Особенности экспрессии CD68 макрофагов в коже и слизистой 12-перстной кишки у больных псориазом ассоциированном с глютеновой энтеропатией

Размещено на http://www.allbest.ru/

Государственное учреждение

«Крымский государственный медицинский университет имени С.И. Георгиевского»

Особенности экспрессии CD68 макрофагов в коже и слизистой 12-перстной кишки у больных псориазом ассоциированном с глютеновой энтеропатией

канд.н. Яссер Халед Абдель Карим Масадех

д.мед.н., профессор Притуло О.А.

доцент Филоненко Т.Г.

Аннотация

Обследовано 36 больных псориазом с индексом PASI от 3 до 27 баллов, у которых была позитивная реакция при определение титра антител к эндомизию (ЭМА) класс IgA . При эндоскопическом и гистологическом анализе слизистой 12-ти перстной кишки выделены 3 группы больных псориазом и целиакией в зависимости от стадии целиакии; 1группа (n = 17)- инфильтративная стадия, 2 группа (n = 12) - гиперпластическая. 3 группа (n = 7) - атрофическая стадия. Увеличение количества CD68+ макрофагов в воспалительном инфильтрате слизистой 12-ти перстной кишки и коже в зависимости от стадии является важным моментом в понимании патогенеза аутоиммунного процесса при псориазе ассоциированном с глютеновой энтеропатией. Наличие межэпидермальных CD68+ макрофагов в атрофическую стадию является гистологической особенностью псориатического поражения кожи у больных с глютеновой энтеропатией.

Ключевые слова: псориаз, целиакия, макрофаги, иммунногистохимия

Abstract

Patients by psoriasis associated with gluten enteropathy 36 is inspected patients by psoriasis with the index of PASI from 3 to 27 marks which had a positive reaction at determination of title of antibodies to endomisium (EMA) class of IGA. At the endoscopic and histological analysis of duodenum mucous membrane are selected 3 groups of patients by psoriasis and celiac disease depending of stage of celiac disease; 1group (n = 17) is the infiltrative stage, 2 group (n = 12) - hyperplastic. 3 group (n = 7) is the atrophy stage. Increase of amount of CD68 macrophages in inflammatory infiltration of duodenum mucous membrane and a skin is an important moment in understanding of pathogeny of autoimmune process at psoriasis associated with gluten enteropathy. A presence of interepidermal CD68 macrophages in atrophy stage is the histological feature of psoriasis defeat of skin at patients with gluten enteropathy.

Keywords: psoriasis, celiac disease, macrophage, immunohistochemistry

Связь болезней кожи с патологией кишечника известна давно. Особенно подробно изучены поражения кожи, ассоциированные с целиакией [1,9,10,11,15,17].

Глютенчувствительная целиакия или глютеновая энтеропатия (ГЭП) - заболевание тонкой кишки, обусловленное иммунным ответом на растительный белок глютен. Сложности диагностики ГЭП связаны с чрезвычайным разнообразием клинических проявлений от крайне тяжелого нарушения всасывания на фоне хронической диареи до малосимптомного течения или проявлением внекишечных симптомов, в том числе и псориаза [3,7,13,15,18].

Развитие иммунного ответа на глиадин при ГЭП определяется активацией иммунной системы, ассоциированной со слизистой оболочкой тонкой кишки . Парфенов А.И. предположил, что имеет место развитие двух вариантов развития иммунного ответа и формирования специфических антител в экстрацеллюлярном матриксе собственной пластинки слизистой оболочки тонкой кишки [3]. Первый путь осуществляется посредством макрофагов, захватывающих глиадин с последующей передачей информации Т- и В-лимфоцитам. Т-хелперы интенсивно экспрессируют антигены гистосовместимости НLА DR, активирующие рецепторы СD40L на В лимфоцитах и вызывают пролиферацию и дифференцировку плазматических клеток, продуцирующих антитела к глиадину. С другой стороны иммунный ответ на глиадин связан с образованием комплекса глиадина с тканевой трансглутаминазой, который обладает сродством к HLA DQ2 или HLA DQ8 на В-лимфоцитах и активизирует пролиферацию и дифференцировку плазматических клеток, которые синтезируют антитела к глиадину. Вновь образованный комплекс глиадина с ТТГ приводит к образованию антиглиадиновых антител, антител к ТТГ (АТТГ) и эндомизию. Дезаминированный глиадин активирует синтез провоспалительных цитокинов Т-лимфоцитами. Увеличение числа межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ) - неспецифический ответ на повреждение эпителиоцитов - является самым ранним морфологическим проявлением целиакии [7,13,18,19,20].

Псориаз, как мультифакторное хроническое рецидивирующее заболевание, также имеет сходные звенья патогенеза с ГЭП и сопровождается развитием аутоиммунных реакций в коже, доказанное многочисленными исследователями [2,4,6,12,16]. Согласно этим данным псориаз рассматривается как аутоиммунное заболевание, которое может быть системным проявлением целиакии или ассоциированным с целиакией , так как повышение кишечной проницаемости тонкой кишки снижает барьерную функцию и позволяет токсинам проникать из кишечника сначала в гуморальную среду, а затем - в кожу с последующим появлением псориатических бляшек [10,11,15]. При этом антигенпрезентирующие клетки, такие как дендритные клетки и макрофаги, высвобождают цитокины IL-12 и IL-23, которые активируют дифференциацию Th-клеток до форм Th1 и Th17. Эти клетки, в свою очередь высвобождают провоспалительные факторы, которое поддерживают воспаление, а также способствуют пролиферации кератиноцитов и эпителиоцитов [12,17].

Таким образом, учитывая общность патогенетических механизмов с развитием хронического аутоиммунного воспаления, участие макрофагов в регуляции экспрессии ко-стимулирующих молекул и продукцию ряда цитокинов, межклеточные взаимодействия, контролирующие антиген-специфическую активность Т-клеток, что определяет сценарий иммунного ответа при ГЭП и псориазе, целесообразно провести иммунногистохимическое исследование с моноклональными антителами CD68, описанных как маркер моноцитов/макрофагов. Определение количества и качества макрофагов в собственной пластинке слизистой 12-ти перстной кишки и псориатической бляшки является актуальным в понимании морфо- и патогенеза в зависимости от стадии ГЭП.

Цель - определение локализации иуровня СD68 макрофагов в коже и слизистой 12-ти перстной кишки у больных псориазом и глютеновой энтеропатией.

Материалы и методы исследования. Обследовано 36 больных псориазом с индексом PASI от 3 до 27 баллов, у которых скриннинговый анализ исследований для выявления целиакии показал позитивную реакцию при определение титра антител к эндомизию (ЭМА) класс IgA методом непрямой флюоресценции в сыворотке крови. Концентрация ЭМА колебалась от низких (1:40) до выраженных значений (1:160). Также проведена фибродуоденоскопия с последующим взятием биоптата слизистой ДПК для верификации диагноза.

Материал для исследования - биоптаты кожи и слизистой 12-ти перстной кишки. Каждый пациент получал подробную информацию о проводимом исследовании и давал информированное согласие на участие в исследовании. Диагностика и лечение больных псориазом проводилась в соответствии протоколу утвержденном приказом МОЗ Украины №312 от 08.05.2009 г. межэпидермальный макрофаг псориатический энтеропатия

Морфологическое исследование проводилось по стандартным методикам с окраской гематоксилином и эозином [8]. Иммуногистохимическое исследование (ИГХИ) проводилось на серийных парафиновых срезах в соответствии со стандартными протоколами [10], с использованием моноклональных антител CD68 (Clone PG-M1, разведение 1:50) и системы визуализации EnVision™ FLEX+, Mouse, High pH (Link), Code K8012 на автостейнере фирмы DAKO. В месте локализации антигена визуализировалась цитоплазматическая реакция коричневого цвета.

Морфометрическое исследование включало подсчет позитивных клеток в 3 полях зрения при увеличении 200. Полученные данные пересчитывали на 1 мм² среза. Просмотр и цифровые фотографии микропрепаратов осуществляли цифровой камерой OLYMPUS C 5050Z, установленной на микроскопе «Olympus CX-41».

Все полученные результаты подвергнуты статистической обработке для параметрических и непараметрических критериев с использованием программы «MedStat» (серийный №MS0011) ДНПП ООО «Альфа», г. Донецк. При анализе проверки распределения на нормальность использовали Хи-квадрат и критерий W Шапиро-Уилка, сравнение центральных тенденций двух независимых выборок с использованием W-критерия Вилкоксона и сравнение средних двух независимых выборок по критерию Стьюдента. Для множественного сравнения непараметрических данных использовали ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса и критерий Дана [5].

Результаты и их обсуждение. Результаты гистологического исследования препаратов кожи и слизистой ДПК позволили выделить три группы больных псориазом ассоциированных с различными формами ГЭП соответствующих классификации Marsh [19]: инфильтративная стадия - 1 группа, гиперпластическая стадия - 2 группа и атрофичесая стадия - 3 группа.

Во всех препаратах обнаружены признаки хронического дуоденита слабой активности с наличием межэпителиальных лимфоцитов и сохранением структуры ворсин (n = 17); в 12 случаях (n = 12) отмечалась пролиферация энтероцитов крипт; в 7 случаях (n = 7)- атрофия ворсин с наличием выраженной лимфоидной инфильтрации в собственной пластинке слизистой ДПК и межэпителиальной зоне и строме.

С целью выявления количества и качества клеток макрофагальной генерации, являющихся одними из главных клеточных компонентов, участвующих в развитии аутоиммунного воспаления проведено иммунногистохимическое исследование с моноклональными антителами CD68, локализующихся в цитоплазме макрофагов.

Экспрессия CD68+ макрофагов обнаруживалась преимущественно в строме ворсинок и на границе с собственной пластинкой слизистой ДПК. При этом в контрольных срезах уровень экспрессии CD68+ макрофагов составил 2,1±0,54. В зависимости от стадии ГЭП (табл.1) уровень экспрессии достоверно изменялся в сторону увеличения. При инфильтративной стадии обнаруживали 12,24±11,19 клеток, при гиперпластической стадии - 19,12±11,28 и при атрофической - 25,14±12,56 (р <0,01). Следует отметить наличие единичных межэпителиальных макрофагов, которые достоверно не отличались в зависимости от стадии ГЭП. При инфильтративной стадии отмечалось 1,2±1,02 клеток, при гиперпластической 2,4±2,34, при атрофической стадии - 2,9±2,14 (р >0,01).

Результаты исследования гистологических препаратов из прогрессирующей псориатической бляшки у больных с ГЭП показали классическую морфологическую картину с наличием лимфоцитарной инфильтрации в дерме, пара- и гиперкератоз, акантоз эпидермиса и базальноклеточную пролиферацию эпидермоцитов, иногда абсцессы Мунро [2].

При иммуногистохимическом исследовании в контрольных срезах здоровой кожи экспрессия CD68+ макрофагов наблюдалась в верхнем слое дермы и составила 10,20±0,48 клеток.

В дермальном воспалительном инфильтрате в инфильтративной стадии ГЭП отмечалось достоверное увеличение уровня экспрессии CD68+ макрофагов по отношению к контролю (13,71±1,01), в гиперпластической - 21,16±7,38 и атрофической - 27,68±11,59 (р <0,01) (табл.1). Во всех группах вне зависимости от стадии ГЭП макрофаги фиксировались в зоне абсцесса Мунро. Обращает внимание появление межэпителиальных макрофагов только в атрофической стадии, что составило 2,4±2,46 позитивных CD68+ клеток (рис.1).

Рис. 1. Фрагмент кожи. Атрофическая стадия ГЭП больного псориазом. Экспрессия CD68 +макрофагов, локализующихся в дерме и межэпидермальной области (стрелки). ИГХИ. Система визуализации FLEX. Ув. 40^х.

Таблица 1. Уровень экспрессии CD68+ макрофагов в слизистой ДПК и коже у больных псориазом ассоциированном с ГЭП (M±m)

Примечание: * - достоверность отличия значений групп от контроля (P<0,01).

Таким образом, количество макрофагов в собственной пластинке слизистой 12-ти перстной кишки и дерме при псориазе ассоциированным с глютеновой энтеропатией увеличивается в зависимости от стадии ГЭП. Наиболее высокие показатели отмечаются в атрофическую стадию. Кроме того, в атрофическую стадию появляются межэпидермальные макрофаги, тогда как при инфильтративной и гиперпластической стадии таковые отсутствуют. По нашему мнению, увеличение количества макрофагов в строме и дерме, а также наличие межэпидермальных макрофагов свидетельствует о значимой роли повышенной секреции определенных цитокинов, что существенно дополняет ее патогенез и обеспечивает степень выраженности клинических проявлений.

Выводы

1. Увеличение количества CD68+ макрофагов в воспалительном инфильтрате слизистой 12-ти перстной кишки и коже является важным в понимании патогенеза аутоиммунного процесса при псориазе ассоциированном с глютеновой энтеропатией.

2. Наличие межэпидермальных CD68+ макрофагов в атрофическую стадию глютеновой энтеропатии свидетельствует о персистенции иммунного воспаления в коже больных псориазом и тяжести заболевания.

Перспективы дальнейшего развития

С учетом полученных данных о количестве и локализации CD68+ макрофагов в коже и 12-ти перстной кишке у больных псориазом с глютеновой энтеропатией необходимо изучить локализацию и количество CD8+ и CD4+ Т-лимфоцитов в воспалительном инфильтрате, определить иммунорегуляторный индекс и их взаимосвязь с макрофагальным компонентом.

Литература

1. Донцова О.В. Целиакия и дерматологические проявления: патологические процессы кожи - ключ к диагнозу «глютенчувствительная энтеропатия»/ О.В.Донцова // Сonsilium medicum Ukraina. - 2013.-Т. 7, №6.- С.3-5

2. Катунина О.Р. Иммуноморфологическая характеристика клеток воспалительного инфильтрата при псориазе / О.Р. Катунина // Вестник дерматологии и венерологии. -2005. -№2. -С.25-28.

3. Килесса А.В. Комплексная морфологическая диагностика глютеновой энтеропатии /А.В. Килесса//дис. К.н., Симферополь - 2012.- 167с.

4. Коляденко К. В. Псоріаз. нові можливості виправдати надії / К. В. Коляденко // Український журнал дерматології, венерології та косметології. - 2007. - № 4. - C. 101.

5. Лапач С.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях / С.Н.Лапач, А.В.Чубенко, П.Н.Бабич // К. - Морион - 2000 - 319с.

6. Новиков А.И. Состояние популяции мононуклеарных фагоцитов (CD68) в псориатической папуле под влиянием Тимодепрессина / А.И. Новиков, В.А. Охлопков, Р.В. Городилов, и др. // Клиническая дерматология и венерология. - 2006. - №3. - С.30-32.

7. Парфенов А.И. Целиакия. Эволюция представлений о распространенности, клинических проявлениях и значимости этиотропной терапии /А.И. Парфенов// М.: Анахарсис.- 2007. - 372с.

8. Сапожников А.Г. Гистологическая и микроскопическая техника: Руководство. / А.Г. Сапожников, А.Е. Дорошевич// Смоленск: САУ, 2000. - 476 с.

9. Admou B. Atypical celiac disease: from recognizing to managing /B.Admou, L.Essaadouni, K.Krati [et al.] // Gastroenterol. Res. Pract.- 2012. -№63. - Р.71-87.

10. Abenavoli L. Celiac disease and skin: psoriasis association/ L.Abenavoli, L.Leggio, G.Gasbarrini, [et al.] // World J Gastroenterol. -2007. - №13. - Р.2138-2139.

11. Birkenfeld S. Coeliac disease associated with psoriasis / S.Birkenfeld, J.Dreiher, D.Weitzaman [et al.] //. Br J Dermatol. -- № 161.- Р.1331-1334.

12. Bos J.D. Immunocompetent cells in psoriasis. In situ immunophenotyping by monoclonal antibodies / J.D.Bos, H.J.Hulsebosch, S.R. Krieg et al. // Arch. Dermatol. Res. - 1983. - Vol.275. -P.181-189.

13. Celiac Disease: WGO-OMGE Practice Guideline // World Gastroenterology Organisation [Electronic resource]. - 2005 - Mode of access:http://www.omge.org/globalguidelines/guide13/ guideline13.htm.

14. Dabbs D.J. Diagnostic immunohistochemistry / Dabbs D.J.// London: Churchill Livingstone, 2006. - 828 p.

15. Damasiewicz-Bodzek A. Serological markers of celiac disease in psoriatic patients /A.Damasiewicz-Bodzek, T.Wielkosszynski // Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. - 2008.- №9(22).- Р.1055-1061.

16. Иabrijan Leo. Crowth CD4 and CD8 lymphocytes and macrophages in psoriasis / Leo Иabrijan, Jasna Lipozenиiж, Tanja Batinac, et al.// Acta Dermatovenerology. - 2009. - Vol. 17, № 3. - С.162-165.

17. Ludvigsson F. Psoriasis in a nationwide cohort study of patients with celiac disease / J.F.Ludvigsson, B.Lindelцf, F.Zingone [et al.] // J Invest Dermatol. - 2011.- №131(10).- Р.2010-2016.

18. Lionetti E. New clues in celiac disease epidemiology, pathogenesis, clinical manifestations, and treatment / E.Lionetti, C.Catassi // Int. Rev. Immunol. -2011. - № 30(4). - Р.219-321.

19. Marsh M.N. Morphology of the mucosal lesion in gluten sensitivity / M.N. Marsh, Р.Т. Crowe // Baillieres Clin. Gastroenterol. - 1995. - Vol. 9, № 2. - P. 273-93.

20. Sapone A. Spectrum of gluten-related disorders: consensus on new nomenclature and classification / A.Sapone, J.C.Bai, C.Ciacci [et al.] // BMC Med. - 2012.- №7. - Р. 10 - 13.

Размещено на Allbest.ru