Иммунологические показатели при прогрессировании опухолевой патологии шейки матки, ассоциированной с вирусом папилломы человека

Размещено на http://www.allbest.ru/

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПРИ ПРОГРЕССИРОВАНИИ ОПУХОЛЕВОЙ ПАТОЛОГИИ ШЕЙКИ МАТКИ, АССОЦИИРОВАННОЙ С ВИРУСОМ ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология 14.01.12 - онкология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Орнер Ирина Юрьевна

Челябинск 2010

Работа выполнена в НИИ иммунологии и на кафедре онкологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Телешева Лариса Федоровна

доктор медицинских наук, профессор Жаров Александр Владимирович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Аклеев Александр Васильевич

доктор медицинских наук, профессор Гамза Валерий Николаевич

Ведущая организация: Институт иммунологии и физиологии УрО РАН, г. Екатеринбург

Защита состоится «____» декабря 2010 года в ______ часов на заседании диссертационного совета Д 208. 117 03 при ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Автореферат разослан « »___________ 2010г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Тишевская Наталья Викторовна.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В общей структуре заболеваемости органов репродуктивной системы у женщин России рак шейки матки (РШМ) занимает 3-е место после рака молочной железы и рака тела матки. Ежегодно в России регистрируется около 12000 вновь заболевших и умирает около 6000 женщин. Стандартизированный показатель заболеваемости на 2008 г. составил 11,2 на 100 000 населения (Чиссов В.И., 2009). Оценивая современное состояние и перспективы онкологической заболеваемости в России, многие онкологи отмечают существенный рост показателей запущенности РШМ (Максимов С.Я., Гусейнов К.А., 2004). Так по Челябинской области количество первично-выявленных больных с III-IV стадией РШМ составило в среднем 50,2% за период с 1998 по 2008 годы (Важенин А.В., 2010). Кроме того, в последнее десятилетие четко прослеживается увеличение заболеваемости у молодых женщин до 40 лет. Особенно заметно повышение заболеваемости РШМ у женщин до 29 лет - ежегодный прирост составляет 2,1% (Давыдов И.И., Аксель Е. М., 2002; Чиссов В.И, 2008, 2009; Шакирова Э.Ж., 2007).

В настоящее время вирус папилломы человека (ВПЧ) считается инициирующим фактором в генезе РШМ. Папилломавирусная инфекция (ПВИ) чрезвычайно сложна для диагностики и терапии, так как требует длительного обследования и лечения половых партнеров. Особенно сложна для диагностики латентная форма ПВИ, при которой морфологических изменений в ткани не выявляют (Кузнецова Ю.Н., 2006; Минкина Г.Н. и др., 1982, 2001). Более чем у 15% женщин ВПЧ обнаруживается в эпителии шейки матки, хотя клиническая симптоматика заболевания отсутствует (Bosch F.X. et al., 1994).

Известно, что только у незначительной части женщин, инфицированных ВПЧ, развивается рак шейки матки, поэтому существуют факторы или кофакторы, способствующие злокачественному прогрессированию опухоли (Аполихина И. А., 2002). К кофакторам относят генетические факторы, способные модулировать эффект ВПЧ, иммуносупрессию, эндогенные гормональные факторы (Bosch F. et al., 1994, 1995, 1997; Syrjдnen K., 2008). У женщин с нормальной работой механизмов контроля над пролиферацией происходят дегенерация и последующее отторжение поврежденных клеток. При нарушении механизмов контроля, тесно связанных с иммуносупрессией, инфекция прогрессирует, и развиваются субклиническая, а затем и клиническая стадии заболевания (Sillman F., Stanek A., Sedlis F., 1984). Поэтому одной из проблем практической гинекологии является тщательный отбор больных с повышенным риском возникновения цервикального рака. Морфологические изменения шейки матки, представляющие собой предраковые состояния, обозначаются как плоскоклеточные интраэпителиальные поражения (ПИП), squamous intraepithelial lesions, цервикальная интраэпителиальная неоплазия (ЦИН) или дисплазия (Сычугов Г.В., 2006).

Сведения об изменениях показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета при ПВИ и отдельных стадиях канцерогенеза прослеживаются в работах многих авторов (Аполихина И. А., 2002; Кулаков В. И., 2004; Прилепская В.Н., 2007; Роговская С.И., 2008; Сухих Г.Т., 1997; Bais A.G., 2005; Manickam A., 2007; Patel S., 2009). Несмотря на это, особенности иммунологического статуса при различных стадиях РШМ остаются неизученными. Поэтому процесс изучения закономерностей и механизмов взаимодействия иммунной системы в процессе канцерогенеза, ассоциированного с ВПЧ, поможет разработать в будущем принципы его регуляции и оптимизации диагностики РШМ.

Цель исследования

Установление особенностей показателей системного, местного иммунитета, сравнение уровней антигена плоскоклеточной карциномы (SCCA) в зависимости от стадии неопластического процесса шейки матки, ассоциированного с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска, и обоснование возможности использования иммунологических показателей для диагностики тяжелой дисплазии и рака шейки матки.

Задачи исследования

1. Оценить состояние системного иммунитета и сравнить уровни антигена плоскоклеточной карциномы у женщин с ЦИН III и различными стадиями рака шейки матки, ассоциированными с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска.

2. Изучить иммунологические показатели цервикального секрета у женщин с ЦИН III и различными стадиями рака шейки матки, ассоциированными с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска.

3. Определить взаимосвязи между иммунологическими показателями системного, местного иммунитета и уровнями антигена плоскоклеточной карциномы у женщин с ЦИН III и различными стадиями рака шейки матки, ассоциированными с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска.

4. Разработать иммунологические критерии для дифференциальной диагностики ЦИН III и рака шейки матки, ассоциированных с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска.

Научная новизна

У больных тяжелой дисплазией и РШМ впервые выявлены особенности изменения иммунного статуса, связанные с прогрессией опухолевой патологии. иммунитет карцинома шейка матка

Независимо от стадии неопластического процесса шейки матки выявлены однонаправленные изменения факторов системного иммунитета: увеличение числа CD10+ клеток, снижение CD3+, CD4+ и NK-клеток, повышение уровней ИНФ-б, ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 и снижение уровня ФНО-б в сыворотке крови.. Обнаружены выраженные изменения в системе локальной иммунной защиты: повышение общего количества лейкоцитов, угнетение внутриклеточного кислородозависимого метаболизма и резерва бактерицидной функции нейтрофилов, усиление лизосомальной активности, а также снижение активности и интенсивности фагоцитоза, повышение уровня sIgA и выраженное снижение уровней ИНФ-б и ФНО-б при росте концентраций ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-10 цервикальной слизи.

Установлено, что уровни SCCA до начала лечения зависят от стадии заболевания, при этом, уровень SCCA значительно возрастает у больных РШМ I стадии относительно показателя группы больных Cr. in situ. У обследуемых женщин обнаружены взаимосвязи между уровнями SCCA и показателями системного и местного иммунитета, что подтверждает сопричастность данного гликопротеина к иммунологическим процессам и, следовательно, значимость онкомаркера для диагностики РШМ.

Выявлены особенности иммунного статуса, характерные для определенной стадии заболевания. У больных ЦИН III выявлено увеличение относительного количества лимфоцитов при уменьшении числа нейтрофилов крови, наблюдается увеличение CD56+ и CD25+ лимфоцитов периферической крови, повышение общего количества лейкоцитов и лизосомальной активности нейтрофилов, снижение показателей НСТ-теста, активности и интенсивности фагоцитоза, повышение содержания ИНФ-б, ИЛ-10 и снижение ФНО-б.периферической крови; повышение уровня sIgA цервикальной слизи, снижение уровней ИНФ-б и ФНО-б при росте концентраций ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-10 в цервикальной слизи; у женщин с Cr. in situ выявлено сокращение количества CD3+, CD4+, CD25+ лимфоцитов, снижение CD95+, CD16+, CD56+ клеток и соотношения CD4+/ CD8+ и повышение уровня ИЛ-10 в сыворотке крови. В системе локальной защиты обнаружено снижение количества жизнеспособных нейтрофилов и повышение уровней ИНФ-б и ИЛ-4 цервикальной слизи; У больных РШМ I стадии выявлено увеличение относительного числа HLA-DR+ лимфоцитов и снижение концентрации ИНФ-б и IgM крови, со стороны местного иммунитета - снижение уровня IgM, повышение уровня IgG и рост концентрации ИЛ-2 цервикальной слизи; у женщин с РШМ II-III стадий обнаружено снижение количества HLA-DR+ и CD11b+ лимфоцитов, рост уровней ИНФ-г, ИЛ-2 и ИЛ-10 периферической крови, также выявлено повышение общего количества лейкоцитов, уровней IgM, IgG, ИЛ-4 и ИЛ-10 цервикальной слизи.

На основании проведенного иммунологического исследования, с помощью дискриминантного метода математического анализа с использованием иммунологических показателей разработан способ диагностики тяжелой дисплазии и РШМ, ассоциированных с ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР).

Теоретическая и практическая и значимость

Полученные сведения об изменении и взаимосвязях иммунологических показателей существенно расширяют представления об особенностях иммунного статуса больных при прогрессировании опухолевой патологии шейки матки. Разработанная математическая модель, построенная на основании иммунологических показателей системного и местного иммунитета, позволяет использовать её как дополнительный метод, применяемый для дифференциальной диагностики тяжелой дисплазии и ранних стадий рака шейки матки, ассоциированных с ВПЧ ВКР с достаточно высокой точностью.

Положения, выносимые на защиту

1. При ЦИН III и раке шейки матки регистрируются изменения всех звеньев системного иммунитета, характер которых зависит от стадии неопластического процесса. Уровень SCCA до начала лечения рака шейки матки зависит от стадии заболевания.

2. Выявлены выраженные изменения иммунологических показателей цервикальной слизи у женщин с ЦИН III и различными стадиями рака шейки матки, ассоциированными с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска.

3. Прогрессирование опухолевой патологии шейки матки сопровождается не только изменением показателей системного и местного иммунитета, но и изменением взаимосвязей между ними.

4. Разработанная математическая модель с использованием иммунологических показателей периферической крови и цервикальной слизи позволяет использовать иммунологические дифференциально-диагностические критерии для ранних стадий неопластического процесса шейки матки.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы на 1-ом Российско-Чешском медицинском форуме (Челябинск, 2006), на научно-практической конференции «Репродуктивное женское здоровье. ВПЧ инфекция» (Челябинск, 2007), на X Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009), на Российской научно-практической конференции «Стратегия развития онкорадиологической службы в регионах РФ» (Челябинск, 2010).

Публикации По теме диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе 8 в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего работы 129 отечественных и 89 иностранных авторов. Диссертация изложена на 161 страницах компьютерного текста и включает 28 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для решения поставленных задач за период с 2005 по 2009 год в НИИ иммунологии и на кафедре онкологии ГОУ ВПО Челябинской государственной медицинской академии Росздрава было проведено иммунологическое обследование 83 женщин, которые находились на лечении в государственном лечебно-профилактическом учреждении Челябинском окружном онкологическом диспансере.

Критериями включения пациентов в данное исследование являлись:

1. Клинически и морфологически подтвержденный диагноз ЦИН III, Cr. in situ и РШМ с I-III стадию.

2. Верифицированное методом ПЦР наличие ДНК ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР): 16, 18, 31, 33 типов в соскобах из цервикального канала.

3. Возраст пациенток от 20-54 лет

4. Индекс качества жизни по шкале Карновского не менее 80%.

5. Отсутствие значимой экстрагенитальной патологии (сахарный диабет, аутоиммунные заболевания, обострение хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта, носоглотки и урогенитального тракта).

6. Информированное согласие пациенток на участие в исследовании.

Всего в исследование было включено 83 пациентки, которые согласно положениям Международной классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем 10-го пересмотра (МКБ-10, 1995), Классификации опухолей Всемирной организации здравоохранения: Патология и генетика опухолей молочной железы и женских половых органов (Tavasolli F.A., Devilee P., 2003) и Классификации злокачественных опухолей TNM (шестое издание, 2002), разделили на 4 группы: группа с ЦИН III, в которую вошли 20 пациенток; группу с преинвазивным РШМ (Cr. in situ) составили 20 женщин; группа с РШМ I стадии (T1aN0M0, T1bN0M0), в которую вошли 20 пациенток; группу с РШМ II-III стадий (Т2аN0М0, Т2bN0М0, Т2bN1М0, Т3аN0М0, Т3аN1М0, Т3bN0М0) составили 23 женщины.

Контрольную группу, полученную методом случайной выборки, составили 20 женщин с латентной ПВИ, при обследовании которых с применением клинических, инструментальных и морфологических методов исследования изменений в шейке матки и иной гинекологической патологии выявлено не было.

Возраст больных варьировал от 20 до 54 лет. Средний возраст женщин составил 39,2 ± 1,7. Группа контроля и группы больных ЦИН III и РШМ были сопоставимы по возрасту.

Все больные ЦИН III и раком шейки матки прошли обязательный объем диагностических исследований, который включал в себя:

1. Клинические методы (сбор анамнеза, методы визуального и физикального онкологического обследования, оценку общего состояния по шкале Карновского, определение распространенности плоскоклеточного рака согласно Международной классификации TNM). Обследование проводилось врачом онкологом-гинекологом.

Инструментальные: УЗИ, УЗДГ сосудов малого таза, КТ, МРТ- по показаниям. При отсутствии визуальных признаков опухолевой ткани и у женщин контрольной группы проводилась прицельная биопсия шейки матки под контролем кольпоскопа. При наличии визуальной опухоли использовали ножевую биопсию. Методика проведения исследования была стандартной и осуществлялась врачом-гинекологом (Прилепская В.Н., 1997).

2. Морфологическое исследование цервикобиоптатов. Исследование и постановка диагноза производились специалистом-гистологом в лаборатории ГЛПУ ЧОКОД.

3. Молекулярно-биологические: для определения качественного состава микрофлоры половых путей и типирования ВПЧ ВКР пациенткам осуществлялось молекулярно-биологическое исследование методом ПЦР

4. Иммунологические методы: для оценки иммунологических показателей у женщин исследовались периферическая кровь и цервикальная слизь. В периферической крови было определено абсолютное число лейкоцитов, абсолютное и относительное число нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов и их субпопуляций, оценена функциональная активность нейтрофилов, концентрации иммуноглобулинов, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и общая активность комплемента. Также определялись концентрации онкомаркера SCCA и цитокинов: ИНФ-б, ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ФНО-б. В цервикальной слизи определяли общее количество лейкоцитов, абсолютное и относительное содержание жизнеспособных клеток, функциональную активность нейтрофилов. Также были определены уровни иммуноглобулинов А, М, G, секреторного иммуноглобулина А и концентрации цитокинов: ИНФ-б, ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10, ФНО-б.

Было проведено:

- определение субпопуляционного состава лимфоцитов крови с помощью иммунофлюоресцентного анализа в модификации Сибиряка С. В. и соавт. (1997) с пременением моноклональных антител производства НПЦ «МедБиоСпектр», Москва;

- определение уровня SCCA в сыворотке крови методом ИФА, с использованием соответствующей тест-система CanAg SCC EIA производства FUJIREBIO™ Diagnostics, Швеция;

- оценка функциональной активности нейтрофилов с исследованием фагоцитарной и лизосомальной активности (Фрейдлин И.С., 1986) и кислородозависимого метаболизма (Маянский А.Н., Виксман М.К., 1979);

- определение концентрации иммуноглобулинов в цервикальной слизи и в сыворотке крови методом ИФА, с использованием иммуноферментных тест-системы ООО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск);

- определение ЦИК методом, предложенным В.Гашковой и соавт. (1978);

- определение общей активности комплемента по 50% гемолизу (Резникова Л.С., 1967);

- определение уровней цитокинов сыворотке крови и цервикальной слизи методом ИФА, с использованием соответствующих тест-систем ТОО «Цитокин» (г. Санкт-Петербург).

5. Статистические методы: Результаты оценивали с помощью пакета статистических программ «Statistica for Windows 6.0» с вычислением средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±m). Различия между сравниваемыми группами считали достоверными при p ? 0,05, по непараметрическим критериям Mann-Whitney, Wald-Wolfowitz. Для сравнения качественных признаков и процентных соотношений использовали критерий ч² и точный критерий Фишера. Определение взаимосвязей показателей проводили с помощью корреляционного анализа по Spearmen. Для построения диагностической модели использовали пошаговый дискриминантный анализ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При поступлении в ГЛПУ ЧОКОД у 69 (83,1%) пациенток преобладали жалобы на кровянистые выделения из половых путей, у 8 (9,6%) из них были обильные кровянистые выделения со сгустками, у 31 (37,3%) беспорядочные кровянистые выделения, у 30 (36,1%) контактные кровянистые выделения. На обильные водянистые со зловонным запахом бели предъявляли жалобы 38 (45,7%) женщин, боли внизу живота - 47 (56,6%), поясничной области - 12 (14,5%), 38 (45,7%) на слабость и недомогание и только 2 (2,4%) человека жалоб не предъявляли.

Сопутствующие гинекологические заболевания были отмечены у 42 (50,6%) пациенток. Наиболее часто встречались миома тела матки у 15 (18,1 %) больных, хронический аднексит и эндометрит - 10 (13,2%), хронический цервицит - 13 (15,7%), гиперпластические процессы эндометрия - 3 (3,6%). У 36 (43,4%) пациенток в анамнезе имелась эрозия шейки матки.

Распределение больных по стадиям было следующим: рак шейки матки Ia (Т1aN0М0) диагностирован у 12 (60%) пациенток; Ib (ТbN0М0) у 8 (40%). По системе TNM II и III стадия распределялась следующим образом: с метастазами в регионарные лимфатические узлы: Т2bN1М0 у 1 (4,3%) женщины и Т3аN1М0 у 1 (4,3%) пациентки и. без метастазов: Т2aN0М0 у 11 (47,8%), Т2bN0М0 у 4 (17,4%), Т3aN0М0 у 5 (21,7 %), Т3bN0М0 у 1 (4,3%).

У всех пациенток клинический диагноз рака шейки матки имел морфологическое подтверждение по Гистологической классификации опухолей шейки матки ВОЗ (2003): плоскоклеточный ороговевающий (keratinizing) у 16 (19,3%) и неороговевающий (nonkeratinizing) у 65 (78,3%) больных, низкодифференцированный из базальных клеток (Basaloid) у 2 (2,4%) женщин с РШМ II-III стадий. Форма роста первичной опухоли при РШМ у 11 (25,6%) больных была экзофитной, у 7 (16,3%) - эндофитной и у 25 (58,1%) пациенток - смешанной.

По результатам молекулярно-биологического исследования (ПЦР), у пациенток контрольной группы патогенных микроорганизмов из цервикального канала выявлено не было. Из условно-патогенных бактерий из цервикального канала была выделена Ureaplasma urealyticum у 4 (20%) женщин. У пациенток с ЦИН III и РШМ из цервикального канала выделялись следующие условно-патогенные микроорганизмы: Ureaplasma urealyticum 24 (28,9%), Mycoplasma hominis 8(9,6%), Mycoplasma genitalium 1 (1,2%), Gardnerella vaginalis 12 (14,5%). Патогенных микроорганизмов (Chlamydia trachomatis), вирусов простого герпеса и цитомегаловирусов у обследованных больных выявлено не было. Нами зарегистрированы ассоциации условно-патогенных микроорганизмов у женщин с ЦИН III и Cr. in situ (10% от общего количества больных в каждой из этих групп).

Выявлено, что при распределении генотипов ВПЧ ВКР у всех обследованных женщин преобладает 16 генотип ВПЧ в составе моно- и микстинфекции (р < 0,001). У больных тяжелой дисплазией и РШМ преобладает моноинфекция по сравнению со смешанной папилломавирусной инфекцией (р < 0,001).

Результаты, полученные при изучении клеточного состава периферической крови, выявили, что у женщин с тяжелой дисплазией шейки матки наблюдается относительный количественный рост числа лимфоцитов при относительном уменьшении содержания нейтрофилов. По данным некоторых авторов, соотношение числа нейтрофилов и лимфоцитов до оперативного лечения является важным прогностическим признаком выживаемости онкологических больных. Считается, что коэффициент соотношения числа нейтрофилов и лимфоцитов, превышающий значение 5, связан с худшим прогнозом (Cho H., Hur H.W., Kim S.W. et al. 2009; Cook E.J., Goulder F. et al., 2005; Walsh S.R., Kishi Y., Kopetz S., Chun Y.S. et al., 2009). Следовательно, рост числа лимфоцитов крови отражает активацию и сохранение эффективности функций противоопухолевого иммунитета на стадии предрака шейки матки. При РШМ II-III определяется достоверное снижение числа лимфоцитов, как в относительном, так и в абсолютном значениях, что указывает на истощение резерва основного звена противоопухолевой защиты.

Установлено, что показатели субпопуляционного состава лимфоцитов на всех стадиях опухолевой прогрессии имеют однонаправленные изменения (таблица 1), выражающиеся в снижении количества CD3+, CD4+ и увеличении числа CD10+ лимфоцитов. Выявленные изменения отражают работу противоопухолевого иммунитета и связаны как со снижением относительного содержания клеток, несущих эти рецепторы, так и с тенденцией к снижению относительного и абсолютного числа лимфоцитов крови по мере прогрессирования опухоли.

Показатели больных ЦИН III при сравнении с контрольными значениями характеризуются ростом числа CD10+, CD56+, CD34+, CD25+ лимфоцитов. Изменения субпопуляционного состава лимфоцитов у пациенток с тяжелой дисплазией могут отражать как активационные процессы в системном иммунитете, так и супрессивное воздействие, связанное с CD4+25+ лимфоцитами, способствующее опухолевой прогрессии (Мейл Д., 2007).

Таблица 1

Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у обследованных женщин

Примечание к таблицам 1- 7

p1-2,3,4,5 - статистическая достоверность различий показателей больных от показателей группы контроля;

p2 -3- статистическая достоверность различий показателей группы женщин с Cr. in situ от показателей группы пациенток с ЦИН III;

p3-4 - статистическая достоверность различий показателей группы женщин с РШМ I стадии от показателей группы пациенток с Cr. in situ;

p4 -5 - статистическая достоверность различий показателей группы женщин с РШМ II - III стадий от показателей группы пациенток с РШМ I стадии;

n- число обследованных женщин. Значение показателя представляет собой среднее ± ошибка среднего;

Полужирным шрифтом выделены достоверные отличия при межгрупповом анализе.

У больных РШМ II-III стадий снижается количество CD8+ и CD16+ клеток, свидетельствующее о нарушении эффекторных и регуляторных механизмов противоопухолевого иммунитета.

Выявлено, что у пациенток с Cr. in situ по сравнению с показателями при ЦИН III снижение большинства количества кластеров дифференцировки CD3+, CD4+, CD16+, CD25+, CD56+, CD95+ клеток и соотношения CD4+/CD8+. Выявленные изменения отражают реакцию иммунной системы в ответ на необратимые цитопатологические изменения в эпителии шейки матки. Показатели начальной стадии инвазивного рака характеризуются ростом числа лимфоцитов с HLA-DR+, более поздних стадий - снижением количества CD11b+ клеток, CD34+, HLA-DR+ лимфоцитов и ростом содержания пула клеток с рецептором CD10+. Важно отметить повышение CD4+/CD8+ при РШМ II-III стадий, связанное с падением числа цитотоксических лимфоцитов, что подтверждает дезинтеграцию иммунных механизмов на поздних стадиях неопластического процесса.

При изучении показателей функциональной активности нейтрофилов периферической крови обнаружен рост фагоцитарного числа у больных ЦИН III относительно контрольной группы и снижение активированного НСТ-теста у пациенток с РШМ II-III стадий относительно показателя группы с РШМ I стадии (таблица 2). В гуморальном звене системного иммунитета обнаружено снижение уровня IgM у пациенток с РШМ I стадии относительно показателя в группе женщин с Cr. in situ (таблица 3). Полученные данные указывают на вовлеченность фагоцитов крови и гуморальных факторов в иммунологический процесс, связанный с опухолевой прогрессией.

Таблица 2

Показатели функциональной активности нейтрофилов периферической крови у обследуемых женщин, (М ± m)

Таблица 3

Содержание гуморальных факторов в сыворотке крови у обследуемых женщин, (М ± m)

Результаты исследования выявили, что в группах с РШМ I стадии и РШМ II-III стадий достоверно повышались уровни онкомаркера по сравнению с группой контроля. Необходимо отметить значительное повышение SCCA у женщин с РШМ I стадии относительно группы с Cr. in situ (рис.1). Рост уровней онкомаркера при инвазивных формах рака может быть связан как с увеличением объема опухолевой ткани, так и с поражением базальной мембраны, ведущим к проникновению антигена плоскоклеточной карциномы в кровеносное русло. Отсутствие достоверных отличий уровней SCCA между показателями больных РШМ II-III стадий и РШМ I стадии может быть связано с наличием в группе больных РШМ II-III стадий женщин с низкодифференцированными формами плоскоклеточного рака, при котором не происходит повышения уровня SCCA (Yuan S.H., Liang X.F., Jia W.H., et al., 2008).

Рис 1 Уровень SCCA при различных стадиях опухолевой прогрессии шейки матки

Примечание: 1- группа контроля; 2- больные ЦИН III; 3-больные Cr. in situ; 4- больные РШМ I; 5-больные РШМ II-III;

* - статистическая достоверность различий показателей больных от показателей группы контроля;

** - статистическая достоверность различий показателей группы женщин с РШМ I стадии от показателей группы пациенток с Cr. in situ;

При изучении цитокинового профиля периферической крови выявлены однонаправленные изменения уровней цитокинов при всех стадиях опухолевой прогрессии по сравнению с показателями контрольной группы (таблица 4), выражающиеся в росте концентраций интерферонов, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 и снижении уровня ФНО-б. Характерным явилось то, что у больных с ЦИН III повышались уровни ИНФ-б, ИЛ-10, а при РШМ I стадии достоверно повышались уровни ИНФ-б, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 относительно значений контрольной группы при сниженном уровне ФНО-б. Полученные результаты могут служить свидетельством работы системного иммунитета на всех стадиях канцерогенеза с тенденцией к преобладанию уровней цитокинов Тh2 ответа. Стабильное нарастание уровней ИНФ-г может быть связано с его продукцией как Тh1-лимфоцитами, так и опухолевыми клетками (Mueller М.М., 2004).

Таблица 4

Уровень цитокинов в периферической крови у обследуемых женщин, (М ± m)

По данным некоторых авторов, рост уровней ИНФ-г и ИЛ-4 при раке эндометрия не предотвращает ангиогенез и способствует опухолевой прогрессии (Глухова Т.Н., Салов И.А., Турлупова Т.И., 2010). Уменьшение содержания в сыворотке крови ФНО-б во всех исследуемых группах относительно контрольных значений может быть связано с повышением уровня растворимой формы TNF-рецепторов, связывающих данный цитокин. Снижение уровня ФНО-б может свидетельствовать также о нарушении функционального профиля фагоцитов, NK-клеток и клеточного апоптоза (Кубанов А.А., 2005).

По мере прогрессирования неопластического процесса для каждой группы больных выявлены характерные изменения уровней цитокинов: в группе больных Cr. in situ, в отличие от показателей при ЦИН III, происходит рост уровня ИЛ-10, что указывает на усугубление нарушений в работе регуляторных Тh1-лимфоцитов и антиген-презентирующей функции макрофагов. При РШМ I стадии относительно показателей пациенток с Cr. in situ происходит снижение продукции ИНФ-б, подавляющего трансляцию белков ВПЧ, который должен оказывать противовирусный иммунитет и сдерживать развитие опухолевой трансформации. Для поздних стадий канцерогенеза характерно резкое повышение уровней ИНФ-г, ИЛ-2 и ИЛ-10, связанное с их продукцией активированными лимфоцитами, опухолевыми клетками и массированным поступлением данных цитокинов из очага неопластического процесса в кровеносное русло (Кубанов А.А., 2005; Mueller М.М., 2004).

Установлено, что существует ряд общих изменений иммунологических показателей в цервикальной слизи у обследованных пациенток при сравнении со здоровыми женщинами: повышение общего количества нейтрофилов, усиление лизосомальной активности, угнетение внутриклеточного кислородозависимого метаболизма нейтрофилов и резерва их бактерицидной функции, а также снижение активности и интенсивности фагоцитоза (таблица 5). Характерными особенностями являются: при Cr. in situ - снижение относительной жизнеспособности нейтрофилов, при РШМ I стадии - повышение фагоцитарного числа на фоне сниженных активности и интенсивности фагоцитоза, при РШМ II-III стадий - рост абсолютного количества жизнеспособных клеток. Необходимо отметить, что нейтрофилы, являясь представителями системы врожденного иммунитета, служат «первой линией» защиты от ПВИ. Поэтому снижение большинства показателей их функциональной активности при тяжелой дисплазии и РШМ указывает на нарушение эффективности работы нейтрофилов и подтверждает ведущую роль адаптивного иммунитета в противоопухолевой защите (Stern P.L., Kitchener H.C., 2009).

Показатели функциональной активности нейтрофилов у больных Cr. in situ достоверно отличались от показателей при ЦИН III снижением относительной жизнеспособности фагоцитов, у пациенток с РШМ II-III стадий от показателей группы с РШМ I стадии - нарастанием общего числа нейтрофилов. Полученные данные могут свидетельствовать как о нарушении функций фагоцитов на фоне ПВИ при тяжелой дисплазии, так и о нарастании местной воспалительной реакции у больных РШМ I стадии, сопровождающей опухолевый процесс и характеризующейся модификацией функциональной активности нейтрофилов цервикальной слизи (Мальцева В.Н., 2006; Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000).

Таблица 5

Количество и функциональная активность нейтрофилов цервикальной слизи у обследованных женщин, (М ± m)

Таблица 6

Показатели гуморальных факторов иммунитета цервикальной слизи у обследованных женщин, (М ± m)

Показатели гуморальных факторов иммунитета представлены в таблице 6. При изучении гуморальных факторов защиты цервикальной слизи у всех женщин с предраком и РШМ отмечено значительное повышение уровней sIgА относительно контроля. При Cr. in situ и инвазином раке обращает на себя внимание изменение уровня IgG в сторону увеличения по сравнению с таковым в контрольной группе. Необходимо отметить у больных РШМ I стадии снижение уровня IgM, а у женщин с РШМ II-III стадий повышение концентраций IgА и IgM относительно контрольных значений.

В зависимости от стадии неопластического процесса выявлено: при РШМ I стадии достоверное снижение уровня IgM и повышение уровня IgG относительно показателей больных Cr. in situ, а при РШМ II-III стадий - повышение концентрации IgМ и IgG относительно показателей женщин с РШМ I стадии. Обращает на себя внимание снижение уровня IgМ у больных РШМ I стадии относительно показателя женщин с Cr. in situ в сыворотке крови и цервикальной слизи. Снижение уровня IgМ у больных РШМ I стадии в цервикальной слизи наблюдается и относительно контрольных значений, что соотносится со снижением числа В-лимфоцитов по сравнению с показателями группы контроля в периферической крови у женщин данной группы. Существующие изменения отражают сдвиги в гуморальном звене системного и местного иммунитета, связанные с инвазией и прогрессией опухоли. Выработка и накопление антител при РШМ связаны с массированной антигенной нагрузкой на фоне развивающихся цитопатологических изменений эпителия и являются отражением напряженной работы гуморального звена иммунитета, подтверждающей преобладание функций Тh-2 при всех изучаемых стадиях заболевания. Эти данные не противоречат литературным данным и согласуются с полученными изменениями иммунологических показателей крови (Гадецкая Н.А., 2007; Rosha-Zavaleta L., 2003).

Изменения цитокинового профиля цервикального секрета имеют характеристики сходные с таковыми в сыворотке крови (таблица 7). Во всех группах больных наблюдается выраженное снижение уровней ИНФ-б и ФНО-б и рост концентраций ИНФ-г, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-10 относительно группы контроля. Обращает на себя внимание наличие реципрокных отношений между уровнями ИНФ-б в сыворотке крови и в цервикальной слизи: рост концентрации ИНФ в сыворотке и снижение в слизи. Существующие изменения могут быть связаны с более поздней активацией факторов системного иммунитета с учетом местного характера заболевания и, следовательно, служить свидетельством изменения функциональной активности лейкоцитов периферической крови.

Необходимо отметить, что в группе с ЦИН III в цервикальной слизи достоверно снижены уровни ИНФ-б и ФНО-б и существенно повышены концентрации ИНФ-г, ИЛ-2 и ИЛ-10 относительно группы контроля. Снижение уровня интерферона (ИНФ-б) связано с истощением противовирусных механизмов защиты при тяжелой дисплазии (Ota K., Matsumiya T., Sakuraba H., 2010). Изменение уровня ФНО-б в сторону снижения может свидетельствовать о проявлении его проканцерогенной (антиапоптотической) активности, поскольку при повышенных концентрациях проявляется антиканцерогенная активность ФНО-б, приводящая к некрозу опухоли.

Таблица 7

Уровень цитокинов цервикальной слизи у обследуемых женщин, (М ± m)

Повышение концентраций цитокинов Th1 (ИНФ-г, ИЛ-2) при повышенном уровне ИЛ-10 у больных ЦИН III может быть связано с особенностями регуляции механизмов клеточной кооперации на начальных этапах опухолевой прогрессии, что подтверждается данными литературы (Pardo-Govea T., Callejas D., Nunez-Troconis J., 2005). Таким образом, сохраняется «равновесие» между уровнями цитокинов Th1 и Th2 типов (Мейл Д., 2007). Что, возможно, обеспечивает обратимость существующих изменений в эпителии шейки матки. Хотя многие исследователи отмечают наличие сдвига секреции Th1-цитокинов ...