено изучение уровня спонтанной и стимулированной секреции ИЛ-10 в смешанных культурах лимфоцитов (данные представлены в табл. 2).

Уровень спонтанной выработки ИЛ-10 не отличался от значения в контрольной группе, показатель стимулированной конканавалином А секреции этого интерлейкина оказался выше на 54% (p=0,04). При изучении влияния имопроксифана на секрецию ИЛ-10 спонтанная его продукция в культурах увеличивалась при использовании концентрации препарата 10-5 г/мл в 2,2 раза (p=0,04), при добавлении концентрации 10-6 г/мл - в 2,6 раза (p=0,03) по сравнению с подгруппой без добавления Н3/Н4 антагониста. На фоне стимуляции конканавалином А и ТФРв1 изменений в уровне выработки ИЛ-10 по сравнению с подгруппой без применения И не отмечено.

Таблица 2. Уровни продукции ИЛ-10 в смешанных лимфоцитарных культурах больных с острым инфарктом миокарда на фоне различных стимуляторов и при добавлении Н3/Н4 антагониста имопроксифана.

Примечание:

Данные представлены в виде медиана (25; 75 процентиль);

† - p<0,05 - сравнение c контрольной группой (критерий Манна-Уитни)

* - p<0,05 - сравнение с группой без И (критерий Вилкоксона)

Концентрация ИЛ-10 представлена в пг/мл; И - имопроксифан; ТФРв1 - трансформирующий фактор роста в1;

Обсуждение.

По данным клинико-экспериментальных исследований усиление выработки провоспалительных цитокинов, в частности ИЛ-6, у больных с острым инфарктом миокарда может иметь неблагоприятные клинические последствия в виде увеличения риска осложненного клинического течения (Koukkunen H. et al., 2001; Jaremo P. et al., 2000). В связи с этим, весьма актуальным является поиск фармакологических средств, которые могут потенциально модифицировать баланс про- и противовоспалительных цитокинов при этом заболевании. При исследовании лимфоцитарных культур нами получены новые данные о возможном иммуномодулирующем эффекте имопроксифана, связанном с угнетением продукции ИЛ-6 и увеличением синтеза ИЛ-10, при остром Q-позитивном ИМ, что может иметь прикладное значение при поиске средств для иммунокоррекции при этом заболевании.

Выводы

1. Спонтанная и стимулированная конканавалином А продукция ИЛ-6 в смешанных лимфоцитарных культурах у больных с Q-позитивным ИМ повышена по сравнению с группой здоровых лиц.

2. Установлен иммуномодулирующий эффект имопроксифана in vitro с уменьшением продукции ИЛ-6 и увеличением выработки ИЛ-10 у больных с Q-позитивным ИМ.

Литература

1. Закирова А.Н., Мухаметрахимова А.Р., Закирова Н.Э. Состояние систолической функции левого желудочка и активность провоспалительных цитокинов при остром инфаркте миокарда. - Сердечная недостаточность. - 2005. - том 6. - № 4. - С. 162-165.

2. Мазуров В.В., Столов С.В., Линицкая Н.Э. Динамика различных уровней провоспалительных цитокинов в зависимости от различных форм ИБС. - Клиническая медицина. - 1999. - № 1. - С. 23-27.

3. Akdis C.A., Blaser K. Histamine in the immune regulation of allergic inflammation. - J. Allergy Clin. Imunol. - 2003. - vol. 112. - p.15-22.

4. Al-Ahmad R.S., Mahafzah A.M., Al-Mousa E.N.Immunological changes in acute myocardial infarction. - Saudi Med. J. - 2004. - vol.25(7). - p.923-928.

5. Arrang J.M., Garbarg M., Schwartz J.C. Auto-inhibition of brain histamine release mediated by a novel class (H3) of histamine receptor. - Nature . - 1983. - vol. 302. - p.832-837.

6. Balbay Y., Tikiz H., Baptiste R.J., Ayaz S., Sasmaz H., Korkmaz S. Circulating interleukin-1 beta, interleukin-6, tumor necrosis factor-alpha, and soluble ICAM-1 in patients with chronic stable angina and myocardial infarction. - Angiology. - 2001. - vol. 52(2). - p.109-114.

7. Idzko M., la Sala A., Ferrari D., Panther E., Herouy Y., Dichmann S., Mockenhaupt M., DiVirgilio F., Girolomoni G., Norgauer J. Expression and function of histamine receptors in human monocyte-derived dendritic cells. - J. Allergy Clin. Immunol.

- 2002. - vol. 109 (5). - p. 839-846.

8. Ishikawa S. , Sperelakis N. A novel class (H3) of histamine receptors on perivascular nerve terminals. - Nature. - 1987. - vol. 327. - p.158-160.

9. Itoh H., Takahashi H.K., Iwagaki H. et al. Effect of histamine on intercellular adhesion molecule-1 expression and production of interferon-gamma and interleukin-12 in mixed lymphocyte reaction stimulated with interleukin-18. - Transplantation. - 2002. - vol. 27. - p.864-870.

10. Jaremo P., Hansson G., Nilsson O. Elevated inflammatory parameters are associated with lower platelet density in acute myocardial infarctions with ST-elevation. - Thromb. Res. - 2000.- vol. 15 (100). - p. 471-478.

11. Kohka H., Nishibori M., Iwagaki H. et al. Histamine is a potent inducer of IL-18 and IFN-gamma in human peripheral blood mononuclear cells. - J. Immunol. - 2000.- vol.164 (12). - p. 6640-6646.

12. Koukkunen H., Penttila K., Kemppainen A. et al. C-reactive protein, fibrinogen, interleukin-6 and tumour necrosis factor-alpha in the prognostic classification of unstable angina pectoris. - Ann. Med. - 2001. - vol. 33(1). - p.37-47.

13. Mazenot C., Durand A., Ribuot C. et al. Histamine H3-receptor stimulation is unable to modulate noradrenaline release by the isolated rat heart during ischaemia-reperfusion. - Fundam. Clin. Pharmacol. - 1999. - vol. 13. - p. 455-460.

14. Okamura H., Tsutsui H., Komatsu T. et al. Cloning of a new cytokine that induces IFN-gamma production by T cells. - Nature. - 1995. - vol. 378. - p.88-91.

15. Seyedi N., Imamura M., Hatta E. Levi R. Desensitization of histamine H3-receptors in a canine model of pacing-induced heart failure: A cause of increased norepinephrine release . - Circulation. - 1996. - 94. - p.406.

16. Smith D.A., Irving S.D., Sheldon J., Cole D., Kaski J.C. Serum levels of the anti-inflammatory cytokine IL-10 are decreased in patients with unstable angina. Circulation. - 2001 104:746-749.

Размещено на Allbest.ru