Лекарственные растения провинции Нгеан Вьетнама
Биоморфологическая характеристика лекарственных растений и оценка их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики. Поиск новых растительных источников с цитопротективным и противоопухолевым механизмом действия в субтропической зоне.
| Рубрика | Медицина |
| Вид | автореферат |
| Язык | русский |
| Дата добавления | 01.05.2018 |
| Размер файла | 1,4 M |
Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже
Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Лекарственные растения провинции Нгеан Вьетнама
Специальность 03.02.01 Ботаника 03.03.04 Клеточная биология, цитология, гистология
Нгуен Ань Зунг
Астрахань 2010
Работа выполнена в Астраханском государственном университете
Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Пилипенко Владимир Николаевич
доктор медицинских наук, профессор Епинетов Михаил Александрович
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор, член - корр. РАМН Шимановский Николай Львович
доктор биологических наук Курочкина Татьяна Федоровна
Ведущая организация: Калмыцкий государственный университет
лекарственный субтропический цитопротективный противоопухолевый
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования.
В современной мировой науке и промышленности все большее значение приобретают исследования и технологии, направленные на сохранение и восстановление здоровья населения (Health Protections), в частности, поиск лекарственных растений с цитопротективным и противоопухолевым механизмом действия. Одним из наиболее перспективных направлений в этой области, по данным WHO, является поиск новых растительных источников в субтропической и тропической зонах.
Вьетнам - тропическая страна с различными климатическими и географическими особенностями в ее различных регионах. Она имеет изобилие разнообразных природных ресурсов. Жители Вьетнама не имея доступ к современным лекарствам приобрели огромный многовековой опыт использования лекарственных растений (Yagama Reddy Y.. A Glimpse of Vietnam's Forest Wealth and Medicinal Plants-Based Traditional Medicine. J. Hum. Ecol.- 2005.-17(4): 293-299).
Нгеан - самая большая по площади провинция Вьетнама, которая расположена на северной части Центрального побережья. Около 83% площади Нгеана покрывается холмами, горами и лесами. В Нгеан произростает более 600 ценных диких лекарственных растений, многие из которых пока еще не изученных, хотя их целебные свойства давно используются в традиционной медицине Вьетнама (Зунг Н.А. Исследование разнообразия высших растений в деревне Мон-шон - буферная зона национального парка Пу-мат. Магистерская диссертация. Вьетнам, 2002; Зунг Н.А. Современное состояние использования лекарственных растений в коммуне Маудык, Конкуонг район, провинция Нгеан. Изд-во науки и техники, Ханой, Вьетнам- 2006. С.61-65).
Аналогичных работ по комплексной оценки эффективности лекарственных растений на биологических моделях маркерной диагностики не проводилось. Выбор места произрастания изучаемых лекарственных растений основан на эндемичной специфичности и высокой биологической активности сырья, связанной с особыми климатическими условиями Нгеан провинции Вьетнама.
Тема исследования поддержана Российским фондом фундаментальных исследований (РФФИ) и Вьетнамской академией наук и технологий (ВАНТ) в рамках Международного проекта Вьетнам-Россия № 09-03-90302.
Целю работы является изучение биоморфологии лекарственных растений Homalonema occulta (Lour.) Schott., Nelumbo nucifera Gaertn., Scoparia dulcis L., Stemona tuberosa Lour., Syzygium jambolana DC., Psychotria montana Blume, Ehretia asperula Zoll. & Moritzi, Erythropalum scandens Blume, Hedyotis diffusa Willd., Symplocos glomerata King ex C.B. Clarke, Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils., Symplocos cochinchinensis (Lour.) S. Moore, Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk собранных в Нгеан провинции Вьетнама и оценки их эффективности на биологических моделях маркерной диагностики.
Для достижения были поставлены задачи:
1. Экспедиция в заповедники Нгеан провинции Вьетнама для сбора и сушки листьев, корней и плодов лекарственных растений H. occulta, N. nucifera, S. dulcis, S. tuberosa, S. jambolana, P. montana, E. asperula, E. scandens, H. diffusa, S. glomerata, S. cuneata, S. сochinchinensis, P. palatiferum.
2. Дать биоморфологическую характеристику собранных лекарственных растений в Нгеан провинции Вьетнама.
3. Дать оценку эффективности экстрактов изучаемых растений на биологической модели клеточной маркерной диагностики пролиферации культур нормальных фибробластов, клеток рака молочной железы человека MCF-7 и рака шейки матки Hela.
4. Провести оценку эффективности экстрактов растений на биологической модели маркерной диагностики методом иммуногистохимического окрашивания экспрессии онкобелка Bcl-2.
5. Оценить эффективность экстрактов растений по способности конкурировать с меченными лигандами гормональных рецепторов за связывание со специфическими участками тканей-мишеней.
6. Определить антиоксидантную активность экстрактов методами хемилюминесценции, определения ТБК - активных продуктов по реакции взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), определения содержания восстановленного глутатиона.
Научная новизна.
1. Впервые на биологических моделях маркерной диагностики изучено влияние экстрактов лекарственных растений собранных в Нгеан провинции Вьетнама на пролиферацию клеток HeLa (рак шейки матки человека) и МCF-(рак молочной железы), экспрессию онкобелка Bcl-2.
2. Впервые на клеточных линиях рака шейки матки (HeLa) и рака молочной железы человека (MCF-7) показана цитотоксическая активность густых экстрактов растений Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa.
3. Впервые в условиях экспериментальной гипоксии, вызванной субтоксическими дозами NaCN и ДНФ, установлено что, изучаемые экстракты растений Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum и Hedyotis diffusa снижали уровень ТБК-активных продуктов в клетках, нормализовали протекающие с участием свободных радикалов окислительные процессы.
Научно-практическая значимость исследования состоит в том, что материалы диссертации могут быть использованы для последующих этапов разработки лекарственных препаратов, обладающих противоопухолевым, антиоксидантным, гормоноподобным действием.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Анализ биоморфологических признаков лекарственных растений H. occulta, N. nucifera, S. dulcis, S. tuberosa, S. jambolana, P. montana, E. asperula, E. scandens, H. diffusa, S. glomerata, S. cuneata, S. сochinchinensis, P. palatiferum собранных в экспедиции в Нгеан провинции Вьетнама.
2. Оценка эффективности экстрактов лекарственных растений собранных в Нгеан провинции Вьетнама на биологической модели клеточной маркерной диагностики пролиферации культур нормальных фибробластов, клеток рака молочной железы человека MCF-7 и рака шейки матки Hela.
4. Маркерная диагностика эффективности изучаемых экстрактов лекарственных растений на биологической модели методом иммуногистохимического окрашивания экспрессии онкобелка Bcl-2.
5. Оценка эффективности изучаемых экстрактов лекарственных растений на биологической модели маркерной диагностики по способности конкурировать с меченными лигандами гормональных рецепторов за связывание со специфическими участками тканей-мишеней.
6. Определение антиоксидантной активности изучаемых экстрактов лекарственных растений методами хемилюминесценции, определения ТБК - активных продуктов по реакции взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), содержания восстановленного глутатиона.
Апробация работы. Диссертация обсуждена на заседании кафедры биологии и экологии растении биологического факультета и кафедры фармакологии химического факультета Астраханского государственного университета (г.Астрахань, 2008 г., 2010 г.).
Основные положения работы были изложены на II Всероссийской конференции-школы «Высокореакционные интермедиаты химических реакций» (г.Астрахань, 2007 г.), III Всероссийской конференции-школе с международным участием «Высокореакционные интермедиаты химических реакций» (г.Астрахань, 2008 г.), Международной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря и водоемов внутреннего стока Евразии» (г.Астрахань, 2008 г.), Международной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов» (г.Астрахань, 2009 г.), Международной научно-практической конференции «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования» (г.Астрахань, 2009 г.), 7-й Международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2010).
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 19 работ, включая 5 статьи в научных журналах, рекомендуемых ВАК.
Объём и структура диссертации. Работа изложена на 131 страницах компьютерного текста, содержит 38 рисунков, 10 таблиц. Диссертация состоит из введения, 4 глав, выводов, библиографического списка, приложения.
ХАРАКТЕРИСТИКА НГЕАН ПРОВИНЦИИ ВЬЕТНАМА
Вьетнам обладает богатейшей флорой на Земле, насчитывающей свыше 12.000 видов растений. Сегодня, по оценкам, 75% процентов вьетнамцев используют традиционную медицину в качестве основного источника для лечения общих проблем здоровья (Зунг Т.Н., Ван Н.Д.Н., 2005).
По данным Министерства здравоохранения Вьетнама в настоящее время собраны более 40 тысяч рецептов при участии более 12 тысяч народных лекарей. Около 400 научных медицинских трудов древности дошли до наших времен и используются современными врачами. Например, современной традиционной медицине Вьетнама известны рукописи народного лекаря Туе Тинь, жившего в XIV н.э. Его труды содержат подробные описания, свойства и применение 499 лекарственных растений для лечения 184 видов заболеваний. Народный вьетнамский лекарь Ле Хыу Чак (XVIII в.) составил 66 книг объемом 5,5 тысяч страниц, в которых подробно описывает более 800 лекарственных растений. Примерно 1500 видов традиционных лекарственных средств в настоящее время имеют лицензию, выданная министерством здравоохранения будет продаваться на рынках Вьетнама (Анон., 2003a; Чань Ван Лау, 2003).
Академическими школами Винь университета были проведены различные ботанические исследования, в т.ч. исследования лекарственных растений Нгеана (Nha N.T, 1995,2001, 2006; Hanh N.Т.,1995, 1999, 2001; Osborn T. и др.,2000; Thin N.N.,2001, 2004; Chau D.Q.,2003; Dung N.A.,2002, 2006). Особенно, в 2001 году, по статистическим результатам Thin N.N., Hanh N.T., Nha N.T. в горном районе Нгеана растет 600 растений, обладающих лекарственными свойствами (Thin N.N. и др., 2001). Авторы также собирали ценные лечебные препараты на основе растительного лекарства, которые давно используются местными лекарями. Некоторые из этих рецептов подвергались проверкой на биологическую активность и формацевтические свойства. Проверка дала положительный результат. Например, препарат для лечения: гастрита, дерматита, воспаления почек (Hanh N.T., 1999, 2001, Thin N.N., Nha N.T., 2001).
В 2002 - 2006 г. проведены исследования, оценка разнообразности растительности в горном районе провинции Нгеана и определено более 600 лекарственных растений, найдено большое количество ценных лечебных лекарственных препаратов, принимаемых народом (Lam D.N. и др., 1987; Зунг Н.А., 2002, 2006). В том числе много ценных диких лекарственных растений до сих пор еще не применяются, хотя их целебные ценности известны.
Природные условия провинции Нгеан, Вьетнам
Провинция Нгеан принадлежит центральной области Вьетнама, с географическими координатами с 18033'10" к 19024'43" северной широты и с 103052'53" на 105045'50" восточной долготы. Общая площадь суши составляет 1.648.729 га, из которых 207.100 га для сельского хозяйства, 1.195.477га для лесоводства (в т.ч. 745.557 га с лесом, 490.165 га без леса).
В северо-восточной части Нгеана находятся цепи гор Чыонгшона со сложными, разнообразными топографическими характеристиками. Местность изрезана горами и реками, проходящими по направлению с Северо-запада к Юго-востоку. Место с наибольшей высотой является пик Пулайленг в горном районе Кушон, низменность располагается в восточных районах Куиньлыу, Зиентьяу, Иентхань. Бывает место (например, село Куиньтхань района Куиньлыу) находящееся выше морской поверхности только 0,2м. Горы и холмы занимает 83% общей площади провинции.
Нгеан расположен в тропической муссонной зоне. Климат формируется под непосредственным воздействием летнего (южного и юго-западного) и зимнего (северо-восточного) муссонов. По данным 2008 года: средняя температура 24,2 выше температуры предыдущих годов 0,2оС; годовой осадок - 1610,9мм; количество дождевых дней-157; средняя влажность года-84; количество солнечных часов года - 1460.
Проведен анализ литературных данных о лекарственных растениях, применяемых в традиционной народной медицине в Нгеане провинции. Выявили более 600 растений, которые используются народной медициной для лечения различных видов заболеваний (Nha N.T, 1995, 2001, 2006; Hanh N.Т., 1995, 1999, 2001; Thin N.N., 2001, 2004; Chau D.Q., 2003; Dung N.A., 2002, 2006). При анализе популярного уровня лекарственных растений во всех средств, определили 82 вида растений наиболее часто используемых для получения препаратов. Нами был проведен сбор 13 видов для изучения биоморфологии: H. occulta, N. nucifera, S. dulcis, S. tuberosa, S. jambolana, P. montana, E. asperula, E. scandens, H. diffusa, S. glomerata, S. cuneata, S. сochinchinensis, P. palatiferum.
ЭКСПЕДИЦИЯ В НГЕАН ПРОВИНЦИЮ ВЬЕТНАМА
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Изучаемые лекарственные растения были собраны в горах Нгеан провинции в период с июля до октября 2008 г. После сбора растений, было проведено определение их научного названия, предварительной обработки, очистки, сушки на кафедре ботаники Винь университета Вьетнама в соответствии с документом «Research Methods in Plant Science» R.M.Klein, D.T.Klein (1979). Для классификации растений пользовались определительными ключами Ho P.H. (1999), и ботаническими описаниями в трудах «Flora of Vietnam», «Vietnam forest tree» (Forest inventory and planning Institute, Vietnam, 1996).
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Для проведения микроскопического анализа сбора часть аналитической пробы помещали на чистую гладкую поверхность и выделяли вручную лопаточкой или препаровальной иглой составные компоненты сбора. При разборе руководствовались внешним видом сырья, рассматривая его невооруженным глазом или с помощью лупы (10х). Для каждого компонента сбора отбирали по 25-30 однородных по внешнему виду частиц и из них готовили микропрепараты. Микроскопическое исследование отдельных компонентов сбора проводили в соответствии с ГФ ХI изд. вып. «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного сырья» (Государственная фармакопея СССР, 1989).
Изучение анатомии растений осуществляли с использованием микроскопа «Unico H604T» (США) с окулярами К7х и объективами 4х, 10х, 20х, 40х и 100х. Для фотосъемки использовали фотокамеру «Canon Power Shot A 650IS - 12M» (Китай).
БИОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СОБРАННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Pseuderanthemum palatiferum Blume
(Псевдэрантемум палатиферум)
Семейство: Аcanthaceae (Акантовые)
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
P. palatiferum является кустарниками и многолетними растениями. Их высота 1-3 м. Стебель мягкий и зеленый в малолетнем возрасте и становится коричневым в многолетнем с разветвлением. Листья симметричные, их края целые, на вершине заостренные, по краям двоякоостропильчатые, около 15см длиной, 4см шириной. Длина основания листьев около 2см. Соцветие с длиной 10-16см. Цветок гермафродитный, неравномерный с длиной около 3 см. Лепестки белые, низкая часть узко-тубчатая, верхняя часть имеет 5 долей. Пыльник фиолетовый. Столбик с длиной около 2,5см.
При рассмотрении поперечного среза листа Pseuderanthemum palatiferum видно, что кроме эпидермиса клетки мезофилла разделяются на два четкие слои. Полисадный мезофилл составляет из 2-3 слои многоугольных клеток с прямыми стенками, содержающих хлоропласт и запасных веществ с кристалличесим видом, располагаемые равномерно. Такой слой обладает многочисленными железками с шарообразным видом. Слой губчатого мезофилла составляет из клеток с разнообразными видами, в основном, многоугольных или шарообразных.
Hedyotis diffusa (L.) Lam. (Хедиотис раскидистый)
Семейство: Rubiaceae (мареновые)
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Hedyotis diffusa является однолетними растениями. Стебель травянистый, гладкий, ползучий. Стебель слабо-коричневый с высотой 30-50 см, круглое основание. Листья серые с длиной 1-3 см в виде ленты, на вершине заостренные и остропильчатые, стойкие, без основания. Цветки одиночные или двойные в аксилле. 4-ая чашечка заостренная. 4-ая гирлянда белая. 4-ая тычинка прицепляет к горловине трубы гирлянды. Плоды сухие, плоские на вершине и имееют много зерен. Цветение круглый год, но в основном в июле-сентебре.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Erythropalum scandens Blume
(Эритропалум лазающий)
Семейство: Olacaceae (Олаксовые)
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Лиана высотой до 5-10 м, стебель гладкий. Черешок 3-10 см, листья яйцевидные, продолговато-яйцевидные или треугольно-яйцевидные, 8-20 Ч 4-15 см, тонкий, кожистые, тупые базы, усеченный, или сердцевидные, и обыкновенно щитовидный, заостренные вершины, основная жилка 3 или 5. Сложный зонтик 6-18 см, много цветков; цветоножка 4-10 см. Цветоножки нитевидные, 2-5 мм. Чашечка относящийся к куполу, 5-зубчатые (1 мм). Лепестки белые, 1,5-2 мм. Тычинки с пучками волос по бокам. Диск повышен. Костянка эллиптический или обратно-яйцевидный, 1,5-2,5 Ч 0,8-1,2 см, увенчанный стойких чашечки. Семена тёмно-синие, широко эллипсоида. Цветет в Марте-сентябре.
При рассмотрении поперечного среза листа Erythropalum scandens видно, что корковая проба составляет из толстых одревесневших клеток. Корковая паренхима составляет из клеток с различными размерами, расположенных неравномерно. У таких клеток имеются игло-шарообразные кристаллы кальции оксалата. Энтодерма составляет из слоя прямоугольных клеток, распооженных равномерно. Перицкл составляет из прямоугольных клеток, расположенных вперемежку с клетками энтодермы. Флоэма составляет из маленьких клеток, образующих пучки, расположенные вперемежку с ксилемой. Сердцевинная паренхима составляет из клеток с тонкими стенками, имеющих различные размеры. В сердцевинной паренхиме рассеянно располаются большие древесинные сосуды.
ИЗГОТОВЛЕНИЕ ЭКСТРАКТОВ ИЗ СОБРАННЫХ РАСТЕНИЙ
Получены жидкие концентрированные и сгущенные экстракты изучаемых растений путем водного извлечения биологически активных веществ растительного происхождения согласно указанию Государственной фармакопеи XI (ГФ) (Таблица 1).
Таблица 1.
Экстракты из растений провинции Нгеан Вьетнама
|
Номер образца |
Название растения |
Часть растения |
|
|
1 |
Syzygium jambolana |
листья |
|
|
2 |
Syzygium jambolana |
цветы |
|
|
3 |
Syzygium jambolana |
плоды |
|
|
4 |
Homalonema occulta () |
корневища |
|
|
5 |
Erythropalum scandens Blume |
корневища |
|
|
6 |
Nelumbo nucifera Gaertn |
листья |
|
|
7 |
Nelumbo nucifera Gaertn |
цветы |
|
|
8 |
Nelumbo nucifera Gaertn |
плоды |
|
|
9 |
Scoparia dulcis L. |
листья |
|
|
10 |
Сахарный густой колер |
Контроль 1 |
|
|
11 |
Stemona tuberosa Lour |
корневой клубень |
|
|
12 |
Pseuderanthemum palatiferum |
листья |
|
|
13 |
Ehretia asperula |
листья |
|
|
14 |
Hedyotis diffusa |
листья |
|
|
15 |
Psychotria montana Blume |
листья |
|
|
16 |
Psychotria montana Blume |
стебель |
|
|
17 |
Symplocos glomerata |
листья |
|
|
18 |
Symplocos cochinchinensis |
листья |
|
|
19 |
Sargentodoxa cuneata |
стебель |
|
|
20 |
Сахарный густой колер |
Контроль 2 |
В процессе получения экстрактов на основе данного растительного сырья, в том числе, лекарственно-технического, основным этапом являлось приготовление вытяжек целевых компонентов. С целью облегчения проникновения воды в экстрагируемый растительный материал, сырье измельчалось согласно указанию Государственной фармакопеи XI (ГФ), листья, травы и цветки измельчались до размера частиц не более 5 мм; стебли, кору, корня - не более 3 мм; плоды и семена-0,5 мм. С целью ускорения диффузионного обмена, а, следовательно, и экстракции процесс веди при повышенной температуре до +72ч78°С. Продолжительность экстрагирования составляла не менее 3 часов. По показателям качества густой экстракт изучаемого растительного сырья соответствовал требованиям Государственной фармакопеи XI (ГФ): внешний вид - густая однородная масса без комков и посторонних включений; цвет - от коричневого до тёмно-коричневого; содержание сухих веществ - 68,0-70,0%.
ОЦЕНКА НА БИОЛОГИЧЕСКИХ МОДЕЛЯХ
Методология оценки на биологических моделях маркерной диагностики с использованием клеточных технологий.
Использование клеточных культур HеLа, MCF-7. Культивирование клеток осуществлялось в стерильных условиях с использованием ламинарбокса ЛБ-В (Россия), (инкубирование: при 37єС, 5% СО2, относительная влажность воздуха 95%). При культивировании клеток использовали стандартную среду DMEM с добавлением 20% термоинактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, L-глутамина в концентрации 100 мкг/мл и антибиотика гентамицина сульфата концентрации 40 мкг/мл.
Оценка эффективности экстрактов лекарственных растений на жизнеспособность чувствительных и резистентных опухолевых клеток методом МТТ (3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолий бромистый) - теста (Mealey et al., 2002).
Оценка эффективности экстрактов лекарственных растений на экспрессию онкобелка bcl-2 в клетках методом иммуногистохимического окрашивания (MediaCybernetics, США).
Оценка эффективности экстрактов лекарственных растений на основании активности специфических ферментов апоптоза методом колориметрического измерения активности каспазы-3. Измерение активности каспазы-3 основано на расщеплении субстрата, меченого хромофором, под действием активной каспазы-3 и высвобождении хромофора, который окрашивает среду в желтый цвет. Окрашивание регистрировали с помощью спектрофотометра при длине волны л=405 нм.
Для оценки апоптоза в культуре клеток использовали электрофорез экстракта геномной ДНК культуры клеток в агарозном геле и флуориметрическую оценку соотношения фрагментированной/ высокомолекулярной ДНК (Daniel et al, 1999).
Изучение противоопухолевых, антиоксидантных, гормоноподобных свойств, динамики воздействия на модельные клеточные системы.
Определение антикосидантной активности изучаемых экстрактов проводили методами хемилюминесценции, определения ТБК - активных продуктов по реакции взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) и по определению содержания восстановленного глутатиона. 20 образцов (18 экстрактов и 2 контроля) изучаемых лекарственных растений провинции Нгеан Вьетнама приведены в таблице 1.
Изучение влияния экстрактов лекарственных растений провинции Нгеан Вьетнама на пролиферацию HeLa, МCF.
Результаты влияния образцов на жизнеспособность клеток HeLa (в % от контроля) представлены в таблице 2, а на жизнеспособность клеток МCF-7 в табл. 3.
Таблица 2.
Влияния образцов на жизнеспособность клеток HeLa (в % от контроля)
|
Концентрация |
Номера образцов |
|||||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
||
|
1% |
100 ±30 |
90 ±27 |
35* ±10 |
60* ±12 |
55* ±18 |
130* ± 15 |
65* ±16 |
60* ±10 |
100 ±20 |
140* ±20 |
65* ±25 |
|
|
0,5% |
100 ±25 |
80 ±10 |
40* ±20 |
75 ±25 |
60* ±20 |
90 ±10 |
70* ±15 |
80 ±10 |
60* ±15 |
150* ± 30 |
70* ±10 |
|
|
0,1% |
100 ±20 |
100 ±25 |
100 ±15 |
90 ±15 |
70 ±10 |
80 ±10 |
100 ±20 |
110 ±15 |
70 ±30 |
100 ±15 |
100 ±10 |
|
|
Концентрация |
Номера образцов |
|||||||||||
|
12 |
13 |
14 |
15 |
16 |
17 |
18 |
19 |
20 |
Физ раствор |
|||
|
1% |
40* ±10 |
150 ±20 |
35* ±15 |
95 ±10 |
20* ±25 |
50* ±20 |
90 ±30 |
70* ±20 |
75 ±10 |
90 ±15 |
||
|
0,5% |
44* ±15 |
140 ±30 |
32* ±15 |
100 ±20 |
28* ±10 |
50* ±15 |
80 ±10 |
75 ±30 |
85 ±15 |
85 ±10 |
||
|
0,1% |
60* ±20 |
90 ±25 |
25* ±15 |
80 ±15 |
90 ±20 |
100 ±25 |
90 ±10 |
100 ±20 |
70 ±15 |
100 ±15 |
Примечание *-достоверные отличия от контроля. Взято по 3 лунки на каждую концентрацию
Таблица 3.
Влияния образцов на жизнеспособность клеток HeLa (в % от контроля)
|
Концентрация |
Номера образцов |
|||||||||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
||
|
1% |
100 ±25 |
95 ±28 |
40* ±10 |
50* ±10 |
60* ±19 |
130* ± 15 |
70 ±30 |
65* ±10 |
100 ±20 |
120 ±20 |
75 ±20 |
|
|
0,5% |
100 ±25 |
85 ±15 |
45* ±15 |
70 ±20 |
60* ±20 |
90 ±10 |
75 ±20 |
80 ±15 |
60* ±15 |
120* ± 30 |
75 ±20 |
|
|
0,1% |
100 ±25 |
100 ±25 |
100 ±20 |
90 ±25 |
70 ±10 |
85 ±15 |
100 ±25 |
110 ±15 |
70 ±30 |
100 ±15 |
105 ±10 |
|
|
Концентрация |
Номера образцов |
|||||||||||
|
12 |
13 |
14 |
15 |
16 |
17 |
18 |
19 |
20 |
Физ раствор |
|||
|
1% |
35* ±15 |
130 ±20 |
30* ±15 |
100 ±10 |
20* ±25 |
80 ±20 |
95 ±20 |
80 ±20 |
85 ±10 |
90 ±15 |
||
|
0,5% |
48* ±12 |
130 ±30 |
39* ±15 |
100 ±20 |
28* ±10 |
60* ±15 |
90 ±10 |
75 ±30 |
95 ±15 |
85 ±10 |
||
|
0,1% |
57* ±20 |
100 ±25 |
30* ±15 |
90 ±15 |
90 ±20 |
100 ±25 |
100 ±10 |
90 ±20 |
80 ±15 |
100 ±15 |
Примечание *-достоверные отличия от контроля. Взято по 3 лунки на каждую концентрацию.
Изучение влияния образцов 5, 12 и 14 на экспрессию онкобелка bcl-2.
Оценку экспрессии онкобелка bcl-2 в клетках осуществляли методом иммуногистохимического окрашивания. Метод иммуногистохимического окрашивания образцов основан на связывании первичных моноклональных антител с онкобелком bcl-2 и последующим присоединением вторичных антител, меченых флуоресцеином. Количество онкопротеина в образце оценивали на флуоресцентном микроскопе методом флуориметрии с использованием программного обеспечения ImageProPlus 5.0 (MediaCybernetics, США).
Продолжая изучение роли апоптоза в механизме действия гестагенов, мы исследовали экспрессию антиапоптотического белка bcl-2, методом иммуногистохимического окрашивания. Клетки культуры MCF-7 и HeLa инкубировали в течение 72 часов в присутствии исследуемых веществ. Контролем служили клетки, инкубируемые в тех же условиях, но в отсутствие исследуемых соединений. С помощью флуоресцентного микроскопа “Axiostar” были получены изображения клеток в спектре видимого света, а также комбинированные изображения при возбуждении флюоресценции маркера вторичных антител УФ-излучением.
Как в опыте, так и в контроле оценивали соотношение количества флуоресцирующих клеток к общему количеству клеток в поле зрения, а также интегральную площадь, соответствующую значениям флуоресценции выше фоновых (программа Image Pro Plus 5.0). Результаты, полученные в результате проведения обработки первичных данных, представлены в таблице 4.
Полученные данные показывают, что отношение флуоресцирующих клеток к общему количеству клеток в поле зрения при уровне значимости p<0,05 достоверно не отличается от контроля ни в одном из образцов.
Таким образом, при анализе экспрессии антиапоптотического белка Bcl-2 в культуре клеток MCF-7 при инкубации с образцами 5, 12 и 14 с помощью иммуноокрашивания не было выявлено достоверных отличий от контроля при времени инкубации 72 часа. Это позволяет говорить об отсутствии значимого влияния исследуемых веществ на экспрессию фактора Bcl-2 в данных условиях.
Таблица 4.
Иммуногистохимическое окрашивание антителами к Bcl-2 в культуре клеток
|
Образец |
Концентрация, моль/л |
Соотношение* |
S окрашивания |
|
|
5 |
1% |
0,234±0,09 |
15,9 |
|
|
0,5% |
0,211±0,18 |
31,1 |
||
|
0,1% |
0,294±0,07 |
30,5 |
||
|
12 |
1% |
0,301±0,12 |
17,1 |
|
|
0,5% |
0,272±0,16 |
26,8 |
||
|
0,1% |
0,213±0,08 |
42,1 |
||
|
14 |
1% |
0,182±0,10 |
3,9 |
|
|
0,5% |
0,231±0,08 |
10,2 |
||
|
0,1% |
0,215±0,22 |
29,0 |
Примечание: Соотношение* - отношение количества флуоресцирующих клеток к общему количеству клеток в поле зрения; S окрашивания - интегральная площадь, соответствующая значениям флуоресценции выше фоновых, вычисленная в процентах по отношению к фону, отражает плотность монослоя клеток.
Сравнительная оценка способности образцов 5, 12 и 14 взаимодействия с участками специфического связывания прогестерона клеточных культур.
Определение сродства новых прогестинов к рецепторам прогестерона проводили по методике Бассалык (1987) в модификации. Для определения общего связывания пробы содержали 0,2 нМ [2,4,6,7]3Н-прогестерона (Р4) в исследуемой культуре клеток. Для определения неспецифического связывания в пробы дополнительно добавляли 10 М спиртовой раствор диэтилстильбэстрола или 4 М спиртовой раствор прогестерона. Каждая проба повторялась три раза. Этанол после раскапывания выпаривали. Затем добавляли 100 мкл суспензии клеток и инкубировали в течение 0,5 ч. После инкубации суспензию клеток наносили на стекловолоконные фильтры GF/F ("Watman"). радиометрировали на жидкостном сцинтилляционном радиометре SL-30 Intertechnique (Франция). Связывание гормона в культуре клеток выражали в фМ гормона, связанного одним млн клеток. Эту величину расчитывали по формуле:
N = (Т-NSВ)хК/(2.22хАхС), (фМ/млн клеток)
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Риc. 9. Способность изучаемых соединений вытеснять 3H- прогестерон из участков связывания на клетках MCF-7.
Был проведен анализ относительной способности связывания (RBA) гестагенов со специфическими участками связывания прогестерона в клетках MCF-7. Для определения общего связывания 3Н- Р4 суспензию клеток инкубировали с 3Н- Р4 (удельная радиоактивность 3,44 ТБк/ммоль), в конечной концентрации 510-8 М в течение 30 мин. при 370 С. Для определения неспецифического связывания среду инкубации дополняли избытком немеченого изучаемого гестагена по отношению к меченому. Каждая проба повторялась три раза. Связанный с клетками гормон осаждали на стеклянных фильтрах GFF (Sigma). Фильтры промывали холодным фосфатным буфером pH=7,4 при t=4 0С. Радиоактивность каждого образца определялась жидкостным сцинтилляционным ?-радиометром "LKB"(Швеция).
Были получены следующие результаты (рис.9).
Общее связывание составило 1195 +/- 125 с.р.м./сек.
Связывание 3Н -прогестерона в присутствии избытка образца 5 составило в среднем 50% от общего, в присутствии аналогичного избытка образца 12 - 40%, а образца 14 - 40-45%.
Из полученных данных следует, согласно расчетам что RBA (образца 14) = 518%, RBA (образца 12) = 1515%, RBA (образца 5) = 1675%. Это означает, что образцы 5 и 12 обладают большей способностью связываться с рецепторами прогестерона, чем эндогенный гормон прогестерон и образец 14.
Полученные результаты влияния соединений на жизнеспособность опухолевых клеток, их сродства к участкам специфического связывания прогестерона позволили предположить наличие у образцов 5 и 12 гестагенной активности.
Изучение влияния образцов 5, 12 и 14 на остеобласты и фибробласты
Проведено исследование протекторных свойств образцов 5, 12 и 14 на жизнеспособность фибробластов и остеобластов и их пролиферативную активность как в норме, так и в условиях гипоксии вызванной цианидом Nа (NaCN) и динитрофенолом (ДНФ).
В экспериментах использовались новорожденные белые крысы. Объектом исследования были культуры остеобластов теменной кости и фибробластов кожи. Остеобласты получали и культивировали по ранее описанному нами методу (Гацура В.В., 1993). Форма клеток соответствовала изображениям остеобластов, приводимым в литературе (Боленский С.В., 2001) и на рисунке 9 а.
Для получения первичной монослойной культуры фибробластов кожу измельчали на фрагменты и помещали в пластиковые флаконы для культивирования. Среда инкубации содержала 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 40 мкг/мл антибиотика гентамицина. Через 10-14 дней после формирования монослоя клеток их обрабатывали трипсином, переводили в суспензию и рассевали по 100 мкл в 96-луночные планшеты Costar для проведения эксперимента (рис. 9 б).
Для моделирования гипоксии добавляли раствор NaCN до конечной концентрации 0,2 мМ и динитрофенол (ДНФ) 0,5 мМ. Инкубировали планшеты в течение суток. Оценку цитотоксичности веществ проводили с помощью МТТ-теста (Чурилова И.В и др. 2002).
Среду отбирали через 4 часа инкубации, кристаллы формазана растворяли в лунках планшета диметилсульфоксидом и измеряли оптическую плотность на ИФА-ридере (анализаторе) планшетов «Пикон». Полученные результаты представляли в виде средних значений 3-х измерений с помощью стандартного программного обеспечения Exel.
Жизнеспособность клеток контролировалась по окрашиванию трипановым синим и составляла 85 - 90%. Для получения изображений культуры окрашивали метиленовым синим и проводили цифровую съемку с использованием системы «МекоС» (Россия).
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью t критерия Стьюдента.
Внесение в среду инкубации NaCN и ДНФ вызывало снижение степени адгезии к субстрату, оцениваемой по уменьшению их площади и увеличению межклеточного расстояния (рис. 10 в, г, д, е). При этом NaCN и ДНФ угнетали рост остеобластов на 50 и 23%,а фибробластов - на 75 и 47% соответственно (табл. 4 и 5).
При воздействии на клетки NaCN и ДНФ, а также их сочетания вызывали достоверное увеличение жизнеспособности клеточных культур, способствовали нормализации адгезии и количества остео- и фибробластов (рис. 11 а - е). Существенных отличий в действии образцов 5, 12 и 14 не выявлено.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Рис. 10. Культура остебластов и фибробластов в присутствии NaCN и ДНФ.
Примечание: а - первичная монослойная культура остеобластов; б - первичная монослойная культура фибробластов; в - остеобласты в присутствии 0,2 мМ NaCN; г - остеобласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ; д - фибробласты в присутствии 0,2 мМ NaCN; е - фибробласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ. Окраска трипановым синим - Ч 100.
Размещено на http://www.allbest.ru/
Размещено на http://www.allbest.ru/
Рис. 11. Культура остебластов и фибробластов в присутствии NaCN, ДНФ и. H. diffusa
Примечание: а - остеобласты в присутствии 0,2 мМ NaCN и H. diffusa 50 мг/мл; б - остеобласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ и H. diffusa 50 мг/мл; в - фибробласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ и H. diffusa 50 мг/мл; г - фибробласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ и H. diffusa 50 мг/мл; д - остеобласты в присутствии 0,5 мМ ДНФ и H. diffusa 50 мг/мл; е - остеобласты в присутствии 0,2 мМ NaCN и H. diffusa 50 мг/мл. Окраска трипановым синим - Ч 100.
Учитывая, что ДНФ вызывает увеличение окислительных процессов и уменьшение образования макроэргических соединений, можно предполагать участие свободнорадикальных механизмов повреждения в его цитотоксическом действии.
NaCN блокирует дыхательную цепь, вызывая накопление продуктов цикла трикарбоновых кислот. Вероятно, образцы 5, 12 и 14 способствует нормализации метаболических процессов в условиях NaCN гипоксии.
Таким образом, образцы 5, 12 и 14 защищают культивируемые остеобласты и фибробласты кожи крыс от действия метаболических гипоксантов: NaCN и ДНФ.
Влияние образцов 5, 12 и 14 на перекисное окисление липидов (ПОЛ)
Целью данной части работы явилось изучение влияния образцов 5, 12 и 14 на процессы ПОЛ остеобластов и фибробластов крыс в условиях экспериментальной гипоксии.
В работе использовались новорожденные белые крысы. Объектом исследования служили культуры остеобластов теменной кости и фибробластов кожи новорожденных крысят. Остеобласты получали и культивировали по ранее описанному нами методу (Вышковский Г.Л. и др., 2004).
Для получения первичной монослойной культуры фибробластов кожу измельчали на фрагменты и помещали в пластиковые флаконы для культивирования. Среда инкубации содержала 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 40 мкг/мл антибиотика гентамицина. Через 10-14 дней после формирования монослоя клеток их трипсинизировали, переводили в суспензию и рассевали по 100 мкл в 96- луночные планшеты Costar. Исходные растворы Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa 50 мг/мл вносили в лунки до разведения 1:10, 1:20 и 1:100.
Для моделирования гипоксии в лунки планшета добавляли растворы цианида Na (NaCN) и динитрофенола (ДНФ) до конечных концентраций 0,2 мМ и 0,5 мМ соответственно, которые, согласно литературным данным (Чурилова И.В. и др., 2002), являются субтоксическими. Жизнеспособность клеток контролировалась по окрашиванию трипановым синим и составляла 85 - 90%.
Интенсивность ПОЛ определяли по уровню активных продуктов 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Из лунок планшетов, с исследуемыми веществами и клетками, инкубируемыми в течение суток, удаляли среду и последовательно добавляли по 100 мкл раствора Тритона Х-100 (0,1%.) и 100 мкл 17% водного раствора трихлоруксусной кислоты. Содержимое лунок количественно переносили в 1,5 мл пробирки Эппендорф. Образующийся осадок отделяли центрифугированием в течение 10 мин при 4 000 об/мин.
К надосадочной жидкости добавляли по 100 мкл 0,8% водного раствора ТБК и помещали пробы на 10 мин в кипящую водяную баню. В качестве контроля использовали пробы, содержащие вместо надосадочной жидкости раствор Хенкса. После развития розовой окраски пробы охлаждали до комнатной температуры, переносили по 200 мкл в луночные планшеты и измеряли оптическую плотность при 530 нм на анализаторе «Пикон», сопоставляя её с контрольной пробой. Результаты выражали в % от контроля. Использовалось по 5 образцов на каждую точку.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью t критерия Стьюдента.
Введение в инкубационную среду образцов 5, 12 и 14 приводило к достоверному снижению уровня ТБК-активных продуктов в условиях гипоксии, индуцированной NaCN и ДНФ.
Таким образом, образцы 5, 12 и 14 не влияют на уровень ПОЛ при их суточной инкубации остеобластов и фибробластов. В условиях экспериментальной гипоксии, вызванной субтоксическими дозами NaCN и ДНФ, изучаемые образцы 5, 12 и 14 снижают уровень ТБК-активных продуктов в клетках, нормализуют протекающие с участием свободных радикалов окислительные процессы и предупреждают разрушение биомембран клеток, связанное с активацией ПОЛ.
ВЫВОДЫ
1. Дана биоморфологическая характеристика лекарственных растений провинции Нгеан Вьетнама Homalonema occulta (Lour.) Schott., Nelumbo nucifera Gaertn., Scoparia dulcis L., Stemona tuberosa Lour., Syzygium jambolana DC., Psychotria montana Blume, Ehretia asperula Zoll. & Moritzi, Erythropalum scandens Blume, Hedyotis diffusa Willd., Symplocos glomerata King ex C.B. Clarke, Sargentodoxa cuneata (Oliv.) Rehder et Wils., Symplocos cochinchinensis (Lour.) S. Moore, Pseuderanthemum palatiferum (Nees) Radlk
2. На биологических моделях маркерной диагностики установлена цитотоксическая активность в отношение опухолевых клеток HeLa (рак шейки матки человека) и МCF-(рак молочной железы) у экстрактов растений Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa.
3. В условиях экспериментальной гипоксии, вызванной субтоксическими дозами NaCN и ДНФ экстракты растений E. scandens, P. palatiferum, H. diffusa снижали уровень ТБК-активных продуктов в клетках, нормализовали протекающие с участием свободных радикалов окислительные процессы и предупреждали разрушение биомембран клеток, связанное с активацией ПОЛ.
4. Полученные результаты влияния экстрактов лекарственных растений E. scandens, P. palatiferum, H. diffusa на жизнеспособность опухолевых клеток, их сродства к участкам специфического связывания прогестерона позволили предположить наличие у экстрактов Erythropalum scandens и Pseuderanthemum palatiferum гестагенной активности.
Практические рекомендации
Лекарственные растения Erythropalum scandens, Pseuderanthemum palatiferum, Hedyotis diffusa произрастающих в Нгеан провинции Вьетнама можно рекомендовать для оценки в фармакологии в качестве средств обладающих противоопухолевой и антиоксидантной активностью гормонозависимых опухолей рак шейки матки и молочной железы человека.
СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Зунг Н.А. Исследование разнообразия высших растений в деревне Мон-шон - буферная зона национального парка Пу-мат, провинция Нгеан. Магистерская дисертатция, Винь университет.- Вьетнам, 2002.- 84 c.
2. Зунг Н.А. Изучение ботанических характеристик и химического состава рода Литза (Litsea) во Вьетнаме / Н.А. Зунг, Ч.Д. Тьанг, Н.С. Зунг // Материалы I Всевьетнамской конф.-школы “Экологии и биоресурсов”.- Вьетнам, 2005.- С.637-642.
3. Сьау Д.Т.М.. Недревесные лесные ресурсы в буферной зоне национального парка Пу-мат, провинция Нгеан и существования эксплуатации и управления / Д.Т.М. Сьау, Н.А. Зунг // Фундаментальные вопросы исследования в биологических наук. Изд-во науки и техники, Ханой.- Вьетнам, 2005.- С.72-75.
4. Зунг Н.А. Обновленные данные о видовом составе семейства бобовые (Fabaceae) в национальном парке Пу-мат, провинция Нгеан / Н.А. Зунг, Б.Т.Т. Хьиен // Научный журнал университета Винг.- Вьетнам, 2006.- № 2[А] - С.59-63.
5. Зунг Н.А. Современное состояние использования лекарственных растений в коммуне Маудык, Конкуонг район, провинция Нгеан / Н.А. Зунг, Н.Ч. Ньа, Л.К. Выонг // Некоторые исследования в биологических наук. Изд-во науки и техники Ханой.- Вьетнам, 2006.- С.61-65.
6. Зунг Н.А. Обновленные данные о видовом составе семейства молочайные (Euphorbiaceae) в буферной зоне национального парка Пу-Мат, провинция Нгеан / Н.А. Зунг, Н.Т. Май // Некоторые исследования в биологических наук. Изд-во науки и техники, Ханой.- Вьетнам, 2006.- С.66-70.
7. Епинетов М.А. Фармакологическая кардиопротекция: итоги и перспективы / М.А. Епинетов, Н.Л. Шимановский, Н.А. Зунг // Материалы II Всероссийской конф.-школы «Высокореакционные интермедиаты химических реакций».- Астрахань, 2007.- С.14.
8. Епинетов М.А. Сравнительная характеристика использования лекарственного растительного сырья России и Вьетнама / М.А. Епинетов, Н.А. Зунг // Материалы III Всероссийской конф.-школы с международным участием «Высокореакционные интермедиаты химических реакций».- Астрахань, 2008.- C.28.
9. Епинетов М.А. Характеристика лекарственного растительного сырья России и Вьетнама / Епинетов М.А, Н.А. Зунг // Материалы международной конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря и водоемов внутреннего стока Евразии».- Астрахань, 2008.- С.255-257.
10. Епинетов М.А. Перспективы применения биологически активных веществ лекарственных растений Syzygium jambolana DC. и Stemona turbelosa Lour. в Нгеан провинции Вьетнама / М.А. Епинетов, Т.Л. Вереиная, В.Е. Турищев, Н.Ч. Ньа, Н.А. Зунг // Материалы международной конф. «Фундаментальные и прикладные проблемы получения новых материалов».- Астрахань, 2009.- С.30-32.
11. Епинетов М.А. Ботанический характеристики и использование лекарственного растения лотос орехоносный (Nelumbo nucifera Gaertn.) в Нгеан провинции Вьетнама / М.А. Епинетов, А.О. Толиба, Н.В. Медведева, Т.Л. Вереина, В.Е. Турищев, Н.А. Зунг // Материалы международной научно-практической конф. «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования».- Астрахань, 2009.- С.167-169.
12. Епинетов М.А. Приготовление экстрактов лекарственных растений вербены (Verbena officinalis) и гарцинии камбоджи (Garcinia cambogia) для пищевой промышленности / М.А. Епинетов, Н.В. Медведева, Т.Л. Вереина, В.Е. Турицев, А.О. Толиба, Н.А. Зунг // Материалы международной научно-практической конф. «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования».- Астрахань, 2009.- С.193-196.
13. Epinetov M.A. Prospects for the use of biologically active substances of medicinal plant Stemona taberosa Lour. from Vietnam / M.A. Epinetov, N.L. Shimanovsky, N.V. Medvedeva, N.A. Dung, O.A. Kiseleva, A.N. Ysenko, N.N. Firsov // Материалы 7-й международной научно-практической конф. «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины».- Астрахань, 2010.- С.11-14.
14. Епинетов М.А. Phytochemical characteristics and application of herb Syzygium jambolana DC. (Гвоздник джамболан) in national medicine in Vietnam / М.А. Епинетов, Н.А. Зунг // Материалы международной научной конф. Инновационные технологии в управлении, образовании, промышленности «АСТИНТЕХ-2010».- Астрахань, 2010.- (в печати).
15. Dung N.X. Chemical composition of the leaf oil of Michelia balansae (A.DC) Dandy from Vietnam / N.X. Dung, T.D. Thang, N.A. Dung // Journal of Essential Oil Bearing Plants, 2005.- №7 [4].- P.34-36.
16. Dung N.X. Chemical Composition of the Leaf Oil of Evodia calophylla Guill. from Vietnam / N.X. Dung, T.D. Thang, N.A. Dung // Journal of Essential Oil Research, (USA), 2009.- Vol. 21.- P.1-2.
17. Dung N.A. Volatile Constituents of the Leaf Oil of Alchornea tiliifolia (Benth.) Muell. (Family Euphorbiaceae) from Vietnam / N.A. Dung, T. D. Thang, H.V. Luu, N.X. Dung // Journal of Essential Oil Research, (USA), 2009.- Vol. 21.- P.3-4.
18. Епинетов М.А. Перспективы применения биологически активных веществ лекарственного растения Скопария сладкая (Scoparia ducils L.) произрастающей в провинции Нгеан Вьетнама / М.А. Епинетов, Н.А. Зунг // Естественные науки, 2009.- №4 [29].- C.66-69.
19. Епинетов М.А. Биологически активные вещества корневищ лекарственного растения Гомалонема душистая (Homalonema aromatica Schott.) и перспективны их применения в фармацевтике / М.А. Епинетов, Н.А. Зунг // Естественные науки, 2010.- (в печати).
Размещено на Allbest.ru
...Подобные документы
Изучение действия и применения известных фармакопейных лекарственных растений. Исследование принципов и особенностей составления растительных сборов для профилактики и лечения заболеваний. Обзор новых технологий упаковки и хранения лекарственных трав.
реферат [32,2 K], добавлен 19.05.2012Классификация мочегонных средств, их разновидности и функциональные особенности. Преимущества растительных лекарственных средств перед синтетическими препаратами. Лекарственные растения и препараты растительного происхождения, применяемые в нефрологии.
курсовая работа [108,6 K], добавлен 06.10.2015Сравнение между синтетическими и растительными препаратами, их недостатки и преимущества. История изучения и применения лекарственных растений, многовековой опыт медицины. Сбор, приготовление, хранение и применение растительных лекарственных препаратров.
статья [22,3 K], добавлен 09.10.2009Ботаническая характеристика, ареал распространения, химический состав, особенности сушки и заготовки лекарственных растений, применяемых для коррекции климактерических расстройств. Фармакологические эффекты лекарственных растений и механизм их действия.
курсовая работа [1,5 M], добавлен 02.11.2015Биологически активные вещества лекарственных растений. Правила сбора, сушки и хранения. Применение лекарственных растений в виде различных лекарственных форм и препаратов. Лекарственные растения семейства губоцветные, их практическое применение.
курсовая работа [42,7 K], добавлен 22.09.2009Характеристика витаминов и лекарственных растений, их применение. Лекарственные растения Западной Сибири (облепиха крушиновая, черника обыкновенная, шиповник коричный) как источники витаминов. Особенности сбора, заготовки и хранения лекарственного сырья.
контрольная работа [24,4 K], добавлен 25.10.2010Характеристика основных принципов фитотерапии при длительном лечении хронических болезней в детской практике и геронтологии. Исследование правил сбора, обработки и дозирования лекарственных растений. Анализ фармакологических свойств растительных сборов.
дипломная работа [92,3 K], добавлен 19.05.2012Анализ механизмов поражения гепатоцитов. Сущность гепотапротекторного действия веществ различных растений. Общая характеристика лекарственных растений, обладающих гепатопроторным действием и содержащих флаволингнаны, флавоноиды и жирорастворимые витамины.
курсовая работа [45,5 K], добавлен 01.06.2010Лекарственные растения и их главные вещества. Возникновение и развитие народной медицины. Календарь сбора лекарственных растений. Эфирные масла, общие понятия и свойства. Мировое производство эфирные масел, их применение и фармакологическое действие.
реферат [33,5 K], добавлен 28.11.2010Категории лекарственных растений. Получение и использование лекарственных растений с лечебными или профилактическими целями в народной, медицинской или ветеринарной практике. Лекарственная ценность женьшеня, лимона, апельсина и ромашки ободранной.
реферат [1,6 M], добавлен 22.12.2010Морфолого-анатомическая характеристика лекарственных растений, произрастающих в Приднестровском регионе, которые успокаивают и стимулируют центральную нервную систему. Химический состав и применение лекарственных растений. Заготовка и хранение сырья.
курсовая работа [34,4 K], добавлен 29.07.2010Понятие и общая характеристика лекарственных растений, их классификация и основные свойства, физико-химическое описание. Группы лекарственных растений, используемых в пищевой промышленности, а также в парфюмерии, ценящиеся в них свойства, характеристики.
реферат [37,4 K], добавлен 07.12.2014История использования лекарственных растений в медицине. Фармакогнозия как наука о лекарственных растениях. Содержание биологически активных веществ в лекарственных растениях. Виды лекарственных растений семейства губоцветные Пензенской области.
курсовая работа [6,2 M], добавлен 22.09.2009Изучение лекарственных растений, входящих в состав шампуней. Исследование принципов действия косметических средств. Сравнение состава трех средств для мытья головы. Механизм действия кондиционеров для волос. Классификация поверхностно-активных веществ.
курсовая работа [40,6 K], добавлен 19.06.2013Общая характеристика алкалоидов как природных азотсодержащих соединений основного характера, образующихся в растительных организмах. Синтетические способы получения пуриновых алкалоидов. Лекарственные растения и сырье, содержащие пуриновые алкалоиды.
реферат [478,4 K], добавлен 26.06.2014Классификация, этиология, патогенез, диагностика и лечение мочекаменной болезни. Лекарственные растения, содержащие антрахиноны, сапонины, фенольные соединения, флавоноиды. Фармакологические свойства и применение в медицине лекарственных растений.
реферат [334,9 K], добавлен 20.11.2015Механизм диуретического действия. Эфирномасличные растения-диуретики. Диуретический эффект сапониновых лекарственных растений. Содержание сапонинов и силикатов (кремневой кислоты) в хвоще полевом и горце птичьем. Растительные литолики и антисептики.
презентация [2,0 M], добавлен 19.02.2012Основные принципы применения лекарственных растений в детской практике. Фитотерапия желудочно-кишечных заболеваний, кожных болезней и простудных заболеваний грудных детей. Лекарственные растения, применение которых ограничено у детей раннего возраста.
курсовая работа [6,3 M], добавлен 24.10.2013Обзор лекарственных растений, оказывающих кардиотоническое действие, их распространение, правила заготовки, хранения, химический состав и Фармакологические свойства. Кардиотонические гликозиды и их применение в медицине, показания и противопоказания.
презентация [1,9 M], добавлен 16.09.2014Общая характеристика сапонинов, спектр их фармакологического действия. Характеристика лекарственных растений, содержащих сапонины: астрагал шерстистоцветковый, женьшень, заманиха, аралия. Лекарственные растения и фитопрепараты, содержащие сапонины.
курсовая работа [2,7 M], добавлен 26.08.2017
