Референтные значения агрегации тромбоцитов при исследовании импедансным методом с аденозиндифосфорной кислотой на агрегометре Multiplate
Роль тромбоцитов в тромбообразовании. Применение антитромботических и антиагрегантных препаратов в профилактике тромбозов у кардиологических больных. Изучение влияния аденозиндифосфорной кислоты на агрегацию тромбоцитов на агрегометре Multiplate.
Рубрика | Медицина |
Вид | статья |
Язык | русский |
Дата добавления | 10.04.2018 |
Размер файла | 490,1 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Референтные значения агрегации тромбоцитов при исследовании импедансным методом с аденозиндифосфорной кислотой на агрегометре Multiplate
О.В. Петрова, С.А. Шашин, Д.Г. Тарасов
Ключевые слова: референтный интервал; агрегация тромбоцитов; индуктор; аденозиндифосфорная кислота; автоматический агрегометр Multiplate.
Современные международные стандарты рекомендуют каждой лаборатории разработать или подтвердить имеющиеся в литературе референтные интервалы для каждого лабораторного показателя. В клинико-диагностической лаборатории Федерального центра сердечно-сосудистой хирургии Министерства здравоохранения РФ у 128 практически здоровых мужчин и женщин Астраханской области (Россия) была изучена агрегационная функция тромбоцитов. Исследование выполняли импедансным методом на агрегометре Multiplate (Verum Diagnostica, Германия), в качестве индуктора использовали аденозиндифосфорную кислоту. Возраст и пол статистически значимого влияния на значения агрегации тромбоцитов не оказывали. Референтный интервал агрегации тромбоцитов с аденозиндифосфорной кислотой на агрегометре Multiplate у здорового взрослого населения Астраханской области составил 598,0-1120,0 AU·min, где AU·min -- площадь под кривой агрегации.
Установленный интервал агрегации тромбоцитов у взрослого населения может быть использован как референтный в лабораториях Астраханской области при работе на аналогичных аналитических системах (автоматическом агрегометре Multiplate), так как он был разработан с учетом всех особенностей формирования референтных групп и со стандартизацией всех этапов лабораторных исследований.
Тромбоциты играют большую роль в тромбообразовании у больных, перенесших кардиохирургические операции. Для профилактики и лечения тромбозов используются антитромботические (антиагрегантные) препараты [1].
К антиагрегантам относят разные по химической структуре лекарственные препараты, обладающие способностью угнетать функции тромбоцитов с помощью различных механизмов. Пациентам с риском развития кровотечений и тромбозов необходимо контролировать применение антиагрегантных препаратов (их дозировку, результаты) с помощью исследования агрегационной функции тромбоцитов. Так, например, при использовании клопидогреля (Плавикса) и Прасугреля контроль осуществляется с помощью исследования агрегационной функции тромбоцитов в присутствии активатора -- аденозиндифосфорной кислоты [2-5].
В настоящее время в лабораторной практике для оценки агрегационной функции тромбоцитов используются агрегометры [1-3]. В основе метода определения агрегационной функции тромбоцитов лежит способность тромбоцитов под действием индукторов активизироваться и образовывать агрегаты, которые и анализирует агрегометр. По типу исследуемого материала агрегометры делятся на анализаторы, в которых используется цельная кровь, и анализаторы, в которых исследуется обогащенная тромбоцитами плазма. По типу регистрации изменений агрегатометрия делится на импедансную и оптическую [4, 5].
В последние годы современные импедансные агрегометры пришели на смену оптическим. Они в отличие от оптических не требуют специального обучения специалистов лабораторной диагностики и подготовки биологического материала, технически просты в эксплуатации, позволяют сократить время исследования крови.
Для оценки результатов лабораторного исследования используют референтный интервал (РИ). Этот показатель -- ориентир, справочная информация, которая необходима врачу для правильной трактовки результата лабораторного исследования. Верхняя и нижняя границы РИ служат линиями раздела между здоровьем и болезнью в лабораторном смысле [6, 7].
Отсутствие регионарных РИ-показателей исследования агрегационной функции тромбоцитов ограничивает использование современных импедансных агрегометров в клинической практике.
Кроме того, современные отечественные и международные стандарты рекомендуют каждой лаборатории установить РИ для каждого лабораторного параметра или подтвердить имеющиеся в справочной литературе данные о РИ [6-8].
Цель исследования -- установить референтные интервалы агрегации тромбоцитов в присутствии аденозиндифосфорной кислоты на агрегометре Multiplate на примере взрослого населения Астраханской области.
Материалы и методы. Для установления РИ использовали классический подход к расчету РИ с применением строгих критериев включения в исследование и исключения из него [6, 7].
Критерий включения в исследование -- практически здоровые лица.
Критерии исключения пациентов из исследования: наличие соматической патологии, влияющей на состояние гемостаза; прием антитромботических препаратов.
Обследования проводили в рамках профилактического медицинского осмотра в Федеральном центре сердечно-сосудистой хирургии (Астрахань).
Референтная группа была сформирована следующим образом: 70 здоровых мужчин и 70 здоровых женщин -- жителей Астраханской области в возрасте от 40 до 60 лет.
Качество лабораторного исследования зависит от преаналитического, аналитического и постаналитического этапов [9], в связи с чем все этапы нашего исследования мы стандартизировали.
Стандартизация преаналитического долабораторного этапа была обеспечена международными и отечественными стандартами, а также локальными документами, разработанными в Федеральном центре сердечно-сосудистой хирургии (Астрахань).
Образцы крови для исследования собирали путем пункции кубитальной вены после наложения жгута (не более 1 мин) в положении пациента лежа с помощью двухкомпонентных систем для забора крови -- одноразовых полипропиленовых пробирок с 17 ЕД/л литий-гепарина (Sarstedt, Германия).
Образцы крови доставляли в лабораторию в течение 15-20 мин после венепункции и анализировали через 30-35 мин с момента поступления биологического материала в клинико-диагностическую лабораторию.
Контроль качества поступающего в лабораторию биологического материала был обеспечен на преаналитическом лабораторном этапе согласно международным и отечественным стандартам.
Стандартизация аналитического этапа была обеспечена:
ежегодным техническим обслуживанием автоматического агрегометра Multiplate (Verum Diagnostica, Германия);
ежедневной проверкой точности (правильности) работы измерительных частей (электродов) с помощью электронного контроля качества согласно инструкции по эксплуатации прибора;
ежедневным контролем качества импедансной агрегометрии с использованием сертифицированных контрольных материалов для проведения внутрилабораторного контроля качества согласно инструкции по эксплуатации анализатора;
наличием лабораторной информационной системы.
Исследование агрегационной функции тромбоцитов проводили в цельной крови импедансным способом, согласно инструкции производителя, на автоматическом агрегометре Multiplate (Verum Diagnosticа, Германия). В качестве индуктора использовали аденозиндифосфорную кислоту, конечная концентрация которой составила 6,5 мкМ. Результаты исследования агрегации тромбоцитов представлены в виде площади под кривой агрегации (AU·min).
Все статистические процедуры выполняли с помощью программного пакета Statistica 6.0 for Windows (StatSoft, Inc., США). Вычисляли X -- среднее арифметическое и SD -- стандартное отклонение, а также медиану, 5-й и 95-й процентили распределения. Проводили одномерный двухфакторный дисперсионный анализ, в котором пол и возраст выступали фиксированными факторами; агрегация тромбоцитов в присутствии аденозиндифосфорной кислоты -- зависимой переменной. Тип распределения определяли по критерию Колмогорова-Смирнова. Для оценки различий средних тенденций между группами использовали критерий Манна-Уитни (U). Разделения считали статистически значимыми при уровне p<0,05.
Для определения РИ использовали статистические подходы, рекомендованные ГОСТ Р 53022.3-2008 и стандартом Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) A28-3 [6, 7].
Исследование проводили в два этапа. На первом этапе определяли и исключали из дальнейшей работы статистические выбросы при изучении агрегационной функции тромбоцитов с аденозиндифосфорной кислотой. Выбросы определяли с помощью метода Тьюки на основе интервала «нормальных» значений:
[Q1-1,5·IQR, Q3+1,5·IQR], где Q1, Q3 -- границы первого и третьего квартилей, IQR=Q3-Q1 -- межквартильный размах. С помощью метода Тьюки из исследования исключили 12 результатов определения агрегационной функции тромбоцитов, что составило 11,7%.
С учетом данных о половых и возрастных различиях агрегационной функции тромбоцитов [10] на втором этапе мы определяли целесообразность выделения групп по полу и возрасту при расчете РИ с помощью одномерного двухфакторного дисперсионного анализа.
Результаты исследования. Результаты одномерного двухфакторного дисперсионного анализа целесообразности выделения групп по полу и возрасту при расчете РИ агрегации тромбоцитов в присутствии аденозиндифосфорной кислоты представлены в табл. 1 и 2.
Статистически значимых различий в агрегации тромбоцитов в присутствии аденозиндифосфорной кислоты (средняя площадь под кривой) у мужчин и женщин не выявлено (см. табл. 1).
Статистически значимых различий в средних значениях агрегации тромбоцитов в присутствии аденозиндифосфорной кислоты у мужчин и женщин в зависимости от возраста также не выявлено (см. табл. 2).
Результаты одномерного двухфакторного дисперсионного анализа показали нецелесообразность деления взрослого населения Астраханской области по полу и возрасту при установлении РИ агрегационной функции тромбоцитов.
В связи с этим данные определения агрегации тромбоцитов у мужчин и женщин объединили в одну группу для того, чтобы рассчитать среднее значение и стандартное отклонение и сравнить полученные данные с данными, указанными в инструкции производителя.
В табл. 3 представлены значения РИ, установленные нами у взрослого населения Астраханской области, и данные из инструкции производителя.
Установленный нами РИ агрегации тромбоцитов в виде 5-95‰ практически не отличался от РИ, указанного фирмой-производителем в инструкции к набору реактивов.
Сравнить значение РИ в виде Хср±1,96SD не представляется возможным, так как производитель не указал его в инструкции к наборам реактивов.
Обсуждение. Согласно известным стандартам, способ (метод) расчета РИ зависит от численности референсной группы и типа распределения значений лабораторного показателя. При численности группы менее 120 человек и ненормальном распределении лабораторных показателей используется расчет РИ в виде 5-95‰, согласно которому у 90% здоровых лиц обнаруживаются нормальные лабораторные показатели и у 10% -- ненормальные. При численности группы более 120 человек и нормальном распределении лабораторных показателей используется расчет РИ в виде Хср±1,96SD, согласно которому у 95% здоровых лиц обнаруживаются нормальные лабораторные показатели и у 5% -- ненормальные [6, 7].
Производитель в инструкции к наборам реактивов указал РИ в виде 5-95‰ при численности референтной группы 150 человек (см. табл. 3), это может указывать на ненормальное распределение значений агрегации тромбоцитов.
В нашем исследовании распределение агрегации тромбоцитов было нормальным и численность референтной группы составила 128 человек. Согласно стандарту CLSI A28-3 и ГОСТ Р 53022.3-2008 при нормальном распределении РИ должен быть рассчитан по формуле Хср±1,96SD [6, 7]. В этой ситуации РИ агрегации тромбоцитов в присутствии индуктора аденозиндифосфорной кислоты составляет 598,0-1120,0 AU·min.
Кроме того, пол и возраст не оказывают статистически значимого влияния на значения агрегации тромбоцитов в присутствии аденозиндифосфорной кислоты. Это отличается от данных, представленных в работе [10], которые выявили возрастные и половые отличия при установлении РИ агрегации тромбоцитов.
В заключение следует еще раз отметить следующее. В последние годы клинико-диагностические лаборатории лечебных учреждений активно оснащаются современными анализаторами. Однако отсутствие региональных РИ для лабораторных показателей затрудняет применение последних. Использование РИ, указанных в инструкции по эксплуатации анализатора, может привести к неправильной интерпретации результата лабораторного исследования, так как эти РИ были установлены для другой популяции.
Кроме того, в современных отечественных справочниках по лабораторной диагностике практически нет данных по РИ агрегационной функции тромбоцитов, которые можно брать за основу.
В то же время, несмотря на наличие РИ в инструкциях по эксплуатации анализаторов, производители лабораторного оборудования рекомендуют устанавливать РИ лабораторных показателей для населения конкретного региона, которое обслуживается данным прибором.
В связи с этим мы провели процедуру установки РИ агрегации тромбоцитов в присутствии аденозиндифосфорной кислоты на агрегометре Multiplate для взрослого населения Астраханской области. Референтный интервал агрегации тромбоцитов с аденозиндифосфорной кислотой на агрегометре Multiplate у здорового взрослого населения Астраханской области составил 598,0-1120,0 AU·min.
Установленный интервал агрегации тромбоцитов у взрослого населения может быть использован как референтный в лабораториях Астраханской области при работе на аналогичных аналитических системах (автоматическом агрегометре Multiplate), так как он был разработан с учетом всех особенностей формирования референтных групп и со стандартизацией всех этапов лабораторных исследований.
Финансирование исследования. Работа выполнена в рамках НИИ, проводимого Федеральным центром сердечно-сосудистой хирургии Министерства здравоохранения Российской Федерации.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие конфликта интересов.
тромбоцит агрегация аденозиндифосфорный
Литература
1. Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. M; 2008; 292 с.
2. Чарная М.А., Морозов Ю.А. Современные антиагрегантные препараты и их применение в клинике (обзор литературы). Кардиология и сердечно-сосудистая хирургия 2009; 2(1): 34-40.
3. Siller J.M., Haberl K., Prillinger K., Panzer S., Lang I., Jilma B. The effect of antiplatet drugs clopidogrel and aspirin is less immediately after stent implantation. Thromb Res 2009; 123(6): 874-880, http://dx.doi.org/10.1016/j.thromres.2008.11.005.
4. Вавилова Т.В. Гемостазиология в клинической практике. СПб; 2005.
5. Долгов В.В., Свирин В.П. Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. Тверь; 2005; 277 c.
6. Казакова М.С., Луговская С.А., Долгов В.В. Референсные значения показателей общего анализа крови взрослого работающего населения. Клиническая лабораторная диагностика 2012; 6: 43-49.
7. ГОСТ Р 53022.3-2008. Технологии лабораторные клинические. Требования к качеству клинических лабораторных исследований. Часть 3. Правила оценки информативности лабораторных тестов. 2009.
8. Clinical and Laboratory Standards Institute. EP28-A3c. Defining, establishing, and verifying reference intervals in the clinical laboratory, approved guideline -- third edition. 2010.
9. Кишкун А.А. Руководство по лабораторным методам диагностики. M; 2007; 800 с.
10. Симонова О.И., Гордеева О.Б., Намазова-Баранова Л.С., Ботвиньева В.В., Горинова Ю.В., Солошенко М.А. Способ диагностики нарушений агрегации тромбоцитов при муковисцидозе у детей. Патент РФ №2533287. 2006.
11. Valarche V., Desconclois C., Boutekedjiret T., Dreyfus M., Proulle V. Multiplate whole blood impedance aggregometry: a new tool for von Willebrand disease. Thromb Haemost 2011; 9(8): 1645-1647, http://dx.doi.org/10.1111/j.1538-7836.2011.04400.x.
12. Tуth O., Calatzis A., Penz S., Losonczy H., Siess W. Multiple electrode aggregometry: a new device to measure platelet aggregation in whole blood. Thromb Haemost 2006; 96(6): 781-788, http://dx.doi.org/10.1160/th06-05-0242.
13. Johnson A., Dovlatova N., Heptinstall S. Multiple electrode aggregometry and P2Y(12) antagonists. Thromb Haemost 2008; 99(6): 1127-1129, http://dx.doi.org/10.1160/th08-01-0054.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Обоснование пользы превентивного применения дезагрегантов во вторичной профилактике ишемической болезни сердца. Виды антиагрегантных препаратов. Импедансный метод исследования агрегации тромбоцитов в цельной крови. Эффективность аспирина в кардиологии.
реферат [31,8 K], добавлен 29.10.2013Определение тромбоцитопении или кардинального снижения количества тромбоцитов в крови. Границы нормальных значений количества тромбоцитов. Ускоренное разрушение тромбоцитов. Синдром анемии - классификация, этиология, методы диагностики. Принципы лечения.
презентация [900,5 K], добавлен 06.04.2016Целесообразность применения скрининговых тестов свертывающей системы. Функция тромбоцитов в процессе коагуляции. Допустимый предоперационный уровень тромбоцитов. Главные компоненты механизма гемостаза. Аспирин как антикоагулянт, механизм коагуляции.
контрольная работа [19,6 K], добавлен 04.08.2009Компоненты гемостаза. Отличительные черты сосудисто-тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза. Образование тромбоцитов в костном мозге. Компоненты гранул тромбоцитов. Механизмы тромборезистентности сосудистой стенки. Классификация типов кровоточивости.
презентация [846,4 K], добавлен 20.06.2013Понятие ДВС-синдрома, его формы, признаки и стадии. Основы проблемы свертывания крови и агрегации тромбоцитов. Рассмотрение процесса активации плазменного компонента гемостаза, распространение тромбоза, проявление развернутого геморрагического синдрома.
презентация [186,7 K], добавлен 26.05.2014Регуляция агрегатного состояния крови и коллоидов. Сохранение жидкого состояния крови, предупреждение и остановка кровотечений. Сосудисто-тромбоцитарный, коагуляционный ферментативный гемостаз. Эффекты эндотелинов и основные свойства рецепторов.
презентация [4,0 M], добавлен 28.04.2012Исследование кроветворения как процесса образования элементов крови: эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Определение причин разрушения составляющих крови. Изучение групп препаратов, стимулирующих эритропоэз и назначаемых при лейкопении и агранулоцитозе.
презентация [7,3 M], добавлен 28.04.2012Важнейшие функции, которые выполняет кровь с помощью системы гемостаза. Номенклатура факторов свертывания крови. Схема агрегации тромбоцитов и фибринолиза. Классификация исследуемых нарушений системы гемостаза по этиологии и направленности изменений.
презентация [338,2 K], добавлен 03.09.2011Оценка антитромбоцитарной терапии у больных с инфарктом миокарда, прошедших экстренное чрескожное вмешательство. Расчет риска кровотечения у данных пациентов. Фармако-экономический анализ в зависимости от применения антитромботических препаратов.
дипломная работа [2,1 M], добавлен 01.08.2015Заболевания с повышенной кровоточивостью без выраженного повреждения сосудистой стенки или незначительной ее травматизацией (геморрагические диатезы). Этапы свертывания крови, причины его замедления и повышения. Роль эндотелия и тромбоцитов в гемостазе.
лекция [22,2 K], добавлен 09.03.2010Рассмотрение понятия триады Вирхова. Изучение системы гемостаза и основных форм нарушения свертывания крови. Общая характеристика гемостатических и антитромботических препаратов, механизм их действия на организм человека и основные побочные эффекты.
презентация [2,8 M], добавлен 19.04.2014Функционирование системы гемостаза, его первичная и вторичная формы. Роль эндотелия в регуляции гемостаза. Свойства субэндотелия, участие тромбоцитов в нем. Факторы свертывания крови. Диагностика и клинические ориентиры гемостаза. Типы кровоточивости.
презентация [546,9 K], добавлен 25.11.2014Онтогенез местного иммунитета. Свертывание крови у детей в первые дни после рождения. Основная функция тромбоцитов. Иммунная система, ее место и масштабы влияния на здоровье человека. Мероприятия по сохранению и восстановлению микрофлоры кишечника.
презентация [701,7 K], добавлен 12.10.2015Эффективность современных гемостатических средств и материалов общего и местного действия. Викасол - синтетический водорастворимый аналог витамина К. Способ купирования кровотечения, обусловленного нехваткой тромбоцитов. Достоинства коллагеновых пластин.
курсовая работа [54,9 K], добавлен 25.04.2014Изучение клеточного состава крови: эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Строение, физико-химические свойства, функции крови. Физиологически активные вещества, принимающие участие в свертывании крови и находящиеся в плазме. Скорость оседания эритроцитов.
курсовая работа [146,8 K], добавлен 26.12.2013Рассмотрение изменений количества эритроцитов, тромбоцитов, скорости оседания крови при различных состояниях организма. Изучение изменений крови на примере острой пневмонии. Сравнительный анализ показателей заболеваемости болезнями органов дыхания детей.
дипломная работа [144,5 K], добавлен 25.07.2015Сочетание аутоиммунной гемолитической анемии с аутоиммунной тромбоцитопенией. Повышенное разрушение эритроцитов и тромбоцитов вследствие фиксации на их поверхности белков. Внутренние и наружные кровотечения, кровоизлияния. Проведение прямой пробы Кумбса.
презентация [264,4 K], добавлен 22.04.2016Этиология, патогенез, классификация, симптомы, патанатомия и лечение тромбоцитопении - состояния, характеризующегося снижением количества тромбоцитов ниже 150·109/л, что сопровождается повышенной кровоточивостью и проблемами с остановкой кровотечений.
презентация [532,2 K], добавлен 27.11.2016Прижизненное формирование и фиксация сгустка тромбоцитов, фибрина, лейкоцитов и эритроцитов на внутренней поверхности сосуда (тромбоз). Системы гемостаза, причины и локализация тромбов. Типы атеросклеротических бляшек. Понятие тромболитического лечения.
презентация [6,3 M], добавлен 22.03.2015Тромбоцитопения как снижение в крови числа тромбоцитов, бесцветных клеток крови, которые имеют огромное значение для свертывания крови, ее главные причины и предпосылки, факторы риска, профилактика, патологическая анатомия. Клиническая картина, симптомы.
презентация [821,5 K], добавлен 27.04.2014