Применение соединений, влияющих на уровень оксида азота в тканях глаза, в комплексной терапии увеита в эксперименте
Влияние доноров оксида азота на течение воспаления при использовании различных доз и сроков применения. Влияние выбранного противовоспалительного вещества на течение иммуногенного увеита при изолированном применении и при введении с дексаметазоном.
Рубрика | Медицина |
Вид | автореферат |
Язык | русский |
Дата добавления | 30.03.2018 |
Размер файла | 956,6 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru//
Размещено на http://www.allbest.ru//
14.00.08 - Глазные болезни
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Применение соединений, влияющих на уровень оксида азота в тканях глаза, в комплексной терапии увеита в эксперименте
Перова Татьяна Сергеевна
Москва - 2007
Диссертационная работа выполнена в Федеральном Государственном Учреждении «Московский научно-исследовательский институт глазных болезней им. Гельмгольца Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи». (директор - доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ В.В. Нероев)
Научный руководитель:
Доктор медицинских наук, профессор В.В. Нероев
Официальные оппоненты:
Доктор медицинских наук, профессор Е.С. Либман
Доктор медицинских наук, профессор Е.П. Тарутта
Ведущая организация: ГУ НИИ глазных болезней РАМН
Защита диссертации состоится « 18 » сентября 2007 года в 14 часов
на заседании диссертационного совета Д.208.042.01.
Адрес института: 105062 г. Москва, ул. Садовая-Черногрязская, 14/19.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского НИИ глазных болезней им. Гельмгольца.
Автореферат разослан « 22» июля 2007 года
Ученый секретарь диссертационного Совета
Доктор медицинских наук, профессор М.Б. Кодзов
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы. В настоящее время проблема лечения увеитов является одной из важнейших в офтальмологии во всем мире. Пациенты с увеитами и их осложнениями составляют от 5 до 18 % больных глазных стационаров. При тяжелых формах заболевания слепота на оба глаза развивается в 10-15 %, а инвалидность по зрению составляет около 30 %. (Кацнельсон Л.А., Танковский В.Э.,1998; Денисова Е.В.,1999; Катаргина Л.А., Архипова А.В.,2004; Либман Е.С., 2004). Полиэтиологичность увеитов и сложность их патогенеза существенно затрудняют выбор препаратов для лечения.
В настоящее время сформировалось несколько подходов к лечению увеитов: консервативная терапия c использованием этиотропных препаратов, кортикостероидов, нестероидных противовоспалительных препаратов, иммунодепрессантов и иммуномодуляторов, хирургическое лечение, которое наиболее целесообразно проводить в комплексе с консервативной терапией, и экстракорпоральная терапия (гемосорбция, плазмаферез, квантовая аутогемотерапия), относящаяся к дополнительным методам лечения. (Dick A.D., 1995; Катаргина Л.А., Хватова А.В.,2000; Becker M.D., Adamus G.,2000; Слепова О.С.,2001).
К сожалению, ряд препаратов, активно используемых в практике, имеет много противопоказаний и может привести к тяжёлым осложнениям. Поэтому поиск новых неспецифических противовоспалительных средств для лечения увеитов относится к числу актуальных проблем офтальмологии во всем мире.
В этом плане большой интерес представляет изучение веществ, влияющих на метаболизм оксида азота. Известно, что при увеитах эндо-и экзоантигены (липополисахариды, S-антиген сетчатки и др.), а также цитокины (IL 10, IL 6 и др.) вызывают активацию макрофагов и нейтрофилов, что приводит к активации индуцибельной NO-синтазы и синтезу оксида азота, являющегося одним из основных эффекторов системы клеточного иммунитета. Вырабатываясь в больших количествах при воспалении, NO может оказывать цитостатическое - цитотоксическое действие, как на чужеродные клетки, так и на собственные клетки организма (Cunha F.Q., Assreuy J.,1993; Chan C.C., Li Q.,1998; Engelbert M., Mylonakis E.,2004).
В то же время, недостаточный синтез оксида азота также оказывает неблагоприятное влияние на течение воспаления (Crow J. P., Spruell C.,1994; Cross A.H., Misco T.P.,1995; Grus F.H., Augustin A.J.,2001).
В связи с этим, есть основания полагать, что направленная регуляция метаболизма оксида азота с помощью доноров NO и ингибиторов NO- синтаз может явиться новым способом в лечении воспалительных заболеваний глаз. Несмотря на большое количество экспериментальных работ по изучению влияния оксида азота на течение воспалительного процесса, в настоящее время не существует единого мнения о патогенетической роли оксида азота в развитии увеита.
Цель работы - изучить влияние экзогенных доноров оксида азота и ингибиторов NO- синтаз на течение экспериментального иммуногенного увеита для выбора нового неспецифического противовоспалительного средства, эффективного при увеитах.
Задачи исследования:
Выбрать рабочую модель иммуногенного увеита, отличающуюся простотой моделирования, выраженной и длительной воспалительной реакцией и высокой воспроизводимостью.
Изучить изменения биохимических показателей слезной жидкости и сыворотки крови у иммунизированных кроликов и у кроликов с иммуногенным увеитом.
Изучить влияние различных групп доноров оксида азота на течение воспаления при использовании различных доз и сроков применения, оценить их влияние на показатели тонографии.
Оценить влияние донора оксида азота на протеиназно-ингибиторный баланс, общую антиокислительную активность и активность ферментов антиоксидантной системы (супероксиддисмутазы и каталазы) в слезной жидкости и сыворотке крови при иммуногенном увеите.
Изучить влияние донора оксида азота на морфологические изменения тканей глаза при иммуногенном увеите.
Изучить влияние различных групп ингибиторов NO-синтазы на течение воспаления при использовании различных доз и сроков применения, оценить их влияние на показатели тонографии.
Оценить влияние ингибитора NO-синтазы на протеиназно-ингибиторный баланс, общую антиокислительную активность и активность ферментов антиоксидантной системы в слезной жидкости и сыворотке крови при иммуногенном увеите. увеит оксид азот воспаление
Изучить влияние ингибитора NO-синтазы на морфологические изменения тканей глаза при иммуногенном увеите.
Выбрать эффективное противовоспалительное вещество и подобрать его оптимальную концентрацию.
Сравнить влияние выбранного эффективного противовоспалительного вещества на течение иммуногенного увеита при изолированном применении и при совместном введении с дексаметазоном.
Научная новизна работы.
-Впервые показано, что при субконъюнктивальных инъекциях доноров оксида азота и ингибиторов NO-синтазы при иммуногеном увеите у кроликов происходят как локальные (в слезе), так и общие (в крови) изменения в протеиназно-ингибиторном балансе и антиоксидантной системе.
-На основании клинических, биохимических и морфологических данных доказано, что применение соединений, увеличивающих уровень оксида азота в тканях глаза, а именно, доноров оксида азота и NO-содержащего газового потока, при иммуногенном увеите приводит к активации воспалительного процесса и увеличивает длительность его течения.
-Впервые изучено действие ингибиторов NO-синтазы (аминогуанидина, S-метилтиомочевина и L-NNA) на коэффициент легкости оттока и офтальмотонус и показано, что они не оказывают влияния на эти показатели.
-На основании клинических, биохимических и морфологических исследований впервые установлено, что применение ингибитора NO-синтазы S-метилтиомочевины при иммуногенном увеите оказывает выраженное противовоспалительное действие; подобран оптимальный режим его введения (дозы и сроки).
-Впервые показана высокая эффективность сочетанного применения S-метилтиомочевины и дексаметазона при иммуногенном увеите.
Практическая значимость работы.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о перспективности применения селективного ингибитора индуцибельной NO-синтазы S-метилтиомочевины в комплексной терапии увеита.
Основные положения, выносимые на защиту:
При иммуногенном увеите происходят локальные и системные изменения протеиназно-ингибиторного баланса и эндогенного антиоксидантного потенциала.
Субконъюнктивальное введение как доноров оксида азота, так и ингибиторов NO-синтазы приводит к изменениям протеиназно-ингибиторного баланса и активности компонентов антиоксидантной системы в слезе и сыворотки крови.
Морфологические исследования, характер локальных и системных изменений протеиназно-ингибиторного баланса, общей антиокислительной активности, компонентов антиоксидантной системы кроликов свидетельствуют о более тяжелом течении увеита при применении доноров NO.
Введение ингибиторов NO-синтазы в виде субконъюнктивальных инъекций не влияет на коэффициент легкости оттока водянистой влаги и офтальмотонус.
При субконъюнктивальном введении ингибиторов NO-синтазы - аминогуанидина и L- нитроаргинина не выявлено противовоспалительного эффекта вводимых веществ.
Субконъюнктивальное введение ингибитора индуцибельной NO-синтазы 0,15 % раствора S-метилтиомочевины в начале воспаления и в момент максимальной выраженности воспалительной реакции существенно уменьшает интенсивность и длительность течения воспалительного процесса.
Морфологические исследования, характер локальных и системных изменений протеиназно-ингибиторного баланса, общей антиокислительной активности, компонентов антиоксидантной системы свидетельствуют о более легком течении увеита у кроликов при применении 0,15 % раствора S метилтиомочевины.
Сравнительное исследование влияния 0,15 % раствора S-метилтиомочевины, дексаметазона и их совместного применения показало, что при сочетанном их применении наблюдается наиболее выраженный противовоспалительный эффект.
S-метилтиомочевину можно рассматривать как возможное перспективное потенциальное лекарственное средство в комплексном лечении увеитов.
Апробация работы.
Основные положения работы доложены и обсуждены: на научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2006), на межотделенческой конференции Московского НИИ глазных болезней им. Гельмгольца 08.06.2007.
Публикации.
По теме диссертации опубликованы 9 работ (3 статьи в центральной печати).
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 201 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы и списка работ, опубликованных по теме диссертации.
Работа содержит 11 таблиц, 25 рисунков. Список литературы включает 328 источников, из них 118 отечественных и 210 иностранных авторов. Работа выполнена в Московском научно-исследовательском институте глазных болезней им. Гельмгольца в отделе патологии сетчатки и зрительного нерва (руководитель д.м.н., проф. В.В. Нероев). Проводились исследования на базе отделения патофизиологии и биохимии (руководитель д.б.н.,проф. Н.Б. Чеснокова), патогистологии (руководитель д.м.н.,проф. И.П. Хорошилова-Маслова) и лаборатории патоморфологии Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова (руководитель д.м.н., проф. А.Б. Шехтер).
Содержание работы
Материалы и методы исследования.
Работа представляет собой экспериментальное исследование, в котором наряду с офтальмологическими методами были использованы биохимические и морфологические методы исследования.
Для моделирования иммуногенного увеита использовали нормальную жидкую лошадиную сыворотку крови (НЛС), производитель «Биомед» (Россия).
Работа выполнена на 235 кроликах (470 глаз) породы «шиншилла». Проведено биохимическое исследование 165 образцов слезной жидкости, 85 образцов крови, взятой до иммунизации животных, после иммунизации, на 1, 3, 7, 14 и 21 сутки после введения разрешающей дозы НЛС интравитреально или подкожно.
Морфологические исследования проведены на 36 энуклеированных глазах кроликов на 2, 5, 14 сутки увеита.
Клиническую оценку течения воспалительного процесса глаз кроликов проводили с помощью биомикроскопии и офтальмоскопии. Оценку клинических проявлений воспаления проводили на 1, 2, 3, 5, 7, 10 сутки (после введения разрешающей дозы) в условных баллах по следующим признакам: отек век, инъекция конъюнктивы, отек роговицы, преципитаты на эндотелии, экссудат в передней камере (фибрин и гипопион), гиперемия и отек радужки, образование задних синехий, опалесценция хрусталика и преципитаты на передней капсуле хрусталика, экссудация в стекловидном теле. В те же дни проводили фоторегистрацию глаз кроликов.
Работа состоит из 4-х частей. В первой части работы проведен выбор оптимальной модели иммуногенного увеита у кроликов. Требования к модели: 1) технически удобна для выполнения, т.е. наличие оптимального времени для предварительной сенсибилизации, 2) длительное течение и выраженная активность воспалительной реакции, 3) высокая воспроизводимость однотипной клинической картины.
Основываясь на литературных данных, нами были выбраны 6 способов моделирования иммуногенного увеита. Животных разделили на 6 групп по 4 кролика в каждой группе. Группы составлялись в зависимости от дозы и способа введения нормальной лошадиной сыворотки, а также сроков введения разрешающей дозы сыворотки в стекловидное тело (табл.1).
Таблица № 1. Моделирование экспериментального иммуногенного увеита.
№ группы |
Число глаз |
Антиген |
Доза введения НЛС (мл) |
Путь введения |
Введение разрешающей дозы (сутки) |
|
1 |
8 |
НЛС |
5 |
в/в |
14 |
|
2 |
8 |
НЛС |
10 |
в/в |
14 |
|
3 |
8 |
НЛС |
5 |
подкожно |
9 |
|
4 |
8 |
НЛС |
10 |
подкожно |
9 |
|
5 |
8 |
НЛС |
10 |
в/в |
9 |
|
6 |
8 |
НЛС |
0,1 |
- |
9 |
Во второй части работы изучали влияние доноров NO и ингибиторов NO-синтазы на течение воспаления при использовании различных доз и сроков введения, оценивали их влияние на показатели тонографии и исследовали влияние ингибитора NO-синтазы на течение иммуногенного увеита как при изолированном применении, так и при совместном введении с дексаметазоном.
Для изучения влияния доноров NO и ингибиторов NO-синтазы на клиническое течение иммуногенного увеита животных разделили на 18 групп по 5 кроликов (10 глаз) в каждой, где контрольная группа - увеит +субконъюнктивальное введение физиологического раствора (табл.2,3,4).
Таблица № 2. Схема эксперимента по изучению влияния доноров NO на течение иммуногенного увеита.
Группы |
Препараты |
Сроки введения после разрешающей дозы |
Кратность введений |
|
1 |
0,02 % р-р молсидомина |
на 2,3 сутки |
2 |
|
2 |
0,04 % р-р молсидомина |
на 2,3 сутки |
2 |
|
3 |
1,0 % р-р молсидомина |
на 2,3 сутки |
2 |
|
4 |
0,4 % р-р Na нитропруссида |
на 2,3 сутки |
2 |
|
5 |
1,0 % р-р L - аргинина |
на 2,3 сутки |
2 |
|
6 |
0,01 % р-р молсидомина |
через 2 часа |
1 |
|
7 |
контрольная |
- |
- |
Таблица № 3. Схема эксперимента по изучения влияния NO-СГП на течение иммуногенного увеита.
Группы |
Начало воздействия после введения разрешающей дозы |
Режим воздействия NO-СГП |
Кол-во воздействий |
|
8 |
на 2 и 3 сутки |
конц.NO 300 ppm, экспозиция 10 сек. |
2 |
|
9 |
через 2 часа |
конц.NO 300 ppm, экспозиция 10 сек. |
1 |
Изучаемые препараты были выбраны из различных групп доноров оксида азота. В качестве экзогенных доноров NO использовали молсидомин, Na нитропруссид, относящиеся к группе периферических вазодилататоров, L - аргинин, являющийся представителем гуанидинов, и NO-содержащий газовый поток (NO-СГП), производимый аппаратом «Плазон».
Ингибиторы индуцибельной NO-синтазы были выбраны также из различных групп: аминогуанидин - производный гуанидина, S-метилтиомочевина - относится к группе амидиновых производных, N-нитро- L-аргинин - производный L-аргинина. Известно, что аминогуанидин и S-метилтиомочевина (SMT) селективны к индуцибельной NO-синтазе, а N-нитро- L-аргинин (L-NNA) ингибирует и индуцибельные, и конститутивные формы фермента.
Таблица № 4. Схема эксперимента по изучению влияния ингибиторов NO-синтазы на течение иммуногенного увеита.
Группы |
Препараты |
Сроки введения после разрешающей дозы |
Кратность введений |
|
10 |
7,0 % р-р L-NNA |
через 0,5 часа |
1 |
|
11 |
1,5 % р-р аминогуанидина |
через 3 часа |
1 |
|
12 |
0,015% р-р SMT |
через 3 часа |
1 |
|
13 |
0,15% р-р SMT |
через 3 часа |
1 |
|
14 |
1,0% р-р SMT |
через 3 часа |
1 |
|
15 |
р-р дексаметазона |
через 3 часа |
1 |
|
16 |
0,15% р-р SMT + дексаметазон |
на 2,3 сутки |
2 |
|
17 |
р-р дексаметазона |
на 2,3 сутки |
2 |
|
18 |
0,15% р-р SMT |
на 2,3 сутки |
2 |
Для введения препаратов были выбраны разные сроки воспаления: ранние - первые 3 часа после введения разрешающей дозы (до начала действия индуцибельной NO - синтазы и выработки эндогенного оксида азота) и в момент максимальной выраженности воспалительного процесса - на 2 и 3 сутки после введение разрешающей дозы (при активном эндогенном синтезе оксида азота индуцибельной NO - синтазой). Дозировки препаратов были выбраны исходя из рекомендуемых доз для экспериментальных животных из литературных данных.
Препараты растворяли в физиологическом растворе и вводили субконъюнктивально в количестве 0,2 мл.
Тонографию интактным животным проводили до воздействия, через 2 часа и через 24 часа после введения препаратов или после воздействия NO-СГП в указанных концентрациях. В работе использовали тонометр, тонограф ТНЦ-100-С № 9156. До введения препаратов проводили тонографию в течение двух дней два раза в день для оценки естественных колебаний истинного внутриглазного давления и коэффициента легкости оттока (фоновое исследование).
Третья часть работы: изучение влияния донора NO и ингибитора NO -синтазы на биохимические показатели слезной жидкости и сыворотки крови. Измеряли общую антиокислительную активность (АОА), трипсиноподобную (ТПА), антитриптическую активность (АТА) и уровень 2- макроглобулина (2--МГ), активность ферментов антиоксидантной системы - супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы.
Животных разделили на 5 групп по 5 кроликов (10 глаз) в каждой. 1 группа - иммунизированные животные, без увеита, 2 группа - увеит +субконъюнктивальное введение физиологического раствора, 3 группа - увеит с введением донора, 4 группа - увеит с введением ингибитора, 5 группа - интактная для контроля биохимических показателей.
В четвертой части работы исследовали влияние донора NO и ингибитора NO-синтазы на морфологические изменения тканей глаза при иммуногенном увеите. Для этого животных разделили на 4 группы по 5 кроликов (10 глаз) в каждой. 1 группа - увеит без лечения, 2 группа - увеит и введение донора NO, 3 группа - увеит и введение ингибитора NOS, 4 группа - контроль, субконъюнктивальное введение физиологического раствора.
Все полученные в ходе работы цифровые данные были статистически обработаны с использованием коэффициента Стъюдента.
Результаты исследований и их обсуждение.
В результате изучения характера течения увеита при различных способах его воспроизведения для дальнейших исследований была выбрана рабочая модель иммуногенного увеита, отличающаяся простотой выполнения, активным и длительным течением воспалительного процесса.
Для постановки этой модели кроликам подкожно вводили 5 мл нормальной лошадиной сыворотки, а затем, на 9-ый день, вводили 0,1 мл разрешающей дозы лошадиной сыворотки интравитреально.
Проведенные исследования показали, что NO активно влияет на течение экспериментального иммуногенного увеита. Установлено, что воздействие оксидом азота в виде газового потока в низкой дозе - концентрация 300 ppm с экспозицией 10 секунд - в первые часы воспаления и в момент максимальной выраженности признаков воспаления (на 2, 3 сутки после введения разрешающей дозы сыворотки) приводит к активации воспалительного процесса и увеличивает длительность его течения (воспалительный процесс в контрольной группе длился около 6,5 суток, в опытных группах - на трое суток дольше). У животных, которым проводили воздействие NO-СГП, воспаление сопровождалось более выраженной экссудативной реакцией (массивный выброс фибрина, гипопион во всех глазах) по сравнению с контрольной группой. Усиление воспалительной активности продолжилось и после повторного воздействия NO-содержащим газовым потоком (на 3 сутки с момента введения разрешающей дозы сыворотки (рис.1)).
Рис.1. Динамика выраженности признаков воспаления при увеите после двукратного воздействия NO-СГП на 2 и 3 сутки с момента введения разрешающей дозы.
Важно отметить, что при введении доноров NO на ранних сроках воспаления и в момент максимальной выраженности воспалительной реакции также наблюдалось более тяжелое (массивный выброс фибрина, гипопион, выраженные передние и задние синехии) и длительное течение воспалительного процесса по сравнению с контрольной группой (воспалительный процесс в опытных группах длился около 9 суток, в контрольной группе около 6,5 суток).
Влияние молсидомина носило дозозависимый эффект, т.е. чем выше была концентрация препарата, тем тяжелее и длительнее протекала воспалительная реакция у животных (рис.2).
Рис.2. Динамика выраженности признаков воспаления при увеите, после субконъюнктивального введения молсидомина двукратно на 2 и 3 сутки после введения разрешающей дозы.
Результаты исследования влияния ингибиторов NO-синтазы - L-NNA и аминогуанидина показали, что эти ингибиторы практически не влияли на интенсивность и длительность течения воспалительного процесса: средняя продолжительность увеита после введения L-NNA составила 7,3 суток, при введении аминогуанидина - 6,4, тогда как в контрольной группе - 6,5 суток.
Результаты изучения влияния ингибитора NO-синтазы S-метилтиомочевины на ранних сроках воспаления показали, что после введения S-метилтиомочевины в различных концентрациях (0,015 %, 0,15 %) отмечалось значительное уменьшение активности и длительности воспалительной реакции (средняя продолжительность увеита в группах, где животным вводили S-метилтиомочевину, была около 5 суток, в контрольной группе - 6,5). Необходимо отметить, что проявлялся и дозозависимый эффект вещества: при введении 0,15% раствора S-метилтиомочевины, воспалительная реакция протекала легче, чем у животных, которым вводили 0,015% раствор.
Однако при введении 1,0 % раствора S-метилтиомочевины обнаружилось отсутствие влияния на интенсивность и длительность течения воспалительного процесса: средняя продолжительность увеита после введения S-метилтиомочевины составила 6,3 суток, тогда как в контрольной группе - 6,5 суток.
При совместном введении 0,15 % S-метилтиомочевины и дексаметазона на ранних сроках воспаления отмечалось значительное уменьшение активности и длительности воспалительного процесса (средняя продолжительность увеита - 3,5 суток, в контрольной группе- 6,7, при изолированном их введении около 5 суток (рис.3)).
Рис.3. Динамика выраженности признаков воспаления при увеите при совместном введении S-метилтиомочевины с дексаметазоном и при изолированном их введении на ранних сроках воспаления.
Совместное введение S- метилтиомочевины и дексаметазона в момент максимальной выраженности признаков воспаления также сопровождалось уменьшением активности и длительности воспаления (при совместном введении продолжительность увеита около 4 суток, в контрольной группе- 6,5, при изолированном введении каждого из препаратов - около 5 суток).
Тонографические исследования после введения ингибиторов NO-синтазы и применения NO в газовом потоке показали отсутствие их влияния на коэффициент легкости оттока и офтальмотонус.
После однократного введения под конъюнктиву доноров NO во всех группах уже через 2 часа наблюдалось снижение истинного внутриглазного давления и значительное увеличение коэффициента легкости оттока. Важно отметить, что при введении 1,0 % раствора молсидомина отмечался более выраженный и длительный гипотензивный эффект. Через 24 часа после введения доноров NO показатели тонографии практически не отличались от уровня фоновых измерений. Результаты проведенного исследования подтверждают литературные данные о гипотензивном эффекте доноров NO.
Биохимические исследования были проведены у иммунизированных кроликов без увеита (подкожное введение разрешающей дозы сыворотки) и у иммунизированных кроликов с развитием увеита (интравитреальное введение разрешающей дозы сыворотки). У иммунизированных животных в сыворотке крови наблюдалось достоверное (р<0,01) снижение ТПА и некоторое увеличение активности 1-АТ, тогда как в группе животных, получивших разрешающую дозу антигена интравитреально отмечалось повышение активности ТПА и снижение активности АТА (p<0,005). Это свидетельствует о том, что наблюдаемые нами изменения активности 1-АТ и ТПА в крови отражают именно течение увеита, а не общую реакцию организма на иммунизацию. Что же касается ингибитора протеолиза - 2-МГ, то динамика изменения его активности в крови полностью совпадала во всех группах животных, имелись некоторые различия в амплитуде пиков. Из этого можно сделать вывод, что изменения данного показателя в большей степени отражают общую реакцию на иммунизацию.
В слезе иммунизация также вызвала увеличение АТА, тогда как развитие увеита вызывало некоторое снижение АТА по сравнению с животными, которым разрешающая доза была введена подкожно.
При данном способе иммунизации не происходит статистически значимого снижения АОА слезной жидкости. Однако при увеите отмечается достоверное (p<0,05) снижение АОА. Это снижение является следствием развития воспалительного процесса во внутренних структурах глаза.
В слезной жидкости на 4 сутки после иммунизации отмечается статистически значимое снижение активности СОД (p<0,005). После интравитреального введения разрешающей дозы происходит достоверное увеличение этого показателя (p<0,005). В крови на 1 сутки после интравитреального введения разрешающей дозы активность фермента достоверно снижается (p<0,005).
В слезной жидкости иммунизированных животных происходит статистически достоверное снижение активности каталазы, тогда как при увеите на 1-7 сутки происходит достоверное увеличение активности этого фермента (p<0,05).
Таким образом, биохимические исследования показали, что сама иммунизация вызывает как местные, так и системные изменения в протеиназно-ингибиторном балансе и состоянии антиоксидантной защиты. Развитие увеита на фоне иммунизации сопровождается изменениями этих показателей. Происходит повышение активности ТПА в крови, и снижение активности АТА в слезе и крови, снижение АОА в слезе, снижение активности СОД и увеличение активности каталазы в острый период течения воспаления.
Оценка влияния изменения уровня оксида азота в тканях глаза на биохимические показатели и морфологические изменения в глазу при увеите была проведена на примере донора оксида азота - Na нитропруссида и ингибитора NO-cинтазы - S-метилтиомочевины.
Обнаружено, что введение доноров и ингибиторов приводит к противоположным изменениям исследуемых биохимических показателей при увеите. Введение донора NO вызвало некоторое снижение ТПА в сыворотке крови, в то время как введение ингибитора NO-синтазы, напротив, вызвало увеличение ТПА на 1-14 сутки. Активность 2-МГ также имела тенденцию к снижению при введении донора NO, тогда как активность 2 - МГ в группе, получавшей ингибитор NO-синтазы, повышалась (рис.4).
Рис. 4. Влияние введения донора NO и ингибитора NOS на активность 2-МГ в крови при иммуногенном увеите.
ось ординат-активность в % от уровня интактных животных
В слезе введение донора NO также вызывало снижение АТА, после введения ингибитора АТА достоверно повысилась (на 1 сутки p<0,02) и оставалась выше, чем в контрольной группе до конца эксперимента. Введение донора NO сопровождалось повышением активности 2 - МГ, тогда как при введении ингибитора она увеличивалась только в острую фазу увеита и снижалась при стихании воспалительного процесса (рис. 5).
Рис. 5. Влияние введения донора NO и ингибитора NOS на активность 2 - МГ в слезе при иммуногенном увеите.
ось ординат-активность в % от уровня интактных животных
Полученные результаты свидетельствуют о том, что введение донора NO, вызывающего усиление воспалительной реакции, сопровождается снижением антипротеолитического потенциала в слезе и крови, а применение ингибитора NO-синтазы, напротив, приводит к увеличению активности ингибиторов протеиназ, что обычно сопровождает более благоприятное течение воспалительного процесса.
Субконъюнктивальные иньекции донора NO не вызывали достоверных изменений АОА слезной жидкости. В то же время применение ингибитора NO-синтазы приводило к достоверному увеличению АОА слезной жидкости на 7 сутки увеита по сравнению с контрольной группой. Такие изменения могут свидетельствовать о положительном действии ингибитора NO-синтазы в лечении увеита.
Применение донора NO приводило к увеличению активности СОД в слезной жидкости с последующим снижением этого показателя на 7 сутки по сравнению с контрольной группой. При применении ингибитора NO-синтазы достоверных изменений активности СОД в слезе не выявлено. Указанные изменения активности СОД свидетельствуют об усилении воспаления, вызванное донором NO, что подтверждено клинически.
В сыворотке крови в обоих случаях достоверных различий между активностью СОД у леченных и нелеченных животных не выявлено.
Применение донора NO приводило к достоверному снижению активности каталазы в слезе на стадии неактивного воспаления, тогда как при введении ингибитора NO-синтазы активность каталазы снижалась в острый период, а на стадии неактивного воспаления активность каталазы была достоверно выше таковой у нелеченных животных (рис.6).
Рис. 6. Влияние введение донора NO и ингибитора на активность каталазы в слезе при иммуногенном увеите.
ось ординат-активность в % от уровня интактных животных
В сыворотке крови в обоих случаях достоверных различий между активностью каталазы у леченных и нелеченных животных не выявлено.
Повышение активности каталазы на стадии неактивного воспаления в группе, получавшей ингибитор NO-синтазы, по-видимому, является компенсаторной реакцией, направленной на снижение развития свободнорадикального окисления. Тогда как снижение активности каталазы в этот период в группе, получавшей донор NO, может свидетельствовать об усилении воспаления.
Сопоставление характера течения увеита и локальных и системных изменений антипротеолитической активности и активности ферментов антиоксидантной системы свидетельствует о более тяжелом течении увеита у кроликов, получавших донор NO и более раннем завершении острого периода увеита у кроликов, получавших ингибитор NO-синтазы.
По данным морфологического исследования в группе животных, которым вводили донор NO, выявлялись более выраженные признаки увеита переднего отрезка (массивная лимфоцитарная инфильтрация роговицы, густая лимфоплазмоцитарная инфильтрация в цилиарном теле и радужке, передние и задние синехии), по сравнению с контрольной группой.
Введение S-метилтиомочевины на ранних сроках воспаления сопровождается уменьшением воспалительной клеточной инфильтрации, отека, сосудистых реакций, дистрофических изменений тканей глаза и длительности течения воспалительного процесса.
Таким образом, проведенные нами исследования позволяют с уверенностью утверждать, что субконъюнктивальное введение 0,15% раствора S- метилтиомочевины оказывает выраженный противовоспалительный эффект даже при таком интенсивном генерализованном воспалительном процессе в глазу, каким является иммуногенный увеит. Совместное применение дексаметазона с 0,15% раствором S-метилтиомочевины потенцирует противовоспалительный эффект S-метилтиомочевины.
Выводы
Воспроизведена модель экспериментального иммуногенного увеита с выраженной и длительной воспалительной реакцией.
Иммуногенный увеит сопровождается локальными и системными изменениями протеиназно-ингибиторного баланса (повышением протеолитической активности в крови и повышением активности 2 - МГ в слезе) и активности антиоксидантных ферментов (снижение активности СОД и увеличение активности каталазы в острый период, то есть снижением эндогенного антиоксидантного потенциала) по сравнению с иммунизированными животными.
Субконъюнктивальные инъекции доноров NO и ингибиторов NO-синтазы оказывают влияниие на протеиназно-ингибиторный баланс и состояние антиоксидантной системы как в слезной жидкости так и в крови.
Морфологические исследования, характер локальных и системных изменений протеиназно-ингибиторного баланса, общей антиокислительной активности, компонентов антиоксидантной системы свидетельствуют о более тяжелом течении увеита у кроликов при применении доноров NO.
Доноры оксида азота обладают выраженным гипотензивным действием, в то время как NO-содержащеий газовый поток и ингибиторы NO-синтазы не влияют на коэффициент легкости оттока и офтальмотонус.
Изучение влияния ингибиторов NOS на течение иммуногенного увеита у кроликов показало, что наибольшей противовоспалительной активностью обладает 0,15 % раствор метилтиомочевины при введении его как на ранних сроках воспаления, так и в момент максимальной выраженности воспалительного процесса.
Морфологические исследования, характер локальных и системных изменений протеиназно-ингибиторного баланса, общей антиокислительной активности, компонентов антиоксидантной системы свидетельствуют о более легком течении увеита у кроликов при применении ингибиторов NO-синтазы.
Сравнительное исследование влияния 0,15 % раствора S-метилтиомочевины, дексаметазона и их совместное применение обнаружило, что при сочетанном их применении наблюдается наиболее выраженный противовоспалительный эффект.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о перспективности применения селективного ингибитора NO-синтазы S-метилтиомочевины при увеите.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
Применение доноров оксида азота и ингибиторов NO-синтаз при увеитах, травмах и другой офтальмопатологии. / Нероев В.В., Давыдова Г.А., Перова Т. С. // Клиническая офтальмология. - 2005. - № 4., Том 6. - С. 172-174.
Моделирование иммуногенного увеита у кроликов. / Нероев В.В., Давыдова Г.А., Перова Т.С. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2006. - №11, Том142. - С. 598-600.
Влияние экзогенных доноров оксида азота - молсидомина и нитропруссида Na на течение увеита у кроликов. / Нероев В.В., Чеснокова Н.Б., Давыдова Г.А., Перова Т.С. // Сборник научных трудов, посвященных 80-летию Уфимского НИИ ГБ «Проблемы современной офтальмологии». - 2006. - С. 136-137.
Изучение влияния молсидомина на течение воспалительного процесса в глазу у кроликов. / Давыдова Г.А., Нероев В.В., Чеснокова Н.Б., Перова Т.С. // Сборник научных трудов всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии». - 2006.- С.384-386.
Изучение влияния нитропруссида Na на течение воспалительного процесса в глазу у кроликов. / Давыдова Г.А., Нероев В.В., Чеснокова Н.Б., Перова Т.С. // Сборник научных трудов всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии». - 2006.- С.386-387.
Влияние NO-содержащего газового потока на течение экспериментального иммуногенного увеита у кроликов. / Нероев В.В., Кваша О.И., Давыдова Г.А., Перова Т.С. //Сборник материалов конгресса 14 российского национального конгресса «Человек и лекарство». - 2007.- С.855.
Влияние донора оксида азота нитропруссида Na на течение иммуногенного увеита у кроликов и биохимические показатели слезы и крови. / Нероев В.В., Чеснокова Н.Б., Давыдова Г.А., Давыдова Н.Г., Перова Т.С., Столярова Е.П., Безнос О.В. // Сборник материалов конгресса 14 российского национального конгресса «Человек и лекарство». - 2007.- С.855.
Влияние доноров оксида азота нитропруссида Na и L-аргинина на течение экспериментального увеита, антиоксидантный и антипротеолитический потенциал слезной жидкости и крови в эксперименте / Нероев В.В., Чеснокова Н.Б., Давыдова Г.А., Давыдова Н.Г., Перова Т.С., Столярова Е.П., Безнос О.В. // Вестник Офтальмологии, № 3, 2007. - С. 22- 25.
Результаты применения NO-содержащего газового потока при иммуногеном увеите у кроликов / Т.С. Перова, В.В. Нероев, О.И. Кваша, Г.А. Давыдова // 11 Всероссийская научная конференция молодых ученых с участием иностранных специалистов «Актуальные проблемы офтальмологии» Москва. - 2007.- С.316.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Оценка транскрипционной активности генов синтаз оксида азота в сетчатке крыс разного возраста, оценка возможной связи развития ретинопатии с изменением генерации NO. Изменение генерации оксида азота при старении и развитии связанных с ним заболеваний.
курсовая работа [980,8 K], добавлен 27.06.2013Медиаторы широкого спектра гомеостатических функций. Применение ингибиторов. Иммунные, острые и хронические воспалительные реакции. Критическое падение давления в условиях геморрагического шока. Патогенетическая роль индукции. Реактивные соединения азота.
реферат [28,3 K], добавлен 20.03.2009Изучение влияния 15% водного раствора димефосфона на клиническое течение хронического генерализованного пародонтита при различных вариантах комплексной терапии. Анализ результатов лечения у лиц пожилого возраста с воспалительными заболеваниями пародонта.
статья [18,2 K], добавлен 01.09.2013Общая характеристика физико-химических свойств белков. Основные источники и биологическая роль оксида азота (NO). Особенности переваривания жиров в желудочно-кишечном тракте. Пути выведения холестерина из организма, а также анализ их возможных нарушений.
курсовая работа [950,7 K], добавлен 11.09.2010Основные факторы высокой заболеваемости детей респираторными инфекциями. Современные приборы для диагностики и контроля этапов лечения ребенка: капнография, бронхофонография, измерение оксида азота и пульсоксиметрия. Профилактика эмфиземы легких.
презентация [107,3 K], добавлен 28.10.2014Производство аммиака, азотной кислоты. Технология производства. Условия труда и оздоровительные мероприятия. Условия труда на различных производственных участках. Воздействие на организм кислородных соединений азота. Профилактические мероприятия.
курсовая работа [11,3 K], добавлен 12.06.2003Особенности оборудования операционной и возможные опасности, связанные с его работой. Применение в операционной кислорода, закиси азота, воздуха и азота, составляющие системы газоснабжения. Обеспечение микроклимата и ответственность анестезиолога.
реферат [29,1 K], добавлен 03.12.2009Влияние анестетиков на маточно-плацентарное кровообращение. Влияние родов на организм матери. Влияние анестетиков на сократительную активность матки и течение родов. Физиологические изменения в организме новорожденного в раннем послеродовом периоде.
реферат [18,6 K], добавлен 10.01.2010Современные аспекты патогенеза и клинического течения эссенциальной артериальной гипертензии, влияние возрастных эндокринных нарушений на клиническое течение болезни у женщин. Особенности современной медикаментозной терапии и медицинской реабилитации.
дипломная работа [2,6 M], добавлен 31.03.2018Изменение в организме беременной, влияющие на течение туберкулезного процесса. Патологический процесс во время беременности. Влияние беременности и родов на течение туберкулеза. Время возникновения и форма заболевания. Показания к прерыванию беременности.
презентация [406,6 K], добавлен 30.04.2016Гормоны — биологические высокоактивные вещества, которые вырабатываются железами внутренней секреции и специальными группами клеток в различных тканях. Особенности химического строения и специфика применения различных видов гормональных препаратов.
реферат [30,3 K], добавлен 27.04.2012Ингаляционная анестезия как наиболее распространенный вид общей анестезии. Свойства ингаляционных анестетиков. Способы наркотизации. Анестезия закисью азота, действие на сердечнососудистую систему, на дыхание, на ЦНС. Методика анестезии фторотаном.
реферат [26,1 K], добавлен 28.10.2009Клинический диагноз и его обоснование: псевдотуберкулез типичное течение легкой степени тяжести, гладкое течение. Симптомы интоксикации слабо выражены. Гладкое течение - без обострения, рецидивов. План обследования и лечения. Диагностический эпикриз.
история болезни [23,0 K], добавлен 11.03.2009Источник возбудителя инфекции. Восприимчивые животные как звено эпизоотической цепи, клинические проявления и симптомы данного патологического процесса, влияние различных факторов на проявление и течение. Сезонные и периодические изменения интенсивности.
реферат [30,3 K], добавлен 12.01.2015Физиологическая характеристика жирорастворимых витаминов (А, Д, Е, К), суточная потребность и источники их в питании. Влияние характера питания на течение различных заболеваний. Диетическое питание как составная часть комплексного лечения больного.
контрольная работа [40,1 K], добавлен 19.02.2015Клиническое течение ИБС и развитие гемодинамически незначимого стеноза. Участие иммунных реакций в эрозии бляшки. Участие системного воспаления в развитии нестабильной стенокардии. Снижение активности локального воспаления в атеросклеротической бляшке.
реферат [14,7 K], добавлен 21.03.2009Воспаление сердечной мышцы, возникающее при введении в нее инородных тел. Адреналиновый миокардит. Получение поражений миокарда аллергического происхождения. Изучение влияния на сердце различных препаратов йода, возможные поражения сердца у животных.
реферат [362,4 K], добавлен 09.08.2010Особенности стероидных и нестероидных противовоспалительных лекарственных средств, их классификация и применение в стоматологии. Клинические признаки воспаления. Механизм противовоспалительного действия. Осложнения противовоспалительной фармакотерапии.
презентация [3,5 M], добавлен 21.08.2015Анатомическое строение сетчатки. Ее слои, центральная зона, особенности кровоснабжения, функции. Симптомы при заболеваниях внутренней оболочки глаза, методы их диагностики. Виды фоторецепторов, их влияние на способность глаза видеть при свете и в темноте.
презентация [1,0 M], добавлен 11.12.2014Применение фенотерола при бронхоспазмах. Случаи внезапной смерти от астмы. Последствия длительного применения бета-2-агонистов, их влияние на легкие и сердце. Повышение мукоцилиарной активности и повышение отхаркивающего эффекта при применении препарата.
презентация [4,2 M], добавлен 09.12.2014