Липидный спектр эритроцитов при отдельных гематологических заболеваниях

Размещено на http://www.allbest.ru/

Липидный спектр эритроцитов при отдельных гематологических заболеваниях

липиды анемия кислород

Показано, что липидный спектр гемолизатов эритроцитов практически здоровых людей, а также больных эритремией и апластической анемией представлен: фосфолипидами, неидентифицированными липидами, холестеролом, моноглицеридами, диглицеридами, свободными высшими жирными кислотами, триглицеридами и стеридами.

По сравнению с контрольной группой в эритроцитах больных эритремией и апластической анемией наблюдалось более низкое количественное содержание всех идентифицированных липидных фракций.

На сегодняшний день изучение биохимических особенностей организма человека является актуальным при диагностике и лечении различных заболеваний, часто встречающихся в лечебной практике[10].Работами последних лет показано, что некоторые заболевания характеризуются определенными биохимическими изменениями в эритроцитах[6,7]. Также известно, что липиды являются одними из мишеней для действия активных форм кислорода и их окисление приводит к увеличению количества малоновогодиальдегида и других продуктов пероксидации липидов[1,9]. В связи с этим, представило интерес изучить липидный спектр эритроцитов при заболеваниях гематологического характера, вчастности, при эритремии и апластической анемии, что и явилось целью настоящей работы.

Материалы и методы исследований

Материалом для исследования служили эритроциты практически здоровых людей (15 человек) - доноров станции переливания крови г.Симферополя и больных эритремией I степени (9 человек), апластической анемией (11 человек). В каждой группе соотношение мужчин и женщин было приблизительно одинаковым. Возраст больных эритремией - в среднем 56 лет, апластической анемией - 54 года.

Кровь больных брали на базе Крымского онкологического центра при поступлении больных в стационар, перед началом лечения.

Эритроциты гемолизировали по методу Драбкина[11]. В гемолизатах эритроцитов определяли содержание отдельных липидных фракций.

Липиды, содержащиеся в 0,2 мл исследуемого образца, экстрагировали 5 мл смеси гептан-изопропаноловой смеси (1:1 по объему) при встряхивании в закрытых пробирках в течение 15 минут. Экстракты освобождали от белкового преципитата центрифугированием при 10 000об/мин. К липидным вытяжкам добавляли водный раствор соляной кислоты (рН 2,0) в объеме 2 мл для разделения фаз и отмывки от нелипидных примесей [3].

Для фракционирования липидных экстрактов гемолизата эритроцитов использовались пластины с тонким слоем силикагеля «Silufol». На зону старта тонкослойной пластины наносили по 10 мклэкстрактакалиброванным капилляром. Хроматограмму проявляли смесью гексана, диэтилового эфира и ледяной уксусной кислоты (73:25:2) в плотно закрытой камере, обложенной внутри фильтровальной бумагой, при восходящем движении проявителя. Пластины сушили под тягой в течение 30 мин и опрыскивали 10%-ным раствором серной кислоты, после чего нагревали при 80-100% до появления темных пятен [3].

Из литературы известно, что в первом пятне от линии старта сосредоточены фосфолипиды, во втором - неидентифицированные липиды, в третьем - холестерол, в четвертом - моноглицериды, в пятом - диглицериды, в шестом - свободные высшие жирные кислоты (ВЖК), в седьмом - триглицериды и в восьмом - стериды [8].

Полученные данные обрабатывали статистически с использованием критерия Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

При изучении содержания отдельных липидных фракций в гемолизате эритроцитов практически здоровых людей и больных эритремией и апластической анемией были получены данные, представленные в таблице 1.

Как видно из данных таблицы, в гемолизате эритроцитов практически здоровых людей наблюдались следующие липидные фракции: фосфолипиды, неидентифицированные липиды, холестерол, моноглицериды, диглицериды, высшие жирные кислоты и триглицериды.

В гемолизате эритроцитов больных эритремией и апластической анемией были выявлены фосфолипиды, неидентифицированные липиды, холестерол, моноглицериды, диглицериды и высшие жирные кислоты. Триглицериды идентифицировались в следовых количествах.

Анализ полученных данных показал, что в гемолизатах эритроцитов контрольной группы наибольшим содержанием липидных фракций характеризовались неидентифицированные липиды, холестерол, ВЖК и триглицериды, что в целом согласуется с имеющимися в литературе данными[2,4,5].Наименьшим содержанием липидных фракций характеризовались фосфолипиды, моноглицериды и диглицериды.

Таблица 1. Содержание липидных фракций в гемолизате эритроцитов больных эритремией и апластической анемией (Мm)

Фракции липидов, г/л

ОбследуемыегруппыКонтрольнаягруппаБольныеэритремиейБольныеапластической анемией

Фосфолипиды

0,3800,004

0,1200,001*

0,0900,004*

Неидентифицированные липиды

0,560 0,030

0,1500,001*

0,0800,001*

Холестерол

0,520 0,004

0,1500,003*

0,0800,005*

Моноглицериды

0,370 0,004

0,1800,003*

0,0900,006*

Диглицериды

0,3600,020

0,1100,002*

0,0800,002*

ВЖК

0,5500,020

0,1500,040*

0,1200,003*

Триглицериды

0,5800,030следовые количестваследовые количества

липиды анемия кислород

Из всех липидных фракций идентифицированных в гемолизатах эритроцитов больных эритремией, наибольшим содержанием характеризовались фосфолипиды, неидентифицированные липиды, холестерол, моноглицериды и ВЖК, наименьшим содержанием отличились диглицериды. Триглицериды обнаружены следовых количествах.

У больных апластической анемией содержание липидных фракций в гемолизатах эритроцитов было близким за исключением ВЖК, количественное содержание которых существенно превышало уровень других липидных фракций.

По сравнению с контрольной группой отмечены достоверные различия в содержании практически всех липидных фракций, идентифицированных в эритроцитах больных эритремией и апластической анемией.

Так, у больных эритремией содержание фосфолипидов в эритроцитах было в 3,1 раза меньше, чем в контрольной группе, неидентифицированных липидов меньше в 3,7 раза, холестерола - в 3,5 раза, моноглицеридов - в 2,0раза, диглицеридов - в 4,0 раза, ВЖК - в 3,7 раза.

У больных апластической анемией также наблюдалось меньшее содержание липидных фракций по сравнению с контрольной группой. Содержание фосфолипидов было в 4,2 раза меньше, чем в контрольной группе, неидентифицированных липидов в 7,0 раз, холестерола - в 6,5 раза, моноглицеридов - в 4,1 раза, диглицеридов - в 4,5 раза, высших жирных кислот - в 4,6 раза.

Из данных таблицы также видно, что наименьшим содержанием в гемолизатах эритроцитов больных эритремией и апластической анемией характеризуются фракции диглицеридов триглицеридов. Что касается триглицеридов, то в случае двух групп больных наблюдается содержание этих липидных компонентов в следовых количествах. Это позволяет предположить, что триглицериды и диглицериды в большей степени чем другие липидные фракции, являются мишенями для активных форм кислорода, подвергаясь их разрушительному действию.

Выводы

липиды анемия кислород

1. Липидный спектр гемолизатов эритроцитов больных эритремией и апластической анемией представлен: фосфолипидами, неидентифицированными липидами, холестеролом, моноглицеридами, диглицеридами, высшими жирными кислотами. Триглицериды идентифицированы в следовых количествах.

2. По сравнению с контрольной группой в гемолизатах эритроцитов больных эритремией и апластической анемией наблюдается более низкое количественное содержание всех выявленных липидных фракций. У больных эритремией отмечено наиболее выраженное снижение количественного содержания фосфолипидов и диглицеридов. У больных апластической анемией показано наиболее выраженное снижение большинства идентифицированных липидных фракций как по сравнению с контрольной группой, так и по сравнению с больными эритремией.

Литература

1. Андреева Л.И., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой / K.И. Андреева, А.А. Кишкун. - //Лабораторное дело. - 1988 г. - №11. - С.41-43.

2. Барабой В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липидов /В.А. Барабой. - 1991. - Т. 111. -Вып. 6. - С. 923-932.

3. Бурлакова Е.Б. Перекисное окисление липидов мембран / Е.Б. Бурлакова. - 2004. - Т. 54. - C. 1540-1558.

4. Владимиров Ю. А. Активные формы кислорода и азота: значение для диагностики, профилактики и терапии // Ю.А.Владимиров. Биохимия. - 2004. - Т. 69, вып. 1. - с. 5-7.

5. Зайцев В. Г. Активные формы кислорода / В.Г.Зайцев. - 2004. - Вып. 2. - С. 69 -75с.

6. Зенков Н. К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах / Н.К Зенков, Е.Б. Меньщикова // Успехи современной биологии. - 1993. - №3. - С. 286-291.

7. Меньщиков Е.Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Меньщиков Е.Б. - М.:Фирма. - 2006. - 556 с.

8. Новицкицй В.В., Гольдберг В.Е., Колосова М.В. Белковый спектр мембран эритроцитов у больных раком легкого и с опухолью головы и шеи./В.В. Новицкицй, В.Е.Гольдберг, М.В.Колосова / Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1999. - Прил.1.- С 18-20.

9. Осипов А.Н. Активные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, О.А. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биологической химии. - 1990. - Т. 31, .№ 2. - С. 180-208.

10. Фред Дж. Шиффман. Патофизиология крови / Шиффман-М.-СПБ.: «Издательство БИНОМ»- «Невский диалект». - 2001.- С.71-74.

11. Drabkin D. A. Simpifled technique for large scole cristallisation of myoglobin and haemoglobin in the crystalline / Drabkin D. A. //Arch. Biochem. - 1949. - v.21. - P. 224-226.

Размещено на Allbest.ru