Взаимосвязь полиморфизмов генов рецепторов врожденного иммунитета с сердечно-сосудистыми заболеваниями

Размещено на http://www.allbest.ru/

Взаимосвязь полиморфизмов генов рецепторов врожденного иммунитета с сердечно-сосудистыми заболеваниями

Обзор отечественных и зарубежных публикаций научных исследований по ассоциативным связям маркерных регионов генов рецепторов TLR1, TLR2, TLR4, TLR6 и TREM-1 с атеросклеротическим поражением сосудов, показал неоднозначность полученных результатов у разных авторов. [3,4,5]. При этом количество публикаций по данной теме крайне ограничено. Актуальность данного исследования определяется высокой частотой заболеваемости атеросклерозом населения России, а также отсутствием информация об ассоциативных связях аллельных вариантов генов врожденного иммунного ответа с риском развития этого заболевания в русской популяции.

Цель исследования: Оценить взаимосвязи аллельных вариантов 16 маркерных локусов генов рецепторов врожденного иммунитета TLR и TREM-1 с риском формирования атеросклеротического поражения сосудов.

Материал и методы: Группу исследования составили 462 пациента, подвергшихся аортокоронарному шунтированию на базе ФГБУ «НИИ КПССЗ» СО РАМН, г. Кемерово с 2011 по 2012 гг. 267 условно здоровых жителей Кемеровской области включены в группу контроля. Группы были сопоставимы по возрастным и гендерным признакам. Все участники исследования принадлежали к одной этнической группе - русские. Исследование одобрено Локальным Этическим Комитетом и проводилось после подписания информационного листа о добровольном согласии на участие в исследовании.

Материалом послужили образцы геномной ДНК, выделенные методом фенол-хлороформной экстракции с протеиназой К по модификации Smith с соавторами из цельной венозной крови [6]. Концентрации и качественные характеристики выделенной ДНК проверяли с использованием спектрофотометра NanoDrop-2000 (TFS, США). Генотипирование образцов осуществляли методом TaqMan с использованием флюоресцентно-меченных зондов производства Applied Biosystems (США). Для проведения полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (RT-PCR) [2] использовали образцы ДНК с концентрацией 5-20 нг/мкл. RT-PCR проводили с применением параметров рекомендованных производителем: активация AmpliTaq Gold-полимеразы (10 мин при 95°С), с последующим повтором 40 циклов, включающих денатурацию (92°С в течении 15 сек), отжигом/элонгацией (60°С в течении 1 мин) с последующей детекцией флуоресцентно меченных продуктов амплификации в конце каждого цикла. Исследовали маркерные локусы 5 генов: TREM-1(rs1817537, rs3804277, rs6910730, rs7768162, rs2234246, rs4711668, rs9471535, rs2234237), TLR1(rs5743551, rs5743611), TLR2 (rs3804099, rs5743708), TLR4 (rs4986790, rs4986791), TLR6 (rs3775073, rs5743810).

Полученные данные регистрировали в электронные таблицы с использованием программного обеспечения Microsoft Office Excel 2003. Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета лицензионной программы «Statistica^® for Windows 6.0». При анализе результатов генотипирования учитывали соблюдение равновесия Харди-Вайнберга (тест ч2). Для попарного сравнения частот генотипов и аллелей между анализируемыми группами использовали критерий ч2 Пирсона с поправкой Йейтса на непрерывность. Различия считали статистически значимыми при p < 0,05 [1]. Для оценки риска, предоставляемых определенными аллелями или генотипами, высчитывали отношения шансов (ОШ) с 95% доверительными интервалами (95% ДИ).

Результаты и их обсуждение: Перед статистической обработкой полученных результатов мы проверили соответствие распределения частот встречаемости аллелей в исследуемых группах закону Харди - Вайнберга методом ч2. Распределение по всем исследуемым локусам было равновесным. Достоверные отличия по распространенности аллельных вариантов между анализируемой и контрольной группами, были найдены по двум маркерным регионам генов TLR: TLR4 (rs4986790) и TLR6 (rs3775073). Так, у лиц, имеющих в генотипе 299Gly аллель гена TLR4, в гомозиготном или гетерозиготном состоянии, риск возникновения заболевания возрастает в 2 раза (ОШ=2.05, 95% ДИ=1.32-3.2, р=0.001). Протективный эффект обнаружен для аллели 421Lys гена TLR6. Гомозиготный генотип по этой аллели уменьшает риск развития атеросклероза на 40% (ОШ=0.64, 95% ДИ= 0.41-0.99, р=0.048). Анализ по маркерным регионам гена TREM-1 выявилдостоверные отличия между анализируемыми группами по четырём локусам: rs9471535, rs2234246, rs1817537 и rs3804277. При этом выявлено, что в маркёрном регионе rs9471535 значимой являлась минорная аллель T . Так наличие этой аллели в генотипе в гомозиготном или гетерозиготном состоянии увеличивает риск развития заболевания в 1,5 раза (ОШ=1.48, 95% ДИ=1.01-2.16, р=0,04). При этом наличие одной из минорных аллелей: G rs1817537, G rs3804277 или G rs2234246 снижает риск формирования атеросклероза (соответственно ОШ=0.78, 95% ДИ=0.61-0.99, р=0.03; ОШ=0.71, 95% ДИ=0.52-0.99, р=0.04; ОШ=0.78, 95% ДИ=0.61-0.99, р=0.041).

При анализе ассоциаций, было установлено, что наличие гаплотипа GGG (rs1817537-rs3804277-rs2234246) достоверно связано со сниженным риском развития атеросклероза (ОШ=0.77, 95% ДИ=0.6-0.98, р=0.037)

Выводы

В результате исследования выявлена ассоциация с увеличением риска развития атеросклероза для одного маркерного региона TLR4 (299Gly rs4986790) и одного гена TREM-1 (Т rs9471535). В качестве протективных выступала аллель 421Lys TLR6 и три локуса гена TREM-1(rs1817537, rs3804277, rs2234246) по минорным аллелям. При этом гаплотип TREM-1 GGG(rs1817537-rs3804277-rs2234246) так же являлся протективным.

Литература

иммунный ген атеросклероз

1. Вейр Б. Анализ генетических данных. М.: Мир, 1995. C.400.

2. Heid C.A., Stevens J., Livak K.J. Williams P.M. Real time quantitative PCR //Genome Research. 1996. №6. Р. 986-994.

3. Koch W., Hoppmann P., Pfeufer A., Schцmig A., Kastrati A. Toll-like receptor 4 gene polymorphisms and myocardial infarction: no association in a Caucasian population. Eur Heart J. 2006; 27(21): 2524-9.

4. Lin Y.C., Chang Y.M., Yu J.M., Yen J.H., Chang J.G., Hu C.J. Toll-like receptor 4 gene C119A but not Asp299Gly polymorphism is associated with ischemic stroke among ethnic Chinese in Taiwan. Atherosclerosis. 2005; 180(2): 305-9.Morange P.E., Tiret L., Saut N., Luc G., Arveiler D., Ferrieres J., Amouyel P., Evans A., Ducimetiere P., Cambien F., Juhan-Vague I. PRIME Study Group. TLR4/Asp299Gly, CD14/C-260T, plasma levels of the soluble receptor CD14 and the risk of coronary heart disease: The PRIME Study. Eur J Hum Genet. 2004; 12(12): 1041-9.

5. Smith К., Kliko С., Cantor C. Puls-elektroforez and methods of work with the big molecules of DNA // The Analysis of the genome. Methods: the Lane with English. М, World. 1990. 58-94.

Размещено на Allbest.ru