Экспериментальное обоснование возможности применения комплексов трикарбонилтехнеция-99м и трикарбонилрения-188 в ядерной медицине

Размещено на http://www.allbest.ru/

Экспериментальное обоснование возможности применения комплексов трикарбонилтехнеция-99м и трикарбонилрения-188 в ядерной медицине

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

радиофарматический препарат опухоль

Актуальность исследования

Проблема постановки своевременного и точного диагноза является одной из основных проблем клинической медицины. Для её решения используются достижения и конкретные результаты исследований в сфере многих фундаментальных наук: радиобиологии, радиохимии, радиофармацевтики. Именно таким симбиозом естественных и точных наук является такие направления ядерной медицины как радионуклидная диагностика и радионуклидная терапия. Технологии ядерной медицины играют важную роль в диагностике и терапии таких социально значимых заболеваний как онкологические. Чем больший выбор диагностических и лекарственных радиофармацевтических препаратов будет в арсенале у специалистов ядерной медицины, тем в более широко они могут быть применимы и в тем больших случаях будет возможно оказание своевременной, адекватной и эффективной помощи пациенту.

Генераторные радионуклиды технеций-99м и рений-188 обладают весьма полезными ядерно-физическими свойствами для диагностики и терапии злокачественных опухолей. Также немаловажным преимуществом этих радионуклидов является возможность их получения непосредственно в клинических условиях. Эти обстоятельства способствуют привлечению особого внимания к поиску, синтезу и изучению биологических свойств различных соединений, меченных как технецием-99м, так и рением-188. Далее на их основе разрабатываются лекарственные формы радиофармацевтических препаратов диагностического или терапевтического назначения.

Определенные трудности в получении новых радиофармацевтических препаратов на основе ^99mTc и ¹⁸⁸Re вносит невозможность прямого введения этих радионуклидов в структуру большинства тех веществ (например, аминокислот, пептидов, белков), которые могут стать "адресными носителями" в составе диагностического или лечебного РФП. Внимание исследователей, работающих в сфере ядерной медицины, привлекает металлоорганический фрагмент трикарбонилтехнеция-99м (рения-188), который входит в состав водорастворимого комплекса M(CO)₃(H₂O)₃⁺ и может быть использован для прямого мечения различных биологически активных молекул. Среди такого рода комплексов в настоящее время ведется активный поиск перспективных соединений, предназначенных для диагностики (^99mTc) или терапии (¹⁸⁸Re) различных, главным образом злокачественных, патологических состояний.

Более детальное исследование биологического поведения различных комплексов трикарбонилтехнеция-99м (рения-188) позволит оценить возможность их применения в ядерной медицине, как потенциальных диагностических или терапевтических агентов, что является крайне актуальным в настоящее время.

Цель исследования

Цель настоящего исследования заключается в экспериментальной оценке возможности использования комплексов ^99mTc-трикарбонила и ¹⁸⁸Re-трикарбонила с цитратом и октреотидом (синтетическим аналогом соматостатина) для получения диагностических и лечебных радиофармацевтических препаратов.

Задачи исследования:

Изучить специфичность и прочность связывания комплексов ^99mTc-трикарбонил цитрат, ^99mTc-трикарбонил октреотид, ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид опухолевыми клетками in vitro;

Изучить распределение комплексов ^99mTc-трикарбонил цитрат, ^99mTc-трикарбонил октреотид в организме животных-опухоленосителей;

Оценить возможность визуализации опухолевых очагов у лабораторных животных при использовании комплексов трикарбонилтехнеция-99м.

Изучить специфичность, прочность связывания и эффективность воздействия комплексов ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид на культуры опухолевых клеток по показателю их выживаемости;

Изучить распределение комплексов ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид у животных-опухоленосителей и дать прогноз относительно возможности достижения терапевтической дозы бета-излучения в экспериментальном опухолевом очаге;

Оценить влияние замены радионуклида технеций-99м на рений-188 в трикарбонильных комплексах цитрата и октреотида на их биологические характеристики.

Научная новизна исследования заключается в том, что впервые:

- исследованы динамика и характер накопления, а также получены количественные данные о специфическом связывании комплексов ^99mTc-трикарбонил цитрат, ^99mTc-трикарбонил октреотид, ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид с клетками меланомы В16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7;

- по критерию выживаемости in vitro показана эффективность воздействия комплексов ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид на культуру опухолевых клеток меланомы B 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7. Для клеток меланомы B 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7 определены величины средней летальной объемной активности изученных комплексов рения-188 и средней летальной дозы бета-излучения, создаваемой данными соединениями в монослое опухолевых клеток;

- исследовано распределение комплексов ^99mTc-трикарбонил цитрат и ^99mTc-трикарбонил октреотид в организме животных с имплантированными меланомой и аденокарциномой молочной железы. Показана возможность визуализации указанных опухолей методом однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ);

- исследовано распределение комплексов ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид в организме животных с имплантированными меланомой и аденокарциномой молочной железы;

- показано значительное накопление комплексов ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид в экспериментальных опухолевых очагах, что свидетельствует о принципиальной возможности их использования в терапии злокачественных новообразований различной этиологии;

- по результатам проведенных экспериментов, показана возможность применения комплексов ^99mTc-трикарбонил цитрат, ^99mTc-трикарбонил октреотид, ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид в ядерной медицине.

Научно-практическая значимость исследования

Результаты исследований показывают, что комплексы ^99mTc-трикарбонил цитрат, ^99mTc-трикарбонил октреотид, ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид избирательно накапливаются клетками меланомы и аденокарциномы молочной железы in vitro и in vivo. Данные, полученные экспериментальным путем, свидетельствуют о возможности достижения терапевтической дозы бета-излучения в опухолевом очаге при использовании комплексов ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид. Показана возможность визуализации экспериментальных опухолевых очагов с помощью ^99mTc-трикарбонил цитрата и ^99mTc-трикарбонил октреотида методом ОФЭКТ. В перспективе изученные комплексы трикарбонилтехнеция-99м и трикарбонилрения-188 могут быть использованы для получения туморотропных радиофармацевтических препаратов диагностического и терапевтического назначения.

В процессе выполнения диссертационной работы, был выполнен полный объем исследований биологических характеристик комплекса ^99mTc-трикарбонил цитрат, соответствующий требованиям, предъявляемым к доклиническим испытаниям диагностических РФП. Данное соединение рекомендовано для дальнейшего клинического изучения.

Результаты исследований биологического поведения изучаемых соединений будут весьма полезны при разработке новых радиофармацевтических препаратов, предназначенных для диагностики и терапии ряда онкологических заболеваний.

Положения, выносимые на защиту:

1. В условиях in vitro ^99mTc-трикарбонил цитрат и ^99mTc-трикарбонил октреотид обладают тропностью к клеткам меланомы B 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7;

2. ^99mTc-трикарбонил цитрат и ^99mTc-трикарбонил октреотид проявляют выраженную туморотропность у животных с трансплантированными меланомой B 16 и аденокарциномой молочной железы Н⁺636;

3. С помощью ^99mTc-трикарбонил цитрат и ^99mTc-трикарбонил октреотид возможна визуализация экспериментальных опухолевых очагов у животных - опухоленосителей методом однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ОФЭКТ);

4. Замена радионуклида технеций-99м на рений-188 в трикарбонильных комплексах не влияет на их тропность к клеткам злокачественных новообразований - меланомы B 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7 и фармакокинетику у животных-опухоленосителей;

5. Количественная оценка цитотоксического действия ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-три-карбонил октреотид на клетки меланомы B 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7;

6. Уровни поглощенных доз при воздействии ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид: на монослой опухолевых клеток, соответствующие 37% выживаемости в условиях in vitro и в опухолевых очагах меланомы B 16 и аденокарциномы молочной железы Н⁺636 у животных - опухоленосителей после внутривенного введения указанных комплексов.

Личный вклад автора

Экспериментальные данные диссертационной работы получены при непосредственном участии автора в исследовании биологического поведения изучаемых соединений in vitro и in vivo. Синтез изученных соединений осуществлен совместно со старшим научным сотрудником лаборатории технологии и контроля качества радиофармпрепаратов ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА РФ А.О. Малышевой. Оценка поглощенных доз в монослое клеток и опухолевых очагах у экспериментальных животных выполнена автором совместно с доктором технических наук, профессором, ведущим научным сотрудником отделения радиоизотопной диагностики РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН Б.Я. Наркевичем и кандидатом технических наук, старшим научным сотрудником отдела № 8 ФМБЦ им. А.И. Бурназяна ФМБА РФ А.В. Тултаевым.

Апробация диссертации

Основные положения диссертационной работы были представлены и обсуждены на следующих научных форумах: Всероссийская научно-техническая конференция "Современные проблемы ядерной медицины и радиофармацевтики" (Обнинск, 2002); конгресс Европейской ассоциации ядерной медицины (Амстердам, 2003 г.); IV Международная конференция по ядерной и радиационной физике (Алматы, 2003 г.); IV Российская конференция по радиохимии (Озерск, 2003 г.); Российская конференция "Современные проблемы ядерной медицины и радиофармацевтики" (Дубна, 2004 г.); XII Европейский симпозиум по радиофармацевтике и радиофармацевтическим препаратам (Сопот, 2004 г.); V Международная конференция "Ядерная и радиационная физика" (Алматы,2005); Международный симпозиум по технецию (Оараи, Япония, 2005 г.); III Всероссийский национальный конгресс лучевых диагностов и терапевтов "Радиология-2009" (Москва, 2009 г.); VII международная конференция "Ядерная и радиационная физика" (Алматы, 2009 г.); конгресс Европейской ассоциации ядерной медицины (Барселона, 2009 г.); VI Российская конференция по радиохимии "Радиохимия-2009" (Москва, 2009 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 20 работ, из них - 6 публикаций в отечественных и зарубежных журналах; 14 - в материалах международных (8) и Российских конференций, съездов и симпозиумов.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 144 страницах машинописного текста. Состоит из введения, четырех глав, заключения и выводов. Данная научная работа иллюстрирована 22 рисунками и 15 таблицами. Библиографический указатель включает 119 источников, из них - 24 отечественных и 95 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность выбранной темы исследования; сформулированы цель и задачи; представлены защищаемые положения и научно-практическая значимость полученных результатов.

В первой главе проведён анализ литературы, посвящённой тематике диссертации. Анализ опубликованных работ показал актуальность развития стратегии "идеальной пары", которая направлена на получение диагностического и терапевтического препаратов на основе одного и того же вещества, меченного радионуклидами технеций-99м или рений-188 соответственно. Доказана значимость существующей проблемы всестороннего изучения биологического поведения различных комплексов трикарбонилтехнеция-99м и трикарбонилрения-188 как потенциальных диагностических или терапевтических агентов.

Во второй главе описаны материалы и методы, использованные в диссертационной работе.

В диссертационной работе изучены комплексы ^99mTc-трикарбонил цитрат (^99mTc-ТК Cit), ^99mTc-трикарбонил октреотид (^99mTc-ТК Окт), ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат (¹⁸⁸Re-ТК Cit) и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид (¹⁸⁸Re-ТК Окт), синтезированные в лаборатории № 37 ФМБЦ им. А.И. Бурназяна.

В экспериментах in vitro использовали асинхронные культуры меланомы B 16, аденокарциномы молочной железы MCF 7, фибробластов кожи человека IMG-1635 и смешанную культуру лимфоцитов крови человека.

Связывание комплексов ^99mTc-ТК Cit, ^99mTc-ТК Окт, ¹⁸⁸Re-ТК Cit и ¹⁸⁸Re-ТК Окт опухолевыми и нормальными клетками изучали в условиях in vitro. Культуры клеток инкубировали в течение 30, 60, 90, 120, 180 мин после внесения раствора изучаемого комплекса с активностью комплексов технеция-99м - 2,1 ± 0,8 МБк и 2,8 ± 0,5 МБк рения-188. Накопленную клетками активность измеряли методом прямой радиометрии и нормировали в процентах от внесенной активности на 10⁶ клеток.

Прочность связывания комплексов со структурами опухолевых клеток изучали методом "вымывания". Клетки инкубировали до достижения максимального накопления изученных комплексов, далее радиоактивную среду удаляли. Затем в культуральные флаконы вносили, свежую среду, и продолжали процедуру инкубирования, по окончании которой определяли аккумулированную радиоактивность.

Вымывание рассчитывали по формуле: В = М_А - Ф_А, где:

М_А - максимальная активность, накопленная клетками;

Ф_А - фиксированная активность после реинкубирования.

Эффективность воздействия комплексов ¹⁸⁸Re-ТК Cit и ¹⁸⁸Re-ТК Окт на клетки меланомы B 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7 оценивали по критерию выживаемости. Опухолевые клетки инкубировали в течение трех часов с комплексами ¹⁸⁸Re-ТК Cit и ¹⁸⁸Re-ТК Окт, внесенными в культуральную среду в количестве, обеспечивающем создание объемной активности от 74 до 740 кБк/мл. Через 48 и 96 ч проводили оценку фракции выживших клеток с последующим построением кривых выживаемости, для которых определяли следующие параметры: уравнение, описывающее кривую и достоверность ее аппроксимации (R²), коэффициент корреляции (R), статистическую значимость (p). По полученным кривым определяли значения средней летальной объемной активности изученных комплексов.

В экспериментах in vivo использовали:

1. Мышей гибридов F1 (СВАхС57В1) самок весом 18 - 20 г. с перевитой пигментированной меланомой В16. Животных включали в эксперимент при достижении размера опухоли 8 - 12 мм в диаметре.

2. Мышей линии BALB/c Cit с трансплантированной аденокарциномой молочной железы Н⁺636. Перевивной материал получен из опухоли, спонтанно возникшей у самки (Н⁺636) в питомнике Института биоорганической химии РАН. В эксперимент были взяты животные с размером опухоли 8 - 12 мм в диаметре. Все работы с лабораторными животными, выполняли согласно правилам проведения экспериментальных работ*.

* Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных (Приказ Минздрава СССР №755).

Поведение комплексов ^99mTc-трикарбонил и ¹⁸⁸Re-трикарбонил с цитратом и октреотидом в организме животных-опухоленосителей изучали путем оценки их распределения по органам и тканям животных. Растворы изученных комплексов с объемной активностью 37 МБк/мл вводили в хвостовую вену животных в объеме 0,1 мл. По прошествии 1, 3, 5 и 24 часов после инъекции животных умерщвляли. В пробах крови, мышечной и опухолевой тканей, а также всех жизненно важных органов (сердце, легкие, печень, почки, кишечник, желудок) методом прямой радиометрии определяли содержание радионуклидов.

Визуализация экспериментальных опухолевых очагов выполнена методом планарной сцинтиграфии. Процедуру проводили на клинической цифровой двухдетекторной гамма-камере "Toshiba" в матрицу 256 х 256 с использованием параллельного коллиматора, вращение детектора на 45° за 180 с.

Перед процедурой животным внутривенно вводили растворы ^99mTc-трикарбонил цитрат и ^99mTc-трикарбонил октреотид объемом 0,2 мл с активностью 74 МБк и фиксировали в специальном станке, мочевой пузырь экранировали свинцовым экраном.

Оценку тканевых доз облучения, расчет дозовых нагрузок и поглощенных доз осуществляли с применением MIRD-формализма - математического аппарата дозиметрии внутреннего облучения от инкорпорированных радиоактивных соединений. При расчетах поглощенной дозы в монослое клеток было принято, что геометрические размеры культурального флакона и высота среды, содержащей радиоактивный раствор, соответствуют понятию протяженного плоского источника.

В третьей и четвертой главах представлены результаты экспериментов и их обсуждение.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение поведения комплексов ^99mTc-ТК Cit и ^99mTc-ТК-Окт in vitro

На рисунке 1 представлены данные о кинетике накопления указанных комплексов опухолевыми и контрольными клетками. В качестве препарата сравнения был использован пертехнетат натрия, ^99mТс (элюат генератора технеция-99м).

Максимальное накопление ^99mТс-TK Cit в клетках меланомы B 16 в 3,7 раза выше, чем в клетках контрольной культуры (фибробласты IMG 1635) и в 11,0 раз выше, чем пертехнетата натрия, ^99mТс. Для аденокарциномы молочной железы MCF 7 эти значения составляли 4,8 и 14,5 соответственно. Результаты экспериментов косвенно подтверждают рецепторный механизм связывания ^99mТс-ТК Окт с опухолевыми клетками, так как накопления данного комплекса лимфоцитами, лишенными рецепторов к соматостатину, практически не происходит. При анализе максимального накопления показано, что ^99mТс-ТК Окт накапливается клетками аденокарциномы молочной железы MCF 7 в 6,0 раз большем количестве по сравнению с контрольной культурой (лимфоцитами) и в 9,0 раз больше, чем пертехнетат натрия,^99mTc. Для меланомы В 16 эти значения составляли 4,0 и 12,0 соответственно.

Изучение прочности связывания комплексов ^99mTc-ТК Cit и ^99mTc-ТК Окт с опухолевыми клетками

Вымывание ^99mTc-ТК Cit из клеток аденокарциномы молочной железы и меланомы не превышало 30%. Процесс вымывания ^99mTc-ТК Cit из опухолевых клеток имел моноэкспоненциальный характер. Время полувыведения ^99mTc из клеток MCF 7 составило 240 мин, из клеток меланомы B - от 16 до 180 мин. Аналогичные значения для комплекса ^99mTc-цитрат, полученного прямым мечением цитрата технецием-99м с использованием дихлорида олова в качестве восстановителя (РФП "Цитратех, ^99mTc"), составляли 40 и 50 минут соответственно. Определяющим туморотропность ^99mТс-ТК Cit, вероятнее всего, является наличие в составе комплекса трикарбонильной группы. Это предположение подтверждается тем фактом, что "Цитратех, ^99mTc" не связывается так же прочно со структурами опухолевой клетки, несмотря на то, что некоторое его накопление все-таки происходит. Полученные данные свидетельствуют о высвобождении до 55% ^99mТс-ТK Окт от максимально накопленной активности уже через 90 минут после начала реинкубирования, что характерно для комплексов, образующихся с мембранными рецепторами. При анализе кривых, отражающих динамику вымывания ^99mТс-ТК Окт, прослеживаются 2 фазы вымывания радиоактивной метки из опухолевых клеток. Первая, "быстрая" фаза, во время которой, вероятно, наблюдается отрыв меченого пептида от соматостатиновых рецепторов, расположенных на мембране опухолевых клеток. В течение следующей, "медленной", фазы наблюдается вымывание радиоактивных продуктов метаболизма и/или комплекса ^99mТс-ТК Окт из внутренних структур клеток. При решении уравнений, описывающих "быструю" и "медленную" фазы вымывания ^99mTc-ТК Окт из клеток MCF 7, время полувыведения составило 78 и 180 мин соответственно. Для клеток B 16 эти значения составляли 50 и 130 минут соответственно.

Изучение распределения комплексов ^99mTc-ТК Cit и ^99mТс-TK Окт в организме животных-опухоленосителей

В таблице 1 представлены данные о распределении комплекса ^99mТс-TK Cit ^99mTc-трикарбонил цитрата у животных с перевитыми меланомой В 16 и аденокарциномой молочной железы в сравнении с радиофармацевтическим препаратом "Цитратех, ^99mTc". Показано накопление комплексов в наиболее значимых органах и тканях в сроки, наиболее благоприятные для проведения сцинтиграфии.

Таблица 1 - Распределение ^99mTc-TK Cit и "Цитратех, ^99mTc", в организме мышей - опухоленосителей(% от введенной активности)

Органы и ткани	Меланома В 16	Аденокарцинома молочной железы	"Цитратех, 99mTc", меланома В 16
	1ч	3ч	1ч	3ч	1ч	3ч
Кровь, %/г	3,5 ± 0,7	1,7 ± 0,2	2,6 ± 0,1	1,2 ± 0,1	2,8 ± 1,1	1,2 ± 0,6
Печень	10,3 ± 1,0	8,6 ± 0,2	11,8 ± 0,3	10,1 ± 0,9	1,3 ± 0,2	0,8 ± 0,01
Почки	1,7 ± 0,3	1,5 ± 0,1	2,3 ± 0,2	3,1 ± 0,1	6,4 ± 0,8	5,3 ± 0,4
Кишечник	3,7 ± 0,3	3,6 ± 1,3	4,5 ± 0,4	6,8 ± 0,1	4,2 ± 0,3	3,9 ± 0,7
Моч. пузырь	40,0 ± 4,5	43,5 ± 17,0	30,5 ± 5,0	41,4 ± 0,3	58,0 ± 15,7	78,1 ± 1,4
Опухоль, %/г	7,6 ± 0,8	7,7 ± 1,0	2,6 ± 0,1	3,4 ± 0,9	1,0 ± 0,3	0,4 ± 0,08
Мышцы, %/г	1,0 ± 0,3	1,0 ± 0,3	1,0 ± 0,4	0,8 ± 0,4	0,5 ± 0,2	0,2 ± 0,06
опухоль/мышца	7,6	7,7	2,6	4,3	2,0	2,0

^99mTc-трикарбонил цитрат накапливается в опухолевом очаге меланомы В 16 уже через 1 час после введения, и к 3 часам после введения уровень накопления в опухоли достигает максимума. Выведение радиоактивности из организма происходит в основном через почки. При этом до 40% от введенной дозы выводится в течение первого часа. В течение суток комплекс практически полностью выводится, задерживаясь частично в печени (до 10%). Максимальные соотношения опухоль/мышца и опухоль/кровь достигаются через 3 часа после введения соответственно. Было сделано предположение о возможности получения визуализации опухолевых очагов с помощью процедуры ОФЭКТ.

Накопление комплекса в опухоли молочной железы регистрируется уже через 1 час, достигает максимума через 3 часа и остается стабильным в течение последующих двух часов. Комплекс медленно покидает опухолевый очаг. Выведение происходит через почки. По данным коэффициентов дифференциального накопления наиболее информативным является исследование через 3 часа после начала эксперимента. Таким образом, получение качественной визуализации опухолевых очагов с помощью процедуры ОФЭКТ возможно в широком временном диапазоне.

Сравнительные данные распределения ^99mTc-ТК Окт и разрешенного к клиническому применению радиофармпрепарата "¹¹¹In октреотид", представляющего собой комплекс октреотида с индием-111, в организме животных-опухоленосителей представлены в таблице 2. Такое сравнение проведено в силу того, что в обоих комплексах мечению подвергались идентичные молекулы. В данном случае это существенно, так как рецепторная природа связывания изучаемых соединений с опухолевой клеткой вносит ряд ограничений, вызванных различием их афинности, количеством соответствующих сайтов на мембранах клеток и т.д. Так же, как и в предыдущей таблице, показано накопление комплексов в наиболее значимых органах и тканях в сроки, наиболее благоприятные для проведения сцинтиграфии.

Таблица 2 - Распределение ^99mTc-TK Окт и "¹¹¹In октреотид" в организме мышей-опухоленосителей (% от введенной активности)

Органы и ткани	99mТс-ТК Окт, меланома В 16	99mТс-ТК Окт, аденокарцинома молочной железы	111In, Октреотид, меланома В 16
	1 ч	3 ч	1 ч	3 ч	1 ч	3 ч
Кровь, %/г	5,0 0,9	1,9 0,3	3,6 ± 1,7	1,8 ± 0,1	2,4 0,4	0,6 0,3
Печень	12,4 3,2	9,7 0,9	10,2± 4,2	9,3 ± 0,6	5,8 0,7	5,0 0,2
Почки	5,7 0,8	5,2 0,6	4,4 ± 1,6	5,1 ± 0,5	3,1 0,4	3,5 0,8
Кишечник	11,0 2,6	9,3 1,0	9,2 ± 3,7	9,3 ± 0,7	3,7 0,3	3,8 0,4
Моч. пузырь	50,314,4	58,4 6,6	32,7± 3,5	56,9± 5,4	79,9 6,9	70,2 7,1
Опухоль, %/г	5,1 1,4	2,6 0,3	2,1 ± 0,8	1,5 ± 0,2	2,3 0,1	2,0 0,4
Мышцы, %/г	0,9 0,04	0,8 0,3	0,6± 0,09	0,8± 0,05	1,7 0,2	0,4 0,1
Опухоль./мышцы	5,7	3,1	3,5	1,9	1,3	5,0

Для ^99mTc-TK Окт наблюдался быстрый клиренс активности из крови, выведение происходило преимущественно с мочой. Динамика процесса накопление - выведение ^99mTc-TK Окт из опухолевой ткани хорошо коррелирует с данными о прочности связывания комплекса со структурами опухолевых клеток, полученными in vitro. По основным характеристикам: накопление в опухолевом очаге и КДН опухоль/мышцы ^99mTc-TK Окт не уступает используемому в клинической практике РФП "¹¹¹In Октреотид".

Оценка возможности визуализации патологических очагов

Для подтверждения возможности визуализации экспериментальных опухолевых очагов с помощью изученных комплексов была выполнена процедура сцинтиграфического исследования. На рисунке 2 представлены сцинтиграммы мышей с перевитой меланомой B 16 через 2 ч и трансплантированной аденокарциномой молочной железы Н⁺636 через 3 часа после внутривенного введения после внутривенного введения ^99mТс-ТК Cit.

На сцинтиграммах отчетливо визуализируются опухолевые очаги, а также печень животного. По данным сцинтиграфии, коэффициент дифференциального накопления опухоль/мышцы у животного с меланомой составляет 5,3, у животного с опухолью молочной железы - 4,1. При вскрытии мыши с аденокарциномой молочной железы в легких обнаружены узелковые образования, которые были гистологически идентифицированы как метастатические очаги. Накопление ^99mТс-ТК Cit в данных очагах составило 2,6 %/г.



На рисунке 3 представлено изображение мыши CBAxC57Bl с перевитой меланомой В 16, полученное после внутривенного введения комплекса ^99mTc-трикарбонил октреотид.

На сцинтиграмме отчетливо визуализируется опухолевый очаг, коэффициент дифференциального накопления опухоль/мышца по данным анализа сцинтиграммы составил 4,5. Так же отмечается накопление ^99mTc-ТК Окт в области печени и кишечника, что соответствует данным фармакокинетики и характерно для рецептор-специфических РФП.

Биологическое поведение комплексов ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид

В данном разделе экспериментов решены следующие задачи: 1) изучение динамики накопления и прочности связывания ¹⁸⁸Re-ТК Cit и ¹⁸⁸Re-ТК Окт в условиях in vitro, 2) оценка эффективности воздействия комплексов, меченных радионуклидом ¹⁸⁸Re на опухолевые клетки и 3) изучение поведения ¹⁸⁸Re-ТК Cit и ¹⁸⁸Re-ТК Окт в организме животных-опухоленосителей с последующей оценкой доз бета-излучения в опухолевых очагах.

Накопление комплексов ¹⁸⁸Re-ТК Cit и ¹⁸⁸Re-ТК-Окт в опухолевых клетках in vitro достигало максимума через полтора - два часа после начала инкубирования. Уровень максимального накопления ¹⁸⁸Re-ТК Cit клетками меланомы B 16 в 14,5, а клетками аденокарциномы молочной железы MCF 7 в 21,5 раза выше, чем перрената натрия,¹⁸⁸Re. Максимальное накопление опухолевыми клетками ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотида превышало накопление перрената натрия, ¹⁸⁸Re для меланомы В 16 - в 4,3, а для аденокарциномы молочной железы MCF 7 - 7,3 раза. Полученные данные подтвердили предположение о том, что замена в изученных трикарбонильных комплексах радионуклида технеций-99м на рений-188 не изменит их биологические характеристики.

Изучение прочности связывания комплексов со структурами опухолевых клеток показало, что за 2 часа реинкубирования из опухолевых клеток вымывалось не более 30% ¹⁸⁸Re-ТК Cit и до 40% ¹⁸⁸Re-ТК Окт. Для ¹⁸⁸Re-ТК Окт отмечен двухэкспоненциальный характер процесса вымывания радиоактивности из опухолевых клеток. Время полувыведения комплекса из клеточных структур аденокарциномы молочной железы MCF 7 во время "быстрой" фазы составляло 80 мин, "медленной" фазы - 130 мин. Для меланомы B 16 эти показатели имели значения 60 и 140 минут соответственно.

2)Кривые выживаемости клеток меланомы и аденокарциномы молочной железы приведены на рисунках 5 и 6. По полученным кривым определены объемные активности радиоактивных комплексов, при которых наблюдали 37% выживаемость опухолевых клеток (C₃₇ - среднелетальные объемные активности).

Кривые выживаемости клеток аденокарциномы молочной железы и меланомы при воздействии на них комплекса ¹⁸⁸Re-ТК Cit описываются следующими уравнениями: 1 - дозовая зависимость, определенная через 48 часов после удаления радиоактивного раствора из инкубационной среды; 2 - дозовая зависимость, определенная через 96 часов после удаления радиоактивного раствора из инкубационной среды:

Культура клеток	1	2
MCF 7	Y1=100·e-0,03x (R2=0,96, SD=0,10, P<0,0001)	Y2=100·e-0,0038x (R2=0,96, SD=0,10, P<0,0001)
B 16	Y1=100·e-0,0023x (R2=0,98, SD=0,06, P<0,0001)	Y2=100·e-0,0027x (R2=0,97, SD=0,11, P<0,0001)

Кривые выживаемости клеток при воздействии на них комплекса ¹⁸⁸Re-ТК Окт описываются следующими уравнениями: 1 - дозовая зависимость, определенная через 48 часов после удаления радиоактивного раствора из инкубационной среды; 2 - дозовая зависимость, определенная через 96 часов после удаления радиоактивного раствора из инкубационной среды:

Культура клеток	1	2
MCF 7	Y1=100·e-0,0029x (R2=0,98, SD=0,12, P<0,0001)	Y2=100·e-0,0041x (R2=0,94, SD=0,22, P<0,0001).
B 16	Y1=100·e-0,0025x (R2=0,96, SD=0,12, P<0,0001)	Y2=100·e-0,0038x (R2=0,98, SD=0,16, P<0,0001)

При решении приведенных выше уравнений, получены значения среднелетальных объемных активностей (C₃₇) для опухолевых клеток при воздействии на них комплексов ¹⁸⁸Re-ТК Cit и ¹⁸⁸Re-ТК Окт, приведенные в таблице 3.

Таблица 3 - Значения среднелетальных объемных активностей C₃₇ для опухолевых клеток при воздействии на них трикарбонильных комплексов рения-188, кБк/мл

Соединение, культура клеток	Через 48 ч ()	Через 96 ч ()
188Re-ТК Cit	Меланома В16	430 ± 30,1	365 ± 32,8
	MCF 7	350 ± 38,5	262 ± 23,6
188Re-ТК Окт	Меланома В16	396 ± 51,5	260 ± 23,4
	MCF 7	365 ± 40,2	242 ± 23,0

Для расчета поглощённых доз в культуре клеток было принято следующее утверждение: основной вклад в поражающее действие вносит воздействие радиоактивного раствора, находящегося над монослоем клеток в течение трех часов. Дополнительный вклад в формирование поглощенной дозы вносит облучение клеток от радионуклида, аккумулированного в самих клетках и, возможно, высвободившегося в культуральную среду в течение последующих 48 часов (три периода полураспада радионуклида). Таким образом, суммарная поглощенная доза складывается из двух компонент: поглощённая доза от раствора, находящегося над монослоем клеток во время инкубирования, и поглощенная доза от радионуклида, вошедшего в структуру клеток за последующее время.

Анализ полученных данных показывает, что поглощенные дозы, соответствующие среднелетальным объемным концентрациям, лежат в следующих диапазонах:

- при воздействии на клетки меланомы B 16 комплекса ¹⁸⁸Re-ТК Cit 1,16 значения поглощенных доз бета-излучения 1,16 - 1,37 Гр, для комплекса ¹⁸⁸Re-ТК Окт эти значения составляют 0,83 - 1,26 Гр;

- при воздействии на клетки аденокарциномы молочной железы MCF 7 комплекса ¹⁸⁸Re-ТК Cit значения поглощенных доз бета-излучения составляют 0,83 - 1,11 Гр, для комплекса ¹⁸⁸Re-ТК Окт 0,80 - 0,98 Гр.

Данные о распределении ¹⁸⁸Re-ТК Cit в организме животных-опухоленосителей представлены в таблице 4. Значения накопления исследованного комплекса в опухолевой ткани приведены в процентах от введенной активности на 1 грамм и в абсолютных значениях (кБк на 1 г).

Таблица 4 - Распределение ¹⁸⁸Re-ТК Cit в организме животных опухоленосителей (% от введенной активности)

Органы/Ткани	F1 CBAxC57Bl с перевитой меланомой В 16	BALB/c Cit с перевитой аденокарциномой молочной железы Н+636
	1 ч	3 ч	1 ч	3 ч
Кровь, %/г	5,6 0,3	2,3 0,3	6,6 0,8	4,9 0,2
Печень	9,4 1,4	6,9 1,0	11,8 1,3	10,7 1,3
Почки	1,4 0,1	0,8 0,2	2,1 0,1	1,6 0,3
Желудок	2,3 0,5	3,0 0,8	2,6 0,9	2,2 0,8
Кишечник	3,5 0,8	4,4 1,0	3,8 0,1	3,3 0,7
Опухоль, %/г кБк/г	12,7 5,1 469,9 188,0	10,3 3,9 381,1 141,0	4,3 2,1 159,1 77,7	2,3 1,3 85,1 48,1
Мочевой пузырь	23,0 2,4	32,6 6,0	13,0 5,5	21,3 8,2
Мышцы, %/г	0,5 0,3	1,20 0,5	1,3 0,8	0,3 0,2

В целом, характер распределения ¹⁸⁸Re-ТК Cit в организме мышей с экспериментальными опухолевыми очагами не имеет принципиальных различий с биологическим поведением ^99mTc-ТК Cit. Распределение ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрата в организме мышей с перевитой меланомой B 16 характеризуется медленным выведением его из организма в течение первых трех часов после введения. В течение первого часа после введения ¹⁸⁸Re-ТК Cit отмечено достаточно высокое содержание комплекса в крови. В организме мышей с перевитой меланомой B 16 накопление ¹⁸⁸Re-ТК Cit в опухолевой ткани происходит быстро и практически остается стабильным на протяжении трех часов после введения. Концентрация радиоактивного комплекса в опухолевой ткани сопоставима со значениями среднелетальных объемных активностей (365 - 430 кБк/мл), определенных для меланомы B 16 при воздействии на эту культуру клеток в условиях in vitro. Накопление ¹⁸⁸Re-ТК Cit у мышей с перевитой аденокарциномой молочной железы в опухолевом очаге умеренное. Однако, оно не вполне удовлетворительное с точки зрения возможности достижения терапевтического эффекта при однократном введении изученного комплекса.

В таблице 5 представлены данные распределения ¹⁸⁸Re-ТК Окт у мышей линии F1 CBAxC57Bl с перевитой меланомой В 16 (% от введенной активности).

Таблица 5 - Распределение ¹⁸⁸Re-ТК Окт в организме мышей линии F1 CBAxC57Bl с перевитой меланомой В 16 (% от введенной активности)

Органы	Время после введения 1 ч	Время после введения 3 ч
Кровь, %/г	4,5 0,6	1,8 0,8
Печень	14,4 0,1	9,5 0,8
Почки	9,1 2,9	13,0 0,3
Желудок	1,0 0,5	1,1 0,3
Кишечник	11,9 1,3	14,4 0,9
Мочевой пузырь	41,5 4,6	39,0 1,7
Опухоль, %/г кБк/г	3,2 0,4 118,4 14,8	2,6 0,7 96,2 25,9
Мышцы, %/г	0,8 0,02	0,5 0,03

Поведение комплекса ¹⁸⁸Re-ТК Окт в организме мышей с перевитой меланомой B 16 характеризуется следующими показателями:

- Быстрый клиренс крови, что характерно для рецептор-специфичных радиофармацевтических препаратов. Через 3 часа после внутривенного введения, концентрация ¹⁸⁸Re-ТК Окт в крови снижалась на 60% от максимальной.

- Связывание изученного комплекса опухолевой тканью характеризовалось удержанием до 80% от максимального в течение как минимум трех часов после его достижения.

Прогноз лучевых нагрузок на опухолевые очаги и основные жизненно важные органы при введении комплексов ¹⁸⁸Re-трикарбонила "среднему" человеку, выполненный по данным их фармакокинетики у животных-опухоленосителей, представлен в таблице 6.

Таблица 6 - Значения эффективной и поглощенной доз в органах и тканях человека

Органы	Поглощенная доза, Гр/МБк
	188Re-ТК Cit, меланома	188Re-ТК Cit, аденокарцинома молочной железы	188Re-ТК Окт, меланома
Опухолевой очаг	1,57·10-1	2,15·10-2	2,58·10-2
Легкие	6,07·10-3	5,97·10-3	1,03·10-4
Красный костный мозг	1,09·10-4	1,04·10-4	2,50·10-4
Печень	1,20·10-2	3,37·10-2	1,63·10-2
Толстый кишечник	5,42·10-2	3,43·10-2	1,46·10-1
Тонкий кишечник	5,32·10-2	1,71·10-2	1,49·10-1
Почки	7,62·10-3	2,05·10-2	5,71·10-1
Мочевой пузырь	5,27·10-1	2,58·10-1	5,22·10-1
Молочная ж-за	4,49·10-4	1,84·10-4	1,95·10-4
Сердце	1,73·10-3	1,35·10-4	1,24·10-4
Эффективная доза, мЗв/МБк	59,26	22,26	57,09

Поглощенная доза в опухолевом очаге меланомы, получаемая при введении в организм комплекса ¹⁸⁸Re-ТК Cit, практически в десять раз больше, чем доза в очаге аденокарциномы молочной железы. Критическими органами для всех изученных комплексов являются те, которые участвуют в выведении радиоактивных комплексов и продуктов их метаболизма, а именно - почки, мочевой пузырь, печень и кишечник. По значениям поглощенных доз в красном костном мозге и сердце можно прогнозировать минимальное проявление гемато- и кардиотоксичности.

Таким образом, резюмируя полученные результаты, отметить следующее.

В настоящей работе впервые проведен всесторонний анализ биологического поведения соединений, представляющих собой "функциональные пары", выстроенные по принципу диагностика - терапия и обладающие как неспецифической, так и рецептор-специфической туморотропностью. Получены радиобиологические характеристики соединений трикарбонилрения-188, которые позволили судить о возможности их применения в радионуклидной терапии. Неспецифическая туморотропность комплекса ^99mTc-ТК Cit определяется туморотропностью комплексообразующей функциональной группы трикарбонил технеция. Туморотропность ^99mTc-ТК Окт связана, прежде всего с сохранением рецепторной специфичности изученного комплекса.

^99mTc-ТК Cit может быть использован в диагностике, а ¹⁸⁸Re-ТК Cit - в терапии недифференцированных сарком с превалирующим сосудистым компонентом, а также дифференцированных ангиосарком. ^99mTc-ТК Окт может быть использован в диагностике злокачественных новообразований, характеризующихся сверхэкспрессией соматостатиновых рецепторов.

Расчетные данные о дозах бета-излучения рения-188, создаваемых в экспериментальных опухолевых очагах, дают основание полагать, что комплексы ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрата и октреотида перспективны в плане разработки терапевтических РФП.

ВЫВОДЫ

1. Комплексы ^99mTc-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат обладают неспецифической туморотропностью и прочно связываются со структурами опухолевых клеток в условиях in vitro. Комплексы ^99mTc-трикарбонил октреотид и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид проявляют рецептор-специфическую афинность к опухолевым клеткам, экспрессирующим соматостатиновые рецепторы.

^{2. 99m}Tc-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат, а также ^99mTc-трикарбонил октреотид и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид обладают выраженной туморотропностью у животных с перевитыми опухолями меланомы и аденокарциномы молочной железы.

3. Визуализация опухолевых очагов при использовании комплексов трикарбонилтехнеция-99м возможна в сроки, определенные по данным их фармакокинетики. ^99mTc-трикарбонил цитрат может быть применен в диагностике недифференцированных сарком с превалирующим сосудистым компонентом, а также дифференцированных ангиосарком. ^99mTc-октреотид может быть применен в диагностике злокачественных новообразований, характеризующихся сверхэкспрессией соматостатиновых рецепторов.

4. Замена радионуклида ^99mTc на ¹⁸⁸Re в комплексах трикарбонил цитрат и трикарбонил октреотид не изменяет их туморотропность и фармакокинетику.

5. В диапазоне объемных активностей 242 - 430 кБк/мл (доза бета-излучения на монослой 0,8 - 1,4 Гр) доказан выраженный цитотоксический эффект комплексов трикарбонилрения-188 с цитратом и октреотидом для клеток меланомы В 16 и аденокарциномы молочной железы MCF 7.

6. Комплексы ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид могут быть использованы в ядерной медицине в комплексной терапии ряда онкологических заболеваний.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

радиофарматический препарат опухоль

1. Клементьева О.Е., Кодина Г.Е., Корсунский В.Н., Малышева А.О. Синтез и изучение биораспределения комплексов ^99mTc(CO)₃⁺ с дитиокарбаматными лигандами, содержащими морфолиновые функциональные группы // Медицинская физика - 2009 - № 4 (44) - С. 46 - 51.

2. Кодина Г.Е., Малышева А.О., Клементьева О.Е., Инкин А.А., Суглобов Д.Н., Лумпов А.А., Горшков Н.И. О механизме реакций карбонилирования технеция-99м // Материалы II-ой Уральской конференции по радиохимии, г. Екатеринбург 20-22 октября 2004 - Вестник УГТУ-УПИ - №17(47) - С.150 - 155.

3. Кодина Г.Е., Малышева А.О., Инкин А.А., Клементьева О.Е. О возможности использования элюата отечественных генераторов технеция-99м для синтеза препаратов трикарбонилтехнеция-99м// Материалы Всероссийской научно-технической конференции "Современные проблемы ядерной медицины и радиофармацевтики", Обнинск - 2002 - С. 80.

4. Kodina G., Malysheva A., Inkin A., Klementyeva O., Korshunov V. Biodistribution of the ^99mTc-tricarbonylcitrate in melanoma-bearing mice // European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging - 2003 - vol. 30, suppl. 2 - P. 319s.

5. Kodina G.E., Malysheva A.O., Klementyeva O.E., Inkin A.A. Comparative study of the organometallic complexes of tricarboniltechnetium-99m and hexaisocyanide technetium-99m // ICNRP'03, Abstracts - Almaty, 2003 - P. 449 - 450.

6. Малышева А. О., Клементьева О.Е., Инкин А.А., Кодина Г.Е., Суглобов Д.Н., Горшков Н.И., Лумпов А.А., Синтез и биологические свойства соединений трикарбонилтехнеция-99m // Материалы 4-ой Всероссийской конференции по радиохимии "Радиохимия-2003" - 2003, Озерск - С. 281.

7. Kodina G.E., Malysheva A.O., Klementyeva O.E., Inkin A.A., Korshunov V.B. Biodistribution of the ^99mTc- tricarbonylcitrate in melanoma-bearing mice // European Journal of the Nuclear Medicine and Molecular Imaging - 2003- v.30 - P. S319.

8. Кодина Г.Е., Малышева А.О., Инкин А.А., Клементьева О.Е. Сравнительное изучение органометаллических комплексов трикарбонил-технеция-99м и гексаметилизобутил-изоцианида технеция-99м // Материалы 4-ой Международной конференции "Ядерная и радиационная физика" - Казахстан, Алматы - 2003 - С. 449.

9. Кодина Г.Е., Малышева А.О., Клементьева О.Е., Инкин А.А., Слободяник И.И. Перспективы использования комплексов трикарбонилтехеция-99м в ядерной онкологии // Тезисы докладов Ш Съезда МОО "Общество ядерной медицины" - Дубна - 2004 - С. 19

10. Greenin M., Klementieva O., Kodina G., Malysheva A., Moskaleva E. In vivo and in vitro characterization of inorganic ^99mTc(CO)₃⁺ and ¹⁸⁸Re(CO)₃⁺ complexes // 12th European Symposium on Radiopharmacy and Radiopharmaceuticals - Gdansk, Poland - Abstracts - 2004 - P. 95.

11. Kodina G.E., Malysheva A.O., Klementyeva O.E., Inkin A.A., Gorshkov N.I., Lumpov A.A., Suglobov D.N. Mechanism of Carbonylation Reactions of Technetium-99m // Int. Symposium on Technetium - Abstr. - 2005 - Oarai, Japan - P. 3

12. Kodina G.E., Malysheva A.O., Klementyeva O.E, Gorshkov N.I., Lumpov A.A., Suglobov D.N. Synthesis and in vitro evaluation of ^99mTc(CO)₃⁺ complexes with dithiocarbamate ligands containing morpholine moiety // Int. Symposium on Technetium - Abstr. - 2005 - Oarai, Japan - P. 29

13. Kodina G.E., Malysheva A.O., Klementyeva O.E., Inkin A.A., Gorshkov N.I., Lumpov A.A., Suglobov D.N. Mechanism of Carbonylation Reactions of Technetium-99m // Journal of Nuclear and Radiochemical Scieces - 2005 - Vol. 6 - №. 3 P. 183-185.

14. Kodina G.E., Malysheva A.O., Klementyeva O.E., Gorshkov N.I., Lumpov A.A., Suglobov D.N. Synthesis and in vitro evaluation of ^99mTc(CO)₃⁺ complexes with dithiocarbamate ligands containing morpholine moiety// Journal of Nuclear and Radiochemical Scieces - 2005 - Vol. 6 - №. 3 P. 187-188.

15. Гринин М.Г., Клементьева О.Е., Слободяник И.И. Экспериментальная оценка функциональной пригодности нового отечественного диагностического радиофармацевтического препарата Октреотид, ¹¹¹In // Ведомости научного центра экспертизы средств медицинского применения - 2007 - №1 - С. 41 - 44.

16. Клементьева О.Е., Кодина Г.Е., Малышева А.О. Изучение поведения ¹⁸⁸Re-трикарбонил и его комплекса с октреотидом в опухолевых клетках // Тезисы докладов Пятой юбилейной молодежной научно-практической конференции "Ядерно-промышленный комплекс Урала: проблемы и перспективы" Озерск 21 - 23 апреля 2009 - С.90 - 91.

17. Клементьева О.Е., Корсунский В.Н., Кодина Г.Е., Малышева А.О. Перспективы использования комплекса трикарбонил рения-188 цитрат в ядерной медицине // Материалы III Всероссийского национального конгресса лучевых диагностов и терапевтов "Радиология-2009"- Медицинская визуализация - 2009 - спец. выпуск - С. 201.

18. Klementyeva O., Kodina G., Korsunsky V., Malysheva A. Synthesis and biological behaviour of citrate ¹⁸⁸Re(CO)₃⁺ complex // Eur. J. of Nucl. Med. and Molecular Imaging - 2009 - V. 36, supp. 2 - P. S390.

19. Клементьева О.Е., Кодина Г.Е., Корсунский В.Н., Малышева А.О. Синтез и изучение биологических свойств комплексов ^99mТс-трикарбонил октреотид и ¹⁸⁸Re-трикарбонил октреотид // Тезисы докладов 7-ой международной конференции «Ядерная и радиационная физика», Алмааты, Казахстан - Ядерная и радиационная физика - 2009 - С. 257 - 258.

20. Клементьева О.Е., Кодина Г.Е., Малышева А.О. Получение и изучение биологического поведения комплекса ¹⁸⁸Re-трикарбонил цитрат // Тезисы докладов шестой российской конференции по радиохимии "Радиохимия-2009". Москва - 2009 - С. 380.

Размещено на Allbest.ru

...