В лечении ишемической болезни сердца, стенокардии, болезней периферических артерий широко применяются методы коронарной ангиопластики и стентирование [1].

Основной проблемой при их использовании является возникновение рестеноза в отдаленном периоде [1, 2]. Вероятность этого осложнения уменьшается при применении стентов с лекарственным покрытием: значительно улучшается клиническая картина ишемической болезни сердца, увеличивается эффективность вмешательств на периферических артериях, снижаются частота рецидивов стенокардии и потребность в повторных реваскуляризациях миокарда [3-5].

Использование полимерного покрытия металлического стента в качестве матрицы для инкапсуляции лекарственного препарата обусловлено необходимостью точечной доставки активного вещества с целью уменьшения интенсивности пролиферации клеток интимы сосуда: постепенная резорбция покрытия обеспечивает локальное высвобождение достаточного количества препарата, необходимого для ограничения гиперплазии в ответ на имплантацию.

Полимерный слой, содержащий лекарственное вещество, должен быть биодеградируемым, биосовместимым и неиммуногенным, а также сохранять свойства после стерилизации. Наиболее полно этим требованиям соответствуют сополимеры молочной и гликолевой кислот, широко применяемые при создании различных медицинских изделий [6, 7]. Конечные продукты их разрушения являются обычными метаболитами клеток млекопитающих, не оказывающими токсического влияния на организм.

Для снижения риска возникновения рестеноза используют следующие лекарственные препараты: иммунодепрессанты (сиролимус и его аналоги), противоопухолевые препараты (паклитаксел и его аналоги) и т.д. [8].

Применение лекарственных стентов прочно вошло в практику восстановления функций сосудов, однако широко представлены на рынке лишь зарубежные изделия [9]. В условиях импортозамещения актуальным для нашей страны является создание собственных аналогов, не уступающих по качеству мировым лидерам. В связи с этим компанией "НаноМед" были разработаны сиролимус-элюирующие коронарные стенты с полилактид-ко-гликолидом в качестве полимера. Лекарственное покрытие наносится на стенты поверх слоя из линейно-цепочечного углерода - инновационного материала, придающего изделию высокую биосовместимость и тромборезистентность. Высвобождение сиролимуса на ранних сроках после операции позволит снизить избыточную пролиферацию клеток в ответ на травматизацию сосудистой стенки, а наличие инертного покрытия из линейно-цепочечного углерода обеспечит снижение рисков рестеноза и тромбоза на более поздних этапах.

При создании нового медицинского изделия в России необходимым этапом является проведение исследований согласно ГОСТ Р ИСО 10993 "Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий". Соблюдение положений стандартов данной серии позволяет обеспечить системный подход к исследованию биологического действия медицинских изделий, поскольку они являются руководящими документами для прогнозирования и исследования на стадии выбора материалов, предназначенных для изготовления, а также для исследований готовых изделий.

Цель исследования - изучение влияния разработанного сиролимус-элюирующего кардиоваскулярного стента на гематологические и биохимические параметры крови для оценки биологического действия медицинского изделия на организм в эксперименте.

Материалы и методы. Эксперимент проводили на 12 самцах кроликов в возрасте 8-10 мес массой 3,5-4,5 кг. Все этапы работы проходили в соответствии с ГОСТ Р ИСО 10993. Содержание животных соответствовало ГОСТ Р ИСО 10993-2-2011, они прошли карантин и акклиматизацию в условиях вивария в течение 14 дней. В работе руководствовались этическими принципами, установленными Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (принятой в Страсбурге 18.03.1986 г. и подтвержденной в Страсбурге 15.06.2006 г.).

Экспериментальные группы формировали методом простой фиксированной рандомизации по 6 животных. Перед проведением операции был произведен забор крови с последующим определением гематологических и биохимических параметров, которые использовали в качестве интактной группы значений.

На базе Центра доклинических исследований (Пенза) сотрудниками Федерального центра сердечно-сосудистой хирургии Министерства здравоохранения Российской Федерации (Пенза) была выполнена ангиопластика аортально-подвздошного сегмента бедренной артерии кроликов с имплантацией голометаллических кобальт-хромовых стентов МС 2,5Ч11 мм и стентов такой же модели с покрытием линейно-цепочечным углеродом и лекарственным покрытием (содержание сиролимуса - 2 мкг/мм²), разработанных ООО "НаноМед" (Россия).

После установки стентов на контрольной ангиографии артерия в месте имплантации стентов была проходима, система доставки и проводники удалены, ушивание ран проводили послойно.

Основываясь на времени резорбции покрытия в условиях in vitro [10], для исследования влияния лекарственных стентов на гематологические и биохимические показатели крови были определены сроки забора биологического материала: 1, 2, 4, 7 нед после имплантации.

Забор крови производили из вены уха кролика. Объем взятой крови составлял 4-5 мл; 250 мкл отбирали в микрокюветы для взятия крови ЭДТА-К2 (Sarsted, Германия), гематологическое исследование проводили с использованием анализатора BC-2800 Vet Auto Hematology Analyzer (Mindray, Китай). Сыворотку получали центрифугированием крови в течение 15 мин при 4000 об. /мин в медицинской лабораторной центрифуге ОПН-8 ("Аналит-Нева", Россия). В полученной сыворотке определяли активность ферментов и концентрацию веществ, рекомендованных к анализу ГОСТ Р ИСО 10993-11-2011 (приложение D.2): аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартатаминотрансферазы (АсАТ), г-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы, альбумина, глюкозы, кальция, креатинина, неорганического фосфора, калия, натрия, общего и прямого билирубина, общего белка, триглицеридов, мочевины, хлорида, общего холестерина.

Биохимические показатели сыворотки крови определяли унифицированными методами [11] с использованием клинических наборов ("Ольвекс Диагностикум", Россия). Оптическую плотность образцов измеряли на фотометре КФК-3 (Загорский оптико-механический завод, Россия) с использованием кюветы с длиной оптического пути 1 см ("Аналит-Нева", Россия). При оценке полученных экспериментальных данных использовали методы статистической обработки. Результаты выражали в виде среднего арифметического (Х) и статистической девиации (SD). Проверку гипотезы о равенстве средних выборочных величин проводили с применением t-критерия Стьюдента. Анализ отсроченного влияния имплантации образцов осуществляли с использованием дисперсионного анализа. Принадлежность подгрупп животных к разным гомогенным группам оценивали с помощью метода Шеффе.

Результаты и обсуждение. Гематологическое исследование крови кроликов в выбранные сроки после стентирования не выявило отклонений значений параметров от таковых в интактной группе, что свидетельствует о хорошем состоянии здоровья животных после проведения ангиопластики. Результаты анализов показали отсутствие ярко выраженной воспалительной реакции во все сроки после проведения операции и реакций отторжения имплантата на более поздних сроках (см. таблицу).

Анализ биохимических показателей крови кроликов на всех этапах исследования (рис.1,2) показал отсутствие системного токсического влияния нового стента с лекарственным покрытием на организм животных. В раннем постоперационном периоде наблюдалось некоторое изменение ряда биохимических параметров, что могло быть следствием оперативного вмешательства. По сравнению с контрольной группой животных, которым ангиопластику выполняли с использованием голометаллических кобальт-хромовых стентов, значения биохимических показателей крови кроликов после имплантации сиролимус-элюирующих стентов статистически значимо не отличались.

стент рестеноз кардиоваскулярный

Полученные данные свидетельствуют также о положительной динамике восстановления и об отсутствии отсроченной негативной реакции на имплантат со стороны организма животного.

Заключение. Результаты проведенного экспериментального исследования свидетельствуют об отсутствии токсического действия разработанного медицинского изделия на организм животного, что подтверждает соответствие стентов с покрытием из линейно-цепочечного углерода и лекарственным покрытием, разработанных ООО "НаноМед", требованиям биологической безопасности и токсичности, предъявляемым к медицинским изделиям.

Финансирование исследования и конфликт интересов. Исследование не финансировалось какими-либо источниками, и конфликты интересов, связанные с данным исследованием, отсутствуют.

Литература