Размещено на http://www.allbest.ru/

Академия наук Республики Узбекистан

Институт иммунологии

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

Прогнозирование иммунологической эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа и критерии для отбора вакцин

14.00.36. - Аллергология и иммунология

кандидата медицинских наук

Смагин Артём Александрович

Ташкент, 2011

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте Эпидемиологии, микробиологии и инфекционных заболеваний Министерства здравоохранения Республики Узбекистан

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Гулямов Нариман Гулямович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Исмаилова Гули Амиджановна

доктор медицинских наук Шереметьев Николай Николаевич

Ведущая организация: "Ташкентский институт усовершенствования врачей"

Защита диссертации состоится «__ _» _________ 2011 г. в ______ часов на заседании Специализированного cовета Д.015.89.01 при Институте иммунологии АН РУз по адресу: 100060, г. Ташкент, ул. Я. Гулямова, 74.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института иммунологии АН РУз.

Автореферат разослан «_____» ________ 2011 г.

Ученый секретарь Специализированного cовета доктор медицинских наук Умарова Адолат Абдурахимовна

Резюме

диссертации Смагина Артёма Александровича на тему: «Прогнозирование иммунологической эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа и критерии для отбора вакцин» на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности 14.00.36 - Аллергология и иммунология

Ключевые слова: Вакцины брюшнотифозные, иммунологическая эффективность, иммуномодулин, прогнозирование и отбор вакцин, нейтрофилы, НСТ-тест.

Объекты исследования: 343 здоровые добровольцы мужского пола в возрасте 18-22 лет, вакцины брюшнотифозные, сыворотка и нейтрофилы крови.

Цель работы: Выявить взаимосвязь между выраженностью иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин и степенью изменений функционально-метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте. Разработать критерии для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин.

Методы исследования: Серологические, цитохимические (НСТ-тест) и статистические.

Полученные результаты и их новизна: Установлено, что иммунологическая эффективность брюшнотифозной вакцины ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм» составила 66,66% %, а вакцины БТВСС (РФ) - 74,58%. Высокие исходные (до вакцинации) показатели активности нейтрофилов в НСТ-тесте ассоциировали со слабой степенью, а низкие исходные показатели ФМАН в НСТ-тесте ассоциировали с выраженной степенью проявления иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин. Показатели степени дополнительного повышения активности нейтрофилов в НСТ-тесте в ответ на воздействие антигена вакцин in vitro и in vivo проявили закономерную взаимосвязь со степенью выраженности иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин. Иммуномодулин способствовал повышению эффективности вакцины ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" до 95,17%. Эффект Иммуномодулина опосредовался через дополнительную индукцию функционально-метаболической активности нейтрофилов в ответ на воздействие антигена вакцины. На основе показателей степени дополнительного повышения активности нейтрофилов в НСТ-тесте при воздействии антигеном вакцины in vitro разработаны объективные критерии для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин для предполагаемого контингента вакцинируемых лиц.

Практическая значимость: Внедрение в практику результатов исследований и критериев позволит оптимизировать процесс отбора и закупки наиболее эффективных брюшнотифозных вакцин, а также повысить эффективность процесса вакцинопрофилактики брюшного тифа.

Степень внедрения и экономическая эффективность: По материалам диссертации изданы методические рекомендации: «Прогнозирование иммунологической эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа и критерии для отбора вакцин» (Ташкент, 2010).

Область применения: Медицина, иммунология.

Тиббиёт фанлари номзоди илмий даражасига талабгор Смагин Артем Александровичнинг 14.00.36 - Аллергология ва иммунология ихтисослиги бўйича «Ичтерламага ?арши вакцинопрофилактиканинг иммунологик самарадорлигини башорат ?илиш ?амда уларни танлаш мезонлари» мавзусидаги диссертациясининг

Резюмеси

Таянч сўзлар: Ичтерламага ?арши вакциналар, Иммуномодулин, вакциналарнинг иммунологик самарадорлиги ва танлови, нейтрофиллар, НСТ-тест.

Тад?и?от объектлари: 343 нафар 18-22 ёшли со?лом эркаклар, ичтерламага ?арши вакциналар, ?он зардоби ва нейтрофиллари.

Ишнинг ма?сади: Ичтерламага ?арши вакциналарнинг иммунологик самарадорлиги ва НСТ-тест кўрсаткичларидаги нейтрофиллар фаоллигининг ортиши даражаси кўрсаткичлари орасидаги бо?ли?ликни ани?лаш. Ичтерламага ?арши вакциналарнинг самарадорлигини башорат ?илиш ва уларни танлаш мезонларини яратиш.

Тад?и?от методлари: Серологик, цитокимёвий ва статистик услублар.

Олинган натижалар ва уларнинг янгилиги: Натижаларга биноан, ?орин тифига ?арши ОАО “Узбиофарм”да чи?арилган ВБТХСЖ вакцинасининг иммунологик самараси 66,66% % ни, БТВСС (РФ) вакцинасининг самараси эса - 74,58% ни ташкил ?илди. Нейтрофилларнинг НСТ-тест ёрдамида ба?оланадиган фаоллиги вакцинациядан олдин ?анчалик ю?ори бўлса, вакцинанинг иммунологик самараси шунга бо?ли? суст бўлиши, нейтрофилларнинг фаоллиги вакцинациядан олдин ?анчалик паст бўлса вакцинанинг иммунологик самараси шунчалик ю?ори булиши ани?ланди. Нейтрофилларнинг НСТ-тест ёрдамида ба?оланадиган фаоллиги кўрсаткичларининг вакцинанинг in vitro ва in vivo шароитида таъсири о?ибатида ?ўшимча ортиш даражаси билан вакциналарнинг иммунологик самараси даражалари орасида узвий бо?ли?лик борлиги ?ам ани?ланди. Вакцинация даврида Иммуномодулиннинг ?ўлланилиши туфайли ОАО “Узбиофарм”да чи?арилган ВБТХСЖ вакцинасининг иммунологик самарасининг 95,17% га ортишига эришилди. Иммуномодулиннинг ижобий самараси унинг нейтрофиллардаги хужайра ичи метаболик ферментлари фаоллигини кескин орттириши туфайли амалга оширилади. Вакциналар антигенининг нейтрофилларга in vitro шароитида таъсири туфайли улар фаоллигининг НСТ-тест кўрсаткичларида ?ўшимча ортиши даражасини ба?олашга асосланиб яратилган мезонлар ичтерламага ?арши турли вакциналарнинг иммунологик самарасини башорат ?илиш ва улар орасидан энг самаралигини танлаш имконини беради.

Амалий ахамияти: Натижаларнинг ва яратилган мезонларнинг амалиётга татби? ?илиниши ичтерламага ?арши вакциналари танлаш ва харид ?илишни ма?садга мувофи? амалга оширишни таъминлайди ?амда ичтерламага ?арши вакцинация жараёнининг самадорлигини ортишини таъминлайди.

Тадби? этиш даражаси ва и?тисодий самарадорлиги: Диссертация натижалари асосида «Повышение иммунологической эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа и критерии для отбора вакцин» (Ташкент, 2010) номли услубий ?ўлланма чоп этилган.

?ўлланиш со?аси: Тиббиёт, иммунология.

Resume

Thesis of Smagin Artem Aleksandrovich on the scientific degree competition of the doctor of philosophy in medical sciences on speciality 14.00.36 - Allergology and immunology: “Forecasting of immunological effectiveness of typhoid fever vaccine prophylaxis and criteria for vaccine selection”

Key words: Typhoid vaccines, immunological effectiveness, Immunomodulin, forecasting and selection of vaccines, neutrophils, NBT test.

Subjects of research: 343 healthy male volunteers at the age of 18-22 years old, typhoid fever vaccine, blood serum and neutrophils.

Purpose of work: To identify correlation between immunological effectiveness of typhoid vaccine and degree of change in functional metabolic neutrophils activity in NBT test. To develop criteria for forecasting effectiveness of typhoid fever vaccine and their selection.

Methods of research: Serological, cytochemical (NBT test) and statistical.

The results obtained and their novelty: It was identified that immunological effectiveness of typhoid vaccine BTVKSJ ОАО «Uzbiofarm» formed 66,66% , and vaccine VBTSS RF - 74,58%. High initial (before vaccine) indicators of neutrophiles activities in NBT test associated with low degree, and low initial indicators of functional-methabolic neutrophil activity in NBT test associated with apparent degree of demonstration of immunological effectiveness of typhoid vaccine. Indicators of degree of neutrophils activity supplementary growth in NBT test in response to effect of vaccine antigen in vitro and in vivo revealed consistent correlation with degree of stating of immunological effectiveness of typhoid vaccines. Immunomodulin was conductive to growth of BTVKSJ ОАО «Uzbiofarm» vaccine effectiveness up to 95, 17%. Immunomodulin effect mediated through supplementary induction of functional metabolic neutrophils activity in response to effect of vaccine antigen. On the basis of readings of degree of neutrophils activity supplementary growth in NBT test over influence of vaccine antigen in vitro, objective criteria were developed for forecasting of typhoid fever vaccine effectiveness and typhoid vaccine selection for prospective contingent of vaccinated people.

Practical value: Research results and criteria implementation will allow optimization of selection process and purchase of more effective typhoid fever vaccines, as well as increase in the effectiveness of typhoid vaccine prophylaxis process.

Degree of embed and economic effectively: The methodical recommendations “Forecasting of immunological effectiveness of typhoid fever vaccine prophylaxis and criteria for vaccine selection” was published by the results of thesis (Tashkent 2010).

Field of application: Medicine, immunology.

Общая характеристика диссертации

Актуальность работы. Брюшной тиф распространен по всему миру и составляет в год около 12,5 млн. случаев при уровне смертности около 1%. Заболевание распространено в основном в развивающихся странах, и, как правило, наблюдается определенная закономерность между уровнем жизни и заболеваемостью брюшным тифом (Анастасий И.А., 2008). Недостаточная эффективность мер борьбы с брюшным тифом, предпринимаемых как в рамках национальных, так и международных программ, побуждает к поиску новых подходов к анализу ситуации и установлению закономерностей эволюционной изменчивости брюшного тифа, критическому переосмысливанию ряда теоретических принципов на уровне современных знаний и с использованием современных методических приемов. Одним из методов предупреждения возникновения брюшного тифа является разработка эффективных мер специфической иммунопрофилактики (Шевченко Ю. Л., Онищенко Г. Г., 2000).

Вакцинопрофилактика является признанным во всем мире ведущим фактором уменьшения инфекционной заболеваемости, ослабления тяжести клинического течения и снижения смертности (Покровский В.И. с соавт., 2002). Социально и экономически оправданным сегодня является оптимизация процесса вакцинопрофилактики брюшного тифа с внесением соответствующих корректив как в процесс отбора вакцин, так и процессы иммуногенеза в организме. Это, в свою очередь требует выявления причин неудовлетворительной эффективности вакцинопрофилактики, разработки подходов для прогнозирования и повышения эффективности процесса вакцинации против брюшного тифа (Атаева М.А, 2004; Горбунов М.А, 2005).

Степень изученности проблемы. В настоящее время решен вопрос профилактики брюшного тифа, в основе которой остается принцип активной иммунизации, заключающийся в применение брюшнотифозной вакцины (Брико Н. И., 2001). Доказано, что эффективные вакцины обеспечивают выработку выраженного иммунитета и способны предохранить от заболевания около 80% привитых. Таким образом, определены границы возможности специфической защиты, являющиеся существенной мерой профилактики, но имеющей относительное значение в связи с иммунным статусом, антигенными различиями между циркулирующими штаммами S. typhi, фоновой патологией и иммунореактивностью организма вакцинируемых (Мирзажанова Д.Б., 2008).

Важно подчеркнуть, что в Республике Узбекистан производится Вакцина брюшнотифозная химическая сорбированная жидкая, проходит клинические испытания Брюшнотифозная моновакцина и импортировалась из России Брюшнотифозная вакцина спиртовая сухая.

Таким образом, практическим решением вопроса профилактики брюшного тифа остается выбор приемлемой для нашего региона вакцины, отвечающего всем современным требованиям, а создание отечественной иммунологической модели по отбору вакцин, должно включать в себя разработку ряда иммунологических тестов, которые будут отражать эффективность каждой из вакцин.

В связи с этим, для изучения иммунологических свойств предложенных нам вакцин и организации их испытания являются: серологическая диагностика в РПГА, тест восстановления нейтрофилами нитросинего тетразолия и изучение влияния иммуномодулятора - Иммуномодулина на иммуногенную активность вакцинного препарата.

Решение указанных проблем позволит разработать способ in vitro для прогнозирования иммунологической эффективности различных брюшнотифозных вакцин у предполагаемого контингента вакцинируемых и изучить эффект Иммуномодулина на активность фагоцитарного звена и процессы антителогенеза при вакцинопрофилактике брюшного тифа, что в конечном итоге будет способствовать укреплению и безопасности здоровья жителей нашего государства.

Связь диссертационной работы с тематическими планами НИР. Диссертационная работа выполнялась в рамках плана НИР НИИЭМИЗ МЗ РУз, а также в рамках Государственного Проекта А-9-383: “Изучение, разработка способов прогнозирования и мер повышения эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа среди мирного населения и воинского контингента вооруженных сил Республики Узбекистан”(2006-2007 гг.).

Основанием для обследования воинского контингента Вооруженных Сил РУз служили:

1. Программа совместных исследований по проблеме: «Изучение, разработка мер прогнозирования и повышения эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа среди личного состава Вооруженных Сил и гражданского населения Республики Узбекистан», составленной и согласованной в 2003 году Департаментом ГСЭН МЗ РУз и Медицинским Управлением МО РУз.

2. Приказ Министра Обороны Республики Узбекистан за № 410 от 7 июня 2004 года «О введении в действие Секторального плана по предотвращению возникновения и распространения заболеваемости брюшным тифом среди личного состава войск Министерства обороны Республики Узбекистан на 2004-2006 годы» (Научный руководитель и ответственный исполнитель - д.м.н., проф. Гулямов Н.Г.).

Цель исследования: выявить взаимосвязь между выраженностью иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин и степенью изменений функционально-метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте. Разработать критерии для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин.

Задачи исследования:

1. Осуществить сравнительную оценку иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин: Вакцины брюшнотифозной химической сорбированной жидкой (ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм») и Вакцины брюшнотифозной спиртовой сухой (ВБТСС РФ).

2. Изучить степень дополнительного повышения функционально-метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте in vivo и in vitro у лиц с различной выраженностью иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин.

3. Оценить влияние Иммуномодулина на эффективность ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм» и на степень дополнительного повышения функционально-метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте in vivo и in vitro.

4. Разработать критерии для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин.

Объект и предмет исследования. Объектом исследования служили 343 добровольца мужского пола в возрасте 18-22 года. Предметом исследования явились иммунологическая эффективность брюшнотифозных вакцин ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм», ВБТСС РФ, отечественный препарат Иммуномодулин, антителообразование после вакцинации, функционально-метаболическая активность нейтрофилов в НСТ-тесте, сыворотка и нейтрофилы периферической крови.

Методы исследования. В процессе выполнения исследования были использованы серологические, цитохимические и статистические методы исследования.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Иммунологическая эффективность брюшнотифозной вакцины ВБТХСЖ

ОАО «Узбиофарм» составила 66,66%, а вакцины ВБТСС (РФ) - 74,58%. Высокие исходные (до вакцинации) показатели функционально-метаболической активности нейтрофилов (ФМАН) в НСТ-тесте предопределяли проявление слабой степени, а низкие исходные показатели ФМАН в НСТ-тесте - проявление выраженной степени иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин.

2. До вакцинации показатели степени дополнительного повышения ФМАН

в НСТ-тесте при воздействии антигена вакцины in vitro проявили закономерную взаимосвязь со степенью дополнительного повышения ФМАН

в НСТ-тесте in vivo и степенью выраженности иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин после вакцинации. Следовательно, показатели степени дополнительного повышения ФМАН при воздействии антигена вакцины in vitro могут служить объективным критерием для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин для предполагаемого контингента лиц.

3. Применение при вакцинации Иммуномодулина способствовало повышению эффективности вакцины ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" с 66,66% до 95,17%. Эффект Иммуномодулина опосредовался через активацию внутриклеточных метаболических ферментов, проявлением чего явилась индукция степени дополнительного повышения ФМАН в ответ на воздействие антигена вакцины как in vivo, так и in vitro.

Научная новизна. Установлены закономерности во взаимосвязи между степенью изменений функционально-метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте in vivo и in vitro с иммунологической эффективностью брюшнотифозных вакцин. Показана возможность существенного повышения иммунологического эффекта брюшнотифозной вакцины путем применения Иммуномодулина. Разработан проводимый in vitro объективный способ для прогнозирования иммунологической эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин для предполагаемого контингента вакцинируемых.

Научная и практическая значимость результатов исследования. Внедрение в практическую деятельность ЦСЭН способа для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин позволит прогнозировать in vitro иммунологическую эффективность различных вакцин до введения в организм, осуществить отбор наиболее эффективной вакцины для предполагаемого контингента вакцинируемых. В регионах с длительным воздействием на организм людей неблагоприятных экологических факторов, обуславливающих снижение реактивности системы иммунитета, применение Иммуномодулина будет способствовать повышению иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин и снижению числа серонегативных лиц среди вакцинированных, что будет иметь существенную эпидемиологическую и экономическую значимость.

Реализация результатов. По материалам диссертационной работы выпущены методические рекомендации «Прогнозирование иммунологической эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа и критерии для отбора вакцин», утвержденные МЗ РУз. Результаты внедрены в учебный процесс кафедры инфекционных болезней и детских инфекционных болезней ТМА, кафедры эпидемиологии, инфекционных болезней и фтизиатрии ТашПМИ и кафедры детских инфекционных болезней ТашИУВ.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: научно-практической конференции молодых ученых с международным участием: «Актуальные проблемы паразитологии и инфекционной патологии» (Ташкент, 2005); Республиканской научно-практической конференции: «Актуальные проблемы паразитологии и инфекционной патологии» (Ташкент, 2007); Военно-медицинской конференции эпидемиологов, бактериологов, гигиенистов, инфекционистов и дерматовенерологов (Ташкент, 2008); Республиканской научно-практической конференции «Санитария-эпидемилогия хизматдаги ислохотлар» (Ташкент, 2008); IX Республиканском съезде эпидемилогов, гигиенистов, санитарных врачей и инфекционистов Узбекистана (Ташкент, 2010); научном семинаре в Научно-исследовательском институте эпидемиологии, микробиологии и инфекционных заболеваний МЗ РУз (Ташкент, 2010); научном семинаре при Специализированном совете (Ташкент 2010).

Публикации: По материалам диссертации опубликованы 7 научных трудов, в том числе 6 журнальных статей, 1 методические рекомендации.

Структура и объем диссертации: Диссертация изложена на 109 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, 3 глав (обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований), заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, включающего 203 источника, из них 172 - на русском и 31 - на иностранных языках. Работа иллюстрирована 8 рисунками и 5 таблицами.

Основное содержание диссертации

Введение. Ситуация в регионах республики усложняется из-за частых вспышек брюшного тифа, вызываемого резистентными к антибиотикам штаммами S.typhi, при которых отмечается неимоверно высокий для кишечных инфекций удельный вес формирования бактерионосительства. Невосприимчивость обычно может быть обусловлена наличием специфического иммунитета в результате перенесенного заболевания, бытовой иммунизации или вакцинации. Медицинская практика располагает в настоящее время рядом корпускулярных и химических вакцин, предназначенных для обеспечения специфической профилактики. Накопленный опыт не позволяет, однако, однозначно решить вопрос о преимуществах какой либо из них для использования в эпидемиологической практике.

Глава 1. Обзор литературы. По самым скромным подсчетам ВОЗ ежегодно тифом заболевает около 16 миллионов человек, из которых 600000 умирают (Иванов Б., 2000). В периоды повышения частоты эпидемических вспышек брюшного тифа, возрастает значимость разработки мер эффективной защиты населения, то есть повышение эффективности процесса специфической иммунопрофилактики. При разработке, испытаниях и применении вакцинных препаратов одним из главных вопросов является определение критериев адекватной стимуляции иммунной системы. Для создания в организме полноценного вакцинального иммунитета необходимо воспроизвести ответную реакцию на введенный антиген, приближающуюся в какой-то степени к тому, что имеет место при инфекционном процессе (Зверев В. В., Семенов Б. Ф., 2002). Среди аналитических методов оценки иммуногенности наиболее часто используют тесты, в которых учитываются агглютинирующие, опсонизирующие и превентивные свойства сывороток привитых людей и животных, показатели фагоцитарной активности клеток крови (Атаева М.А, 2004; Горбунов М.А, 2005). Функциональное зондирование нейтрофилов, являющихся первой линией защиты организма и определяющих развитие специфического иммунного ответа, позволяет оценить не только их эффекторные ресурсы, но и резервы иммунитета (Ахкямов Э.М. и др., 1999). Вместе с этим появляется прекрасная возможность проанализировать взаимосвязь различных звеньев специфического и неспецифического иммунного ответа через сравнение специфических показателей в РПГА к конкретному антигену и показателям спонтанного и стимулированного НСТ-теста.

Глава 2. Материалы и методы исследований. Работа выполнена в 2004-2008 гг. на базе лаборатории хронического инфекционного процесса, совместно с лабораторией тифопаратифозных инфекций и прочих сальмонеллезов Научно-исследовательского института эпидемиологии, микробиологии и инфекционных заболеваний МЗ РУз.

Руководствуясь программой по «Изучению, разработке мер повышения и прогнозирования эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа среди личного состава вооруженных сил и гражданского населения Республики Узбекистан» от 28 августа 2003 года и на основании Приказа Министра обороны Республики Узбекистан № 410 от 7 июня 2004 года о введении в действие «Секторального плана по предотвращению возникновения и распространения заболеваемости брюшным тифом среди личного состава войск Министерства обороны Республики Узбекистан на 2004-2006 годы» нами обследованы 343 человека. Все обследованные были мужского пола в возрасте 18-22 лет. Для проведения исследований были использованы следующие методические подходы:

1. Иммуноцитохимические - оценка степени активации фагоцитарно-метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте при воздействии антигена испытуемых вакцин in vitro и in vivo.

2. Серологические - определение в крови титра специфических антител к О- антигену сальмонелл в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

3. Иммунокоррекция Иммуномодулином в ходе вакцинации брюшнотифозной вакциной химической сорбированной жидкой производства ОАО «Узбиофарм».

4. Методы статистической обработки.

В работе использовались две брюшнотифозные вакцины: Вакцина брюшнотифозная спиртовая сухая производства РФ (ВБТСС РФ) и Вакцина брюшнотифозная химическая сорбированная жидкая ОАО "Узбиофарм" (ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм"), а также отечественный иммуномодулятор - Иммуномодулин.

Все добровольцы обследовались комплексно цитохимическими и серологическими методами в динамике вакцинального процесса: показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста исследовались до вакцинации (контроль) и на 4-й день после вакцинации, так как в этот промежуток времени ответ нейтрофилов на антигенное воздействие самый высокий. Показатели серологической реакции (РПГА) с О-антигеном S. typhi исследовались до вакцинации и на 30-й день после вакцинации.

Для постановки РПГА пользовались коммерческим диагностикумом: Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный О антигенный, жидкий 1, 9, 12.

Анализ цитохимических и серологических данных проводился у добровольцев провакцинированных двумя различными брюшнотифозными вакцинами, а также получаювших одномоментно препарат Иммуномодулин и сравнивали их с показателями здоровых лиц до вакцинации. Далее, в целях разработки критериев эффективности вакцинации изучали воздействие 2-х различных брюшнотифозных вакцин на функционально-метаболическую активность нейтрофилов в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте in vitro. Исследования цитохимической активности нейтрофилов периферической крови в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте проводили спектрофотометрическим методом (Pick E., Charon J., Mizel D., 1981). Общепринятыми серологическими методами в РПГА с О-антигеном S. typhi оценивали процесс нарастания титра антител в парных сыворотках в динамике вакцинального процесса (М. О. Биргер, 1982).

Для установления достоверности цифрового материала, полученные результаты были статистически обработаны. Вычисляли среднюю арифметическую ряда (М), ошибку средней арифметической (m), среднее квадратичное отклонение. Значимость различий определялась согласно критерию Стьюдента (Лакин Г. Ф., 1996). Обработка результатов проводилась с применением пакета прикладных программ Excel для медико-биологических исследований на ПЭВМ «Pentium - 4».

Глава 3 состоит из пяти подглав, посвящена описанию результатов собственных исследований.

Для решения поставленных задач и достижения цели был осуществлен контролируемый эпидэксперимент - обследованы 343 военнослужащих мужского пола в возрасте 18-22 лет, подлежащих плановой вакцинации против брюшного тифа. Из них 181 человек получали брюшнотифозную вакцину ВБТСС РФ, 99 человек - вакцину ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" и 63 человека одновременно с вакциной ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" получали Иммуномодулин. Обследования проводили до вакцинации, на 4-й и на 30-й дни после вакцинации.

Одной из задач исследования была сравнительная оценка иммунологической эффективности вакцин ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" и ВБТСС РФ. Иммунологическую эффективность вакцин оценивали определением в сыворотке крови титра специфических антител к О-антигену S. typhi в РПГА в парных сыворотках, полученных до и на 30-й день после вакцинации.

По порядку нарастания титра специфических антител в парных сыворотках вакцинируемые распределялись на группы: 0 - группа - нет нарастания титра антител (отсутствие иммунного ответа); 1-я группа - нарастание титра антител на 1 порядок (отсутствие иммунного ответа); 2-я группа - нарастание титра антител на 2 порядка (слабый иммунный ответ); 3-я группа - нарастание титра антител на 3 порядка (умеренный иммунный ответ); 4-я группа - нарастание титра антител на 4 порядка (выраженный иммунный ответ) и 5-я группа - нарастание титра специфических антител на 5 и более порядков (выраженный иммунный ответ) (табл.1).

После вакцинации ВБТХСЖ ОАО «УЗБИОФАРМ» отсутствие иммунологического эффекта вакцины наблюдали у 33 (33,33%) вакцинированных, различную степень проявления иммунологической эффективности вакцины - у 66 (66,66%) человек. Из этого числа группу лиц с выраженным иммунологическим эффектом вакцины наблюдали у 9 (9,09%) лиц. Характерным для ВБТСС (РФ) было то, что из 181 вакцинированного у 46 (25,42%) лиц иммунологический эффект вакцины отсутствовал, тогда как у 135 (74,03%) вакцинированных была отмечена различная степень проявления иммунологической эффективности вакцины. При этом группу лиц с выраженным иммунным ответом на воздействие антигена вакцины составили 21 (11,60%) человек (табл.1). То есть, при наших исследованиях иммунологическая эффективность ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" составила 66,66%, иммунологическая эффективность ВБТСС (РФ) была несколько больше и составила 74,58%. ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" у 33,33% и ВБТСС РФ у 25,42% вакцинированных иммунологический эффект не проявили.

иммунологический брюшнотифозный вакцина метаболический

Таблица 1. Иммунологическая эффективность вакцин ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" и ВБТСС РФ

Группы по порядкам нарастания титра АТ	Количество человек	Иммунологический эффект
	Абс. ч.	%
Вакцина ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм», n=99
+ 0 (0-я группа)	9	9,09	33,33	Отсутствует
+ 1 (1-я группа)	24	24,24
+ 2 (2-я группа)	26	26,26		Слабый
+ 3 (3-я группа)	31	31,31		Умеренный
+ 4 (4-я группа)	5	5,05	9,09	Выраженный
+ 5 (5-я группа)	4	4,04
Всего:	99	100
Вакцина ВБТСС РФ, n=181
+ 0 (0-я группа)	3	1,66	25,42	Отсутствует
+ 1 (1-я группа)	43	23,76
+ 2 (2-я группа)	68	37,57		Слабый
+ 3 (3-я группа)	46	25,41		Умеренный
+ 4 (4-я группа)	18	9,94	11,60	Выраженный
+ 5 (5-я группа)	3	1,66
Всего:	181	100

Нами изучалась зависимость проявления иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин от исходных (до вакцинации) показателей ФМАН в спонтанном НСТ-тесте. Согласно результатам, при вакцинации ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм» и ВБТСС РФ у лиц с отсутствием иммунологической эффективности вакцин исходные показатели ФМАН в НСТ-тесте были в пределах от 39,6% до 45,1% относительно показателей стимулированного зимозаном НСТ-теста. У лиц со слабой и умеренной степенью выраженности иммунологической эффективности вакцин исходные показатели ФМАН в НСТ-тесте колебались в пределах от 33,4% до 37,0%. А у лиц с выраженной иммунологической эффективностью вакцин- в пределах от 27,9% до 31,6% относительно показателей стимулированного НСТ-теста (табл.2).

Эти результаты позволили прийти к заключению, что степень выраженности иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин проявила обратную зависимость от исходных показателей ФМАН в спонтанном НСТ-тесте. Чем выше были исходные показатели ФМАН в НСТ-тесте, тем меньше была степень выраженности иммунологической эффективности вакцин. И, наоборот, чем были ниже исходные показатели ФМАН в НСТ-тесте, тем больше была степень выраженности иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин.

Нами изучена взаимосвязь выраженности иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин и степени дополнительного повышения ФМАН в спонтанном НСТ-тесте в ответ на воздействие вакцины in vivo и и in vitro. Степень дополнительного нарастания ФМАН в НСТ-тесте

Таблица 2. Взаимосвязь показателей степени дополнительного нарастания ФМАН в НСТ-тесте при воздействии антигена брюшнотифозных вакцин in vivo и in vitro

Группы по порядку нарастания титра АТ	Кол-во вакцинированных	Показатели ФМАН в НСТ-тесте
		До вакцинации	После вакцинации
		Спонт. от стимулир. зимозаном, %	НСТ in vitro	НСТ in vivo
			Стимулир. вакциной от стимулир. зимозаном, %	Степень дополнит активации ФМАН, %	НСТ спонт. от стимулир. зимозаном НСТ, %	Степень дополнит активации ФМАН, %
	Абс	В %
ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм», n=99
+ 0 (0-я группа)	9	9,1	45,1	52,0	+6,9	49,5	+ 4,4
+ 1 (1-я группа)	24	24,2	39,6	54,2	+14,6	49,5	+ 9,9
+ 2 (2-я группа)	26	26,3	37,0	57,7	+20,7	52,2	+ 15,1
+ 3 (3-я группа)	31	31,3	34,0	55,3	+21,3	53,9	+ 19,9
+ 4 (4-я группа)	5	5,1	31,6	55,9	+24,3	53,5	+ 22,0
+ 5 (5-я группа)	4	4,0	27,9	53,8	+25,9	51,0	+ 23,1
ВБТСС РФ, n=181
+ 0 (0-я группа)	3	1,7	43,1	54,8	+11,8	49,6	+ 6,6
+ 1 (1-я группа)	43	23,8	39,0	53,6	+14,6	49,7	+ 10,7
+ 2 (2-я группа)	68	37,6	35,5	57,8	+19,7	56,0	+ 20,5
+ 3 (3-я группа)	45	24,9	33,4	56,9	+23,5	56,0	+ 22,5
+ 4 (4-я группа)	18	9,9	32,6	58,0	+25,4	58,8	+ 26,1
+ 5 (5-я группа)	3	1,7	31,6	61,1	+29,4	59,7	+ 28,1

in vivo определяли путем вычисления значений спонтанного НСТ-теста до вакцинации из значений спонтанного НСТ-теста после вакцинации. Различия между значениями спонтанного НСТ-теста после вакцинации и до вакцинации отражали степень дополнительного повышения ФМАН в ответ на воздействие антигена вакцины.

В результате исследований выявлено, что при различной выраженности иммунологического эффекта вакцин направленность и степень изменений показателей дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте in vivo и in vitro были схожи и близки между собой.

Так, результаты сравнительного изучения показателей степени дополнительного нарастания ФМАН при воздействии антигена ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм» in vitro и in vivo показали следующее. На 4-й день после вакцинации ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм» у лиц с отсутствием иммунологической эффективности вакцины показатели степени дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте in vivo и in vitro не превысили 9,9% и 14,6% соответственно. У лиц со слабой и умеренной выраженностью иммунологической эффективности вакцины показатели степени дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте in vivo и in vitro были соответственно в пределах от 15,1% до 19,9% и от 20,7% до 21,3%. У лиц с выраженной степенью иммунологического эффекта вакцины дополнительное повышение ФМАН после вакцинации составила от 22,0% до 23,1%, а в НСТ-тесте in vitro - от 24,3% до 25,9%, также соответственно (рис. 1).

После вакцинации ВБТСС РФ у лиц с отсутствием иммунологической эффективности вакцины показатели степени дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте in vivo и in vitro не превышали 10,7% и 14,6% соответственно. У лиц со слабой и умеренной выраженностью иммунологической эффективности вакцины показатели дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте in vivo и in vitro были соответственно в пределах от 20,5% до 22,5% и от 19,7% до 23,5%. А у лиц с выраженной степенью иммунологического эффекта вакцины дополнительное повышение ФМАН in vivo и in vitro после вакцинации составило в пределах от 26,1% до 28,1% и от 25,4% до 29,4%, также соответственно (рис. 2).

Итак, показатели дополнительного повышения показателей ФМАН в НСТ-тесте при воздействии антигенов боюшнотифозных вакцин in vitro проявили закономерную взаимосвязь со степенью дополнительной активации ФМАН in vivo после вакцинации и выраженностью проявления иммунологической эффективности вакцин. Дополнительное повышение ФМАН в НСТ-тесте при воздействии ВБТСС РФ in vitro менее, чем на 15% ассоциировало с отсутствием после вакцинации иммунологического эффекта вакцины, дополнительное повышение показателей НСТ-теста in vitro от 15% до 23,5% - ассоциировало с умеренным проявлением иммунологического эффекта, а нарастание показателей НСТ-теста in vitro на 25% и более - ассоциировало с выраженным иммунологическим эффектом вакцины (рис. 1, 2).



Рис 1. Сравнительный анализ степени дополнительного повышения показателей функционально-метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте in vivo и in vitro у лиц с различной степенью выраженности иммунологического эффекта ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм"

Рис 2. Сравнительный анализ степени дополнительного повышения показателей функционально-метаболической активности нейтрофилов в НСТ-тесте in vivo и in vitro у лиц с различной степенью выраженности иммунологического эффекта ВБТCC (РФ)

Вакцинируемые ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" однократно получали Иммуномодулин внутримышечно в дозе 150 мкг (опытная группа). Контролем служили показатели 99 лиц, вакцинированных ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" и не получавших Иммуномодулин.

Эффект Иммуномодулина выразился в значительном уменьшении числа лиц с отсутствием иммунологического эффекта вакцины с 33,33% в контрольной группе до 4,76% в опытной группе, увеличением числа лиц с умеренным иммунологическим эффектом вакцины с 31,31% до 57,14%, а также существенным увеличением числа лиц с выраженным иммунологическим эффектом с 9,09% до 28,57% (табл. 3).

Таблица 3. Влияние Иммуномодулина на иммунологическую эффективность брюшнотифозной вакцины ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм"

Группы по порядкам нарастания титра АТ	ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм»	ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм» + Иммуномодулин	Иммунологический эффект
	Абс.	В %	Абс.	В %
+ 0 (0-я группа)	9	9,09	33,33	1	1,59	4,76	Отсутствует
+ 1 (1-я группа)	24	24,24		2	3,17
+ 2 (2-я группа)	26	26,26	57,77	6	9,52	66,66	Слабый Умеренный
+ 3 (3-я группа)	31	31,31		36	57,14
+ 4 (4-я группа)	5	5,05	9,09	10	15,87	28,57	Выраженный
+ 5 (5-я группа)	4	4,04		8	12,70
Всего:	99	100		63	100

Под влиянием Иммуномодулина общая иммунологическая эффективность ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" повысилась с 66,66% до 95,17%. То есть, Иммуномодулин оказал выраженное индуцирующее влияние на процессы антителогенеза на фоне вакцинации брюшнотифозной вакциной (табл. 3).

Для выяснения механизма индуцирующего эффекта Иммуномодулина на процессы антителогенеза при вакцинации, изучали степень дополнительного повышения ФМАН при одновременном воздействии антигена вакцины и Иммуномодулина на нейтрофилы как in vitro до вакцинации, так и in vivo после вакцинации. Эффект Иммуномодулина проявился в уменьшении в 4 раза случаев с дополнительным повышением ФМАН менее чем на +10%, в уменьшении почти в 6 раз числа случаев с дополнительным повышением ФМАН до 20% и менее, а также в увеличении более чем в 4 раза случаев с дополнительным нарастанием ФМАН в НСТ-тесте на 21% и более (табл. 4).

Таблица 4. Эффект Иммуномодулина на ФМАН в НСТ-тесте при воздействии антигена брюшнотифозной вакцины ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" in vivo и in vitro

Степень дополнительного нарастания ФМАН в НСТ-тесте	in vivo	in vitro
	Вакцина (n=99)	Вакцина + Иммуномодулин (n=63)	Вакцина (n=99)	Вакцина + Иммуномодулин (n=63)
	%
До 10%	33,3	3,2	14,8	3,7
От 11% до 20%	57,6	12,7	64,2	11,1
До 21% и более	9,1	84,2	21,0	85,2

Итак, при вакцинации брюшнотифозной вакциной индуцирующий эффект Иммуномодулина на процессы антителогенеза был обусловлен его стимулирующим влиянием на реактивность фагоцитарного звена системы иммунитета. Отражением стимулирующего влияния Иммуномодулина на реактивность фагоцитарного звена системы иммунитета явилось повышение показателей степени дополнительного нарастания ФМАН в НСТ-тесте в ответ на воздействие антигена вакцины как in vivo, так и in vitro.

Таким образом, анализ результатов исследований позволил выявить, что если наиболее оптимальными для раннего прогнозирования степени иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин являются показатели степени дополнительного повышение ФМАН в НСТ-тесте in vivo на 4-й день после вакцинации, то одним из предопределяющих факторов иммунологической эффективности процесса вакцинации являются исходные показатели ФМАН до вакцинации. При изучении влияния как ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм", так и ВБТCC РФ на ФМАН в НСТ-тесте после воздействия антигена вакцин на нейтрофилы in vitro были выявлены закономерные связи со степенью дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте in vivo и выраженности иммунологической эффективности вакцин. Это подтвердило предположение о том, что при воздействии антигеном вакцин in vitro показатели дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте могут служить для критерием для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин in vitro, то есть до введения их в организм людей.

Выявленные общие закономерности о взаимосвязи показателей степени дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте in vivo и в НСТ-тесте in vitro с иммунологической эффективностью брюшнотифозных вакцин ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" и ВБТCC РФ дают основание считать:

· что показатели степени дополнительного повышения ФМАН в НСТ-тесте при воздействии антигена вакцин на нейтрофилы in vitro могут служить объективным показателем для прогнозирования иммунологической эффективности и отбора наиболее эффективных вакцин до их введения в организм;

· НСТ-тест, проводимый с воздействием на нейтрофилы крови in vitro позволяет одновременно определять ФМАН в большой выборке проб, существенно сократить время подсчета результатов, что является еще одной ценностью при его использовании при вакцинальном процессе.

На основании выявленных закономерностей сформулированы следующие критерии для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин:

1. При прогнозировании иммунологической эффективности брюшнотифозной вакцины в НСТ-тесте in vitro среди контингента подлежащих вакцинации лиц проявление высокой частоты случаев с дополнительным повышением ФМАН менее, чем на 10% является прогностическим критерием низкой иммунологической эффективности вакцины.

2. При прогнозировании иммунологической эффективности брюшнотифозной вакцины в НСТ-тесте in vitro среди контингента подлежащих вакцинации лиц проявление высокой частоты случаев с дополнительным повышением ФМАН от 11% до 20% является прогностическим критерием слабой либо умеренной иммунологической эффективности вакцины.

3. При прогнозировании иммунологической эффективности брюшнотифозной вакцины в НСТ-тесте in vitro среди контингента подлежащих вакцинации лиц проявление высокой частоты случаев с дополнительным повышением ФМАН на 21% и более является прогностическим критерием выраженной иммунологической эффективности при использовании вакцины.

Выводы

1. Иммунологическая эффективность брюшнотифозной вакцины ВБТХСЖ ОАО «Узбиофарм» составила 66,66%, а вакцины БТВСС (РФ) - 74,58%.

2. Высокие исходные (до вакцинации) показатели активности нейтрофилов в НСТ-тесте ассоциировали со слабой степенью, а низкие исходные показатели ФМАН в НСТ-тесте - с выраженной степенью проявления иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин.

3. Показатели степени дополнительной активации нейтрофилов в НСТ-тесте в ответ на воздействие антигена вакцин in vitro и in vivo проявили закономерную взаимосвязь со степенью выраженности иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин.

4. Иммуномодулин способствовал повышению эффективности вакцины ВБТХСЖ ОАО "Узбиофарм" до 95,17%. Эффект Иммуномодулина опосредовался через дополнительную индукцию функционально-метаболической активности нейтрофилов в ответ на воздействие антигена вакцины.

5. Показатели степени дополнительной активации нейтрофилов в НСТ-тесте при воздействии антигеном вакцины in vitro могут служить объективным критерием для прогнозирования эффективности и отбора брюшнотифозных вакцин для предполагаемого контингента лиц.

Практические рекомендации

1. Внедрение разработанных «Критериев для прогнозирования иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин» в практическую деятельность органов здравоохранения (ЦСЭН) позволит:

- оптимизировать процесс отбора и закупки наиболее эффективных брюшнотифозных вакцин;

- повысить эффективность процесса вакцинопрофилактики брюшного тифа, что имеет большую экономическую и социальную значимость.

2. Применение Иммуномодулина при вакцинальном процессе будет способствовать существенному повышению иммунологической эффективности брюшнотифозных вакцин.

Список опубликованных работ

1. Смагин А.А., Хушвактов А.С. Значение НСТ-теста в оценке активности фагоцитарного звена системы иммунитета// Инфекция, иммунитет и фармакология. - Ташкент, 2005. - № 3.- С. 44-46.

2. Шоумаров С.Б., Гуломов Н.Г., Хушвактов А.С., Смагин А.А. Ичтерлама вакцинопрофилактикаси муамолари ва уларнинг ечимига назар// Инфекция, иммунитет ва фармакология. - Тошкент, 2005. - №1. - Б. 134-136.

3. Смагин А.А., Шоумаров С.Б., Гулямов Н.Г., Хушвактов А.С. Перспективы применения НСТ-теста для прогнозирования и оценки эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа// Инфекция, иммунитет и фармакология.- Ташкент, 2006. - №2. - С. 86-87.

4. Шоумаров С.Б., Хушвактов А.С., Гулямов Н.Г., Смагин А.А. Сравнительное изучение активности брюшнотифозных вакцин// Вестник врача. - Самарканд, 2007. - №1. - С. 115-116.

5. Смагин А. А., Гулямов Н. Г., Шоумаров С. Б., Хушвактов А. С., Сафарова Д. Д. Эффект Иммуномодулина на эффективность вакцинопрофилактики брюшного тифа// Инфекция, иммунитет и фармакология. - Ташкент, 2010. - №3-4. - С. 73-77.

6. Шоумаров С.Б., Гулямов Н.Г., Смагин А.А. Причины и пути преодоления формирования серонегативности при вакцинопрофилактике брюшного тифа// Профилактическая и клиническая медицина (Вестник Санкт-Петербургской Государственной медицинской академии им. Мечникова).- Санкт-Петербург, 2010. - №1. - С.147-148.

7. Гулямов Н. Г., Смагин А. А., Шоумаров С. Б., Ахмедова Х. Ю. Прогнозирование иммунологической эффективности вакцинопрофилактики брюшного тифа и критерии для отбора вакцин. - Методические рекомендации. - Ташкент, 2010. - 20 с.

Размещено на Allbest.ru

...