Применение криоконсервированных клеток фетальной печени для коррекции иммунной системы у крыс с атопическим дерматитом
Атопический дерматит как одна из актуальных проблем современной дерматологии. Анализ и оценка эффективности применения криоконсервированных клеток фетальной печени для коррекции иммунной системы. Влияние данной терапии на улучшение лечебного эффекта.
Рубрика | Медицина |
Вид | статья |
Язык | русский |
Дата добавления | 19.04.2018 |
Размер файла | 67,5 K |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Применение криоконсервированных клеток фетальной печени для коррекции иммунной системы у крыс с атопическим дерматитом
В последнее время отмечается неуклонный рост частоты и распространенности аллергических заболеваний кожи: атопического дерматита (АД), контактного дерматита, экземы от которых в ряде стран страдает до 25% населения [1]. Повсеместно наблюдается нарастание тяжести течения и торпидности аллергодерматозов к проводимой терапии [4].
АД - это генетически обусловленное заболевание, имеющее хроническое, рецидивирующее течение. Развивающееся иммунозависимое воспаление усугубляется генетически детерминированным дефектом кожного барьера, обусловленным нарушением функции гена филаггрина [11]. Вместе с тем признается мультифакторность патогенетически значимых для развития АД факторов таких, как толл-подобные рецепторы [7], включая иммунологические нарушения в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета [5]. На этом фоне наблюдается гиперпродукция иммуноглобулинов класса E (IgE) [4], которые не только способны непосредственно связывать антиген, вызывающий развитие атопического процесса, но и активно участвуют в его презентации дендритными клетками T-лимфоцитам - Th2 [12]. Присоединение вторичной инфекции, имеющей хронический и рецидивирующий характер [8], на фоне разбалансировки состояния местного и системного иммунитета при АД является показанием для лечения данного заболевания иммуномодуляторами [6, 9]. Создание препаратов, способных модулировать иммунный ответ, основанный на регуляции показателей в клеточном, гуморальном звеньях и моноцитарно-фагоцитарной системе может выявить новые пути в патогенетически обоснованном лечении АД [10].
В данной работе в качестве таковых применяли суспензию криоконсервированных клеток фетальной печени (кКФП), как было ранее показано в наших работах [2,3], обладают выраженной иммуномодулирующей активностью. Образцы кКФП хранили в низкотемпературном банке ИПКиК НАНУ в жидком азоте при температуре -196оС.
Цель исследования - оценить эффективность применения криоконсервированных клеток фетальной печени для коррекции иммунной системы у крыс с атопическим дерматитом
Объекты и методы исследования. Эксперименты проведены на крысах линии Вистар в возрасте 6 месяцев, массой 180-200 г., в соответствии с «Европейской Конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1986 г.) и одобренными Национальным конгрессом Украины по биоэтике (Киев, 2003 г.). Лабораторные животные содержались в условиях вивария ИПКиК НАНУ и были использованы в экспериментальной работе.
Инициировали АД по методу [Залкан, Ивлева, 1965] Животному ежедневно, в течение 21-х суток, в кожу спины (3Ч4 см2) втирали по 0.5 мл 5% спиртово-ацетонового раствора динитрохлорбензола. Криоконсервировали КФП по методу [2]. Всего под наблюдением находилось 63 крыс, которые были распределены в группы: 1 - интактные (контроль) (n=7); 2 - АД без лечения (n=14); 3 - АД+стандартное лечение (преднизолоновая мазь) (n=14); 4 - АД+нКФП (n=14); 5 - АД+кКФП (n=14).
Иммунокоррегирующий эффект кККЧ оценивали по степени восстановления клеточного (КЗИ) звена иммунитета на 7-е сутки после развития АД и лечения (28-е сутки после сенсибилизации). В КЗИ определяли количество CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD19+, CD25+ клеток селезенки, а также CD16+ в популяции нейтрофилов и моноцитов на проточном цитофлюориметре (FACS Сalibur (BD, США)), используя соответствующие антикрысиные ФИТЦ-меченные МАТ (ВD, США). Процедуру окрашивания и фиксации клеток проводили стандартным способом в соответствии с указаниями фирмы производителя.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили методом Стьюдента-Фишера с применением программы Statistica 7.0, (Stat Soft Inc.), адаптированной к поставленным задачам и с учетом специфики данных.
Полученные данные свидетельствуют о том, что терапевтический эффект от стандартной терапии (преднизолоновая мазь) наблюдали у крыс с индукцией АД на 7-е сутки. В то время как при лечении с применением КФП его наблюдали уже на 3-5-е сутки от начала терапии и независимо от того, какой биообъект применяли нативный (нКФП) или криоконсервированный (кКФП). Так, уровень общего IgE в сыворотке крови на 7-е сутки после стандартного лечения cнижался относительно исходного уровня у 56% животных, а после применения нКФП или кКФП - у 80 и 82%, соответственно.
Данные анализа фенотипических характеристик Т-лимфоцитов селезенки приведены в таблице.
атопический дерматит криоконсервированный иммунный
Содержание субпопуляций Т-лимфоцитов в селезенке крыс с индукцией АД до и после лечения
Результаты оценки состояния Т-клеточного звена иммунитета показали, что для крыс с АД (группа 2) было характерным достоверное снижение содержания общего пула Т-клеток CD3+ (р<0.05), а также субпопуляции Т-хелперов CD4+ (p<0.001) и уровня CD8+ (p<0.001) лимфоцитов, хотя это не отражалось на показателях ИРИ (p>0.001). Заслуживает внимания почти двукратное снижение концентрации клеток с фенотипом CD16+ (p<0.001), которые идентифицируются с пулом ЕК, по сравнению с показателями у животных контрольной группы 1. было несколько повышенным у животных с АД и содержание регуляторных Т-лимфоцитов (CD4+CD25+) (p<0.001).
Проведение стандартной терапии оказывало выраженное повышение, но не нормализацию, содержания Т-лимфоцитов (p<0.001). Отмечалось повышение содержания CD4+ и CD8+лимфоцитов (p<0.001), но эти показатели оставались ниже контрольных значений (p<0.01 в обоих случаях). Стандартная терапия не влияла существенно и на показатели содержания клеток с цитотоксической активностью (CD16+), а также на показатели содержания Т-рег. клеток (p>0.05).
Неоднократно нами отмечалось, что препараты фетального происхождения, включая и КФП проявляют иммунотропный и иммунокоррегирующий эффект [2]. Наши данные подтверждают этот тезис. Установлено, что применение как терапевтического средства лечения АД КФП у крыс группы 4 и 5 нормализовало содержание CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ лимфоцитов и ИРИ (p>0.05 относительно показателей контроля). В сравнительном аспекте важно, что положительный эффект был получен при применении как кКФП, так и кКФП, который следует расценивать как сохранение в криоконсервирующем материале тех активных начал, которые реализуют иммунокоррегирующий эффект в отношении КЗИ.
Экспериментальное обоснование возможности применения КФП как лечебного препарата при широком спектре аутоиммунных заболеваний продемонстрировано во многих работах [2,3]. Состоятельность этого материала выступать в роли иммуномодулятора и иммунокорректора доказана и для кКФП, которые сохраняют все биологические свойства и доступность в очаг иммуновоспаления [3].
АД является хроническим иммунозависимым заболеванием с развитием очага воспаления в кожных покровах [1,6,8]. Многообразие проявления его клинических признаков и широта патогенетических факторов обусловливающих их манифестацию подтверждают мультифакторность развития данной патологии [4]. Не вызывает сомнения участия в индукции и поддержания развития АД инфекционной микрофлоры колонизирующей кожу [8], и агравации этого процесса при некоторых дефектах геномного профиля кожи выражающихся нарушением ее барьерной функции [11]. Очевидным остается и факт развивающихся «особых» взаимоотношений на этом плацдарме микрофлоры с субстратами иммунной системы (ИС), являющимися органически необходимым субстратом кожных покровов [6].
К настоящему времени накоплен огромный опыт применения КФП как в экспериментальных исследованиях, так и в клинике [3]. Обоснован и продемонстрирован иммуномодулирующий потенциал КФП при лечении целого ряда патологических состояний организма [2]. В данной работе мы продемонстрировали способность КФП выступать в роли лечебного препарата для весьма распространенного в настоящее время и трудно поддающегося лечению такого заболевания, как АД, особенно у детей.
Известно, что КФП после воздействия физико-химических факторов криоконсервирования (замораживания-оттаивания), так же как и нативные, сохраняют потенциал экспрессии таких иммунологически значимых генов, как б-цепи ИЛ2, TНФб, ИФНб и ИФНг активировать пролиферацию и дифференцировку клеток гемопоэтической ткани и т.д. [2]. Вполне вероятно, что сохранение именно этих свойствами кКФП определяло их нормализующий эффект в отношении многих показателей ИС у животных с АД.
Известно, что большинство АИЗ и аллергических заболеваний, являющихся мультифакторной патологией, развиваются на фоне срыва естественной толерантности. Одной из главных причин несостоятельности естественной толерантности является снижение функциональной активности Т-супрессорного звена иммунитета и, прежде всего, Т-регуляторных клеток [3]. Следует заметить, потенциал их активации является одним из главных структурно-функциональных элементов фетальной печени, а именно, МСК.
Одним из механизмов иммуносупрессорной активности МСК, которые входят в состав КФП, является непосредственные межклеточные образования между МСК и Т-лимфоцитами [3].
Обобщенный анализ полученных данных показывает, что иммуномодулирующая терапия в виде применения КФП происходила на фоне не снижения, а даже повышения содержания клеток Т-лимфоцитов супрессорного типа, т.е. Т-рег. (CD4+25+). Коррегирующий эффект от применения КФП в отношении данных показателей очевиден.
Полученные в работе результаты свидетельствуют о том, что кКФП, подобно нКФП, оказывают коррегирующее действие на т - клеточное звено иммунитета, восстанавливая их функциональные свойства у животных с индукцией АД.
Литература
1. Белоусова Т.А. Белоусова Т.А. Аллергодерматозы - болезни современной цивилизации / Т.А. Белоусова. // РМЖ. - 2003. - №27. - С. 1538-1542.
2. Гольцев А.М. и др. 2000. Способ лечения аутоиммунных заболеваний. Патент №30723А Украина, МПК6 А61К35/50. Бюл. №7-II, 19.
3. Грищенко В.И. Трансплантация продуктов эмбриофетоплацентарного комплекса. От понимания механизма действия к повышению эффективности применения. / В.И. Грищенко, А.Н. Гольцев. // Проблемы криобиологии. - 2002. - №1. - С. 54-84.
4. Кунгуров Н.В. Об оптимизации терапии больных атопическим дерматитом детей и взрослых / Н.В. Кунгуров, М.М. Кохан, Ю.В. Кениксфест. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2004. - №3. - С. 23-29.
5. Матушевская Е.В., Богуш П.Г., Свирщевская Е.В. и др..Анализ аллергенспецифических IgE у больных атопическим дерматитом в Москве / [Е.В. Матушевская, П.Г. Богуш, Е.В. Свирщевская та др.]. // Вестник дерматологии и венерологии. - 2003. - №2. - С. 4-8.
6. Атопический дерматит: современная диагностика и лечение. / [Ю.В. Сергеев, О.Л. Иванов, Д.К. Новиков та др.]. // Иммунопатология, аллергология и инфектология. - 2001. - №4. - С. 28-48.
7. Снарская Е.С. Некоторые клинико-иммунологические аспекты патогенеза атопического дерматита и роль толл-подобных рецепторов / Е.С. Снарская. // 4. - 2012. - С. 109-110.
8. Ardern-Jones M.R. Bacterial superantigen facilitates epithelial presentation of alergen to T-helper 2 cells / Ardern-Jones. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2007. - №104. - Р. 5557-5562.
9. Hultsch Т. Immunomodulation and safety of topical calcineurin inhibitors for the treatment of atopic dermatitis / Т. Hultsch, A. Kapp, J. Spergel. // Dermatology. - 2005. - №211. - С. 174-187.
10. Leung D.Y. New insights into atopic dermatitis / Leung. // The Journal of Clinical Investigation. - 2004. - №113. - С. 651-657.
11. Palmer С. N. Common loss-of-function variants of the epidermal barrier protein filaggrin are a major predisposing factor for atopic dermatitis / С. Palmer. // J. Nature Genetics. - 2008. - №38. - С. 441-446.
12. Reefer A.J. Analysis of CD25hiCD4+ «regulatory» T-cell subtypes in et al atopic dermatitis reveals a novel T(H) 2-like population / Reefer. // Journal of Alergy and Clinical Immunology. - 2008. - №121. - С. 415-422.
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Аллергические заболевания кожи, возникающие, в раннем детском возрасте, роль наследственной предрасположенности к атопическим заболеваниям. Возрастные особенности локализации и морфологии очагов воспаления кожи у детей, больных атопическим дерматитом.
презентация [3,2 M], добавлен 31.01.2017Роль клеток миелоидного и лимфоидного рядов в функционировании иммунной системы. Комплементарная система как составляющая врожденного иммунитета. Положительная и отрицательная селекция развивающихся Т-клеток в тимусе и вне его. Этапы развития В-клеток.
реферат [30,1 K], добавлен 10.10.2009Роль печени в организме. Биохимические основы формирования алкогольной болезни печени. Экспериментальное моделирование патологии печени у крыс. Влияние карсила и эссенциале на состояние печени крыс при острой интоксикации CCl4 и этиловым спиртом.
дипломная работа [10,2 M], добавлен 06.06.2016Определение иммунитета, его типы и виды. Общая схема иммунного ответа. Маркеры и рецепторы клеток иммунной системы. Распределение T-клеток в организме. Особенности структуры имунноглобулина, его классы и типы. Общая характеристика энергетических реакций.
реферат [203,4 K], добавлен 19.10.2011Органы иммунной системы. Клетки и медиаторы иммунной системы. Иммунный ответ как основная реакция иммунной системы. Возрастные особенности иммунитета. Критические периоды становления иммунной системы. Иммунная компетентность и аутоиммунные заболевания.
курсовая работа [1,4 M], добавлен 19.05.2016Возрастные особенности иммунной системы ребенка и их функция. Основные методы исследования иммунной системы. Синдромы и семиотика поражения иммунной системы. Врожденные и приобретенные иммунодефицитные заболевании частота, клинические проявления.
презентация [606,7 K], добавлен 15.05.2016Понятие иммунитета у беспозвоночных, классификация клеток крови, индуцибельные гуморальные защитные факторы. Эволюция В-клеток и иммуноглобулинов, клетки системы врожденного иммунитета, антимикробные пептиды. Лимфомиелоидные ткани у низших позвоночных
реферат [32,5 K], добавлен 27.09.2009Клиническая картина атопического дерматита, роль психогенных факторов при его развитии. Психические расстройства у пациентов с атопическим дерматитом, их диагностирование. Выявление возрастных показателей. Психогенные обострения, влияние стресса.
курсовая работа [375,9 K], добавлен 04.09.2014Факторы риска развития и критерии диагностики атопического дерматита. Оценка аллергологического статуса. Механизмы аллергии и медиаторы воспаления. Общие направления в терапии больных АД. Влияние местных кортикостероидов на барьерную функцию кожи.
презентация [955,3 K], добавлен 12.11.2014Характеристика эмбриональных стволовых клеток (ЭСК): свойства генома, основные источники и способы выделения. Характеристика традиционных методов лечения цирроза печени. Сравнительный анализ традиционного лечения и лечения цирроза печени с помощью ЭСК.
курсовая работа [1,5 M], добавлен 23.07.2011Взаимосвязь функций печени, водно-электролитного баланса и кровообращения, влияние лекарственных препаратов. Определение риска при операциях у больных с заболеваниями печени. Особенности диагностики и терапии в различные фазы оперативного вмешательства.
реферат [26,6 K], добавлен 17.02.2010Болезни, вызванные недостаточностью иммунной системы. Болезни, обусловленные избыточным реагированием иммунной системы. Инфекции и опухоли иммунной системы. Классификация первичных иммунодефицитов по механизмам развития. Развитие болезни Брутона.
презентация [967,5 K], добавлен 19.04.2013Опухоль как структура, сходная с тканевым трансплантатом и распознаваемая иммунной системой. Стимуляция иммунной системы для отторжения опухолей. Иммунологический надзор, распознавание клетками иммунной системы или антителами опухолевых антигенов.
реферат [25,4 K], добавлен 28.09.2009Механизм действия кортикостероидов, их использование в дерматологии. Классификация топических кортикостероидов, побочные эффекты от их употребления. Применение средств при атопическом дерматите. Противопоказания к терапии кортикостероидными препаратами.
реферат [20,7 K], добавлен 24.11.2013Аутоиммунный гепатит - хронический воспалительный процесс, связанный с иммунной агрессией на ткани печени: причины развития, симптомы; методы диагностики. Роль физкультурного комплекса при лечении заболевания, активизация нервной регуляции функций печени.
реферат [48,4 K], добавлен 20.11.2012Понятие про атопический дерматит. Распространение, этиология и патогенез заболевания. Элементы кожных высыпаний при атоническом дерматите. Основные и дополнительные признаки заболевания. Организация гипоаллергенного быта. Особенности лечения дерматита.
реферат [24,2 K], добавлен 12.02.2012Бактериальная этиология и патогенез абсцесса печени, клинические проявления заболевания и постановка диагноза. Эпидемиология и патоморфология эхинококкоза печени и методы его профилактики. Распространенность первичного рака печени и течение болезни.
реферат [22,8 K], добавлен 11.09.2010Характеристика и виды очагового образования печени. Совершенствование методов лабораторной и инструментальной диагностики. Радиоизотопное сканирование печени. Клиника, диагностика и лечение метастатического рака печени. Доброкачественные опухоли печени.
реферат [16,6 K], добавлен 25.02.2009Общая характеристика болезней печени. Токсическая дистрофия печени человека. Этиология и патогенез, патологическая анатомия по стадиям, осложнения, исходы. Роль пункционной биопсии печени в диагностике гепатитов. Медикаментозное поражение печени.
реферат [34,4 K], добавлен 25.05.2014Высококвалифицированная своевременная медицинская помощь - фактор, способствующий уменьшению сроков выздоровления и снижает время пребывания пациентов в стационаре. Специфические особенности противовоспалительной терапии при атопическом дерматите.
курсовая работа [101,6 K], добавлен 06.05.2019